方法学验证方案.docx
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方法学验证方案
***含量测定
方法学确认方案
日期:
2016年1月
验证方案审查与批准
您下面的签字表明您已审阅此份验证方案并同意实施。
姓名
职务
签名
日期
起草人
姓名
职务
签名
日期
审核人
审核人
姓名
职务
签名
日期
批准人
1目的
对苦参膜中的含量测定检测方法进行确认,确保方法的可行性,以便为有效控制苦参膜的含量提供依据。
2范围
本方案适用于*****药业股份有限公司齐墩果酸片含量测定方法的确认。
3验证机构与职责
3.1验证小组成员
姓名
所在部门
在验证中担任职务
签名
日期
组长
组员
组员
3.2职责
3.2.1验证小组组长职责
3.2.1.1保证确认方案及各种检查表的起草。
3.2.1.2保证在执行前完成对确认方案及各种检查表的审核和批准。
3.2.1.3负责对确认小组成员进行本方案的培训。
3.2.1.4保证完全按照确认方案实施。
3.2.1.5确保能及时发现偏差,并按照已经达成一致的偏差处理方法对其进行记录、纠正、调查和最终确认。
3.2.1.6确保确认报告的生成、审核和批准。
3.2.2QA职责
3.2.2.1执行前完成对确认方案及各种检查表的审核。
3.2.2.2负责确认过程的监控和检查,保证确认方案的实施,参与确认结果评价。
3.2.2.3参与确认偏差的调查、处理、和评估。
3.2.2.4确认过程中,如有变更,保证按《变更处理程序》执行。
3.2.3其它成员职责
3.2.3.1执行前确认确认方案已批准,并经过培训。
3.2.3.2按确认方案实施确认,收集、整理确认数据,完成确认记录和报告。
3.2.3.3参与确认偏差的调查和处理,确认通过偏差修订和解决方案。
3.2.3.4确认确认过程中的变更在实施前已经批准。
4定义
4.1线性:
指在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。
4.2准确度:
指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般用回收率(%)表示。
4.3重复性:
再规定范围内,取同一浓度的供试品,用6个测定结果进行评价。
4.4中间精密度:
在同一个实验室,不同时间由不同分析人员或用不同设备测定结果之间的精密度,称为中间精密度。
5参考文件
5.1药品生产质量管理规范(2010年修订版)
5.2药品生产验证指南
5.3中国药典(2015年版)二部
5.4《国家药品监督管理局国家药品标准》
5.5公司相关文件:
5.5.1苦参膜质量标准及检验规程()
5.5.2验证管理()
5.5.3变更控制操作规程()
5.5.4偏差处理操作程序()
5.5.5纠正措施与预防措施操作规程()
5.5.62016年度验证总计划
6风险因素分析
风险评估将采用失效模式及影响(FMEA)的工具来评估和衡量方法参数失效后对产品分析结果的影响。
评估过程将参照公司质量风险管理的要求,风险等级为低、中、高级别的必须给出合理的建议措施,之后再次对建议的风险控制措施进行评估以确保风险的降低,分析、评估结果见附录1《风险评估表》。
7验证准备
确保所有方法SOP是最新版本且经过批准,将检查结果记录在附录2《文件检查》内。
确认参与验证的人员都经过此方案和相关SOP的培训,和识别所有签字和草签本方案任何数据表的人员。
将检查结果记录在附录3《培训检查和签名确认》内。
7.3确认验证过程中用到设备、计量仪器都是经过校验,并在有效期内,将检查结果记录在附录4《确认用仪器/仪表校准检查》内。
8检测方法的描述
药品与试剂的准备
***对照品(中国药品生物制品检定院提供),***(为*****药业股份有限公司生产);硅钨酸试液、碘化汞钾试液、苦味酸、氯仿、甲醇、浓氨、稀碘化铋钾试液、盐酸液(L)、氢氧化钠液(1mol/L)、氢氧化钠滴定液(L)、硫酸滴定液(L)、甲基红示液、磷酸、乙腈、无水乙醇。
仪器分析条件
电子天平(FA2014)、超声池(KQ-300DE)、电热恒温水浴锅(DK-98-1)、高效液相(LC-10ATVP)
8.3检测方法
显色鉴别、色谱鉴别、酸碱滴定法、高效液相色谱法
检测操作
鉴别
显色鉴别:
样品连续三批,A、B两位组员各取样品1号、样品2号约,分置三支试管中,加水2ml使溶解,分别加硅钨酸试液、碘化汞钾试液及苦味酸试液1~2滴,分别生成白色、淡黄色及黄色沉淀。
薄层鉴别:
样品连续三批,A、B两位组员分别取本品,加甲醇10ml使溶解,超声提取15分钟,静置,取上清液作为供试品溶液;另取苦参碱及氧化苦参碱对照品适量,加甲醇制成每1ml中各含5mg的溶液作为对照品溶液,照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,取上述三种溶液各2~3μl,分别点于同一以%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5:
:
)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的两个斑点。
酸碱滴定法:
连续三批样品,两位组员分别取样品1、样品2,各10片,剪碎,取一片重两份,各精密称定,加氯仿25ml回流3次,每次1小时,合并提取液,置水浴上挥干,残渣用L盐酸液5ml使溶解,滤过,滤液置入分液漏斗中,用水10ml分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取5次(25、20、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤,再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。
合并三氯甲烷液,精密加硫酸滴定液(L)10ml及新沸过的冷水20ml,振摇提取后,分取酸层,氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次,每次10ml,合并酸液与洗涤液,置水浴上加热,除去残留的三氯甲烷,放冷至室温,加甲基红指示液2滴,用氢氧化钠滴定液(L)滴定。
每1ml的硫酸液(L)相当于的C15H24N2O2。
本品每片含总生物碱以****%~%。
相对偏差(dr%)不得超过%
计算公式:
C1:
硫酸滴定液的实际浓度(mol/L);
C2:
硫酸滴定液的理论浓度(mol/L);
C3:
氢氧化钠滴定液的实际浓度(mol/L);
C4:
氢氧化钠滴定液的理论浓度(mol/L);
V1:
加入硫酸滴定液的体积(ml);
V2:
消耗氢氧化钠滴定液的体积(ml);
T:
标示量(;
:
该批20片苦参膜的平均重量(g);
M:
使用苦参膜的量(g)。
.4高效液相色谱法
色谱条件与系统适用性试验:
用氨基键合硅胶为填充剂:
以乙腈-无水乙醇-3%磷
酸溶液(85:
:
)为流动相;柱温30℃,检测波长为220nm,流速/min,理论塔板数按氧化苦参碱峰计算,应不低于5000。
对照品溶液的制备:
取******对照品适量,精密称定,置同一量瓶中,加乙腈-无水乙醇(85:
15)制成每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35μg的溶液,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:
取已剪碎的样品约,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水,精密加入三氯甲烷25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,加三氯甲烷补足损失重量,滤过,精密吸取续滤液5ml,水浴上挥干,用乙腈-无水乙醇(85:
15)定溶至25ml量瓶中,摇匀,用μm滤膜滤过,即得。
测定法:
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5~10μl,注入高效液相
色谱仪,测定,即得。
本品每片含******不得少于mg。
相对标准偏差不得过2%。
计算公式:
:
对照品进两针的平均峰面积;
:
对照品第一针峰面积;
:
对照品第二针峰面积。
9验证实施
线性实验
目的:
在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度应符合规定。
滴定法
实验过程
同一人同时取同一批样品,各10片,剪碎,取一片重样品1、样品2、样品3、样品4、样品5,各精密称定,加氯仿25ml回流3次,每次1小时,合并提取液,置水浴上挥干,残渣用L盐酸液5ml使溶解,滤过,滤液置入分液漏斗中,用水10ml分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取5次(25、20、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤,再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。
合并三氯甲烷液,精密加硫酸滴定液(L)10ml及新沸过的冷水20ml,振摇提取后,分取酸层,氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次,每次10ml,合并酸液与洗涤液,置水浴上加热,除去残留的三氯甲烷,放冷至室温,加甲基红指示液2滴,用氢氧化钠滴定液(L)滴定。
每1ml的硫酸液(L)相当于的C15H24N2O2。
本品每片含总生物碱以氧化苦参碱(C15H24N2O)计,应为标示量的%~%。
相对偏差(dr%)不得超过%。
以样品滴定过程中消耗氢氧化钠的体积为横坐标,以样品含量为纵坐标,绘制回归方程。
可接受标准(相关系数dr《%)。
记录:
将实验结果记录在《***滴定含量测定线性实验记录》内,见附录。
高效液相
对照品配制:
取***一瓶精密称取置25ml容量瓶中、***对照品两瓶精密称取置50ml量瓶中,加乙腈:
无水乙醇(85:
15)溶解至刻度。
分别精密量取氧化苦参碱、苦参碱5ml;氧化苦参碱1ml、苦参碱10ml;氧化苦参碱2ml、苦参碱20ml,分别置25ml容量瓶中,加乙腈:
无水乙醇(85:
15)至刻度。
既得。
样品制备:
取已剪碎的样品约,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水,精密加入三氯甲烷25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,加三氯甲烷补足损失重量,滤过,精密吸取续滤液5ml,水浴上挥干,用乙腈-无水乙醇(85:
15)定溶至25ml量瓶中,摇匀,用μm滤膜滤过,即得。
测定法:
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5~10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
本品每片****,不得少于mg。
以对照品的吸取量(峰面积)为横坐标,以样品含量(峰面积)为纵坐标,绘制回归方程
可接受标准(相关系数RSD《2%)。
记录:
将实验结果记录在《***高效含量测定线性实验记录》内,见附录5。
重复性实验
目的:
在规定范围内,取同一批次的样品品,用5个测定结果进行评价,得到的结果RSD应符合要求。
滴定法:
实验过程
取同一批样品,10片,剪碎,取一片重样品1、样品2、样品3、样品4、样品5各精密称定,加氯仿25ml回流3次,每次1小时,合并提取液,置水浴上挥干,残渣用L盐酸液5ml使溶解,滤过,滤液置入分液漏斗中,用水10ml分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取5次(25、20、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤,再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。
合并三氯甲烷液,精密加硫酸滴定液(L)10ml及新沸过的冷水20ml,振摇提取后,分取酸层,氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次,每次10ml,合并酸液与洗涤液,置水浴上加热,除去残留的三氯甲烷,放冷至室温,加甲基红指示液2滴,用氢氧化钠滴定液(L)滴定。
每1ml的硫酸液(L)相当于的C15H24N2O2。
本品每片含总生物碱以****%~%。
相对偏差(dr%)不得超过%。
可接受标准(相关系数dr《%)。
记录:
将实验结果记录在《***滴定含量测定重复性实验记录》内,见附录5。
高效
实验过程
对照品配制:
对照品溶液的制备:
取苦参碱、氧化苦参碱对照品母液适量,置同一量瓶中,加乙腈-无水乙醇(85:
15)制成每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35μg的溶液,摇匀,即得。
样品制备:
取同一批样品10片,剪碎并分别取样品1、样品2、样品3、样品4、样品5约,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水,精密加入三氯甲烷25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,加三氯甲烷补足损失重量,滤过,精密吸取续滤液5ml,水浴上挥干,用乙腈-无水乙醇(85:
15)定溶至25ml量瓶中,摇匀,用μm滤膜滤过,即得。
测定法:
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5~10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
本品每片含苦参总碱以苦参碱(C15H24N2O)与氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量计,不得少于mg。
可接受标准(相关系数RSD《2%)。
记录:
将实验结果记录在《***高效含量测定重复性实验记录》内,见附录5。
中间精密度实验
目的:
含量测定中,一个实验室内不同的人、在不同时间(通常是不同天)测定得到的结果RSD应符合要求。
滴定含量
实验过程
两名实验人员分别在不同时间(通常是不同天)各取同一批号苦参膜10片,精密称定,剪碎,各精密称取本品3份(每份约),加氯仿25ml回流3次,每次1小时,合并提取液,置水浴上挥干,残渣用L盐酸液5ml使溶解,滤过,滤液置入分液漏斗中,用水10ml分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取5次(25、20、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤,再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。
合并三氯甲烷液,精密加硫酸滴定液(L)10ml及新沸过的冷水20ml,振摇提取后,分取酸层,氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次,每次10ml,合并酸液与洗涤液,置水浴上加热,除去残留的三氯甲烷,放冷至室温,加甲基红指示液2滴,用氢氧化钠滴定液(L)滴定。
每1ml的硫酸液(L)相当于的C15H24N2O2。
可接受标准(同一人实验结果RSD%≤%;两人间的RSD%≤%)
记录:
将实验结果记录在《***滴定含量测定中间精密实验记录》内,见附录5。
高效
两名实验人员用同一批对照品分别在不同时间(通常是不同天)各取同一批号苦参膜10片,精密称定,剪碎,各精密称取本品3份(每份约),置具塞锥形瓶中,加浓氨水,精密加入三氯甲烷25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,加三氯甲烷补足损失重量,滤过,精密吸取续滤液5ml,水浴上挥干,用乙腈-无水乙醇(85:
15)定溶至25ml量瓶中,摇匀,用μm滤膜滤过,即得。
测定法:
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5~10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
本品每片含苦参总碱以苦参碱(C15H24N2O)与氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量计,不得少于mg。
可接受标准(同一人实验结果RSD%≤%;两人间的RSD%≤%)。
记录:
将实验结果记录在《***高效含量测定中间精密度实验记录》内,见附5。
含量测定准确度实验
目的:
含量测定中,用已确定的方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般用回收率(%)表示,得到的结果RSD应符合要求。
实验过程
精密称取同一已知含量的供试品9份(每份约),分别置于圆底烧瓶中,分成三组,分别向第一组的每一份供试品中加入浓度为(35μg/ml)的氧化苦参碱对照品2ml;向第二组的每一份供试品中加入浓度为(35μg/ml)的氧化苦参碱对照品5ml;向第三组的每一份供试品中加入浓度为(35μg/ml)的氧化苦参碱对照品7ml。
加氯仿25ml回流3次,每次1小时,合并提取液,置水浴上挥干,残渣用L盐酸液5ml使溶解,滤过,滤液置入分液漏斗中,用水10ml分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取5次(25、20、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤,再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。
合并三氯甲烷液,精密加硫酸滴定液(L)10ml及新沸过的冷水20ml,振摇提取后,分取酸层,氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次,每次10ml,合并酸液与洗涤液,置水浴上加热,除去残留的三氯甲烷,放冷至室温,加甲基红指示液2滴,用氢氧化钠滴定液(L)滴定。
每1ml的硫酸液(L)相当于的C15H24N2O2。
测定法
将测得的总含量减去供试品中已知含量,计算每组的回收率。
可接受标准(实验结果回收率%~%)。
记录:
将实验结果记录在《***滴定含量测定准确度实验记录》内,见附录8。
高效
对照品制备:
对照品溶液的制备:
取苦参碱、氧化苦参碱对照品母液适量,置同一量瓶中,加乙腈-无水乙醇(85:
15)制成每1ml含苦参碱和35μg的溶液,摇匀,即得。
供试品制备:
精密称取同一已知含量的供试品9份(每份约),置具塞锥形瓶中,加浓氨水,精密加入三氯甲烷25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,加三氯甲烷补足损失重量,滤过,精密吸取续滤液5ml,水浴上挥干,用乙腈-无水乙醇(85:
15)定溶至25ml量瓶中,摇匀,用μm滤膜滤过,即得。
分成三组(每组3份样品),分别向第一组的每一份供试品中加入浓度为(每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35μg的溶液)的对照品2ml;向第二组的每一份供试品中加入浓度为(每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35μg的溶液)的对照品5ml;向第三组的每一份供试品中加入浓度为(每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35μg的溶液)的对照品7ml。
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5~10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
测定法
将测得的总含量减去供试品中已知含量,计算每组的回收率。
可接受标准(实验结果回收率%~%)。
记录:
将实验结果记录在《***效含量测定准确度实验记录》内,见附录8。
10偏差与变更
验证偏差
当该方案的某一部分无法实施或实际情况无法达到可接受标准时,需要进行偏差报告。
当偏差出现时,首先要进行全面调查以确定该偏差是由什么引起的,之后再确定相应的解决措施。
将验证过程中产生的偏差记录在《偏差处理单》中,并作为验证记录附件。
10.2变更控制
所有在验证过程中产生的变更都需记录,确保所有的变更得到评估和批准,验证的结果达到预定的目的和要求。
将验证过程中产生的变更记录在《变更处理单》记录中,并作为验证记录附件。
11确认结果评定与结论
验证小组负责对确认结果进行综合评审,做出确认结论。
对确认结果的评审应包括:
确认实施是否有遗漏?
确认实施过程中对确认方案有无修改?
修改原因、依据以及是否经过批准?
确认记录是否完整?
确认试验结果是否符合标准要求?
是否需要进一步补充试验?
12附录目录
附录1风险评估报告
附录2文件检查
附录3培训检查和签名确认
附录4确认用仪器/仪表校准检查
附录5***滴定含量测定操作记录
附录5***高效含量测定操作记录
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