美国药典微生物检测精要.docx
- 文档编号:29890110
- 上传时间:2023-08-03
- 格式:DOCX
- 页数:20
- 大小:24.11KB
美国药典微生物检测精要.docx
《美国药典微生物检测精要.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《美国药典微生物检测精要.docx(20页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
美国药典微生物检测精要
美国药典微生物检测精要
培训小结
一微生物实验室规范
重要的控制点:
无菌技术、培育基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记载与实验室规划和运作、员工培训等。
1无菌技术:
防止和坚持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。
可经过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手腕来完成。
2培育基:
是微生物实验任务的中心。
包括培育基制备、培育基贮存、培育基质量控制。
2.1培育基制备
2.1.1依据既定的目的选用正确的培育基
2.1.2参考消费商的COA和说明书:
关于配制、贮存和菌种选用等。
2.1.3所用的水应为去离子水或蒸馏水,应记载用量。
2.1.4成分的称量运用校准过的天平,依据称量量的不同选择适宜的天平。
运用清洁的容器和工具〔<1051>玻璃器皿清洁〕以防外来污染和抑制剂。
应记载称量量。
2.1.5加热协助溶解时应防止过度加热,通常培育基颜色变深说明加热过度了。
2.1.6灭菌条件:
●灭菌参数应验证,验证应同时思索无菌和培育基生长才干
●采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。
干冷灭菌应思索装载散布,加热速渡过慢会使培育基过度加热,通常为121℃15min,此时间是指培育基温度到达121℃后15min。
●保证最低SAL,在无菌和过度加热之间平衡。
●与污染物分开灭菌
●消毒完毕后,不应在灭菌柜中贮存培育基,过度加热会影响培育基颜色、廓清、pH和凝结才干。
2.2培育基贮存
2.2.1制备培育基的贮存
●琼脂培育基易受冷冻影响,低于0℃会破坏凝胶结构。
●应避光避热,密封防止水分蒸发〔建议运用螺旋盖的瓶子密封,保管时间长〕。
2.2.2培育基消融
●不能超越一次,以防过度加热或潜在污染。
●消融可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。
微波炉加热宜采用大批屡次,以防过度。
●培育基消融后在40-50℃水浴中贮存不应超越8小时,浇制平皿前应擦干以防污染。
2.2.3培育基标示
●培育基称号
●批号、制备批号
●制备日期、有效期
2.2.4有效期确定
●依据成分、配方、容器、贮存条件等确定
●有生长才干实验数据支持
2.2.5应在验证过的条件下贮存
2.2.6重要区域环控用培育基必需
●双层包装
●最终灭菌,否那么停止全数培育及用前反省
2.2.7依据外地生物风险品平安顺序处置过时培育基
2.3培育基质控
2.3.1灭菌后培育基反省
2.3.1.1生长才干
●每批制备的培育基均需停止
●测试菌种依据药典,供应商说明书及环境中分别失掉
●测试不合格应停止调查,如无缘由,或无有效纠正措施,不得运用该批号
2.3.1.2无菌
2.3.1.3pH
2.3.1.4容器/平皿的完整性
2.3.1.5抑制或指示才干
2.3.2活期动摇性反省以确认贮存有效期
3菌种保藏
3.1树立规范顺序处置、保管菌种,防止污染和特性变化
3.2运用前确认菌种身份和纯度
3.3依据消费商说明书复苏菌种,运用接种技术
3.4-70℃以下或冷冻枯燥保管储藏菌种,可延伸保管周期
3.5开启后不要重新冷冻菌种,剩余局部应弃置
3.6传代次数〔每接种一次即为一代〕不超越5次
3.7保藏时间依据详细保藏条件确定
4设备维护
4.1活期校准、保养
4.2活期功用反省
4.3活期清洁、消毒
5实验室规划和运作
5.1防止交叉污染
5.2活动分区:
无菌、环控样品的处置和培育应在无菌环境中停止
5.3当发现微生物生长,后续的任务应转移至〝阳性〞区
5.4环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作
5.5应在受控条件下小心取样
6样品处置
6.1大局部样品、水或环控样品中的微生物对操作、贮存环境敏感
6.2增加样品,取样与测试间的时间距离
6.3长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响
6.4在无菌条件下,运用无菌技术取样,即使是非无菌样品
6.5取样记载:
样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认
7培育基培育时间
7.1短于3天,用小时表示
7.2善于3天,用天表示〔上午、下午,相反时间段〕
8人员培训
8.1每个岗位应有相应培训要求,停止上岗前资质确认
9实验室文件
9.1微生物人员培训和才干确认〔上岗资质〕
9.2设备验证、校准和维护
9.3测试中的设备功用〔如温度记载〕
9.4培育基制备、无菌反省、生长才干测试、选择性测试
9.5培育基清单与控制
9.6依据顺序〔SOP〕停止测试的重要数据
9.7数据和计算确实认
9.8经QA人员或相应指导审核过的报告
9.9超标结果调查
10实验室结果维护
10.1检测报告至少应包括:
●日期
●测试样品
●微生物检验人员名字
●顺序编号
●测试结果
●偏向〔如有〕
●测试参数〔设备、菌种、培育基〕
●管理人员审核签名
10.2数据纠错:
错误的中央划一横线,签名和日期,必要时说明缘由
10.3测试结果
●应包括平皿计数结果〔如有〕
●数据剖析方法应罗列在相关SOP中
●对粘贴的图表、数据骑缝签名
10.4存档:
记载应存档并防止丧失,应有记载留存方案
11测试结果解释
11.1微生物数据有时不容易解释
●与人类相关的微生物群落被普遍的用于许多测试
●人员污染是一直被关心的效果
●样品或环境中的微生物并非平均散布
●微生物检测可变范围大:
能够在+/-0.5log10单位左右
11.2不契合的结果能够是由2个缘由形成的:
实验室错误或产品不契合。
无论哪种状况,管理层必需立刻被通知
11.3调查应包括:
●数据偏离的水平〔严重性〕
●平行数据间差异的评价
●实验室环境
●取样方法
●物料特性〔存活的污染微生物〕
●人员面谈
●留样评价
●测试进程
11.4纠偏方案〔警戒限、举动限〕
●假设发理想验室错误,需求
●纠偏措施的有效性需求跟踪和记载
11.5有效测试:
由于错误将实验视作有效必需记载
11.6确认测试〔复试〕:
应有SOP描画何时停止
二非无菌产品:
微生物计数
1惯例进程
1.1防止产品以外的微生物的污染。
1.2去除细菌抑制/真菌抑制性。
1.3证明外表活性剂的无毒性及其与抑制剂的相容性。
2计数方法
2.1薄膜过滤法
2.2平皿计数法:
平皿浇注法,外表涂布法。
2.3最大能够性数量法〔MPN〕:
用于检测极少数量的微生物,精细度、准确度差,不适宜用于霉菌。
3生长才干测试和方法适用性
3.1生长才干测试:
●普通思索
●测试菌株预备
●缓冲液
●阴性对照
●培育基生长测试
3.2计数方法适用性:
●样品制备
●接种与稀释
●中和/去除抗菌活性
●产品存在状况下的微生物的回收率
●结果与解释
4微生物数据的可变性
4.1成品测试
4.1.1抗菌效能测试
4.1.2微生物限制反省
4.2培育基生长才干测试
固体培育基,计数结果与规范接种物的计数数量差异小于系数2。
对新颖制备的菌液,生长与前批已经过的培育基的前次测试结果分歧。
4.3计数方法适用性测试
样品计数结果与对照计数结果的相差小于系数2。
4.4微生物回收率验证
4.4.1固体培育基的回收率验证
4.4.2受损微生物的恢复
三非无菌产品:
控制菌微生物测试
1惯例进程
1.1防止产品以外的微生物的污染。
1.2去除细菌抑制/真菌抑制性。
2产品测试
2.1样品制备和增殖
2.2选择性培育
2.3结果解释
3培育基适用性测试和方法适用性测试
3.1培育基适用性测试:
●测试菌株预备
●菌株
●阴性对照
●生长才干测试、抑制及选择性测试
3.2方法适用性:
●样品制备
●接种与稀释
●中和/去除抗菌活性
●产品存在的状况下,微生物的回收率
●结果与解释
4菌种
●金黄色葡萄球菌
●铜绿假单胞菌
●大肠埃希菌
●肠道沙门氏菌
●白色念珠菌
●梭菌
4.1微生物运用不超越5代
4.2PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备悬浮菌液
4.3悬浮菌液2小时内运用,2-8℃不超越24小时
4.4生孢梭菌也可制备孢子悬浮液,2-8℃保管期限需确认
四药物制剂和药用物质的接受规范
1非无菌制剂的微生物质量规范
1.1口服固体
1.2口服液体
1.3直肠制剂
1.4局部及鼻腔制剂
1.5阴道制剂
1.6吸入剂
1.7活性药物成分、辅料
2药物产品的接受规范
2.1其他重要性依据评价:
●产品用途
●产品特点
●运用的方法
●药物接受者:
对婴儿、幼儿及安康患者的风险是不同的
●存在疾病、伤口、器官损伤
相应的要素的风险评价由经授权的有资质的人员停止
3有害微生物
3.1有害微生物的概念不适宜无菌产品,无菌产品中不得有任何微生物
3.2将用于非无菌产品的微生物测试,及非无菌产品环境中分别到的微生物评价及清洁验证
3.3有害微生物的定义:
3.1.1能在产品中增殖的微生物,对药品的物理特性及治疗作用有负面影响
3.1.2由于产品中微生物的数量及致病功用招致运用该药品的患者遭到感染
4微生物质量相关的产品召回
5USP微生物质量接受规范
5.1USP各论要求是最低的公共规范
5.2通那么提供了契合各论要求的方法
5.3有效期内测试
5.4不等于成品所需的一切放行测试
五水分活性确定对非无菌药品的运用
1水分活性
1.1非无菌药物制剂中水分活性确实定:
1.1.1改善产品处方以提高防腐系统的抗菌效能
1.1.2降低能够在产品处方中化学水解的活性成分的降解
1.1.3降低微生物对产品的污染
1.1.4可以增加和如何挑选需测试的控制菌
1.2降低水分活性在微生物生长方面的作用
1.2.1较长的停滞期、较慢的生长速度、较少的动摇期的微生物数量
1.2.2增加微生物毒素的发生
1.2.3在某个微生物专有的水分活性以下,该微生物不会生长
1.2.4水分活性下降后,微生物的耐热性会提高
2测试战略
2.1水分活性高于0.75的多剂量水性药品需求参与防腐剂并将微生物限制测试作为惯例放行测试
2.2水分活性低于0.75的药品不需额外防腐,在风险评价后不需求将微生物限制测试作为惯例放行测试
2.3制药厂商对原料厂商的消费工艺、质量方案、测试记载有片面的了解。
这些可以经过供应商审计方案失掉
六无菌测试
1灭菌和无菌保证中的观念:
依照无菌最严厉的定义,只要当样品中完全没有活的微生物时,它才干被称为是无菌的。
2无菌测试的首要难点:
整批产品不能停止逐一破坏反省是无法证明相对无菌的。
2.1无菌是依据概率的原那么判别的。
从给定批号的一切产品中存在被污染产品的概率得出判别。
2.2目的是使其能够性与真实性仅有可接受的庞大差异。
3无菌测试自身并不是设计用于保证产品无菌或产品已灭菌。
产品的无菌保证是经过灭菌工艺或无菌工艺的验证来失掉的。
4无菌测试流程
4.1培育基和细菌抑制/真菌抑制性测试〔方法验证〕
4.2去除任何抑制细菌和真菌生长的要素
4.3确定用于测试的样品数量,每个样品的用量
4.4培育样品
4.5反省测试样品能否有生长的迹象
4.6显微镜反省有疑问的容器能否有生长的迹象
4.7必要的话再接种培育
4.8写报告
5培育基测试
5.1培育基的贮存
●2-25℃
●无菌,密闭容器
●贮存不超越验证过的期限
●硫乙醇酸盐液体培育基颜色指示要求契合
5.2培育基的无菌:
●每种要求的培育基取一局部在特定温度下培育14天,反省能否混浊
●与测试同时停止培育基的无菌反省
5.3生长才干测试:
●在硫乙醇酸盐液体培育基中参与≦100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生饱梭菌
●在大豆酪蛋白消化培育基中参与≦100cfu的枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
●细菌3天、真菌5天
●反省生长的迹象
6方法适用性测试
6.1将待测样品内在的细菌抑制性和真菌抑制性去除
6.2制备微生物培育的稀释液,最终浓度应使参与产品的微生物数量不超越100cfu
6.3依据产品〔或各论要求〕运用膜过滤法或直接接种法
6.3.1膜过滤法:
●产品特征允许的话,作为首选方法
●将测试样品滤过,将微生物截留在滤膜上〔孔径不大于0.45uM〕
●在最后一步冲洗液中在参与不超越100cfu的微生物
●将滤膜放入测试用培育基
●记住对6个微生物,每个都要这样操作〔见上述生长才干测试〕
●停止培育基生长才干测试作为阳性对照
●在适宜温度下培育不超越5天
6.3.1.1冲洗:
〝每个滤器冲洗不要超越100ml5次,即使在验证中显示这样的冲洗还不能完全去除抗菌活性
6.3.1.2化学添加物
6.3.2直接接种法:
●将样品参与培育基。
样品体积不超越培育基体积的10%。
〔或配制稀释培育基〕
●培育基中参与不超越100cfu的微生物
●记住对6个微生物,每个都要这样操作〔见上述生长才干测试〕
●停止培育基生长才干测试作为阳性对照
●在适宜温度下培育不超越5天
7微生物回收率验证
7.1当测试方法决议于微生物生长时,去除细菌抑制性或真菌抑制性是很重要的
7.2可以运用特殊的中和剂、停止稀释或经过这些不同方法的组合
8通常的留意点:
●无菌测试在无菌环境中停止
●留意防止污染的同时,留意不要影响测试对微生物的检出
●停止测试的任务环境应经过对任务环境取样停止活期监测,并停止适当控制
●无菌测试时包括适当的阴性对照
●观察进程中硫乙醇摇的时分不能太猛烈
●培育器的帽口不要弄到培育基
9惯例方法
9.1培育条件:
硫乙醇酸盐液体培育基在32.5〔+/-〕2.5℃培育不少于14天,大豆酪蛋白消化培育基在22.5〔+/-〕2.5℃培育不少于14天
9.2观察:
●在14天的培育进程中活期观察培育基
●假设在14天内观察到测试样品呈阳性,可以中止以后的观察
10结果解释
10.1只要一项或多项以下状况发作时,测试才干够被思索为有效测试:
●无菌测试区域的微生物环境监控数据显示有错误发作
●发现测试进程有错误
●阴性对照发现微生物阳性
●测试污染微生物鉴定后,能明白地将微生物生长归因于用于无菌测试运用的物料及/或技术发作错误
10.2有效测试可重新停止测试
七无菌保证
1一批产品的无菌保证不是经过<71>无菌测试合格而失掉的。
而是经过树立恰当的经过验证的灭菌工艺或无菌工艺进程,严厉执行这些工艺进程的要求来失掉的〔cGMP〕。
2验证和证明灭菌工艺的基本原那么
2.1工艺与控制设备必需能按要求的参数运作
2.2在有代表性的设备操作范围内重复停止灭菌工艺并引入产品或模拟产品
2.3证明工艺是在方案中预设的限制内完成的
2.4重复显示经过这样的工艺后,微生物存活到位能够性在预设的限制内,微生物指示剂经常被运用以证明这一点
2.5日常运作中参数的监控,设备、工艺的活期验证
3概率
3.1一批产品被称为无菌是跟据概率论来定义的,说明该批产品中,即使只要一个产品被污染的能够性也是微乎其微,可以接受的。
3.2通常被接受的无菌保证水平是10-6的微生物存活率或更低,即保证经灭活的物品或产品中有活的微生物的能够性不超越百万分之一。
4D值
4.1D值是将微生物增加90%或1个log所需求的时间〔分钟〕
4.2过度杀灭:
4.2.1在与D值测定的异样条件下,暴露于12个D值的时间后就相当于典型的〝过度杀灭〞
4.3少量的灭菌工艺验证运用生物指示剂来确定物品暴露在灭菌条件下的时间,以到达至少为10-6的无菌保证水平〔SAL〕
5生物指示剂
5.1生物指示剂被狭义的定义为:
对特定灭菌工艺有抗性的特定微生物的制备物,其特性经过确认。
5.2微生物指示剂的耐受性必需大于灭菌产品中的自然存在的微生物。
5.3依据微生物载量确定的灭菌工艺需活期对产品中的微生物数量及对验证条件的耐受性停止评价。
5.4灭菌方法
5.4.1干冷灭菌
常用适当的杆菌菌株的芽孢
5.4.2干热灭菌
5.4.2.1不如干冷灭菌有效
5.4.2.2在树立干热灭菌工艺进程中,经常用内毒素去热原研讨替代微生物灭活研讨,其速度更慢。
5.4.3气体灭菌
当物料无法接受干冷灭菌或干热灭菌的高温时,经常运用气体灭菌。
5.4.3.1常用气体:
●环氧乙烷
●气态过氧化氢
5.4.4电离辐射灭菌
5.4.5过滤除菌
5.5无菌工艺进程
5.5.1多级屏障系统
5.5.2设备设备润滑,资料能耐受频繁的清洗、消毒
5.5.3足够大的更衣室和物料贮存室
5.5.4预备室与灌装区的有效分隔
5.5.5适当的气锁及风淋设备
5.5.6风压、单向流、换气次数控制
5.5.7湿度、温度控制
5.5.8合理的消毒方案方案
5.5.9人员培训等
5.6无菌工艺验证包括:
●设备验证
●过滤系统有效性
●环境验证,包括微生物环境
●培育基模拟灌装等
八无菌工艺
1无菌产品必需在最严厉的规范控制下发生。
1.1无菌Sterile:
完全的明白地不含有活动微生物。
1.2无菌Aseptic:
经过控制环境使污染坚持在最低的风险水平,以去除活的微生物。
2用于防止活的微生物在消费进程中的任何步骤中污染产品,对这些产品步骤而言,没有任何的后续步骤可去除这些微生物。
3控制措施:
●原料药
●辅料
●水
●容器
●密封系统
●空气
●外表
●操作员
4关键要求
4.1应用空气系统有效维护的恰当的设计,提供无活的微生物的空气环境
4.2适当装备并更衣的经培训的操作人员才干进入
4.3活期环境过滤器反省
4.4惯例粒子及微生物环境监测
4.5可以包括活期无菌培育基灌装
5洁净室和其他受控环境的微生物评价
6洁净室分类的树立
6.1FDA指南中的AirClassifications
7受控环境微生物评价方案的重要性
8微生物警报限和举动限
8.1警报限:
通常依据从特定的受控环境中的日常消费操作中失掉的历史数据。
举动限:
超越一定的微生物水平〔cfu〕时,需求立刻的措施,必要时包括纠正措施。
8.2从污染微生物数量,种类停止剖析,了解环境状况潜在的变化,及时剖析缘由,采取举动,使环境坚持在要求的条件下
8.3调查:
●区域维护文件回忆
●清洁消毒文件回忆
●固有的物理或操作参数回忆,如环境温度及相对湿度的变化
●及人员的培训形状
9微生物鉴别
10无菌模拟灌装
11降低人与产品接触的系统
九热原测试
1热原:
在体内到达一定浓度是会惹起发烧的任何化学物质。
2细菌内毒素:
不同的革兰氏阴性菌在其细胞外膜中不同类型的脂多糖。
十微生物替代方法的验证
1验证的方法的目的在验证末尾前被明白。
2通那么<1223>提供指点如何验证一个方法以替代药典方法
2.1微生物测试类型
2.2样品中存活微生物的定量测实验证
●准确度
●精细度
●专属性
●定量限
●线性
●检测限
●范围
●耐受性
●耐用性
2.3样品中存活微生物的定性评价验证
●专属性
●检测限
●耐用性
●重复性
●耐受性
3比拟验证要求证明替代方法同药典方法相比拟,契合其预期运用的要求。
依据上述状况,微生物实验室应停止相应的调整,以确保产品契合药典要求并严厉控制产质量量。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 美国 药典 微生物 检测 精要