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不同品种紫苏油抗氧化作用研究讲解
不同品种紫苏油抗氧化作用研究
摘要:
本文以低温压榨法压榨的9种不同品种的紫苏油为原材料,分别采用DPPH法、羟基自由基法和超氧阴离子法3种方法研究紫苏油的抗氧化活性。
结果表明:
9种紫苏油对DPPH的IC50值为0.665-1.470g/L;对羟基自由基的IC50值为0.840-1.058g/L;对超氧阴离子的IC50值为0.305-0.437g/L。
其中1号(ZB-2)的抗氧化活性最强,对DPPH、羟基自由基和超氧阴离子的IC50值分别为0.665g/L、0.840g/L和0.305g/L,是研究和开发保健油的优良品种。
关键词:
紫苏油,DPPH,羟基自由基,超氧阴离子
StudyondifferentvarietiesofperillaoilAntioxidant
Abstract:
Inthispaper,coldpressedmethodsqueezedninekindsofdifferentvarietiesofperillaoilasrawmaterialwereusedDPPHmethod,hydroxylradicalsmethodandsuperoxideanionmethodthreekindsofmethods,researchperillaoilantioxidantactivity.Theresultsshowthat:
ninekindsofperillaoilonDPPHIC50valueof0.665-1.470g/L;IC50valueforthehydroxylradical0.840-1.058g/L;IC50valuesforsuperoxideanion0.305-0.437g/L.WhereNo.1(ZB-2)havethestrongestantioxidantactivityDPPH,hydroxylradicalsandsuperoxideanionIC50valueswere0.665g/L,0.840g/Land0.305g/L,isthedevelopmentandresearchhealthoilvarieties.
Keywords:
Perillaoil,DPPH,hydroxylradical,superoxideanion
目录
1前言1
1.1概述1
1.2紫苏油简介2
1.2.1紫苏油的成分和性质2
1.2.2紫苏油的功能简介3
1.3抗氧化活性研究的方法4
1.3.1对DPPH的清除能力4
1.3.2对羟基自由基的清除能力5
1.3.3对超氧阴离子的清除能力6
1.4本课题研究的目的及意义6
2材料与方法8
2.1实验材料8
2.2紫苏油的制备8
2.3主要仪器8
2.4主要药品及试剂8
2.5实验方法9
2.5.1DPPH清除法9
2.5.2羟基自由基清除法9
2.5.3超氧阴离子清除法10
3结果与分析12
3.1不同品系紫苏油的抗氧化性比较分析12
3.1.1不同品系紫苏油对DPPH的清除率分析12
3.1.2不同品系紫苏油对羟基自由基清除率的分析14
3.1.3不同品系紫苏油对超氧阴离子清除率的分析16
4结论19
参考文献20
致谢23
1前言
1.1概述
紫苏别名苏、桂苏、红苏、香苏等,其英文名叫Perilla,紫苏为通称[1]。
紫苏系唇形科一年生草本植物,全株有特异芳香,株高160-170cm,茎四棱形,紫色或紫绿色,主茎发达,多分枝,有紫色或白色的长柔毛。
紫苏叶片对称生长,叶柄长约3-5cm,叶片皱,呈卵形或卵圆形,叶片长4-11cm,宽2.5-9cm,尖端突尖或渐尖,叶片上面绿下面紫,两面均长有柔毛。
紫苏为总状花序,生长在一侧的顶部或腋部。
苞片卵状三角形,花萼钟形,长有柔毛。
花冠二唇形,紫红色或淡红色。
紫苏果实为小坚果,近圆形,内含1粒种子。
紫苏种子呈卵圆形或类球形,直径0.6-2mm,表面灰棕色或灰褐色,有微隆起的暗棕色网状花纹,果皮薄而脆,易压碎、种仁黄白色,富油性。
由于紫苏的叶、茎、果实都可入药历史本草均有记载,是卫生部首批颁布的食品和药物的60种物品之一[2]。
紫苏目前已发展成为一种重要的油料作物,主要用于药用、油用、食用等方面[1,2]
紫苏原产于喜马拉雅山及我国中南部地区,现在主要分布于印度、日本、中国、朝鲜和韩国等地。
紫苏在我国已有两千多年的栽培历史,在我国分布很广,主要产于陕西、湖北、浙江、四川、辽宁、山东等省,以大棚栽培较多。
全世界的紫苏品种有1个种,即紫苏(原变种,包括紫苏和白苏),和3个变种[2](野生紫苏、回回苏、耳齿紫苏)。
野生紫苏又名尖叶紫苏,果实、叶片、种子较小,多产于山西、河北、湖北、四川等地;回回苏又名皱叶紫苏、鸡冠紫苏,叶片具有狭而深的锯齿,常为紫色,果萼较小;耳齿紫苏与野生紫苏相似,但其叶基呈圆形,具有耳状齿缺,浙江、安徽为其主要产地。
调查显示,各地栽培以回回苏最多[3]。
紫苏是传统的多用途经济植物,是国家卫生部首批颁布的既是药品又是食品的60种中药之一。
在医药方面,紫苏是常用的重要中药,其茎、叶、根及果实都可以入药。
紫苏叶能发散风寒,行气和胃;苏梗可以理气安胎,止痛;紫苏子有化痰平喘,润腑等作用。
现代医学研究证实[4],紫苏叶和紫苏子中含有诸多功能成分,如萜类、黄酮及其甙类、类脂类、花青素及多糖等。
紫苏中的醇类物质可以预防乳腺癌、肝癌、肺癌以及其他癌症。
紫苏提取物中含有迷迭香酸,其具有非常好的祛除自由基抗炎效果,能抗氧化、抗病毒活性、抗炎、抗血栓、抗血小板聚集和抗菌,是己经获得美国FDA认可的公众安全食品原料之一。
紫苏种子油中含有丰富的α-亚麻酸,α-亚麻酸是人体中必须的脂肪酸,具有降血压、降血脂、抑制血小板聚集、减少血栓形成、抗乳腺癌细胞的生长和代谢作用,其对结肠癌具有拮抗作用,可以大大降低结肠癌疾病的发生率。
现代药理研究证明,紫苏子还具有顺气平喘、消痰润肺、疏肝益脾、消炎镇痛等功效。
在食用价值上,从古到今,紫苏都是民间食用蔬菜中的调味精品,享有食疗珍品之称。
现在研究表明[5],紫苏含糖量低,富含纤维素、胡萝卜素、矿质元素等,是一种的高档营养蔬菜。
目前紫苏广泛用于保健食用油、调味品、饮料、防腐剂、食用色素等食品行业。
在轻工业方面,紫苏是重要的香料植物,其花序经过水蒸气蒸馏而得到的紫苏油是非常名贵的天然香料之一,可以广泛应用于生产各种各样的香精。
紫苏提取物还可以用来制作色漆、肥皂、涂料、化妆品等[1]。
紫苏的叶、梗和种子均可入药,同时又是一种时尚蔬菜和保健品[1,2]。
紫苏油中含有的亚麻酸达50%-70%,有降血压、降血脂、抑制血小板聚集、减少血栓形成、抗乳腺癌细胞的生长和代谢作用。
紫苏的茎、叶、种子和根均具有很高的营养价值,糖的含量较低,油脂和氨基酸的含量较高。
由于紫苏在医药、食品、轻工业等众多领域都有广泛的应用,紫苏的开发利用研究一直备受到美国、日本、韩国等世界各国关注,各国纷纷开展紫苏产业,开发研究出了包括食用油、药品在内的多种紫苏产品。
我国自20世纪90年代起展开了对紫苏的研究,取得了丰硕的成果[5]。
1.2紫苏油简介
1.2.1紫苏油的成分和性质
紫苏油含有大量的不饱和脂肪酸,研究表明紫苏子油中主要含4种脂肪酸,即α-亚麻酸、亚油酸、硬脂酸、软脂酸,较多文献还报道含有油酸[7]。
紫苏属植物种子出油率有地区及品种的差异。
我国科学家采用气相色谱法对我国各地所产紫苏油中棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸5种脂肪酸组成进行了分析。
其中不饱和脂肪酸占主导地位,达90%以上,其中以α-亚麻酸的含量最高,可达56.1%-64.8%,远远高于其他植物油,是衡量紫苏油油质的重要指标,其次是亚油酸,占30%左右[8]。
把紫苏油经皂化和甲酯化后进行GC-MS分析,从中分离鉴定出12种脂肪酸成分,占总脂肪酸的99.91%,分别为棕榈酸、α-亚麻酸、油酸、硬脂酸、棕榈油酸、十七烷酸、十九碳烯酸、十九烷酸、二十碳三烯酸、二十碳烯酸、花生酸(二十烷酸)、二十一烷酸,后面8种脂肪酸系首次分离得到[9]。
紫苏子油是一种高亚麻酸含量的植物油新资源,α-亚麻酸为全顺式9,12,15-十八碳三烯酸,属ω-3系列多烯不饱和脂肪酸。
紫苏油的理化性质:
折光率为1.475,沸程240-252℃,皂化值197,碘值208,酸值19.1,是优良的干性油,并具有“三高”性质(高碘值、高干性、高不饱和性),是一种理想的食用保健油[10]。
1.2.2紫苏油的功能简介
紫苏油是一种高不饱和度的天然油脂,所含主要成份为α-亚麻酸,含量高达50%-70%,是目前所发现的所有天然植物油中这种脂肪酸含量最高的。
对降低胆固醇、降低血脂、防止动脉粥样硬化、降低脑血栓和心血管疾病的发生有持久作用。
α-亚麻酸摄入人体后在酶的作用下可以在人体内转化成二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),它就是深海鱼油的主要成份,因此又叫植物深海鱼油,比深海鱼油更好的是它不含胆固醇,医学界认为紫苏油制剂是鱼油制剂的换代产品。
α-亚麻酸等ω-3系列不饱和脂肪酸如果被大力的开发,将其代替动物性脂肪,是构筑健康身体所必需的。
此外,开发新产品不再仅限于中医药方剂的传统形式,将会给食品、保健等行业带来巨大的经济效益。
国外研究表明,α-亚麻酸有抗过敏和在逆境中提高适应能力及抑制某些癌细胞的作用。
它在人体内不能自主合成,需由食物供给。
世界卫生组织和联合国粮农组织鉴于α-亚麻酸的重要性和人类普遍摄入不足的状况,建议专项补充α-亚麻酸。
紫苏油的主要成分α-亚麻酸是ω-3系列高度不饱和脂肪酸的母体,是补充人体缺乏ω-3系列不饱和脂肪酸最理想的资源。
人体若缺乏α-亚麻酸会造成脑、视神经系统功能障碍,脂肪代谢紊乱,免疫力下降,缩短寿命[5]。
紫苏油具有降血脂的作用,Zhara等研究证明,紫苏油可以控制人体内血小板凝聚,降低血液中的中性脂质,清除胆固醇,防止血栓形成[4,5]。
经科学实验证明,为目前已知植物油类中最适宜用于炒菜烹饪的油。
同时紫苏油具有健脑并提高记忆力的作用α-亚麻酸所合成的DHA大量存在于大脑皮层,视网膜和生殖细胞中,促使脑神经细胞突触生长,改善记忆力[4,5]。
紫苏油具有抗衰老功,美国专家Watababe试验发现,摄取紫苏油可明显提高红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活力,对延缓机体衰老有明显作用。
紫苏油还有抗癌作用,紫苏油能明显抑制化学致癌剂DMBA所致乳腺癌的发病率,还可降低结肠网膜鸟氨酸脱羧酸的活性,抑制结肠癌的发生[5]。
Horri及日本名古屋市立大学奥山教授等的研究证明,给小白鼠喂食紫苏油,可以使引起过敏的物质白三稀和中间体血小板凝集活化因子(PAF)的产生量明显减少,从而抑制过敏性反应,达到健美皮肤的功效。
紫苏油是纯天然植物性减肥食品,不需要节食且不会引起腹泻,可以阻断人体脂肪合成,防止和消除脂肪围积。
长期食用能很好地调节人体机能,达到减肥健美的目的[6]。
紫苏油里丰富的亚麻酸具有降低血清中胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白的作用,从而抑制血栓形成,预防心肌梗塞和脑梗塞,另外α-亚麻酸还可以降低血粘稠度、增加血液携氧量,一直甘油三酯的合成,增加体内各种脂质的排泄,所以紫苏籽油降脂降压的效果特别明显,尤其是对高血脂及临界性高血压效果更加突出。
紫苏籽油中的α-亚麻酸能有效抑制脂肪合成,并分解脂肪将其排出体外,每天食用可以预防脂肪肝的形成。
能有效的保护肝脏。
而且使用紫苏油还能健脑益智、保护视力。
α-亚麻酸还有抗过敏和在逆境中提高适应能力及抑制某些癌细胞的作用。
它在人体内不能自主合成,需由食物供给[7,8]。
紫苏油具有优生优育的作用,紫苏油含有大量人体所需要的DHA,如果孕妇缺少DHA,胎儿脑细胞数必然不足,严重时会引起弱智或流产。
孕妇在妊娠时长期补充紫苏油,通过母体将DHA输送到胎儿大脑,对胎儿大脑的初期发育起良好作用,并可增加产后乳汁分泌,提高乳汁质量[9]。
紫苏油还能能益智健脑,α-亚麻酸所合成的DHA是大脑的重要物质,它能促进核酸新蛋白质形成,增强大脑神经兴奋性,提高神经反射能力,使人的语言思维能力、反应能力担心提高,对于老年人防止大脑衰老是十分有益的。
摄入足够的紫苏油,大脑中有足够的DHA,能显著促进儿童智力发育,有效地提高学生的学习成绩[11]。
1.3抗氧化活性研究的方法
现在抗氧化活性研究使用的方法有DPPH法,超氧阴离子法和羟基自由基法3种,即对DPPH的清除能力、对羟基自由基的清除能力和对超氧阴离子的清除能力。
1.3.1对DPPH的清除能力
DPPH法是20世纪50年代发明的,最初用于研究食物中的供氢体,后来广泛用于定量测定生物试样、酚类物质和食品的抗氧化能力。
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,该法DPPH根据在517nm处有强吸收和其乙醇溶液呈紫色的性质。
当抗氧化剂存在时,由于与其孤对电子配对而吸收消失或减弱,可以通过计算IC50,TC50(清除DDPH50%时所用的时间)和AE(清除效率)等参数来反映抗氧化剂清除自由基的能力[13,14]。
DPPH法是评价天然抗氧化剂抗氧化活性的一种快速,简便,灵敏的方法。
DPPH法又可分为动力学法和静力学法2种。
动力学方法检测的是添加含有供氢能力的样品后DPPH减弱的速率,表征的是被测物的反应速率,一般用DPPH减弱的起始速率表示;静力学方法检测的是被测物清除DPPH的量,或DPPH与某一供氢体反应的化学计量关系或复杂混合物中活性·OH的量,多以IC50表示[13,14]。
该法的主要缺陷是DPPH自由基会与其他自由基(如烷氧自由基)发生反应,且自由基反应达到稳定状态的时间与抗氧化剂和DPPH的浓度比不成线性关系。
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其结构中含有3个苯环,1个氮原子上有1个孤对电子,呈紫色,在517nm有强吸收。
有自由基清除剂存在时,DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度变小,而且这种颜色变浅的程度与配对电子数是成化学剂量关系的,因此可用于检测自由基的清除情况,从而评价实验样品的抗氧化能力。
1.3.2对羟基自由基的清除能力
羟基自由基(·OH)性质:
羟基自由基(·OH)是一种氧化能力很强的自由基、反应活性大、寿命短(小于10.4s)、存在浓度低。
在已知的氧化剂中,·OH氧化电位为2.80V,仅次于氟的2.87V[14]。
它是一种非选择性的氧化剂,能很容易的氧化各种有机物和无机物,氧化效率高,反应速度快[13]。
过氧化氢与催化剂Fe2+构成的氧化体系通常称为Fenton试剂。
Fenton试剂法是一种均相催化氧化法。
Fenton试剂是1894年由HJFenton发现,并应用于苹果酸的氧化[14],其实质是二价铁离子(Fe2+)和H2O之间的链式反应催化生成·OH,使苹果酸及其它有机物最终氧化为CO2和H2O。
在反应体系内·OH首先与有机污染物RH反应生成游离基R·,R·进一步氧化生成CO2和H2O。
使有机污染物最终得以降解。
在含有亚铁离子的酸性溶液中投加过氧化氢时,在Fe2+催化剂作用下,H2O2能产生两种活泼的氢氧自由基,从而引发和传播自由基链反应,加快有机物和还原性物质的氧化。
其一般历程为:
Fe2++H2O2→Fe3++OH-+·OH
Fe2++·OH→Fe3++OH-
Fe3++H2O2→Fe2++H++HO2·
HO2·+H2O2→O2+H2O+·OH
RH+·OH→R·+H2O
R·+Fe3+→R++Fe2+
甲基紫在酸性溶液中呈紫色,在578nm处有强吸收。
过氧化氢与催化剂二价铁离子发生Fenton反应,产生的·OH具有高的反应活性,会与甲基紫中具有高电子云密度的-C=C-基团发生亲电加成反应,使甲基紫褪色。
通过测定甲基紫在578nm处吸光度的变化可间接测定出·OH的生成量。
当有清除自由基的物质存在时,会阻断甲基紫与·OH的反应,从而使得甲基紫的颜色有所加重,因此可利用抗氧化剂加入前后溶液吸光度的变化来评价物质的抗氧化性强弱[14]。
1.3.3对超氧阴离子的清除能力
常见的超氧阴离子测定方法有化学发光法、NBT法、细胞色素法、邻苯三酚法、肾上腺素法和羟胺氧化法。
但由于干扰因素颇多,实际应用时困难不少。
常用的方法是邻苯三酚法。
邻苯三酚法全称邻苯三酚自氧化一分光光度法。
邻苯三酚自氧化一分光光度法被广泛应用于食品和药品行业的抗氧化剂初步筛选及各种活性物质清除超氧阴离子自由基(·O)的抗氧化功能评价。
邻苯三酚自氧化过程为链式反应,可产生·O,其自身氧化产物的含量可用分光光度仪检测。
在pH值<9.0时,邻苯三酚自氧化速率与生成的·O的浓度呈正相关,故可通过紫外可见光分光光度仪来定量测定抗氧化剂在此体系中对·O的清除作用,间接评价抗氧化剂的抗氧化能力。
但是该法在实际应用中争议较多:
检测波长、缓冲液的组成及pH值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在着较大的差异,同一物质在不同条件下测定结果偏差极大。
因而,建立能够普遍适用的、可较真实反映生物体内环境下物质抗氧化能力的统一条件体系具有重要意义。
邻苯三酚在碱性条件下发生自氧化反应,产生稳定浓度的超氧阴离子自由基(·O)与中间物,中间物又与超氧阴离子自由基反应,得到一种带有颜色的中间产物,此物在紫外有吸收,引起某一波长处吸光值的线性积累,来反应抗氧化剂的清除能力的大小[15]。
通过对邻苯三酚反应体系的吸收光谱,对自氧化速率及邻苯三酚浓度和缓冲液pH值对反应体系产生的超氧阴离子自由基清除率的影响进行了研究。
分光光度法测定邻苯三酚反应体系的检测波长为319.5nm,反应体系体积10mL,反应时间为9min,3mg/L邻苯三酚加入量为0.3mL,Tris-HCl缓冲液pH值为8.2,自氧化速率为0.035;用上述方法研究紫苏油浓度和清除率的关系[16],以IC50值(清除率为50时的浓度值)作为评价指标。
1.4本课题研究的目的及意义
紫苏油含有大量的不饱和脂肪酸,其中以α-亚麻酸含量最高,是目前已知含α-亚麻酸最高的的天然植物油。
紫苏油具有抗衰老、抗癌、抗过敏、抗血栓等作用,是非常理想的食用保健油。
研究抗衰老作用的实质是研究抗氧化作用。
本课题研究紫苏油的抗氧化活性,以9个品种紫苏油为原材料研究紫苏油对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除能力,筛选出抗氧化能力强的紫苏品种,为紫苏保健油产品开发提供实验依据。
2材料与方法
2.1实验材料
实验所用9个紫苏品种的种子:
1号(ZB-2),2号(B-1),3号(BS-10),4号(ZY-7),5号(PX-1),6号(ZB-1),7号(ZY-10),8号(ZY-10-1),9号(TS-1)均由中北大学生物工程实验室提供。
2.2紫苏油的制备
通过自制螺旋式榨油机冷压压榨得到紫苏油,放入冰箱0℃保存。
过程如下:
紫苏籽原料经清理后,把其中一个品种紫苏种子放入螺旋式冷压压榨机的压榨桶中,把压榨桶固定在支架板上,把支架板固定在地上,烧杯放在压榨桶下面。
开始拧螺旋栓,使螺旋栓进入压榨桶,继续旋转,直到螺旋栓不能向下前进为止。
静置10分钟左右,取出烧杯,把烧杯里的粗油放入布氏漏斗中抽滤,取滤液,得到天然纯净紫苏油。
清洗压榨桶,然后重复上述过程,得到9种紫苏油。
2.3主要仪器
表2.1实验设备及仪器一览表
名称
规格型号
产地/品牌
循环水式多用真空泵
SHZ-15B型
河南巩义市英峪华仪器厂
电子天平
JM-B
余姚市纪铭称重校验设备
紫外可见分光光度计
721E
上海光谱仪器有限公司
移液枪
YQ-56
大龙医疗设备(上海)
2.4主要药品及试剂
表2.2主要药品及试剂一览表
药片或试剂名称
纯度规格
生产厂家
1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)
分析纯
天津市风船化学试剂
无水乙醇
分析纯
天津市风船化学试剂
正己烷
分析纯
天津市风船化学试剂
无水硫酸钠
分析纯
国药集团化学试剂
硫酸亚铁晶体
分析纯
国药集团化学试剂
30%过氧化氢
分析纯
上海强顺化学试剂
甲基紫
分析纯
上海强顺化学试剂
2.5实验方法
2.5.1DPPH清除法
DPPH的配置:
准确称取DPPH试剂25.65mg,用95%乙醇溶解定容至500mL容量瓶中,得浓度为51.30mg/LDPPH贮备液(1.3×10–4mol/L),摇匀置于冰箱中冷藏备用。
实验步骤如下:
(1)在10mL比色管中依次加入4.0mL51.30mg/LDPPH溶液和1.0mL95%乙醇,混匀反应稳定后,以95%乙醇液为参比,在517nm处测吸光值,记为A0。
(2)在10mL比色管中依次加入4.0mL51.30mg/LDPPH溶液的溶剂(95%的乙醇溶液)和1.0mL待测试样溶液,混匀反应稳定后,以95%乙醇液为参比,在517nm处测吸光值,记为Ar。
(3)在10mL比色管中依次加入4.0mL51.30mg/LDPPH溶液和1.0mL待测试液,混匀反应稳定后,以95%乙醇液为参比,在517nm处测吸光值,记为As。
(4)计算自由基清除率(Y),得出IC50值(在Y为50%时紫苏油的浓度即为IC50值)。
Y(%)=[1-(AS-Ar)/A0]×100
2.5.2羟基自由基清除法
pH=7.47的Tris-HCl缓冲液的配制:
取36%-38%的盐酸4.29mL用蒸馏水定容到1L得到0.05mol/L的盐酸溶液,稀释5倍得到0.01mol/L的盐酸溶液;称取12.11gTris用蒸馏水定容到1L得到0.1mol/L的Tris溶液;在烧杯内加入45mLTris溶液和45mLHCl溶液,并调节溶液pH为7.47。
FeSO4溶液的配制:
称取5.21mgFeSO4·7H2O晶体用蒸馏水定容到250mL容量瓶中得到1.0×10-3mol/L的FeSO4溶液。
双氧水溶液溶液的配制:
取25μL30%的H2O2用蒸馏水定容到100mL容量瓶中得到0.0075%的H2O2溶液。
实验步骤如下:
(1)在10mL比色管中依次加入1.0mL甲基紫溶液、1.0mLFe2+溶液和1.0mLH2O2溶液,用Tris-HCL缓冲溶液调节pH到4.5后稀释到10mL,混匀反应稳定后,以蒸馏水做参比,在578nm处测吸光值,记为A0。
(2)在10mL比色管中依次加入1.0mL甲基紫溶液溶液和1.0mL待测试样溶液,用Tris-HCl缓冲溶液调节pH到4.5后稀释到10mL。
混匀反应稳定后,以蒸馏水为参比,在578nm处测吸光值,记为Ar。
(3)在10mL比色管中依次加入1.0mL甲基紫溶液、1.0mLFe2+溶液(1.0×10-3mol/L)、1.0mLH2O2溶液和1.0mL待测试样溶液,用Tris-HCL缓冲溶液调节pH到4.5后稀释到10mL。
混匀反应稳定后,以蒸馏水为参比,在578nm处测吸光值,记为As。
(4)计算自由基清除率(Y),得出IC50值(在Y为50%时紫苏油的浓度即为IC50值)。
Y(%)=[1-(AS-A0)/(Ar-A0]×100
2.5.3超氧阴离子
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