医学生物化学实验教案.docx

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医学生物化学实验教案

《医学生物化学实验》教案

第1次课2学时

实验项目

3，5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定还原糖

实验性质

设计性实验

教学目的和要求

1、了解糖的还原性

2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。

3、熟悉分光光度计的使用方法。

教学重点与难点

重点:

绘制标准曲线的方法，分光光度计的使用原理和使用方法。

难点：

标准曲线的应用。

实验材料

1.试剂

（1）1mg/mL葡萄糖标准溶液：

准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。

（2）3，5-二硝基水杨酸试剂：

称取6.3g3，5-二硝基水杨酸并量取262mL2mol/LNaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182g酒石酸钾纳溶于500mL水中），再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000mL贮于棕色瓶中。

（3）未知浓度还原糖。

2.材料

小麦淀粉或玉米淀粉。

3.器材

分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

实验内容

一、实验原理★：

在NaOH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色

二、实验步骤：

1.取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

表1葡萄糖标准曲线制作

管号

1mg/ml葡萄糖标准液（mL）

蒸馏水

（mL）

DNS

（mL）

葡萄糖含量（mg）

光密度值（OD-540nm）

1

0

0.5

0.5

0

2

0.1

0.4

0.5

0.1

3

0.2

0.3

0.5

0.2

4

0.3

0.2

0.5

0.3

5

0.4

0.1

0.5

0.4

6

0.5

0

0.5

0.5

7（未知浓度还原糖）

0.5

0

0.5

0.5

将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min取出，冷却至室温，用蒸馏水补足至5mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。

调波长540nm，用1号管调零点，分别测出2~6号管的光密度值。

2.绘制标曲▲

以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线（电脑Excel完成最好）。

计算7号管还原糖的百分含量。

三、结果与计算▲：

计算出7号管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。

查曲线所得葡萄糖毫克数×提取液总体积/测定时取用体积

还原糖（%）=——————————————————————————×100%

样品毫克数

教学过程中师生活动设计

糖的还原性，具有还原性的糖结构有何特点？

提纲、板书设计

实验原理及反应方程式，实验步骤中表1及计算公式

作业

1、为什么要设置空白对照？

2、标准曲线的定义？

主要

参考资料

[1]《生物化学实验》，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013

[2]《生物化学实验》，董晓燕主编，化学工业出版社，2010

总结分析

1、让学生理解糖定量测定的原理及方法；

2、强调标准曲线的绘制要点；

3、需要和学生一起推导还原糖浓度的公式

《医学生物化学实验》教案

第2次课2学时

实验项目

糖的呈色反应和还原糖检验

实验性质

验证性实验

教学目的和要求

1.了解糖类某些颜色反应的原理

2.学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法

教学重点与难点

重点：

颜色反应鉴别糖的方法

难点：

鉴别糖的反应原理

实验材料

1、仪器：

试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅

2、试剂：

莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液

实验内容

一、实验原理★：

α—萘酚反应：

糖在浓无机盐作用下，脱水生成糠醛衍生物，后者在浓硫酸的作用下能与α—萘酚生成紫红色物质，在糖液面与浓硫酸液面间出现紫色环。

但一些非糖物质对此反应也呈阳性

间苯二酚反应：

在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基醛，后者可与间苯二酚作用生成红色物质。

此反应是酮糖的特异反应。

醛糖在同样条件下呈色反应慢。

托伦反应：

戊糖在浓酸作用下脱水生成糠醛，后者可与间苯三酚结合生成樱桃红色物质。

本反应常用来鉴定戊糖，戊糖此反应最快，可以和其他糖类区分。

二、操作步骤▲：

α—萘酚反应：

先取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支试管中各加入2滴莫氏试剂，混匀。

另外取1支试管，只加2滴莫氏试剂作为空白对照，倾斜4支试管，沿各试管壁缓慢加入浓硫酸约1.5mL，慢慢立起试管，切勿摇动。

试管中液体分成两层，浓硫酸在试液下面。

在两液分界处有紫红色环出现。

观察、记录各管颜色。

间苯二酚反应：

取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液各0.5mL。

再向各管分别加入塞氏试剂2.5mL，混匀。

将3支试管同时置于沸水浴中，注意观察颜色的变化及变化时间。

托伦反应：

取3支试管，分别加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1%葡萄糖溶液各0.1mL，再向各管分别加入托伦试剂1mL，混匀。

将3支试管同时置于沸水浴中，观察、记录颜色的变化及颜变化的时间。

教学过程中师生活动设计

观察和记录各管颜色及颜色变化的时间后，说出各管颜色变化的原因。

提纲、板书设计

原理及操作步骤

作业

1.简述α—萘酚反应原理。

2.可用何种颜色反应鉴别酮糖存在。

主要

参考资料

[1]《生物化学实验》，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013

[2]《生物化学实验》，董晓燕主编，化学工业出版社，2010

总结分析

1、让学生掌握糖显色反应的原理；

2、给学生强调注意观察各管颜色变化的时间

《医学生物化学实验》教案

第3次课2学时

实验项目

蛋白质等电点和沉淀反应

实验性质

基础性实验

教学目的和要求

1.了解蛋白质的两性解离性质。

2.学习测定蛋白质等电点的方法。

3.了解蛋白质变性与沉淀的关系及沉淀蛋白质的方法以及其实用意义。

教学重点

与难点

重点：

学习测定蛋白质等电点的方法及沉淀蛋白质的方法。

难点：

蛋白质变性与沉淀的关系，沉淀的蛋白质不一定表现为变性；变性的蛋白质不一定表现为沉淀。

实验材料

（一）材料

新鲜鸡蛋

（二）试剂

1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200mL

2、1.00mol/L醋酸溶液100mL

3、0.10mol/L醋酸溶液300mL

4、0.01mol/L醋酸溶液50mL

5、蛋白质溶液500mL

5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清:

水=1:

9）

6、pH4.7醋酸—醋酸钠的缓冲溶液100mL

7、3%硝酸银溶液10mL

8、5%三氯乙酸溶液50mL

9、95%乙醇250mL

10、饱和硫酸铵溶液250mL

11、硫酸铵结晶粉末10000mL

12、0.1mol/L盐酸溶液300mL

13、0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL

14、0.05mol/L碳酸钠溶液300mL

15、甲基红溶液20mL

（三）器具

水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、吸管、试管及试管架

实验内容

1.实验原理★：

蛋白质是两性电解质。

在蛋白质溶液中存在下列平衡：

最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。

蛋白质的沉淀反应可分为两类。

（1）可逆的沉淀反应

此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。

如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

提纯蛋白质时，常利用此类反应。

（2）不可逆沉淀反应

此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。

加热引起的蛋白质沉淀与凝固。

蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。

蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。

因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

二、实验步骤：

（一）酪蛋白等电点的测定

（1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。

试管号

蒸馏水

（mL）

0.01mol/L蜡酸

（mL）

0.1mol/L蜡酸（mL）

1.0mol/L蜡酸（mL）

1

8.4

0.6

-

—

2

8.7

-

0.3

—

3

8.0

-

1.0

—

4

7.4

-

-

1.6

（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。

此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。

观察其混浊度。

静置10分钟后，再观察其混浊度。

最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。

（二）蛋白质的沉淀及变性★▲

1、蛋白质的盐析

无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。

盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。

如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。

由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。

加蛋白质溶液5mL于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。

倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？

将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。

此时析出沉淀为清蛋白。

取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。

2、重金属离子沉淀蛋白质：

重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。

取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。

放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？

为什么？

3、某些有机酸沉淀蛋白质

取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。

放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。

4、有机溶剂沉淀蛋白质

取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。

观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。

5、乙醇引起的变性与沉淀

取3支试管，编号。

依下表顺序加入试剂：

试剂（mL）

管号

蛋白质

溶液

0.1mol/L氢氧化钠溶液

0.1mol/L盐酸溶液

95%乙醇

pH4.7缓冲溶液

1

2

3

1

1

1

—

1

—

—

—

1

1

1

1

1

—

—

振摇混匀后，观察各管有何变化。

放置片刻向各管内加入水8mL，然后在第2，3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和之。

观察各管颜色的变化和沉淀的生成。

每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。

解释各管发生的全部现象。

教学过程中师生活动设计

蛋白质沉淀原理，什么是蛋白质变性？

根据性质推测其应用

提纲、板书设计

原理及简要操作步骤

作业

1.什么是等电点？

2.临床上为什么可以用蛋清或牛乳解救误服金属盐的病人？

主要

参考资料

[1]《生物化学实验》，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013

[2]《生物化学实验教程》，王金亭，方俊主编，华中科技大学出版社，2010

总结分析

1、通过原理分析，帮助学生理解“沉淀的蛋白质不一定表现为变性；变性的蛋白质不一定表现为沉淀”；

2、重点区别：

“可逆沉淀”与“不可逆沉淀”

《医学生物化学实验》教案

第4次课2学时

实验项目

蛋白质和氨基酸显色反应

实验性质

基础性实验

教学目的和要求

1.学习和了解常用的几种鉴定蛋白质与氨基酸的方法。

2.了解蛋白质与氨基酸的显色反应原理。

教学重点与难点

重点：

蛋白质与氨基酸的显色反应原理。

难点：

鉴定蛋白质与氨基酸的方法。

实验材料

试剂：

0.5%醋酸铅1mL、10%NaOH、1%CuSO4

器具：

水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、吸管、试管及试管架

实验内容

一、实验原理★：

1.双缩脲反应（biuretreaction）

蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。

2.苯环的黄色反应

Tyr（Trp）+浓硝酸

黄色

Phe+少量浓硫酸+浓硝酸

黄色

3.醋酸铅反应（半胱氨酸和胱氨酸）

R-SH+2NaOH

R-OH+Na2S+H2O

Na2S+Pb2+

PbS+2Na+

PbS+2HCl

PbCl2+H2S

二、实验步骤▲：

1.双缩脲反应（biuretreaction）

取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清:

水=1:

9）约1mL和10%NaOH约2mL，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。

观察现象，记录。

2.苯环的黄色反应

向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。

鸡蛋清溶液（蛋清:

水=1:

9）

管号

1

2

3

4

5

6

材料

鸡蛋清液

指甲

头发

0.5%苯酚

0.3%色氨酸

0.3%酪氨酸

（滴）

4

少许

少许

4

4

4

浓硝酸（滴）

2

20

20

4

4

4

现象

逐滴加10%NaOH后现象变化

3.醋酸铅反应

0.5%醋酸铅1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三样试剂混匀加热，观察现象。

然后冷却至20~30℃，加10滴浓HCL，再将湿润的醋酸铅试纸放于管口，加热，嗅其气味同时观察试纸颜色变化。

教学过程中师生活动设计

含苯环的氨基酸有哪些？

双缩脲反应颜色与什么相关？

提纲、板书设计

原理及简要操作步骤

作业

1.在实验室如何区分核酸和蛋白质？

2.黄色反应中为何会出现深浅不一的黄色？

主要

参考资料

[1]《生物化学实验》，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013

[2]《生物化学实验教程》，王金亭，方俊主编，华中科技大学出版社，2010

总结分析

1、实验过程中让学生重点观察颜色变化的过程；

2、醋酸铅反应的每一步都要记录现象

《医学生物化学实验》教案

第5次课2学时

实验项目

糖的薄层层析

实验性质

基础性实验

教学目的和要求

1.了解薄层层析的基本原理。

2.熟悉薄层层析的操作过程。

教学重点与难点

重点：

掌握薄层层析的吸附原理。

难点：

掌握分配系数，Rf值。

实验材料

四种糖样品、染色液、扩展剂、层析缸、层析板等

实验内容

一、实验原理★：

薄层层析（简称TLC）是在吸附层析基础上发展起来的一种微量而快速的层析法，它是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的，故称薄层层析。

为了使所要分析的样品各组分得到分离，必须选择合适的吸附剂。

硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂，在吸附剂或支持剂中添加合适的粘合剂后再涂布，可使薄层紧贴在玻璃板上。

糖是多羟基化合物在硅胶G薄层上展层时，被吸附的强弱有差异，同时在展开剂中溶解性质也有差异。

吸附力主要与糖的相对分子质量和羟基数有关，一般为三糖〉二糖〉单糖，醛糖〉酮糖〉脱氧糖。

经过适当的溶剂展开后，糖在薄板上的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。

薄层层析与其他方法比有明显的优点：

层析时间短、样品用量范围大（1μg-0.5g）、观察结果方便、可以分离多种化合物等，其灵敏度比纸层析高10-100倍，显色方法甚至可以用腐蚀性显色剂。

而且薄层层析法操作方便，设备简单，所以薄层层析法目前应用范围相当广泛。

二、实验步骤▲：

1．点样

选取制备好的薄板一块，在距底边1.5cm的直线上均匀选4个点。

用毛细管分别点上不同的糖样品于4个点，样品量控制在5-10μg，斑点直径不超过3mm。

点样完毕，立即用电热吹风机吹干样点。

2．展层

将薄板置于盛有层析溶剂的层折缸中，自下向上展层，当展层溶剂到达离薄板顶端约1cm处时取出薄板，在溶剂前沿处作一记号，于80℃下烘干5min。

3．显色

除尽溶剂后，向薄层板上喷雾糖显色剂，于80℃下烘干10min，则各种糖分别显出不同的颜色。

三、实验结果▲：

（1）记下各斑点的位置、颜色，计算Rf值。

（2）鉴定混合糖中糖的种类，并绘出层析图谱。

教学过程中师生活动设计

还有哪些层板方法？

提纲、板书设计

原理及简要操作步骤

作业

何谓Rf值？

Rf值与什么因素有关？

主要参考资料

[1]《生物化学实验》，董晓燕主编，化学工业出版社，2010

[2]《生物化学实验教程》，王金亭，方俊主编，华中科技大学出版社，2010

总结分析

1、点样是本实验的关键，教师在指导学生操作时，强调点样要轻、快，稳、小并且点样点要集中；

2、放展板时，点样点不要浸如展层溶液中

《医学生物化学实验》教案

第6次课2学时

实验项目

酶的特性

实验性质

基础性实验

教学目的和要求

掌握酶促反应速度的几个主要影响因素

了解淀粉水解程度的鉴定。

教学重点与难点

重点：

唾液淀粉酶催化的酶促反应；淀粉水解程度的判断。

难点：

酶活性的影响因素。

实验材料

仪器：

水浴锅、电炉、白瓷板、试管、量筒、漏斗、脱脂棉。

试剂：

0.2%、0.5%淀粉液、0.3%NaCl、0.85%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、1%Na2SO4、pH=5.0、pH=8.0、pH=6.8缓冲溶液。

实验内容

一、实验原理★：

温度与酶促反应速度关系密切。

温度降低时，酶促反应速度降低以至完全停止；随着温度升高，反应速度逐渐加快。

在某一温度时反应速度达到最大值，此温度称酶作用的最适温度。

温度继续升高，反应速度反而下降。

人体内大多数酶的最适温度在37℃左右。

pH值也会影响酶促反应速度。

因为酶本身是蛋白质，pH不仅影响酶蛋白分子某些基团的解离，也影响底物的解离程度，从而影响酶与底物的结合。

当酶促反应速度达到最大值时的溶液pH值，称为该酶的最适pH。

不同的酶最适pH值不尽相同，人体多数酶的最适pH值在7.0左右。

例如唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。

凡是能够提高酶活性，加快酶促反应速度的物质都称为酶的激活剂。

例如Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。

凡是能够降低酶的活性，使酶促反应速度减慢，又不使酶变性的物质称为酶的抑制剂。

例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。

在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘显现的颜色不同来判断：

淀粉（蓝色）

红色糊精（红色）

无色糊精（不显色）

麦芽糖（不显色）

葡萄糖（不显色）

二、实验步骤：

1.制备稀释50倍的唾液淀粉酶：

用蒸馏水漱口清除食物残渣，再含一口蒸馏水一分钟

后使其流入量筒并稀释50倍，混匀备用。

2.温度对酶促反应速度影响实验

（1）取试管3支，编号，各管按下表依次加入各种试剂。

温度对酶促反应速度影响实验加样表

管号123

0.1％淀粉溶液（mL）1.51.51.5

稀释唾液（ml）111

煮沸唾液——1

摇匀

水浴温度37℃0℃37℃

（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KI-I2溶液，混匀，观察各管颜色并解释结果▲

3.pH对酶促反应速度的影响实验

（1）取试管3支，编号，按下表依次加入各种试剂。

pH对酶促反应速度影响实验加样表

管号123

0.2％淀粉液（mL）222

PH5.0缓冲液（mL）3——

PH6.8缓冲液（mL）—3—

PH8.0缓冲液（mL）——3

稀释唾液酶（mL）222

（2）混匀后，将各管置于37℃水浴5分钟后，取2号管中混合液1滴于点滴板上，加1滴KI-I2溶液显色，以检验淀粉的水解程度。

若不是棕黄色，则继续保温，然后每隔1min继续取2号管的混合液1滴于点滴板上，加1滴KI-I2溶液显色，直至变成棕黄色时，向所有试管内依次滴加2滴KI-I2溶液显色。

观察各管颜色并解释结果▲。

4.激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响

（1）取试管4支，编号，按下表依次加入各种试剂。

激活剂和抑制剂对酶促反应速度影响实验加样表

管号1234

0.1％淀粉液（mL）1.51.51.51.5

1％NaCl溶液（mL）2———

1％Na2SO4溶液（mL）—2——

1％CUSO4溶液（mL）——2—

蒸馏水（mL）———2

稀释唾液酶（mL）0.50.50.50.5

（2）混匀后，将各管置于37℃水浴8分钟后，取1号管中混合液1滴于点滴板上，加1滴KI-I2溶液显色，以检验淀粉的水解程度。

若不是棕黄色，则继续保温，然后每隔1min继续取1号管的混合液1滴于点滴板上，加1滴KI-I2溶液显色，直至变成棕黄色时，向所有试管依次滴加1滴KI-I2溶液显色。

观察各管颜色并解释结果▲。

教学过程中师生活动设计

随着淀粉水解，为什么与碘有颜色反应变化？

提纲、板书设计

原理及简要操作步骤

作业

1在作离子对酶活的影响时3、4号管有何作用？

2.在激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响实验中如何证明Cl-是唾液淀粉酶的激活剂？

3.酶的抑制剂与变性剂有何区别？

主要参考资料

[1]《生物化学实验》，董晓燕主编，化学工业出版社，2010

[2]《生物化学实验教程》，王金亭，方俊主编，华中科技大学出版社，2010

总结分析

1、对照实验要注意同步性；

2、不同人的唾液淀粉酶活性不尽相同，让学生注意到样本差异；

3、重点分析激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响

《医学生物化学实验》教案

第7次课2学时

实验项目

Folin-酚试剂法测蛋白质浓度

实验性质

综合性实验

教学目的

和要求

1.学习会用Folin-酚试剂法测蛋白质浓度的方法。

2.巩固分光光度计的使用。

教学重点

与难点

1、重点：

分光光度计的使用

2、难点：

标准曲线的绘制

实验材料

试剂：

标准蛋白溶液，Folin-酚试剂，样品液蛋白质

器材：

分光光度计、恒温水浴锅、试管、移液管

实验内容

一、实验原理★

Folin-酚试剂法测蛋白质浓度的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin-酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。

这两种显色反应产生深兰色的原因是：

在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。

Folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。

在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。

二、实验步骤▲

1.曲线的测定：

取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml）。

用水补