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药物分析实验教案
药物分析实验教案
药物分析实验教案玄光善张丹丹金岩金宏二○○六年第一周:
1,实验室打扫卫生2,发放实验仪器3,提出实验要求附件实验室规则一、实验前必须认真预习实验内容,否则不得进行实验。
二、不迟到、不早退,中途有事须离开实验室时,须经教师同意。
三、爱护室内一切公物,使用贵重仪器应严格遵守规程进行操作。
用完后要在使用卡片上登记,请教师签名,如有损坏要及时报告,以明确责任。
四、实验所用标本、药材及实验室其他物品用后放回原处,严禁携带出室外。
五、实验过程中的废物应放在指定地点,腐蚀性液体必须倒在液缸中,不得倒入下水道中。
六、实验中必须采取严密措施防止火灾、中毒、腐蚀、触电等事故放生,一旦发生意外,应遇事不慌。
七、实验结束后,每人要将台面清理干净,洗净仪器、用具,并放回原处。
八、值日生应认真负责清扫卫生,检查水电、煤气、门窗,保证安全清洁。
第二周巴比妥类药物的鉴别和微晶反应一、目的要求1.掌握巴比妥类药物的鉴别反应原理。
2.掌握化学反应和微晶反应的操作要点。
二、基本原理1.银盐反应巴比妥类药物在适当的碱性溶液中,遇过量硝酸银试液,即产生白色的二银盐沉淀。
2.铜盐反应因巴比妥类药物分子中含有-CONHCONHCO-基团,可互变异构成烯醇型,与铜盐在碱性溶液中作用,产生类似双缩脲的颜色反应。
反应后,巴比妥类药物显紫色或产生紫色沉淀;含硫巴比妥类显绿色,用此反应可以区别巴比妥类和含硫巴比妥类药物。
3.亚硝酸钠-硫酸反应含芳环取代基的巴比妥类药物,与亚硝酸钠-硫酸反应后,显橙黄色,其反应原理可能是苯环上的亚硝基化反应。
4.甲醛-硫酸反应含芳环取代基的巴比妥类药物,与甲醛-硫酸反应显玫瑰红色,其反应产物不明。
5.显微结晶大部分巴比妥类药物,均可应用显微结晶法鉴别。
根据药物本身的晶形,或药物与试剂反应产物的晶形进行鉴别。
本法特别适用于生物样本中微量巴比妥类药物的检验。
思考题1,鉴别实验中样品如何取量?
2,鉴别反应中,所用的仪器要求如何?
3,如何正确掌握巴比妥、苯巴比妥微晶反应技术?
4,如何正确使用显微镜?
第三周葡萄糖的一般杂质检查一、目的要求1.了解药物中一般杂质检查的目的和意义2.掌握葡萄糖中一般杂质检查的项目和限量计算方法。
3.掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐及炽灼残渣限量检查的基本原理和方法。
二、一般杂质检查的基本原理1.氯化物检查法氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用,生成氯化银微粒而显白色浑浊,与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较,测定供试品中氯化物的限量。
Cl-+AgNO3AgCl2.硫酸盐检查法药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用,生成硫酸钡微粒而显白色浑浊液,同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下,用同法处理生成的浑浊比较,判断药物中含硫酸盐的限量。
SO42-+BaCl2BaSO43.铁盐检查法三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氢酸盐生成红色可溶性的硫氢酸铁络离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。
Fe3++6SCN-[Fe(SCN)6]3-加硝酸3滴,煮沸5分钟,可使Fe2+氧化为Fe3+。
4.重金属检查法重金属是指在弱酸性(pH3~3.5)溶液中,能与硫代乙酰胺或硫化钠作用生成硫化物的金属杂质,如银、铅、汞、铜、镉、铋、砷、锑、锡、锌、钴、镍等。
在药品生产过程中遇到铅的机会较多,铅又易积蓄中毒,故检查时以铅为代表。
由于硫代乙酰胺在弱酸性(pH约3.5)溶液中水解,产生硫化氢,可与重金属离子作用,呈有色硫化物的均匀沉淀,可与对照标准液按同法处理比较。
CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SPb2++H2SPbS5.砷盐检查法中国药典主要采用古蔡氏(Gutzeit)法检查砷盐。
其原理是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢,与药物中的微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞(或氯化汞)试纸,产生黄色至棕色的砷斑,与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,可判定药物中含砷盐的限量,其反应如下:
AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2黄色AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3棕色五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢,但生成砷化氢的速度较三价砷慢,故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷,碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。
AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+溶液中的碘离子,与反应中产生的锌离子能形成络合物,使生成砷化氢的反应不断进行。
4I-+Zn2+ZnI42-氯化亚锡与碘化钾存在,可抑制锑化氢生成,因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成砷斑,在实验条件下,100ug锑存在不会干扰测定。
氯化亚锡又可与锌作用,在锌粒表面形成锌锡齐,起去极化作用,从而使氢气均匀而连续地发生。
6.炽灼残渣检查法有机药物经炽灼炭化,再加硫酸湿润、低温加热至硫酸蒸气除尽后,于高温(700~800℃)炽灼至完全灰化,使有机质破坏分解变为挥发性物质逸出,残留的非挥发性无机杂质(多为金属的氧化物或无机盐类)成为硫酸盐,成为炽灼残渣。
如炽灼残渣需留作重金属检查,则控制炽灼温度在500~600℃,否则,将使重金属检查结果偏低。
三、思考题1.药物的一般杂质检查中,为什么称取样品时仅需采用托盘天平,而坩埚的称重需要用精密天平?
2.古蔡氏法检查砷盐,能适用于所有的药物吗?
为什么?
第四周某些药物的特殊杂质检查一、实验目的要求1.熟悉某些药物中的特殊杂质。
2.掌握特殊杂质检查的操作方法。
二、实验方法1.乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查取本品0.10g,加乙醇1ml溶解后,加冷水适量使成50ml,立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸溶液(9100)1ml,加硫酸铁铵指示液2ml后,再加水适量使成100ml]1ml,摇匀;30秒钟内如显色,与对照液(精密称取水杨酸0.1g,加水溶解后,加冰醋酸1ml,摇匀,再加水使成1000ml,摇匀,精密量取1ml,加乙醇1ml,水48ml与上述新制的稀硫酸铁溶液1ml,摇匀)比较,不的更深(0.1%)。
2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查精密量取本品,加乙醇稀释使成每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液。
另取对氨基苯甲酸,加乙醇制成每1ml含30g的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10l,分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,用苯冰醋酸丙酮甲醇(14:
1:
1;4)为展开剂,展开后,取出晾干,用对二甲氨基苯甲醛溶液(2%对二甲氨基苯甲醛溶液100ml,加入冰醋酸5ml制成)喷雾显色。
供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点,其颜色与对照品溶液的主斑点比较,不得更深(1.2%)。
3.硫酸阿托品中莨菪碱的检查取本品,按干燥品计算,加水制成每1ml中含50mg的溶液,依法测定(中国药典2019年版附录17页),旋光度不得过-0.40。
具体测定方法:
测定旋光度时,用读数至0.01并经过检定的旋光计,将测定管用供试品液冲洗数次,缓缓注入供试液适量(注意勿使发生气泡),置于旋光计内,检测读数,即得供试液的旋光度。
用同法读取旋光度3次,取3次的平均数,照下列公式计算,即得供试品的比旋度。
LcatD100][=式中:
[]=比旋度;D=钠光谱的D线;L=测定管长度;t=测定时的温度;=测得的旋光度(已扣除空白);每100ml溶液中含有被测物质的重量(g,按干燥品或无水物计算)。
三、思考题1.设计药物中特殊检查方法的依据是什么?
2.特殊杂质检查的常用方法有哪些?
第五周水杨酸钠的双相滴定法一、目的要求1.掌握双相滴定法的基本原理。
2.掌握双相滴定法的基本操作。
二、基本原理水杨酸钠为水杨酸的碱金属盐,易溶于水,可采用盐酸标准液定量滴定。
但滴定产物游离水杨酸不溶于水,在滴定过程中妨碍终点的观察。
因此,将精密称量的样品置于分液漏斗中,加水溶解后以,甲基橙为指示剂,加入有机溶剂,边用盐酸标准溶液滴定,边强力振摇。
这样,将滴定中生成的水杨酸不断的萃取入有机溶剂中,同时降低水杨酸的离解。
为使滴定完全,最后将有机层分出用水洗涤,使可能混溶于有机层中的的盐洗出,洗液并入水层,再另加入有机溶剂,继续以盐酸标准液滴定至水层显持续的橙红色。
指示剂除用甲基橙外也可用溴酚蓝,终点变化较为明显。
三、思考题双相滴定操作中有哪些平行原则需要遵循?
第六周葡萄糖注射液的旋光法、折光法与快速分析法一、目的要求1.掌握旋光法、折光法和快速分析法(剩余碘量法)测定葡萄糖含量的基本原理和方法,并比较三种分析方法的优缺点。
2.学会正确使用旋光仪和折光仪。
二、基本原理
(一)旋光法测定葡萄糖的基本原理本品为葡萄糖的灭菌水溶液。
葡萄糖的分子结构中五个碳(C*)都是手性碳原子,具有旋光性。
当直线偏振光通过该具有光学活性的化合物溶液时,能引起旋光现象,使偏振光的平面向左或向右旋转。
此种旋转在一定条件下,有一定的度数,称为旋光度。
旋光度()与溶液的浓度(c)和偏振光透过溶液的厚度(l)成正比。
当偏振光透过厚1dm并每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时,在一定波长与温度下测定的旋光度称为比旋光度[]tD,即clatD=100][。
式中,D为钠光谱的D线(589.3nm),t为测定时的温度。
葡萄糖的比旋光度25D][a=+52.75。
所以测定待测葡萄糖溶液的旋光度即可求得其含量。
(二)折光法测定葡萄糖的基本原理光线自一种透明介质进入另一种透明介质的时候,由于两种介质的光密度不同,光速发生变化,即发生折射现象。
一般折光率系指光线在空气中的速度与在供试品中的速度之比值,用tDn表示。
D为钠光谱的D线(589.3nm),t为测定时的温度,折光率与水溶液中溶质浓度的关系可用下式表示:
PFnntDtD+=水FnnPtDtD水=式中P:
百分浓度,即水溶液中含的溶质克数;tDn供试液的折光率;tDn水:
同温度时折光率;F:
折光因素,即被测溶液浓度每增加1%时,其折光率的增长数。
20℃时,tKDn202,葡萄糖的折光因素F=0.00142,所以测定20℃时供试液葡萄糖注射液的折光率就可求其含量。
(三)快速分析剩余碘量法测定葡萄糖的基本原理葡萄糖为一醛糖,具有还原性。
在碱性介质中,过量的标准碘溶液将葡萄糖氧化成葡萄糖酸。
剩余的碘在酸性介质中用硫代硫酸钠回滴。
反应式表示如下:
(1)I2+2NaOHNaIO+NaI+H2OCH2OH(CHOH)4CHO+NaIO+NaOHCH2OH(CHOH)4COONa+NaIO3
(2)过量的I2一部分在NaOH中生成NaIO,继而进一步氧化为NaIO3,一部分由于碱量不足仍以游离碘形式存在。
加酸酸化后,又全部还原以碘的形式存在。
即:
I2+2NaOHNaIO+NaI+H2O3NaIONaIO3+2NaINaIO3+5NaI+3H2SO43I2+3Na2SO4+3H2O(3)硫代硫酸钠回滴I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6三、思考题1.折光法快速分析法比旋光法的结果高还是低?
试分析其原因?
2.该旋光法能否适用于葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的分析?
为什么?
第七周复方乙酰水杨酸片中A、P、C的容量分析法一、目的要求1.掌握复方片剂中各成分测定的基本原理和操作方法。
2.掌握复方片剂的分析特点。
二、基本原理复方乙酰水氧酸片中含有乙酰水杨酸(简称A)、非那西丁(简称P)和咖啡因(简称C)三种主要成分。
各成分之间性质差异大。
乙酰水杨酸为芳酸类药物,具酸性,41027.3=aK,可用酸量法测定;非那西丁为芳酰胺类药物,具酰胺基,呈中性,但具潜在芳伯氨基,可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定;咖啡因为黄嘌呤类生物碱,碱性极弱,14107.0=bK,不能采用一般生物碱的含量测定方法,但可将其与碘发生定量沉淀以后,剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。
三、思考题1.在制剂分析和原料分析中,取样量的描述不同。
以乙酰水杨酸为例,原料分析中:
取本品约0.4g,精密称定,;片剂分析中:
取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于乙酰水杨酸0.4g),。
请回答下列问题:
(1)0.4g是怎样求得的?
这里的约和精密称定是否矛盾?
为什么?
(2)片剂分析中取样量为何如此规定?
能否直接精密称取约0.4g的粉末进行分析,为什么?
2.通过本实验试讨论复方制剂分析的特点。
第八-九周银黄注射液中黄芩和绿原酸的紫外分光光度法一、目的要求1.掌握银黄注射液中黄芩甙和绿原酸的紫外分光光度法测定混合物的基本原理和含量计算方法。
2.学习紫外分光光度法的一般操作步骤。
二、基本原理中药银黄进行提取本品为金银花提取物与黄芩甙提取物的灭菌水溶液。
金银花提取物以绿原酸为代表。
黄芩提取物以黄芩甙为代表。
由于两者结构中均具有大共轭体系,在紫外区有吸收。
绿原酸在324nm处有最大吸收峰。
黄芩甙在276nm处有最大吸收峰,并且吸收光谱发生相互重叠。
本法根据吸收度具有可加和性的原理,测定两个最大吸收波长(max)处的吸收度。
列出联立方程式,求解,即得混合灭菌水溶液中两者的含量。
三、思考题1.吸收系数是物质的物理常数之一,这是一个理论值还是一个经验值?
确定一个药品的吸收系数,需要那些实验条件及具体要求?
2.欲将吸收系数作为定量依据,需要那些实验条件?
第十周复方新诺明片中磺胺甲基异恶唑及甲氧苄氨嘧啶的双波长分光光度法一、目的要求1.掌握双波长分光光度法的基本原理,复方制剂不经分离直接测定各组分含量的方法。
2.熟悉使用单波长分光光度计(751G型)进行双波长法测定。
二、基本原理1.双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理在干扰组分的吸收光谱上吸收系数相同的两个波长处,若被测组分的吸收系数有显著差异,则可用于消除干扰吸收,即直接测定混合物在此波长处的吸收度之差值,该差值与待测物浓度成正比,而与干扰物浓度无关。
用数学式表达如下:
lCElCEAAAAAAAbbaabbaababa∆+∆=+==∆++212121)21(混若b为干扰物所选波长12处的Eb相等,所以0=∆bE则lCEAaa∆=∆混与待测物浓度成正比,与干扰物浓度无关。
2.双波长测定复方新诺明片中磺胺甲基异恶唑(SMZ)含量的基本原理复方新诺明片是含磺胺甲基异恶唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)的复方片剂。
在0.1mol/L氢氧化钠液中,SMZ在257nm波长处有一最大吸收峰,TMP在257nm和304nm波长处为等吸收点,而SMZ在这两波长处的吸收差异大,所以测得样品在257nm和304nm波长处的吸收度差值A与SMZ浓度成正比,与TMP浓度无关。
3.TMP含量测定原理以TMP的max287nm为测定波长,用二元线性回归方程计算的方法测得TMP的含量。
三、思考题1.当确定参比波长时,干扰物如TMP溶液是否需要精确配制?
为什么?
2.在选择实验条件时,是否应考滤赋形剂等辅料的影响?
如何进行?
第十一周合成冰片中龙脑和异龙脑的气相色谱分析法一、目的要求1.学习用面积归一化法测定组分的含量。
2.了解气相色谱仪的结构及正确使用。
二、基本原理归一化法是常用的一种简便、准确的定量方法。
使用这种方法的条件是,样品中所有组分都要流出色谱柱,且在检测器上都产生讯号。
如果各组分的相对校正因子不一样,当测量参数为峰面积时,归一化公式如下:
%100%=siisiiifAfAC归一化法的优缺点是简便、准确,当操作条件如进样量流速变化时,对结果影响较少,如果相对校正因子近似一样时,则归一化公式可以简化为:
%100%=iiiAAC三、思考题1.在气相色谱分析中,样品必须具备什么条件?
2.柱温能否超过柱内担体所涂固定液的最高使用温度,为什么?
3.气化室检测器温度必须高于柱温,为什么?
第十二周磺胺嘧啶的重氮化滴定一、目的要求1.掌握永停滴定法在重氮化滴定中的原理、操。
2.掌握亚硝酸钠标准溶液的配制与标定。
3.了解永停滴定法测定磺胺嘧啶。
二、实验原理永停滴定法是容量分析中用来确定终点的一种方法,已收载在药典。
其测定原理为将两支完全相同的铂电极插入待测溶液中,在两电极间外加一个小电压(10~200mV),根据可逆电对有电流产生,不可逆电对不产生电流的现象,通过观察滴定过程中电流变化的情况确定滴定终点的方法。
此装置简单、操作简便,与外指示剂法和观察费休试液变化结果等比较具有精确度高、测定准确、使用方便。
永停滴定法是根据电流的变化确定滴定终点的方法,其装置如图所示。
磺胺嘧啶是具有芳伯胺结构的药物,它在酸性条件下,可与亚硝酸钠定量进行重氮化反应,生成重氮盐,其反应式如下:
化学计量点前,溶液中无可逆电对,无电流产生,电流检流计指针停在零位(或接近于零位)。
化学计量点后稍有过量的NaNO2,是溶液中有HNO2及其分解产物NO的可逆电对存在,此时在外加小电压的两个铂电极上有如下电极反应:
因此,电路由原来的无电流通过变为有电流通过,检流计指针偏转并不在回零。
滴定用NaNO2标准溶液的浓度是以对氨基苯磺酸为标准物质进行标定,冲淡化反应如下:
同样,用永停滴定法确定磺胺嘧啶样品的滴定终点。
三、仪器和试剂仪器:
ZYT-1型自动永停滴定仪,260型铂电极,酸式滴定管(1支),搅拌棒1根,100mL烧杯试剂0。
1mol/LNaNO2标准溶液,盐酸(12),对氨基苯磺酸(基准试剂),浓氨试液,淀粉-KI试纸,溴化钾,磺胺嘧啶(原料药)三、实验方法
(一)仪器的使用1,器安装与检查:
(1)开启电源开关,将手自动开关置手动档,桉慢滴开关则黄灯亮,按快滴开关则黄绿灯亮。
(2)将极化电压置50mV、灵敏度10-9、门限值0,则黄灯即暗。
过1分钟红灯亮蜂鸣叫。
(3)将自动开关置手动档则红灯暗。
2,赶气泡、调液滴:
(1)装上滴定管,并加入标准液。
(2)将电磁阀门的盖打开,按手动开关的快滴或慢滴,标准也流下,待导管内无气泡时,盖上门盖。
(3)拧动右边电磁阀螺丝,使慢滴速度为0.02~0.03mL/次。
拧动左边电磁阀螺丝,使快滴速度成线性。
3,条件设定:
将电极电压、灵敏度、门限值调规定值(药典规定的灵敏度10-9,电极电位50mV,门限值80)。
4,安装电极:
使用前将电极泡在清洁液中0.5-1分钟,并冲洗干净。
5,调滴定液的刻度:
将标准液装入滴定管中,按慢滴开关,实地定管的标准液为零刻线。
6,调搅拌速度:
将测定样品的烧杯置搅拌器上,插入电极和滴定管口,开启搅拌棒并调搅拌速度。
7,读数:
把开关置自动档,滴定开始,待红灯亮,则重颠倒,记入滴定管上的读数。
8,重复操作:
将开关置自动档,用蒸馏水冲洗电机,从(五)开始重复操作。
(二)0.1MNaNO2标准溶液的配制与标定磺胺嘧啶的含量测定(三)数据处理四、注意事项五、思考题第十三周氯霉素眼药水的高效液相色谱分析法(选择实验)一、目的要求4.学习内标法和外标法测定组分的含量。
5.了解高效液相色谱仪的结构及正确使用。
二、基本原理内标物可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差,精密称取样品后加,入一定量的内标物,然后制成适当溶液进样分析。
根据样品和内标物的重量及其响应的峰面积比,求出某组分的含量。
外标法又称校正法或定量进样法。
本法要求能准确的定量进样。
配制一系列已知浓度的标准液,在同一操作条件下,按同量注入色谱仪,测量其峰面积(或峰高),作锋面积(或峰高)与浓度的标准曲线。
然后在相同条件下,注入同量样品溶液,测量待测组分的峰面积(或峰高),根据标准曲线,计算样品中待测组分的浓度。
三、实验方法
(一)实验条件色谱仪:
YSBDZ性高效液相色谱仪;柱:
YWG系列5mODS柱(15cm15cm);温度:
室温;流动相:
内标法(甲醇;水=60:
40);外标法:
(甲醇:
水=80:
20);流速:
0.7ml/min;检测器:
0.04aufs;记录器:
满标量程1mV;纸速:
4mm/min
(二)标准贮备液的制备1.1mg/ml氯霉素标准贮备液的配制精密称取氯霉素100mg至100ml容量瓶中,以甲醇溶解,并稀释至刻度。
2.2mg/ml对硝基苯酚(内标)标准贮备液的配制精密量取对硝基苯酚约200mg置100ml量瓶中,以甲醇溶解,并稀释至刻度。
(三)内标法测定氯霉素的含量1.相对校正因子的测定分别精密吸取对硝基苯酚标准贮备液各2.5l,置5个10ml容量瓶中,再分别精密加入氯霉素标准贮备液1,2,3,4,5ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,色谱仪基线平稳后,分别进样0.5l得色谱图。
测量对硝基苯酚及氯霉素峰面积或峰高,按公式计算相对校正因子:
内标A内标内标WAWfiii=或内标h内标内标WhWfiii=式中iW-氯霉素重量;内标W-对硝基苯酚的重量;)(iihA-氯霉素峰面积或峰高;)(内标内标hA-对硝基苯酚的峰面积或峰高。
本实验中,由于峰形较窄,可采用峰高法。
2.样品含量测定精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素5.0mg,标示量为2.5mg/ml),置10ml容量瓶中,并加入对硝基苯酚的贮备液2.5ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,进样0.5l,得色谱图。
按下式计算标示量的百分含量:
%100%100%==内标样内标内标h标示量iiifWWhWW(四)外标法测定
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