原子吸收分光光度法.docx
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原子吸收分光光度法
原子吸收分光光度法
原子吸收光谱法 火焰原子吸收光谱法测定水中铜的含量
一、实验目的
1.掌握原子吸收光谱分析法的基本原理
2.了解火焰原子吸收分光光度计的基本结构、性能和使用方法
3.掌握火焰原子吸收光谱法进行定量分析的方法和主要性能指标的检验
二、实验原理
1.分析仪器简介
原子吸收光谱法是根据物质的基态原子蒸气对特征辐射的吸收作用来进行元素定量分析的方法原子吸收分光光度计一般由光源、原子化系统、分光系统、检测系统、读出系统五个主要部分组成(见图1)
图1原子吸收分光光度计结构图
2.实验原理
(1)定量分析方法
原子吸收光谱法中有两种基本定量方法:
校正曲线法和标准加入法标准曲线法简便、快速,但只适用于基体成分较为简单的试样如果溶液中共存基体成分比较复杂,则应在标准溶液中加入相同类型和浓度的基体成分,以消除或减少基体效应带来的干扰,必要时采用标准加入法而不用标准曲线法
在使用标准曲线法时要注意以下几点:
①配制的标准溶液的浓度,应在吸光度与浓度成直线关系的范围内;②标准系列的组成与待测试样组成尽可能相似
③在整个分析过程中测定条件应保持不变;由于仪器的不稳定会使标准曲线的斜率发生变动,在大量试样测定过程中,应该经常用标准溶液对吸光度进行检查和校正
在使用标准加入法时要注意以下几点:
①配制的标准溶液的浓度,应在吸光度与浓度成直线关系的范围内;
②为了得到很好的外推结果,至少应采用4个点来作外推曲线,而且要使第一个加入量产生的吸收值为试样原吸收值的一半左右
③采用标准加入法只能消除基体效应带来的影响,但不能消除背景吸收的影响④对于斜率太小的曲线,也就是当灵敏度很低时,容易引起很大的测定误差
(2)最佳工作条件的选择依据
选择最佳的工作条件能获得最好的灵敏度、检出限和良好的线性范围,不同的仪器与不同的待测元素其仪器工作条件都有所不同,因此在进行元素分析前均需进行工作条件的选择
①分析波长的选择:
分析波长的选择一般根据灵敏度、干扰、仪器条件三方面进行选择对于低含量样品一般采用最灵敏的共振线为分析线;对于高含量样品分析时,为避免样品溶液过度稀释和减少污染机会等问题,则选用次灵敏线;对于分析谱线附近的谱线比较复杂和分析线位于200nm以下的元素,不易选择这些元素的共振线作分析线
②光谱通带的选择:
选择光谱通带的一般原则是:
不降低灵敏度和能分辨开干扰谱线的前提下,应尽可能使用较宽的光谱通带
③灯电流的选择:
从灵敏度、精密度、灯的使用寿命考虑,灯电流的选择原则是:
保证稳定放电和合适的光强输出前提下,尽可能选用较低的工作电流④火焰状态的选择:
火焰状态取决于燃气和助燃气的混合比例燃助比不同,火焰的温度和性质也不同其选择的方法是:
在固定助燃气的条件下,改变燃气流量,吸光度大且火焰比较稳定的燃气流量,就是最佳燃助比
⑤燃烧器高度的选择:
采取调节燃烧器高度,实现光源的辐射从自由原子浓度最大的火焰区域通过具体选择方法是:
在固定燃助比条件下,测定标准溶液在不
同燃烧器高度时的吸光度,选择吸光度最大的燃烧器高度为最佳条件(3)主要性能指标①特征浓度:
在原子吸收分析中常用特征浓度CC来表征灵敏度,特征浓度是指能产生1%吸收或吸光度所对应的待测元素浓度特征浓度愈小,测定的灵敏度愈高
CC
s
A
(mg/L/1%) (1-1)
式中:
s—标准溶液的浓度(mg/L);A—吸光度②检出限:
是指以95%的置信度检测出试样溶液中元素的最低含量,它是仪器的一项综合性指标原子吸收分析中求检出限的方法是:
配制约能产生1%吸光度的标准溶液代替空白溶液进行测量,检出限可用DL表示:
DL
s3
(1-2)
式中:
s—标准溶液的浓度(mg/L),;—多次测量吸光度的平均值;
δ—11次测量空白溶液吸光度的标准偏差;3—置信度系数③精密度:
是表示多次测定某一数据时所得到的数值的离散程度,是由偶然误差引起的在有限次测定中,通常用n次测定中的标准偏差S或相对标准偏差(RSD)来衡量
S
(X
1
n
i
)2
n1
(1-3)
RSD=
S
(1-4)式中:
—n次测定的算术平均值,Xi—单次测定值
一般用6~10次测定结果的标准偏差来表示原子吸收的精密度精密度的好坏取决于随机误差,它反映了分析方法的成熟程度和操作者的技术水平
三、试剂和仪器
1.仪器
220FS原子吸收分光光度计(美国Varian公司);铜空心阴极灯;无油空气压缩机;乙炔气体钢瓶2.试剂
Cu标准储备液(/L);Cu标准工作液(①/L:
吸取/LCu标准储备液于100ml容量瓶中,超纯水定容,摇匀备用;②/L:
吸取/L标准工作液5ml于50ml容量瓶中,二次蒸馏水定容,摇匀备用)
四、方法和步骤
1.原子吸收分光光度计的常规操作
原子吸收分光光度计类型很多,不可能有统一的操作方法,应按每台仪器的说明书进行启动主要操作步骤如下:
(1)开机:
①将空心阴极灯安放到适宜的灯位上②打开仪器电源开关,运行仪器控制程序
(2)工作表格的建立与分析方法的编辑:
根据测试要求添加方法,进行分析方法的编辑和仪器参数的设定仪器模式选择吸光度测量;火焰类型选择空气-乙炔火焰;测量模式火焰法选择最优化测量模式(PROMT);定量方法选择标准曲线法,输入配制标准曲线的浓度,设定测量时间和读数延迟时间;根据测定灵敏度等需要选择适宜的分析波长和推荐狭缝;给空心阴极灯输入适宜的工作电流(3)仪器的调试:
①开空气压缩机,调出口压力为70Kpa;乙炔气的出口压力为75Kpa②进入仪器操作方式,然后按点火开关点燃火焰③在优化方式中完成灯位等参数的调节2.最佳工作条件的选择
(1)灯电流的选择:
分别输入不同的灯电流4、5、6、7mA,在不同的灯电流下测定mg/LCu的吸光度,选择适宜的灯电流
(2)燃助比的选择:
固定空气流量为/min,改变乙炔流量分别为、、、L/min,测定mg/LCu的吸光度,选择适宜的燃助比(3)燃烧器高度的选择:
使用燃烧器高度旋钮改变燃烧器高度,测定mg/LCu的吸光度,选择适宜的燃烧器高度
3.配制标准系列溶液与标准曲线的制作
分别吸取mg/LCu工作液、、、mL于50mL容量瓶中,用二次蒸馏水定容,即配制成含Cu为:
、、、mg/L的标准系列溶液在选定的仪器工作条件下,依次进入空白和各标准溶液,完成标准曲线的制作4.水样的测定
吸入待测水样,仪器显示的读数即为水样中Cu的含量(mg/L)5.主要性能指标的测定
特征浓度:
对/LCu标准溶液进行三次重复测定,求其平均值,由公式1-1计算得到本方法测定Cu的特征浓度
精密度(RSD%):
对/LCu标液进行7次重复测定,由7次测定的吸光度平均值和标准偏差计算本方法测定Cu的精密度
检出限:
对接近于空白溶液的标准溶液进行11次连续测定,将11次测定的标准偏差与/LCu标液的平均吸光度代入公式1-2计算,便得到本方法测定Cu的检出限6.关机
(1)关闭空心阴极灯
(2)吸人去离子水清洗雾化器系统3-5分钟
(3)在点火情况下关乙炔瓶总阀门使火焰自动熄灭这样可保证管路中没有乙炔压力
(4)关闭空压机,关闭通风设施(5)关主机电源开关
7、返回主页,进行报告的编辑与打印
五、数据处理
原子吸收分析实验原始记录
第 页 共 页(其中附图0页、附表0页)
六、思考题
1.原子吸收分光光度计由哪些主要部分组成?
各部分的作用是什么?
2.灵敏度与检出限之间有什么关系?
影响它们的主要因素有哪些?
原子吸收分光光度法与二氮杂菲分光光度法测水中铁的比较 1034
CHINATROPICALMEDICINEVol18No16June2008 中国热带医学2008年第8卷第6期
[检验医学]
原子吸收分光光度法与二氮杂菲分光光度法测水中铁的比较
Comparisonofdetectionofironinwaterwithatomicabsorptionandphenanthrolinespectrophotom2
(PuningMunicipalCenterforDiseaseControlandPrevention,Puning515300,Guangdong,)
林庆光
摘要:
目的 比较原子吸收分光光度法与二氮杂菲分光光度法测定水中总铁的差异 方法 在21份不同类型的水质中分别用两种方法进行分析测定,比较其测定结果,方法的回收率,准确度和精密度 结果 21份水样用二种方法测定结果经配对t检验,结果差异无统计学意义(t=,P>),二氮杂菲分光光度法的回收率为96%~
103%,标准偏差~,相对标准偏差为%~%原子吸收分光光度法的回收率是95%~106%,标准
偏差为~,相对标准偏差为%~% 结论 两种测定方法均能达到较好的准确度和精密度,原子吸收分光光度法工作效率高,但仪器昂贵可根据各自的实际条件选用不同的测定方法
关键词:
分光光度法;原子吸收;二氮杂菲;水;铁
中图分类号:
R-33 文献标识码:
B 文章编号:
1009-9727(2008)6-1034-02 铁在地壳中分布很广,但天然水中铁的含量较低,其溶解度和状态主要取决于水的pH值和氧化─还原电势通常地表水的pH值在~之间,1mg/L以内,但当地表水受污染,或地下水、,5%硝 WFX-120原子吸收分光
,配铁元素空心阴极灯,北京瑞利分析仪器公司
测定条件 波长,狭缝,灯电流2mA,燃烧器高度6nm,空气压力,乙炔压力~,空气流量/mim,乙炔流量/min 实验分析步骤
二氮杂菲分光光度法测水中总铁含量 取150ml三角
铁的含量就有所不同了,之一,,造成缺铁性贫血,部分,如过氧化氢酶和细胞色素都含有铁,成年人每天须摄入铁,男12mg,女18mg[1]但摄入过量的铁也会引起中毒或造成高铁性贫血,一般生活饮用水要求达到铁≤/L[2]
1 材料与方法
测试水样 21份测试水样中水库水5份,溪河水4份,井
μg/ml],0、烧瓶8个分别加入铁标准使用液[ρ(Fe)=
、、、、、、,各加纯水至50ml,
取待测水样50ml于三角烧瓶中,同时作平行样和试剂空白,于上述标准系列及样品瓶中各加入4ml盐酸(1+1),1ml盐酸羟胺(100g/L),电热板上加热煮沸至约30ml,冷却至室温移入
50ml具塞比色管中,各加2ml二氮杂菲溶液(/L),混匀再
水12份,均为送检水样
测定原理
原子吸收分光光度法测定原理 水中铁离子被原子化
各加乙酸铵缓冲液(),各加纯水至50ml混匀,放置15min,于722型光栅分光光度计,510nm波长,用2cm比色皿的纯水作参比测量吸光度,计算出相关回归方程,由回归方程求出样品中总铁含量
原子吸收分光光度法测定水中总铁含量 在()条件下,将标准系列(mg/L)0、、、、、、、及样品依次喷入火焰,在软件工作站绘制标准曲线
后,吸收来自铁元素空心阴极灯发出的共振线,吸收共振线的量与样品中铁元素的含量成正比,在其他条件不变的情况下,根据测量被吸收后的谱线强度,与标准系列比较定量
二氮杂菲分光光度法测定原理 在pH值3~9的条件
下,低铁离子和二氮杂菲生成稳定的橙色络合物,在波长
510nm处有最大光吸收,二氮杂菲过量时,控制溶液~可使显色加快,水样先经加酸煮沸溶解铁的难溶化合物,
并读取样品中总铁含量(mg/L)
2 结果
两种方法测定结果的比较 将送检的21份不同类型的
同时消除氰化物,亚硝酸盐,多磷酸盐的干扰,加入盐酸羟胺将高价铁还原为低价铁,也可以消除氧化剂的干扰
试剂
配制同《生活饮用水检验规范》
铁单元素标准液 由国家标准物质研究中心提供,编
[3]
水样用原子吸收分光光度法(直接法)和二氮杂菲分光光度法用时进行测定,其结果见表1由表1可见两种方法测定结果差异无统计学意义,(经配对t检验,t=,(20)=,
t)
μg/ml]号GBW08616按说明临用时配成[ρ(Fe)=
仪器
二氮杂菲分光光度法仪器 150ml三角烧瓶,50ml具
3作者单位:
普宁市疾病预防控制中心,广东普宁 515300.
中国热带医学2008年第8卷第6期 CHINATROPICALMEDICINEVol18No16June2008
1035
表1 两种方法测定21份水中总铁含量结果(mg/L)编号
1234567891011
,相对标准偏差%~%,见表4
原子吸收分光光度法测定结果的精密度 取7份不同
原子吸
收分光光度法
二氮杂菲分光光度法
编号
12131415161718192021
原子吸收分光光度法
二氮杂菲分光光度法
水样分别进行7次重复测试,所得结果标准差~,相对标准偏差%~%,见表5
表2 二氮杂菲分光光度法测定回收试验结果(mg/L)水样号本底值
1234567
加标值
测得值
回收值
回收率(%)
991099610298101
两种测定方法回收率的比较
二氮杂菲分光光度法测定水中总铁加标回收试验于7
表3 (mg/L)水样号23567
.
.
回收值
回收率(%)
100102989510697104
份水样中分别加入铁标准相当于/L进行回收,其回收率在96%~103%之间,见表2
原子吸收分光光度法测定水中总铁(直接法)收试验 于7份水样中分别加入铁标准相当于1.回收,回收率在95%~106%之间, 取7份不同
水样分别进行7,其测试结果标准差~
表4 二氮杂菲分光光度法测定结果及精密度(mg/L)
水样号
1234567
测定次数及测得值
RDS
(%)
表5 原子吸收分光光度法测定结果及精密度(mg/L)
水样号
1234567
测定次数及测得值
RDS
(%)
(下转第1052页)
1052
CHINATROPICALMEDICINEVol18No16June2008 中国热带医学2008年第8卷第6期
Mycol,1999,37
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多种致病真菌均可产生磷脂酶B随着分子生物学研究的不断深入,念珠菌基因组全序列测定的完成[14],以及各种亚型磷脂酶B的提纯和编码基因的克隆,我们可以生产出各种特异性的念珠菌磷脂酶B作为抗原抗体反应的抗原应用该纯化的抗原与患者血清中的抗体结合,进行高度特异和敏感的诊断性实验,该血清学诊断方法,将能很好的解决传统单纯培养的阳性结果不能很好区分是正常寄生还是已经发生病的问题,做到对念珠菌病的早期诊断
我们可以相信,磷脂酶B的研究成果将有助于进一步明确白色念珠菌的致病机制、耐药机制,为抗真菌药物的开发及白色念珠菌病的诊断和治疗等方面提供了新的前景参考文献:
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收稿日期:
2008-03-17
(上接第1035页)析则可采用共沉淀法,它的最低检出浓度可到达~0.
05mg/L故此,应当尽可能地在实验室配备原子吸收光度计,
3 结论
上述比较结果表明,原子吸收分光光度法(直接法)与二氮杂菲分光光度法测定水中总铁均能得到满意的结果两种测定方法在21份不同水样的测定结果中,经配对t检验结果差异无统计学意义(t=,P /L
[4]
这对于实验室测定水中的金属离子将起到节省人力和时间的作用参考文献:
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科学技术文献出
,测定一份样品所需时间2h原子吸收分光光度
法(直接法)在()条件下最低检出浓度/L,测定一份样品所需时间40min(包括仪器预热),并且可以同时测定锰、锌、铜、镉、铅等物质原子吸收分光光度法(直接法)不仅能够满足生活饮用水检验的需要,而且相对于二氮杂菲分光光度法来说,可以缩短测定时间,提高工作效率所以,在有经济条件的情况下,测定水中总铁应当选用原子吸收分光光度法,并且在微量分析时可选取原子吸收分光光度法中的萃取法,它的最低检出浓度为~/L若须进行痕量分
版社重庆分社,1989.
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收稿日期:
2008-02-29
原子吸收分光光度法常使用哪些定量分析方法 原子吸收分光光度法常使用哪些定量分析方法?
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338发布时间:
2010-4-2710:
29:
51
原子吸收分光光度法的定量依据是吸收定律,其方法主要有标准曲线法和标准加入法
(1)标准曲线法
先配制相同基体的含有不同浓度待测元素的系列标准溶液,在选定的实验条件下分别测其吸光度.以扣除空白值之后的吸光度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线在同样操作条件下测定试样溶液的吸光度,从标准曲线查得试样溶液的浓度使用该方法时应注意:
配制的标准溶液浓度应在吸光度与浓度成线性的范围内;整个分析过程中操作条件应保持不变另外,标准曲线法虽然简单,但必须保证标准样品与试样的物理性质相同,保证不存在干扰物·对于组成尚不清楚的样品不能用标准曲线法
(2)标准加入法
适用于试样的基体组成复杂且对测定有明显干扰时,但在标准曲线呈线性关系的浓度范围内的样品取四份相同体积的试样溶液,从第二份起按比例加入不同量的待测元素的标准溶液.稀释至一定体积分别测定加入标准溶液后样品的吸光度以吸光度对加入的待测元素的浓度作图,得到一条不通过原点的直线,外延此直线与横坐标的交点即为试样溶液中待测元素的浓度为得到较为准确的外推结果·应最少用四个点来作外推曲线需要注意的是,该方法只能消除基体效应的影响,而不能消除背景吸收的影响,故应扣除背景值
(1)灵敏度高
火焰原子吸收分光光度法测定大多数金属元素的相对灵敏度为×10-8~
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