微生物大实验方案.docx
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微生物大实验方案
土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选
及淀粉酶活力的测定
摘要:
从土壤中筛选能够产生淀粉酶的芽孢杆菌并测定其所产淀粉酶活力;首先通过所选土样进行梯度稀释,再根据淀粉酶选择培养基筛选出能够产淀粉酶菌株,再进行纯培养,进而通过结合镜检、生理生化试验结果,查阅博杰细菌手册确定其该菌种属;另一方面,通过种子培养基对菌种进行活化,活化后对其进行发酵培养,进而获得粗酶液;用3,5—二硝基水杨酸显色法对发酵培养粗酶液淀粉酶活力进行精确测定。
关键词:
土壤、产淀粉酶、芽孢杆菌、酶活力
前言:
芽孢杆菌产淀粉酶是工业用淀粉酶的一个重要来源,因此获得产高活力的淀粉酶菌株对于淀粉酶行业来说非常重要;另一方面,通过对获得产淀粉酶的芽孢杆菌以及测定淀粉酶活力这个大实验,不仅仅有效提高我们同学的实验能力,另一方面也加强了同学们之间的相互认识以及团队合作能力。
1、实验目的:
(1)了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术;
(2)掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法;
(3)掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法;
(4)培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力;
(5)对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练;
(6)从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌,并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。
2、材料、试剂及仪器:
1.材料:
(1):
土壤样品:
用五点法取样,选取生化楼下和广州大学缪老师温室蓬附近5cm-10cm土层土样。
(2):
培养基:
(制备好都要进行高压灭菌锅121℃,灭菌20min,属于前期工作)
1 :
葡萄糖蛋白胨培养基(V.P试验用)(%):
葡萄糖0.5蛋白胨0.5氯化钠0.5pH7.27.4
2 :
蛋白胨水培养基(吲哚试验用)(%):
蛋白胨1.0氯化钠0.5PH7.2~7.4
3 :
糖发酵培养基(产酸产气用)(%):
糖酵解培养基(葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖)(%):
蛋白胨0.2氯化钠0.5K2HPO40.021.6%溴甲酚紫0.2糖1.0(pH7.0~7.2)
乳糖发酵培养基:
蛋白胨0.2氯化钠0.5K2HPO40.021.6%溴甲酚紫0.2乳糖1.5pH7.2~7.4
4 :
淀粉培养基(%):
牛肉膏0.5蛋白胨1.0氯化钠0.5可溶性淀粉0.2琼脂2.0pH7.2~7.4
5 :
淀粉选择培养基(%):
可溶性淀粉2.0NH4NO30.2K2HPO40.2MgSO4·7H2O0.05KCl0.05酵母粉0.1琼脂1.5pH自然
6 :
液体发酵培养基(%):
玉米粉2黄豆饼粉1.5CaCl0.02MgSO40.02NaCl0.25K2HPO40.2柠檬酸钠0.2硫酸氨0.075(溶解后加)Na2HPO40.2校正pH值7.0
7 :
种子培养基:
可溶性淀粉0.5%、牛肉膏0.5%、蛋白胨l%、NaCl0.5%、pH7.2~7.4
8 耐盐培养基(%):
蛋白胨1牛肉膏0.3氯化钠2琼脂1.5~2.0蒸馏水
蛋白胨1牛肉膏0.3氯化钠5琼脂1.5~2.0蒸馏水
蛋白胨1牛肉膏0.3氯化钠7琼脂1.5~2.0蒸馏水
蛋白胨1牛肉膏0.3氯化钠10琼脂1.5~2.0蒸馏水
9 酪素水解培养基:
5g脱脂奶粉,50mL蒸馏水;1.5g琼脂,50mL蒸馏水.分开灭菌,现配现用.
10 运动性穿刺培养基(%):
蛋白胨1牛肉膏0.3氯化钠0.5琼脂0.4-0.6蒸馏水(pH7.2~7.4)
1 西蒙氏柠檬酸盐培养基(%):
氯化钠0.5硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.02磷酸二氢铵0.1磷酸氢二钾0.1柠檬酸0.5琼脂2溴麝香草酚蓝溶液4酚红试剂校正pH6.8
2 营养明胶培养基(%):
蛋白胨0.5、牛肉膏0.3、明胶1.2,调pH6.8~7.0
3 酪氨酸水解培养基:
5%2-酪氨酸10mL营养琼脂100mL.用时再混匀
4 苯丙氨酸培养基(%):
酵母浸膏0.3NaCl0.5苯丙氨酸0.1琼脂1.2
磷酸氢二钠0.1定容100mL
5 牛肉膏蛋白胨培养基:
牛肉膏0.5g蛋白胨1.0g琼脂1.5-2.0NaCl0.5g水100mLpH7.2~7.4
⑥ 硝酸盐培养基成分:
硝酸钾0.2g蛋白胨5g蒸馏水 1000mLpH7.4
2.试剂:
简单染色:
草酸铵结晶紫染色液
革兰氏染色:
草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、潘红试剂;
芽孢染色:
5%孔雀绿溶液,石炭酸复红液;香柏油、二甲苯
吲哚试验:
乙醚、吲哚试剂
V.-P.试验:
40%NaOH溶液、α-奈酚
MR实验:
甲基红
糖发酵实验:
溴甲酚紫
淀粉酶活力测定:
1%3,5-二硝基水杨酸试剂
无菌生理盐水制备:
称0.85gNaCl至盛有100mL蒸馏水的三角瓶中,塞上棉塞,塞外包上一层报纸,置加压蒸汽灭菌锅内在121℃下灭菌20min。
碘液等
3.仪器:
无菌玻璃涂棒无菌吸管接种环无菌培养皿三角瓶烧杯洗瓶玻棒试管擦镜纸接种环酒精灯载玻片吸水纸等。
恒温摇床恒温培养箱高压蒸汽灭菌箱超净工作台水浴箱移液管涂布器显微镜。
3、实验过程:
(1)土壤稀释液的制备:
1.从两个土样中分称取土样5g,分别放入装有45mL无菌生理盐水的锥形瓶中,振荡10min,即为稀释10-1的土壤悬浮液。
2.将锥形瓶加塞、包扎、摇匀(无菌室里),利用恒温水浴装置80℃左右水浴,水浴锅温度恒定后维持10min,制成10-1g/ml的土壤悬液。
3.再分别另取装有9mL无菌生理盐水试管12支,用记号笔编上10-2、10-3、10-4、10-5(注意标明土样类型)。
取已稀释成10-1土壤液,振荡后静止5min;用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入编号10-2的无菌水的试管中,并在试管内轻轻反复吹吸数次,使之充分混匀,即成10-2土壤稀释液。
同样的方法从10-2的试管中吸取1mL稀释液加入编号为10-3的无菌水试管中,混匀后即为10-3土壤稀释液,依次连续稀释土壤稀释液至10-5。
(2)分离纯化
1.涂布分离:
各用一支新的无菌枪头,由低浓度开始,依次从两个土样中的10-2、10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液中各吸取100ul,对号移入已写好稀释度的淀粉选择培养基平板上,用灼烧冷却后的无菌玻璃涂棒涂匀。
每个浓度做2个平板(重复实验)。
在37℃恒温培养箱中培养24h。
2.菌株的纯化(连续划线):
次日,灌淀粉培养基平板,待淀粉培养基平板凝固后,各组分别用接种环以无菌操作挑取淀粉选择培养基平板上长出的单菌落,挑取少量菌种进行单染色,然后将有芽孢的菌种在淀粉培养基上连续划线法划线,倒置于37℃恒温培养24h。
3.分别挑取少量菌种进行单染色,再次确定菌种是否长芽孢,将长芽孢的菌种分别接种到2个平行的淀粉培养基上(要对应接种,注意标记),倒置于37℃恒温培养24h。
4.次日将碘液滴加其中一个培养基上观察水解圈大小,对应一个培养基挑选菌种接种
5.重复2次,每种菌点接法,做两个平行实验,一个加碘液,另外一个不加碘液;对应挑取(对应标记),每个平板中选取有水解圈较大且长势较好的单菌落,以获得长势较好,较纯的菌种。
(3)菌种保存
1.斜面保存菌种:
灌斜面平板,将平板菌株对应接入到斜面培养基中,每株菌做2个斜面,并做好标记,置于37℃恒温培养24h,然后4℃冰箱保存。
4、镜检:
单染色:
1、涂片:
在玻片中央滴上一小滴蒸馏水,再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中,并充分混匀涂成薄膜。
2、干燥:
将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。
3、固定:
涂面朝上,通过微火2-3次。
4、染色:
待玻片泠却后加结晶紫(或者石炭酸复红)1-2滴于涂片上,覆盖涂面染色1-2分钟。
5、水洗:
倾去染色液,用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止(注:
勿冲去菌体)。
6、干燥:
自然干燥,或用吸水纸吸干。
7、镜检:
油镜观察并绘图。
从最终分离纯化的菌落中选取部分菌体进行革兰氏染色和芽孢染色,并记录菌体细胞的形态结构等情况。
(1)革兰氏染色:
1.涂片、干燥及固定
2.初染:
在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1min,倾去染液,流水冲洗至无紫色。
3.媒染:
先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1min,后水洗。
4.脱色:
除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约15-20s,后立即用流水冲洗。
5.复染:
滴加番红染色液,染3-5min,水洗后用吸水纸吸干。
6.镜检:
油镜观察染色结果,并绘图。
(2)芽孢染色:
1、涂片、干燥及固定
2、加温染色:
加5%孔雀绿染色液于玻片上,微火加热至冒蒸汽维持5分钟。
3、水洗将玻片冷却,水洗直到流出的水中无绿色为止。
4、常温复染:
加番红染色2分钟后,倾去染色液,水洗,直接用吸水纸吸去余水。
5、镜检:
用油镜观察绘图。
5、生理化学实验:
1.吲哚实验:
1 试管标记:
取装有蛋白胨水培养液的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中,空白对照管不接种,置37℃恒温箱中培养24h。
3 观察记录在培养液中加入乙醚1~2ml,经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中,静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面,此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂(加入吲哚试剂后切勿摇动试管,以防破坏乙醚层影响结果观察),如有吲哚存在,乙醚层呈现玫瑰红色,此为吲哚试验阳性反应,否则为阴性反应。
4 阳性用“+”、阴性用“-”表示。
2.V-P实验:
1 标记试管:
取装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管,编号每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中,空白对照管不接菌,置37℃恒温箱中,培养24h。
3 观察记录取出以上试管,充分振荡2min。
每管分别加入40%NaOH溶液10~20滴,并加等量α-奈酚,振荡试管,以使空气中的氧溶入,置37℃恒温箱中保温15~30min后,若培养液呈红色,记录为V.P.试验阳性反应(用“+”表示);若不呈红色,记录为V.P.试验阴性反应(用“-”表示)。
3.MR实验:
1 标记试管:
取装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管,编号每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中,空白对照管不接菌,置37℃恒温箱中,培养24h。
3 观察记录取出以上试管,滴加2--3滴甲基红试剂,观察现象,培养基变红为阳性,培养基变黄为阴性。
4 阳性用“+”、阴性用“-”表示。
4.糖发酵实验:
1)葡萄糖发酵实验:
1 标记试管:
取装有(葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖)发酵培养基的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中,空白对照管不接菌,置37℃恒温箱中,培养24h。
3 观察记录观察试管颜色变化及德汉式小管的气柱变化。
产酸:
指示剂(溴甲酚紫),由紫色(pH6.8以上)变为黄色(pH5.4以下)
4 不利用:
用“-”表示
5 产酸:
用“+”表示
6 产酸产气:
用⊕表示
2)乳糖发酵实验:
1 标记试管:
取装有乳糖发酵培养基的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中,空白对照管不接菌,置37℃恒温箱中,培养24h。
3 观察记录观察试管颜色变化及德汉式小管的气柱变化。
产酸:
指示剂(溴甲酚紫),由紫色(pH6.8以上)变为黄色(pH5.4以下)
4 不利用:
用“-”表示
5 产酸:
用“+”表示
6 产酸产气:
用⊕表示
5.耐盐性试验
1 标记试管:
取装有耐盐培养基的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 将分离获得的细菌分别接种在NaCl浓度为2%,5%,7%,10%,的牛肉膏蛋白胨液体培养基中,置37℃恒温箱,培养24h,观察生长情况。
3 (“—”不生长,“+”生长较差,“++”生长一般,“+++”生长良好。
)
6.酪素水解试验
1 将两液分别融化,混匀倒平板,即成牛奶平板。
2 将菌种点接在平板上,37℃恒温箱中培养24h.
3 记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明.
7.运动性试验
1 使用半固体营养琼脂试管,将接种针从直立柱培养基中央自上而下直刺到离管底1~1.5cm处,沿原穿刺线拔出接种针.
2 于37℃恒温培养箱培养24h。
3 观察是否产生树根状生长,若有,则菌株有鞭毛,若直立生长,则菌株无鞭毛.
8.柠檬酸盐试验
1 标记试管:
取装西蒙斯氏柠檬酸盐培养基的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 接种菌种于试管,置于37℃恒温箱中培养24h。
3 观察结果,若培养基变蓝色,则表明该菌能利用柠檬酸盐作为碳源而生长,即为阳性反应,以“+”表示。
若培养基仍为绿色则为阴性反应,以“-”表示。
9.明胶水解试验
1 穿刺接种、培养先用接种针在斜面上挑取少量菌苔。
左手拿直立柱试管,在火焰旁用右手小指和掌边拔出棉塞。
随之将试管口朝下,同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上直刺到离管底1~1.5cm处(切勿穿透培养基)。
然后沿原穿刺线拔出接种针。
管口过火,塞上棉塞,插在试管架上。
灼烧接种针上残菌。
各种杆菌分别接种2支直立柱试管,标记,要与斜面菌种标记相对应。
另设一支不接种,作为空白对照。
2 将已接种的直立柱试管置37℃恒温培养基培养24h后取出,
3 通过透射光目测细菌在穿刺线上的生长情况,并记录结果。
凡能产生蛋白酶的细菌,可使明胶自表面开始沿穿刺线逐渐分离,使明胶柱液化呈火山口状,芜菁状,漏斗状、囊状或层状等不同的形状。
10.酪氨酸水解试验
1 将营养琼脂融化,冷却至温热,与L-酪氨酸混匀.分别将菌种点接在平板上,2个平行实验一个空白实验。
2 将培养基置于37度培养24h。
3 记录菌落周围是否有透明圈.若有,则菌株能够水解酪氨酸.
11.硝酸盐还原实验
有些细菌具有还原硝酸盐的能力,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。
亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。
① 取硝酸盐培养基,做上标记。
将菌种接种于培养基中,2个平行实验,空白对照不用接种,
② 于37℃恒温箱中培养24h。
临试前将试剂的A(磺胺酸冰醋酸溶液)和B(α-萘胺乙醇溶液)试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面,立即或于10min内呈现红色即为试验阳性,若无红色出现则为阴性。
(用α-萘胺进行试验时,阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果。
进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。
α-萘胺具有致癌性、故使用时应加注意。
)
12.苯丙氨酸脱氨酶测定
有些芽孢杆菌具有苯丙氨酸脱氨酶,能使苯丙氨酸氧化脱氨形成苯丙酮酸。
苯丙酮酸与FeCl3起反应后呈现蓝绿色。
1 编号:
取苯丙氨酸斜面培养基,分别做上标记每组2个平行实验1个空白对照。
2 接种:
按标记接种后置于37℃恒温箱中培养24h。
3 观察:
加10%FeCl3试剂4-5滴于斜面上,若斜面与试剂相接触的界面出现蓝绿色者为阳性反应,以“+”表示;无变化则以“—“表示。
13.马尿酸盐水解试验
马尿酸钠1g,牛肉膏蛋白胨培养基100ml;三氯化铁试剂:
三氯化铁12g溶于2%盐酸100ml中;将马尿酸钠和牛肉膏蛋白胨培养基(pH7.8)加热溶解后分装于试管中,每管4ml,121℃灭菌,备用。
1 标记试管:
取装西马尿酸钠和牛肉膏蛋白胨培养基的试管,编号,每种菌株做两个平行实验,最后一个空白对照实验。
2 取纯菌接种培养基,37℃培养24h.
3 观察培养基液面。
如液面下降时以蒸馏水补充之。
离心沉淀,取上清液0.8ml加入三氯化铁试剂0.2ml,立即混匀。
经10~30min观察结果,出现稳定沉淀物为阳性。
反之为阴性。
14.温度对微生物生长的影响(温度试验)
1 将牛肉膏蛋白胨培养基熔化倒平板。
(培养基厚度为一般培养基的1.5到2倍)
2 取牛肉膏蛋白胨固体培养基,分别进行标记。
在上述各平板中分别划线接种不同的菌种,每个菌种重复接种2个平板,1个空白对照。
3 各取每个菌种两套平板倒置于4℃、20℃、37℃,60℃下保温培养24小时,观察细菌的生长状况。
(“—”不生长,“+”生长较差,“++”生长一般,“+++”生长良好。
)
菌种的生化特性:
根据生理生化试验的结果,查阅伯杰氏细菌鉴定手册,确定菌株的菌种。
本次实验根据从伯杰式细菌学手册芽孢杆菌属中检索到的芽孢杆菌的生理生化特点,选取能从土壤中分离到的芽孢杆菌种为标准菌种,其生理生化指标如下表:
革兰氏
耐盐试验
VP试验
吲哚试验
糖发酵试验
糖发酵气
柠檬酸盐
明胶试验
葡
木
阿
甘
枯草芽孢杆菌
+
+
+
+
+
+
+
—
+
+
地衣孢杆菌
+
+
+
+
+
+
+
—
+
w
蜡状孢杆菌
+
+
+
+
—
—
—
—
+
巨大孢杆菌
+
+
+
+
w
w
w
—
+
+
多粘孢杆菌
d
+
—
+
+
+
+
+
环状孢杆菌
d
—
—
+
+
+
+
—
w
凝结孢杆菌
+
—
d
—
+
w
w
w
—
蜂房孢杆菌
d
—
+
+
+
—
—
—
—
坚硬孢杆菌
+
+
—
—
w
w
w
+
—
短孢杆菌
d
—
—
—
d
—
—
w
—
球形孢杆菌
d
w
—
—
—
—
—
—
—
差大
巴氏孢杆菌
d
—
—
—
w
马尿酸盐水解
运动
试验
苯丙氨酸脱氨
硝酸盐还原
酪素水解试验
卵黄反应试验
温度试验
最高
最低
枯草芽孢杆菌
—
+
+
+
—
45-55
5-20
地衣孢杆菌
—
+
+
+
—
50-55
15
蜡状孢杆菌
w
+
+
+
35-45
10-20
巨大孢杆菌
w
w
+
—
35-45
3-20
多粘孢杆菌
+
—
+
+
35-45
5-10
环状孢杆菌
w
—
—
w
35-50
5-20
凝结孢杆菌
+
—
w
w
55-60
15-25
蜂房孢杆菌
w
—
—
+
35-45
15-20
坚硬孢杆菌
w
w
+
+
40-45
5-20
短孢杆菌
+
—
w
+
40-60
10-35
球形孢杆菌
+
+
—
w
30-45
5-15
巴氏孢杆菌
+
d
d
33-42
阳性:
+;阴性:
—;阳性和阴性不稳定:
d;弱阳性:
w;
通过对目的菌种进行多项生理生化实验,对比伯杰式手册的实验结果,从而鉴定出目的菌的种别;
6、淀粉酶活力测定
1、粗酶液的制备:
将活化的芽孢杆菌(直接从保存在4摄氏度拿取)菌液接种于种子培养基中(30/300mL锥形瓶),37℃,培养12h。
然后以5%的接种量接种于发酵培养基中(50/500mL锥形瓶)摇床培养,180r/min,37℃培养24h。
离心(4000r/min,20min),收集上清液即为待测粗酶液。
2、标准曲线绘制:
试剂
管号
1
2
3
4
5
6
7
麦芽糖标准液(mL)
0
0.2
0.6
1.0
1.4
1.8
2.0
蒸馏水(mL)
2.0
1.8
1.4
1.0
0.6
0.2
0
麦芽糖含量/mg
0
0.2
0.6
1.0
1.4
1.8
2.0
3,5-二硝基水杨酸(mL)
1.5
标准样液配制按上表配制完成,摇匀,置沸水浴中煮沸5min。
取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20ml。
以一号管作为空白对照管,540nm比色测定吸光度。
以麦芽糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
三、淀粉酶活力测定—3,5—二硝基水杨酸显色法
取20mL具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥、编号。
取粗酶液1.0mL→2%的可溶性淀粉1.0mL,蒸馏水3.0mL,于40℃水浴中预热5min→加0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH值6.0)1.0mL,于40℃水浴中保温30min→加入1.5mL3,5-二硝基水杨酸,沸水中5min,迅速冷却,加蒸馏水定容至20mL。
空白对照加发酵液后加pH3.6的硫酸钝化淀粉酶,使酶失活,其余步骤同上。
定容后,摇匀,用紫外可见分光光度计测定540nm下的OD值。
试剂
管号
1
2
3
4
5
6
粗酶提取液(mL)
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2%可溶性淀粉(mL)
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
蒸馏水(mL)
3.0
3.0
3.0
3.0
3.0
3.0
40℃水浴中预热5min
柠檬酸缓冲液(mL)
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
40℃水浴中保温30min
DNSmL
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
OD(540nm)
在上述条件下以单位体积样品在30min释放1mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位(MMU)表示酶活性。
酶活性计算方程:
α-淀粉酶酶活力(U/mL)=(麦芽糖毫克数xN)/T
N-酶液稀释倍数
T为反应时间(min)
7、注意事项:
1、要严格按照培养基配方配制培养基,防止杂菌污染。
2、观察结果时要注意滴加药量及反应时间。
3、严格无菌操作,防止污染情况的发生。
4、称药品用的药匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖。
调pH时要小心操作,避免回调。
不同培养基各有配制特点,要注意具体操作。
5、革兰氏染色时注意脱色的时间的控制,过长或过短都会影响实验结果。
6、进行染色鉴定时,都应有已知的对照菌种在同等条件下染色,然后进行对比记录结果。
7、在芽孢染色中,应注意温度的控制,避免染料在玻片上蒸腾,冒出蒸汽,否则影响实验结果。
8、每次包扎或试管编号都要标注清楚,避免实验数据错乱。
9、灭菌方法:
高压灭菌锅121℃,灭菌20min。
10、这次实验中用分光光度计是所用的比色皿为玻璃比色皿(可见光)
8、结果与
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