常见蛋白酶抑制剂之欧阳育创编.docx

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常见蛋白酶抑制剂之欧阳育创编

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时间：

2021.02.04

创作：

欧阳育

蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全

日期：

2012-06-13  来源：

互联网

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相关专题：

解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展

摘要:

 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。

在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。

以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度

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蛋白酶抑制剂

破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。

在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。

以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。

由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。

在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。

常用抑制剂

PMSF

1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）;

2）10mg/ml溶于异丙醇中;

3）在室温下可保存一年;

4）工作浓度:

17~174ug/ml（0.1~1.0mmol/L）;

5）在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。

EDTA

1）抑制金属蛋白水解酶;

2）0.5mol/L水溶液，pH8~9;

3）溶液在4℃稳定六个月以上;

4）工作浓度:

0.5~1.5mmol/L.（0.2~0.5mg/ml）;

5）加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。

胃蛋白酶抑制剂（pepstantin）

l）抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;

2）1mg/ml溶于甲醇中;

3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;

4）1作浓度:

0.7ug/ml（1umol/L）

5）在水中不溶解。

亮抑蛋白酶肽（leupeptin）

1）抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B;

2）lOmg/ml溶于水;

3）储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;

4）工作浓度0.5mg/ml。

胰蛋白酶抑制剂（aprotinin）

1）抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;

2）lOmg/ml溶于水，pH7~8

3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;

4）工作浓度:

0.06~2.0ug/ml（0.01~0.3umol/L）;

5）避免反复冻融:

6）在pH>12.8时失活。

蛋白酶抑制剂混合使用

35ug/mlPMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂

0.3mg/mlEDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂

0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂（Pepstatin）…………酸性蛋白酶抑制剂

0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶（Leupeptin）……………广谱蛋白酶抑制剂

常用蛋白酶抑制剂表

抑制剂

靶蛋白酶

有效浓度

储藏溶液

注解

Antipain

木瓜酶和胰酶

50μg/ml

1mg/ml水溶液

对胰凝蛋白酶，胃液素，纤溶酶无影响

APMSF

胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶

10-40μg/ml或10-20μM

100mmol/L水溶液

毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶

抑肽酶

丝氨酸蛋白酶

0.06-2μg/ml

10mg/mlPBS溶液

避免反复动冻融

抑氨肽酶B

氨基肽酶

40μg/ml

溶于甲醇

不能抑制羧肽酶

Calpain抑制剂Ⅰ、Ⅱ

Calpain（钙依赖性半胱氨酸蛋白酶）

Ⅰ:

17μg/ml

Ⅱ:

7μg/ml

溶于乙醇

可渗透薄膜

抑糜朊酶素

胰凝乳蛋白酶

6-60μg/ml

溶于DMSO

B.M.综合酶片

丝氨酸，半胱氨酸和金属蛋白酶

每10-50ml细胞提取液内加一片

不含EDTA

EDTA

金属蛋白酶

0.2-0.5mg/ml或0.5-1.3μmol/L

500mmol/L水溶液pH=8.0

抑蛋白酶醛肽

丝氨酸蛋白酶，巯基蛋白酶

0.5-2μg/ml

10mg/ml水溶液

a2-巨球蛋白

广谱

1∪/ml

100∪/mlPBS溶液

避免接触还原剂

PefablocSC（boe-hringerMannheim）

丝氨酸蛋白酶

0.1-1.0mg/ml或0.4-4mmol/L

100mM水溶液

无毒，在中性pH下较PMSF稳定

胃蛋白酶抑制剂

酸性蛋白酶

0.7μg/ml

1mg/ml甲醇溶液

PMSF

丝氨酸蛋白酶

17-170μg/ml

10mg/ml异丙醇溶液

每一操作步骤时新鲜加入

TLCK

胰蛋白酶

37-50μg/ml

1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸盐溶液，pH=5.0

对胰凝蛋白酶无影响

TPCK

胰凝乳蛋白酶

70-100μg/ml

3mg/ml乙醇溶液

对胰蛋白酶无影响

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首页实验实验中心常用蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度

常用蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度

2014-06-0923:

01:

02 来源：

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[常用蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度] 在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）以防止蛋白质的降解。

另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂（proteas [蛋白酶抑制剂 分子量 溶解性 磷酸酶抑制剂 工作浓度 贮存液 胰蛋白酶 丝氨酸]

在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）以防止蛋白质的降解。

另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor），EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠 ，BETA-glycerophosphate甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。

对这些蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。

蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）

PMSF：

特性：

丝氨酸蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor），如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）。

溶解性：

溶于异丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。

在水溶液中不稳定。

在100%异丙醇，+25℃时稳定至少9个月分子量：

174.2

使用：

贮存浓度：

200mM，工作浓度：

1mM

Leupeptin 亮肽素

特性：

抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B

溶解性：

高度溶于水（1mg/ml）。

4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月

分子量：

C20H38N6O4x1/2H2SO4:

475.6

C20H38N6O4x1/2H2SO4xH2O:

493.6

使用：

贮存浓度：

1mg/ml，工作浓度0.5ug/ml（1mM）

Aprotinin抑肽酶

特性：

丝氨酸蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor），抑制纤维蛋白溶酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。

不抑制凝血酶或因子X。

溶解性：

易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1M，pH8.0）。

pH约7-8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。

避免反复冻融,pH>12.8的碱性环境可使其灭活。

分子量：

6,512

使用：

贮存浓度:

1mg/ml,工作浓度：

0.06–2.0ug/ml（0.01–0.3uM）

Pepstatin胃蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）

特性：

抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，肾素，组织蛋白酶D，凝乳酶，许多微生物酸性蛋白酶

溶解性：

溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇，过夜溶解可达到1mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。

4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存1个月

分子量：

 685.9

使用：

贮存浓度：

1mg/ml，使用浓度：

0.7μg/ml（1μM）

EDTA-Na2

特性：

金属蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）

溶解性：

溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月分子量:

 372.24

使用：

工作浓度：

0.2–0.5mg/ml（0.5–1.3mM），不需现用现配，在溶液pH值调至8-9时再加入。

磷酸酶抑制剂

NaF氟化钠

溶解性：

溶于水

分子量：

 41.99

使用：

 贮存液：

5M 工作浓度：

10-20mM

Na3VO4 原矾酸钠

分子量：

183.91

溶解性：

溶于水，我们购买过来的是原矾酸钠.原矾酸钠需要经过处理以后才能成为激活的矾酸钠,激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用.原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是:

100mM原矾酸钠激活储存液配制

（1）.取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10（颜色变黄）

（2）.煮至无色

（3）.室温冷却

（4）.重调PH至10

（5）重复（１）（２）（３）（４）直至溶液保持无色，并且ＰＨ稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管.（终浓度为1mM）,-20度保存.

使用：

 贮存液：

100mM 工作浓度：

1mM

BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠

溶解性：

溶于水

分子量：

306.11

使用：

贮存液：

100mM 工作浓度：

25mM

Na2P2O4 焦磷酸钠

溶解性：

溶于水

分子量：

265.9

贮存液：

100mM,工作浓度：

1-2mM

关键词：

蛋白酶抑制剂分子量溶解性磷酸酶抑制剂工作浓度贮存液胰蛋白酶丝氨酸

时间：

2021.02.04

创作：

欧阳育