实验常用试剂缓冲液的配制方法.docx
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实验常用试剂缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1MTris-HCl□组份浓度1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L
□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTris-HCl□组份浓度1.5MTris-HCl(pH8.8)□配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TEBuffer□组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL
□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mM
Na2HPO4,2mMKH2PO4□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸铵□组份浓度10M醋酸铵□配制量100mL
□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:
醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、Tris-HCl平衡苯酚□配置方法
1.使用原料:
大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意:
苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3.苯酚平衡:
因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,
同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法
1.说明:
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:
24:
1)。
氯仿可使蛋白(25:
24:
1)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配置方法:
将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:
1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10%(W/V)SDS□组份浓度10%(W/V)SDS□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3.将溶液定容至100mL后,室温保存。
10、2NNaOH□组份浓度2NNaOH□配制量100mL□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
11、2.5NHCl□组份浓度2.5NHCl□配制量100mL
□配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
2.室温保存。
12、5MNaCl□组份浓度5MNaCl□配制量1L
□配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
13、20%(W/V)Glucose□组份浓度20%(W/V)Glucose□配制量100mL
□配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
14、SolutionI□组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0),10mM
EDTA,50mMGlucose
(质粒提取用)□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HCl(pH8.0)25mL0.5MEDTA(pH8.0)20mL20%Glucose(1.11M)45mLdH2O910mL2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII□组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS(质粒提取用)□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10%SDS50mL2NNaOH50mL2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
3.室温保存。
此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意:
SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
16、SolutionIII□组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH(质粒提取用)□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc147gCH3COOH57.5mL2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500mL。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA□组份浓度0.5MEDTA(pH8.0)□配制量1L
□配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。
注意:
pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
18、1MDTT□组份浓度1MDTT□配制量20mL
□配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
19、10mMATP□组份浓度10mMATP□配制量20mL
□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份,-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin□组份浓度100mg/mlAmpicillin(100mg/ml)□配制量50mL
□配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3.用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
2、IPTG□组份浓度24mg/mLIPTG(24mg/mL)□配制量50mL
配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3.用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
3、X-Gal□组份浓度20mg/mLX-Gal(20mg/mL)□配制量50mL
□配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。
2.加入40mLDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。
3.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
4、LB培养基□组份浓度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,1%(W/V)NaCl□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
5、LB/Amp培养基□组份浓度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压灭菌后,冷却至室温。
6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)后均匀混合。
7.4℃保存。
6、TB培养基□组份浓度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)YeastExtract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4□配制量1L
□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72M
K2HPO4)100mL。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.4℃保存。
7、TB/Apm培养基□组份浓度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)YeastExtract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配置方法
1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin(100mg/mL)。
6.均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基□组份浓度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeastExtract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2□配制量1L□配置方法
1.配制250mMKCl溶液。
在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后,定容至100mL。
2.配制2MMgCl2溶液。
在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌。
3.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone20gYeastExtract5gNaCl0.5g4.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
5量取10mL250mMKCl溶液,加入到烧杯中。
6.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
7.加入去离子水将培养基定容至1L。
8.高温高压灭菌后,4℃保存。
9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。
9、SOC培养基□组份浓度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)YeastExtract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖□配制量100mL□配置方法
1.配制1M葡萄糖溶液。
将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌。
2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。
3.4℃保存。
10、2×YT培养基□组份浓度1.6%(W/V)Tryptone,1%(W/V)YeastExtract,0.5%(W/V)NaCl□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone16gYeastExtract10gNaCl5g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加1NKOH,调节pH值至7.0。
4..加水离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压后,4℃保存。
11、Φb×broth培养基□组份浓度2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,0.5%(W/V)MgSO4•7H2O□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone20gYeastExtract5gMgSO4•7H2O5g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加1NKOH,调节pH值至7.5。
4..加水离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压后,4℃保存。
12、NZCYM培养基□组份浓度0.5%(W/V)YeastExtract0.1%(W/V)CasaminoAcid1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgSO4•7H2O□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
YeastExtract5gCasaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO4•7H2O2g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4..加水离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压后,4℃保存。
13、NZYM培养基□组份浓度0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgSO4•7H2O□配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基□组份浓度1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V)MgSO4•7H2O□配置方法NZM培养基除不含YeastExtract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的□配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。
配制Agar(琼脂:
铺制平板用)15g/LAgar(琼脂:
配制顶层琼脂用)7g/LAgarose(琼脂糖:
铺制平板用)15g/LAgarose(琼脂糖:
配制顶层琼脂用)7g/L2.高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。
3.待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。
4..铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度1%(W/V)Tryptone
平板培养基0.5%(W/V)YeastExtract1%(W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5%(W/V)IPTG0.04mg/mLX-Gal1.5%(W/V)Agar□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
8.4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度
1.2%(W/V)Tryptone
平板培养基2.4%(W/V)YeastExtract0.4%(W/V)Glycerol17mMKH2PO4
72mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin0.024mg/mLIPTG0.04mg/mLX-Gal1.5%(W/V)Agar□配制量1L
□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
8.4℃保存平板。
生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液□组份浓度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
4、0.2%葡萄糖标准溶液□组份浓度0.2%□配制量1L
□配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清□组份浓度250μg/mL白蛋白标准液□配制量2L
□配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲
□配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。
2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入0.25g硫酸铜•5水,溶解。
3.将1:
2:
去离子水按20:
4:
1的比例混合即可。
4.4℃保存,可用一周。
7、Folin试剂乙□配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g,钼酸钠•2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL,浓盐酸25mL,充分混合。
2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存,可使用多年
注意:
上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右,几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18倍,使之浓度为0.1mol/L略高。
这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是上文称之为的“应用液”。
Folin试剂乙贮备液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂。
用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点。
8、DNS试剂
□配置方法1.取3,5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。
(3,5-二硝基水杨酸试剂)2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g。
3.待其完全溶解,用去离子水稀
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