刺梨白粉病抗性候选基因的克隆DOC.docx

刺梨白粉病抗性候选基因的克隆DOC.docx

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刺梨白粉病抗性候选基因的克隆DOC

项目类别

申报学科代码1

科学部编号

A

C010904

国家自然科学基金

申请书

项目名称：

申请者：

所在单位：

邮政编码：

通讯地址：

电话：

传真：

申请日期：

国家自然科学基金委员会

一九九七年制

填报说明

一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及规定。

申请书各项目内容，要实事求是，逐条认真填写。

表达要明确、严谨，字迹要清晰易辨。

外来词要同时用原文和中文表达。

第一次出现的缩写词，须注出全称。

二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。

第三页起各栏空格不够时，请自行加页。

一式六份（至少一份为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对口学部。

地区科学基金项目，申请书另送省（自治区）科委一份原件。

三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报学科代码1由申请者填写。

四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组成员参加研究：

——在读（含在职）研究生

——已离退休的科研人员

——申请单位的兼职科研人员

五、申请者和项目组中具有高级专业技术职称的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金数（不含重点项目、重大项目），不得超过两项。

六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。

七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申报书原件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。

科学部将对此信息保密。

八、国家自然科学基金委员会通讯地址：

北京市海淀区花园北路35号东门

邮政编码：

100083

一、简表

研究项目

名称

中文

刺

梨

白

粉

病

抗

性

候

选

基

因

的

克

隆

英文

CloningofPowderyMildewResistanceGeneCandidatesofCili（Rosaroxburghii）

类别

A.自由申请B.高技术探索C.青年D.地区

高技术探索

项目主题号

E.重大F.重点H.专项

D

申报学科

名称1

名称2

A.基础研究

B.应用基础

代码1

代码2

A

申请金额

起止年月

2003年1月至2005年12月

所用实验室

A.国家重点B.部门开放

实验室编号

13269202

A

申请者

姓名

中文

性别

A.男

出生年月

民族

民族

名称

汉

拼音

B.女

A

身份证号

代号

01

专业技术职务

名称

副教授

学位

A.博士

B.硕士

C.学士

博士学位

授予国别

或地区

国（地区）

中国

A.院士

B.博士生导师

C.博士后

代码

B

代码

156

所在单位

名称

系（所）

单位代码

性质

A.高等院校

B.科研机构

C.其它

邮政编码

隶属关系

名称

A

申请者电话

代码

所在地

项

目

组

总人数

高级

中级

初级

博士后

博士生

硕士生

参加单位数

主要成员（不含申请者）

姓名

身份证号

专业技术职务

所在单位名称及代码

项目中

的分工

签字

研究内容和意义

摘要

多

数

植

物

抗

病

基

因

编

码的

的

蛋

白

质

具

有

NBS-LRR

保

守

结

构

域

。

本

项

目

拟

以

我

国

特

有

果

树

——

刺

梨

为

试

材

，

基

于

NBS-LRR

结

构

域

设

计

简

并

引

物

，

扩

增

对

白

粉

病

抗

、

感

类

型

基

因

组

DNA

，

然

后

回

收

、

克

隆

后

选

基

因

片

段

；

应

用

双

假

测

交

原

理

，

采

用

BSA

法

，

确

定

克

隆

的

片

段

和

抗

病

性

的

关

系

；

通

过

构

建

BAC

文

库

，

以

获

得

后

选

抗

病

基

因

的

全

长

序

列

。

主题词

1.主题词数量不多于三个；2.主题词之间空一格（英文用/分隔）。

中文

刺

梨

抗

病

后

选

基

因

克

隆

英文

Rosaroxburghii/Resistancegenecandidate/Cloning

简表填写要求

一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字。

简表中所有代码以最新发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。

高技术探索课题主题号按《高技术新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写，申请其重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。

二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。

三、部分栏目填写要求：

项目名称──应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）。

基础研究──指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。

应用基础研究──指有广泛应用前景，但以获取新原理、新技术、新方法为主要目的的研究。

申报学科──申请项目所属的最基础学科。

如涉及多学科可填写两个，先填写主学科。

申请金额──以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。

起止年月──起始时间从申请的次年1月算起。

终止时间为完成年度的12月。

所用实验室──系指研究项目将利用的实验室，仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的

开放实验室。

所在单位名称及代码──按单位公章填写全称。

例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填

“中科院西安光机所”或“西安光机所”。

全称中的数字，一律写中文，例如：

中国航天工业总公司第七○一所。

首次申请国家自然科学基金的单位，尚未编

入单位代码，其代码暂不填写。

参加单位数──指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位（合作者所在单位），以

阿拉伯数字表示。

项目组主要成员──指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作

用的人员，本人应在申请书上亲自签名。

本栏双线右侧内容不输入计算机。

研究内容和意义──摘要与主题词均录入软盘。

二、立论依据

（包括项目的和研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处）

对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义;

对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景。

刺梨（Rosaroxburghii,Tratt）属蔷薇科蔷薇属植物，集中分布于西南地区，在桂西北、湘西、鄂西及陕南等地也有分布。

其果实肉脆、甜酸、具浓郁的特殊香味，Vc含量高达2054~3541mg/100g，被誉为水果中的“Vc之王”（朱维藩等，1984）。

除鲜食外，更是加工高级饮品的优质原料，尤其是刺梨的防癌、抑癌作用和抗衰老、降血脂、增强免疫力、解铅中毒等保健作用已引起国内外的广泛关注（樊卫国等，1997；Maetal,1997），与猕猴桃、山楂并誉为我国三大新兴水果（史继孔等，1991）。

近年来，贵州省政府将其列为今后培育的八大产业经济之一，在西部开发的大潮中，亦将其作为特色产业来开发。

自上世纪80年代以来，经几代果树科研人员的辛勤耕耘,贵州选育出一些优良株系（朱维藩等，1984；向显衡等，1987），有的已直接用于大面积生产，产生了较大的经济效益。

先后有20多个省市从贵州引种，在部分地区建立了生产基地。

1815年，刺梨由传教士Roxburgh经印度引入欧洲，因其果实表面有刺，形同板栗的总苞而被称为栗玫瑰（Chestnutrose），在欧洲及美国等地将其作为观赏植物来培植（Fangan,1988）。

近年来的研究表明，刺梨对玫瑰的黑斑病（Blackspot）具有免疫能力，在玫瑰抗病育种中倍受青睐（Wiggersetal,1997）。

但是在刺梨的人工栽培中，白粉病（Sphaerotheca）为害严重，主要表现为4~6月为害刺梨的嫩叶和花果，造成叶片和花果脱落（庞纯翠等，1986）。

经过20多年的选育工作，获得了一个对白粉病高抗的株系（待发表），这一珍贵的种质资源为培育刺梨的白粉病抗性品种及直接分离抗性基因提供了物质基础。

不幸的是，迄今为止对刺梨的遗传基础研究极为薄弱。

过去人们对植物抗病基因的结构和功能缺乏认识，只能依赖图位克隆（Map-basedcloning/Positionalcloning）或转座子标签技术（Transposontagging）对植物抗病基因进行克隆，并在一些一年生植物上得到成功应用（董继新等，2001）。

但多拷贝基因的存在以及插入位点的随机性极大地限制了转座子标签法的应用范围（Dixonetal,1996），同时木本植物很难获得转座子突变体。

图位克隆法是近些年来发展起来的另一种有效方法，但高密度的分子标记遗传图谱是该方法不可逾越的一道鸿沟，目前的应用仅限于基因组较小的一些模式植物。

近年来，随着分子生物学和基因克隆技术的发展，对一些抗性基因的分子特性有了新的认识（Bakeretal,1997;Hammond-Kosacketal,1997;董继新等，2001），从而在一定程度上促进了基因的分离和克隆研究。

利用同源序列克隆技术（Homology-basedcloning）已成功地分离出小麦叶锈病抗性基因Lr10（Fenillet，1997）及拟南芥白粉病的广谱抗性基因RPW8（Xiaoetal,2001）。

剖析已克隆的20余例植物抗病基因，发现大多数抗病基因编码的蛋白质都含有核苷酸结合位点（Nucleotidebindignsite,NBS）和亮氨酸富集重复序列（Leucine-richrepeat，LRR）结构域（董继新等，2001；郑先武等，2001；Dengetal,2000），如拟南芥Rps2、Rpm1、Rpp5基因，番茄Prf和I2基因，亚麻的L6和M6基因，烟草的N基因等（Mindrinosetal,1994;Whithametal,1994;Hammond-Kosacketa