生物标本制作与生物样品保存.docx
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生物标本制作与生物样品保存
生物标本制作与生物样品保存
方法与技术
★干制标本
植物腊叶标本要保管在密封干燥的腊叶标本橱内。
新制标本因为常有害虫和虫卵寄生,入橱最好用药消毒。
就是用二硫化碳约0.5Kg盛在容器内,放入杀虫箱(1.7m2)中,两日后开箱,使毒气散尽,拿出标本。
二硫化碳气体比空气重。
药品应放在标本上面。
或者把未上台纸的标本放入0.5%升汞酒精(工业用75%)溶液中浸一次,制好后入橱。
升汞有毒,并能与金属起化学作用,切忌使用金属器械。
用时要带橡皮手套,事后用肥皂水洗手,标本用什么药品杀虫,应在台纸上注明,以防中毒。
腊叶标本橱内要放樟脑精以防虫害。
★分类
入橱标本要进行分类才便于利用。
植物根、茎、叶花果实的干制标本,可按课本上的次序排列。
分类标本在按照分类系统,分科排列。
目前标本室常用的分类系统有恩格斯(AENGLER)、克朗奎(A。
CRONGUIST)等分类系统。
橱门上应有分科目录表,橱内要有分科标签,便于查找。
★维修
如果标本中的叶片脱落,可用毛笔刷胶水(植物胶)在叶背面,按照自然姿态贴好,阴干。
枝茎断裂的要用醋酸乙烯胶粘贴,再贴上胶水纸。
发霉和虫蛀的标本,用毛笔蘸95%酒精或10%福尔马林液洗刷,干后用毛笔刷除霉斑。
台纸和盖纸破损的要调换新的。
移动标本,手脚要轻,不要翻转颠倒。
入橱标本,不要太挤。
标本外借,要多用填纸包装,注意防潮。
植物种子标本 要选择典型无病虫害的新种子,清除杂质后晒干,装入种子瓶中,并贴上标签,经常检查,以防发霉虫蛀。
昆虫标本和植物病虫害等盒装标本
大型昆虫的腹部和柔软部分以及烘干的幼虫,都容易发霉。
盒装的昆虫生活史、病虫害等标本里的安瓿容易破碎和标签脱落,可将损坏部分掉换。
植物损坏部分可按照维修腊叶标本方法维修。
盒装标本内应放入樟脑、硅胶等防虫防潮药品。
★其它
化石标本要防止震动和碰撞,损坏时用石膏填补和聚醋酸乙烯胶(乳白胶水)粘接。
鸟卵标本卵壳损坏,可分块取下粘贴。
循环系统干制标本是用赛璐珞作填充物的,脆性大,要防震,如果损坏,可以用毛笔蘸丙酮液粘接。
★浸制标本和材料
浸制标本和实验材料都应有标签,标签要贴实,外面涂蜡,按编号平稳地放入生物橱中保存。
标本瓶不能震动,以免打碎,并且不宜放在有阳光直接照射、高温或0℃以下的地方,以防封蜡熔化和玻璃瓶冻裂。
植物实验材料也可以不用药液浸制,标本瓶底放些浸有20%福尔马林的药棉,上盖白纸,再封口材料多时可以在塑料袋里放少量20%福尔马林液体,再放入实验材料,扎紧袋口。
也能长期保存。
要用登记簿按记号记下每瓶标本的制作日期和药液配方,便于日后检查处理。
原色标本要放在有板门的生物橱内,防止因阳光照射而退色。
溶液发黄浑浊和标本露出液面,要及时更换和补充新液(加10%福尔马林等)。
如果保存的实验材料将要变质,可增加保存液浓度。
浸制透明标本会产生许多气泡,可用注射器抽出。
标本上贴字号等。
如果标本脱落,可用药棉吸干脱落部位,用明胶液(明胶克,浸在50毫升水中泡一天后,再隔水加热到溶化)粘贴。
如果固定标本的玻璃板打碎,用钻石刀划好玻璃,用砂轮奖四边磨平,重新固定放入。
加换溶液和封瓶宜在夏季进行,因为夏季瓶盖容易开启,转动盖上的玻璃球,然后拨出瓶盖。
也可用刀尖除去封蜡后开瓶。
★剥制标本
剥制标本应按号放在生物橱中,过大的要自制玻璃橱箱存放,要防潮、防腐、防尘、防虫、防鼠。
橱内用硅胶或生石灰(用两层纱布包好)作干燥剂,用樟脑制剂驱虫防霉(用纱布包好)。
剥制标本不能长期裸露放在橱顶上积尘。
新剥制的未干标本不要放入生物橱。
可以用烟熏剂消灭害虫,在春季,把标本放在消毒箱里,箱里放碟子,上面放碗,碗里放硫磺,碗上放铁片条,点着硫磺,密封箱盖。
两日后打开箱盖,拿出标本放入生物橱中保存。
脊椎动物标本如果损坏,要选用种类、性别、大小相似的动物,切下损坏的相应部分,用大头针固定,涂上40%福尔马林液防腐,干后作修补用材料。
修补后再整形涂色。
如鱼的鳍条、爬行动物的趾骨等断裂,可切成两个斜面,用聚醋酸乙烯胶帖。
大型哺乳动物缺损可用油灰填补,再拔下腋窝、腹部等处毛,用聚醋酸乙烯胶帖在油灰上。
★骨骼标本
骨骼标本要防止震动和撞散,用后盖好。
受潮脱胶,关节容易掉落。
阳光久射要发黄变色。
骨骼断裂或脱落时,可用聚醋酸乙烯胶帖(用线固定)。
★切片标本
切片标本要编号放在特别分格切片的木盒内,盒内两侧刻很多凹沟,载波片的两侧沿凹沟插入,使载玻片直立在盒中。
每盒可装50~100片。
盒子要直放,使标本保持平放位置。
盒内应有每片标本的编号和名称目录,以方便查找使用。
木盒应放在干燥地方,避免日光照射。
切片也可用玻片标本夹(格隔)保存。
★常用染料性能简介
(一)天然染料
1、苏木精
苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用乙醚浸制出来的一种色素,是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸-酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。
2、洋红
洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。
单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
(二)人工染料
人工染料,即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。
它的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。
他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水和酒精,遇酸呈蓝色。
他能作染料,也用作指示剂。
他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。
他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。
在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。
刚果红可以跟苏木精作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。
3、甲基蓝
甲基蓝是弱酸性染料,能溶于水和酒精。
甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。
他跟伊红合用能染神经细胞,也是细菌制片中不可缺少的染料。
它的水溶液是原生动物的活体染色剂。
甲基蓝极易氧化,因此用他染色后不能长久保存。
4、固绿
固绿是酸性染料,能溶于水(溶解度为4%)和酒精(溶解度为9%)。
固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。
他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
5、苏丹Ⅲ
苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。
苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
6、伊红
这类染料种类很多。
常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。
伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。
7、碱性品(复)红
碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。
碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。
在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。
在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。
在尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。
8、结晶紫
结晶紫是碱性染料,能溶于水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。
他是细胞核染色常用的,用来显示染色体的中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。
凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好的结果。
用番红和结晶紫作染色体的二重染色,染色体染成红色,纺锤丝染成紫色,所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。
用结晶紫染纤毛,效果也很好。
用结晶紫染色的切片,缺点是不易长久保存。
9、龙胆紫
龙胆紫是混合的碱性染料,主要是结晶紫和甲基紫的混合物。
在必要时龙胆紫能跟结晶紫互相替用。
医药上用的紫药水,主要成分是甲基紫,需要时能代替龙胆紫和结晶紫。
10、中性红
中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。
它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。
中性红无毒,常做活体染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。
11、番红
番红是碱性染料,能溶于水和酒精。
番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。
12、亚甲蓝或美蓝
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。
亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
13、甲基绿
甲基绿是碱性染料。
它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。
甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
2、细菌特殊染色剂
配方一芽孢染液
用此配方染色是用甲液染色后,用乙液复染。
甲液:
取5克孔雀绿,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成孔雀绿染液。
乙液:
取番红花红0.5克,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,集成番红花红复染液。
配方二:
荚膜染液
此配方先用甲液染色,后用乙液复染。
甲液:
取结晶紫0.1克,溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。
乙液:
取硫酸铜31.3克,溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,即成20%硫酸铜脱色剂。
配方三:
鞭毛染液
甲液:
饱和明矾溶液2毫升、5%石炭酸溶液5毫升、20%丹宁酸溶液2毫升
乙液:
碱性品红11克、95%酒精100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,过滤即可。
3、植物细胞壁染色剂
配方一:
纤维素细胞壁染液(Ⅰ)
取固绿0.1克,溶于100毫升95%酒精中,即成0.1%固绿-酒精溶液。
该液能染色纤维素细胞壁,还用于动植物中作浆质染色剂。
配方二:
纤维素细胞壁染液(Ⅱ)
氯化锌20克、碘化钾 6.5克、碘1.5克、蒸馏水加至100毫升
先把氯化锌溶于少量蒸馏水中,再加入6.5克碘化钾,在碘完全溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成碘-氯化锌溶液。
该染液能把细胞壁染成紫色,胞质染成淡黄色,胞核染成棕色。
配方三:
纤维素细胞壁染液(Ⅲ)
甲液:
取1克碘和1.5克碘化钾,溶于100毫升蒸馏水中,即成1%碘液。
乙液:
取7份硫酸和3份蒸馏水相混,即成66.5%硫酸溶液。
染色时,在材料上滴加甲液,再加一滴乙液,纤维素细胞壁就染成黄色。
配方四:
木质化细胞壁染液(Ⅰ)
硫酸化苯胺(或盐酸话本安)1份、蒸馏水70份、95%酒精30份、硫酸30份
将上述各组分相混,将细胞材料放入混合液里染色,可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。
配方五:
木质化细胞壁染液(Ⅱ)
取间苯三酚4~5克,溶于100毫升95%酒精中,即成间苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴浓盐酸,然后滴上间苯三酚-酒精液1滴,木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。
配方六 木质化细胞壁染液(Ⅲ)
取1克番红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%番红溶液。
4、细胞质染色剂
配方一 伊红染液
伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。
(1)取1克伊红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%伊红水溶液(市售红墨水内含伊红成分,可以用红墨水稀释液来代替本溶液)。
(2)取1克伊红,溶于99毫升70%酒精中,即成1%伊红-酒精溶液。
配方二 甲基蓝染液
取1克甲基蓝,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸馏水,即成1%甲基蓝染液。
配方三 亮绿染液
取0.5克亮绿,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%亮绿溶液。
5、细胞核染色剂
配方一 甲基绿染液
取1克甲基绿,溶于99毫升蒸馏水中,加入1毫升冰醋酸。
本染液能染细胞核,还用来染木质化细胞壁。
配方二 龙胆紫染液
取1克龙胆紫,溶于少量2%醋酸溶液中,加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。
配方三 美蓝(亚甲基蓝)染液
取0.5克美蓝,溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氢氧化钾溶液,保存在棕色瓶内 。
此溶液能染细胞核,还用来染细菌、血和神经组织等。
配方四 硼砂-洋红染液
取4克硼砂,溶于96毫升蒸馏水中。
再加入2克洋红,加热溶解后煮沸30分钟,静置3日,用100毫升70%酒精冲淡,放置24小时后过滤。
此染液能染细胞核,还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色,如水螅、血吸虫等整体标本。
配方五 德氏(Delafield's)苏木精染液
甲液 取1苏木精溶于6毫升无水酒精中,即成苏木精-酒精溶液。
乙液 取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中,即成10%铵矾水溶液。
取甲液逐滴加入到乙液中,用纸遮盖,放在阳光明亮处,使它充分氧化。
3~4天后将溶液过滤,在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇,保存在密闭玻璃瓶内。
静置1~2个月,待该液颜色变深时过滤,可长久保存。
本染液是染色体的优良染色剂,除能染细胞核外,还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。
配方六 席夫(Schiff's)试剂
称取0.5克碱性品红,加到100毫升煮沸的蒸馏水中,再微微加热5分钟,不断搅拌,使它溶解。
在溶液冷却到50摄氏度时过滤,滤液中加入10毫升1N盐酸。
再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠或无水亚硫酸氢钠。
把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后,塞紧瓶塞,放在黑暗中24小时。
在溶液颜色退到淡黄色时,加入0.5克活性炭,用力摇荡1分钟,过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞,滤液应该是无色的。
在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光)。
如溶液变成红色,即失去染色能力。
碱性品红是较强的核染色剂,在孚尔根氏(Feulgen's)反应中作为组织化学试剂,以检查DNA。
6、染色体染色剂
配方一 醋酸-洋红染液
取45毫升冰醋酸,加蒸馏水55毫升,煮沸后徐徐加入洋红1克,搅拌均匀后加入1颗铁锈钉,煮沸10分钟,冷却后过滤,贮存在棕色瓶内。
配方二 醋酸-地衣红染液
取45毫升醋酸,跟55毫升蒸馏水相混,加热,徐徐加入地衣红粉末1~2克,搅拌溶解后,缓缓煮沸2小时。
冷却后过滤,贮存在棕色瓶里。
配方三 龙胆紫染液
取1克龙胆紫,用少量蒸馏水溶解后,加蒸馏水,稀释到100毫升,保存在棕色瓶内。
配方四 甲苯胺蓝染液
取0.5克甲苯胺蓝,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。
7、线粒体染色剂
配方一 詹钠斯绿B(Janu's green B)酒精饱和溶液
取125毫升詹钠斯绿B,加入到62.5毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
(1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1:
30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1:
10000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二 詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。
詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。
中性红酒精饱和液配制方法:
取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。
在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。
詹钠斯绿B稀释液是活体染液。
8、脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
9、血液染色剂
配方一 瑞氏(Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。
把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。
并用完甲醇为止。
配制好的染液在室温中保存,即可使用。
新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。
这染液的适宜pH值是6.4~6.8。
因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。
这种染液除能染血液,还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。
在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤。
在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升,随加、随搅拌,使混合液呈紫色。
静置一夜后,用滤纸过滤。
滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二 甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。
10、吸虫染色剂
梅耶氏(Mayer's )明矾-洋红染液
取铵明矾(硫酸铝铵)5克,溶于95毫升蒸馏水中,再加入0.5克洋红酸,加热溶解,冷却后过滤。
在滤液中加入少量防腐剂,如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚(石炭酸)等,以防生霉。
这种染液适合于染小型动物材料,如吸虫等寄生虫的整体,也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。
11、活体染色剂
配方一 中性红染液
先配成1%中性红水溶液(1克中性红溶于100毫升蒸馏水中)。
取这种溶液1毫升,用0.6%生理盐水(或蒸馏水)稀释到50毫升,即成0.02%中性红水溶液,贮存在棕色瓶里,放在黑暗处。
本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。
配方二 尼罗蓝(Nile Blue)染液
取0.1克尼罗蓝,溶解于1000~1500毫升蒸馏水中,即成尼罗蓝染液。
这种染液能把原生动物大核染成绿色,食物泡染成蓝色。
配方三 亚甲蓝染液
取0.1克亚甲蓝,溶解于1000毫升蒸馏水中,即成亚甲蓝染液。
这种染液用于原生动物的活体染色。
12、透明骨骼标本染色剂
配方一 茜素红染液(Ⅰ)
取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。
在这种混合液中方入少量茜素红,制成茜素红饱和溶液。
配方二 茜素红溶液(Ⅱ)
取1克茜素红,溶于100毫升95%酒精中,搅拌,然后跟900毫升1%氢氧化钾溶液相混,即成深紫色的茜素红染液。
(七)固定液和保存液
用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状态。
固定液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。
单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。
混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美的固定液。
这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。
常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。
常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。
有时按特殊保存的需要,再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。
1、福尔马林
福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。
永福尔马林固定精细的解剖标本时,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的浓度是5~10%(根据材料的大小、性质和数量而定)。
保存液常用的浓度是5~10%。
用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。
在配制福尔马林溶液(固定液或保存液)时,应将37~40%的甲醛作为整个溶质来配。
例如配制5%福尔马林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。
实际上甲醛含量只有1.9~2%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
注意事项:
(1)福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙( )或碳酸镁( )等碱性物质进行中和。
(2)福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。
所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。
其中如有白色沉淀物,加热后可使它溶解。
(3)市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。
2、酒精(乙醇)
酒精也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。
但是,它的脱水作用较强,在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。
一般用于固定浸制标本材料,分一级或二级固定,即70%或50%与70%的酒精。
有些小型材料或精细的解剖材料,最好用二级或三级固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再进行保存。
从经济效果来考虑,一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。
市售的工业用酒精浓度是95%左右,因此用时要重新配制。
保存液的浓度通常是70%。
注意事项:
(1)在固定材料时要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。
大型材料必须先往体内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐怀变质。
用福尔马林液固定也是如此。
(2)高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。
含有多量脂肪或拟脂标本(如脑、脊髓)等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。
(3)为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或解剖标本时,因加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。
(4)忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。
3、醋酸
醋酸即乙酸,纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体,所以叫冰醋酸
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