常用缓冲溶液配制方法.docx

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常用缓冲溶液配制方法

Preparedon24November2020

常用缓冲溶液配制方法

常用缓冲溶液的配制方法

1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L）

X毫升mol/L甘氨酸+Y毫升mol/LHCI，再加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

50

50

50

50

50

50

50

50

甘氨酸分子量=，mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。

2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（mol/L）

X毫升mol/L邻苯二甲酸氢钾+mol/LHCl，再加水稀释到20毫升

pH（20℃）

X

Y

pH（20℃）

X

Y

5

5

5

5

5

5

5

5

5

邻苯二甲酸氢钾分子量=，mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升

3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液

pH

LNa2HPO4

（毫升）

L

柠檬酸

（毫升）

pH

LNa2HPO4

（毫升）

L

柠檬酸

（毫升）

Na2HPO4分子量=，mol/L溶液为28.40克/升。

Na2HPO4·2H2O分子量=，mol/L溶液含35.01克/升。

C4H2O7·H2O分子量=，mol/L溶液为21.01克/升。

4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液

pH

钠离子浓度

（mol/L）

柠檬酸（克）

C6H8O7·H2O

氢氧化钠（克）

NaOH97%

盐酸（毫升）

HCl（浓）

最终体积（升）①

210

210

210

210

245

285

266

84

83

83

83

144

186

156

160

116

106

45

68

105

126

10

10

10

10

10

10

10

①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。

5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（mol/L）

pH

mol/L

柠檬酸

（毫升）

mol/L

柠檬酸钠

（毫升）

pH

mol/L

柠檬酸

（毫升）

mol/L

柠檬酸钠

（毫升）

柠檬酸C6H8O7·H2O：

分子量，mol/L溶液为21.01克/升。

柠檬酸钠Na3C6H5O7·2H2O：

分子量，mol/L溶液为29.41克/毫升。

6．乙酸–乙酸钠缓冲液（mol/L）

pH（18℃）

mol/L

NaAc

（毫升）

mol/L

HAc

（毫升）

pH（18℃）

mol/L

NaAc

（毫升）

mol/L

HAc

（毫升）

Na2Ac·3H2O分子量=，mol/L溶液为27.22克/升。

7．磷酸盐缓冲液

（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（）

pH

mol/L

Na2HPO4

（毫升）

mol/L

NaH2PO4

（毫升）

pH

mol/L

Na2HPO4

（毫升）

mol/L

NaH2PO4

（毫升）

Na2HPO4·2H2O分子量=，mol/L溶液为85.61克/升。

Na2HPO4·12H2O分子量=，mol/L溶液为克/升。

NaH2PO4·2H2O分子量=，mol/L溶液为克/升。

磷酸盐是化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：

NaH2PO4：

pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：

pKa1＝，pKa2＝

配酸性缓冲液：

用NaH2PO4，pH＝1～4，

配中性缓冲液：

用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，

配碱性缓冲液：

用Na2HPO4，pH＝10～12。

用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。

磷酸盐缓冲液的优点为：

①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于。

其缺点为：

①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。

（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15mol/L）

pH

mol/L/15Na2HPO4

（毫升）

mol/L

15M11.876克15M9.078克0.05M0.2M

20℃

20℃

18℃

0.04M

0.04M

0.04M8.25克0.05M25℃0.1M

1M溶液为12.114克/升。

Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。

11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）

pH

0.05M硼砂（毫升）

0.2M硼酸（毫升）

pH

0.05M硼砂（毫升）

0.2M硼酸（毫升）

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。

硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。

硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。

12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）

X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

甘氨酸分子量=;0.2M溶液含15.01克/升。

13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）

X毫升0.05M硼砂+Y毫升加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

50

50

50

50

50

50

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;0.05M溶液为19.07克/升。

14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）

Ca2+、Mg2+存在时不得使用

pH

（毫升）

（毫升）

20℃

37℃

1

2

3

4

5

6

7

8

9

9

8

7

6

5

4

3

2

1

Na2CO2·10H2O分子量=;0.1M溶液为28.62克/升。

N2HCO3分子量=;0.1M溶液为8.40克/升。

15．“PBS”缓冲液

pH

H2O

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4

1000

1000

1000

100ml

8.5g

2.2g

0.4g

pH标准缓冲溶液

StandardpHBufferSolutions

名称（Name）

配制

（Compoundingway）

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

草酸盐标准缓冲溶液

c[KH3（C2O4）2·2H2O]为L。

称取12.71g四草酸钾[KH3（C2O4）2·2H2O]溶于无二氧化碳的水中，稀释至1000ml

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

酒石酸盐标准缓冲溶液

在25℃时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾（KHC4H4O6），并剧烈振摇至成饱和溶液

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

-

-

-

-

-

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液

c（C6H4CO2HCO2K）为L，称取于±℃干燥2～3h的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.21g，溶于无CO2的蒸馏水，并稀释至1000ml

（注：

可用于酸度计校准）

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

磷酸盐标准缓冲溶液

分别称取在±℃干燥2～3h的磷酸氢二钠（Na2HPO4）（3．53±0．01）g和磷酸二氢钾（KH2PO4）（3．39±0．01）g，溶于预先煮沸过15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：

可用于酸度计校准）

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

硼酸盐标准缓冲溶液

c（Na2B4O7·10H2O）称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）（3．80±0．01）g（注意：

不能烘！

），溶于预先煮沸过15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。

置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。

存放时要防止空气中的CO2的进入（注：

可用于酸度计校准）

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

氢氧化钙标准缓冲溶液

在25℃，用无二氧化碳的蒸馏水制备氢氧化钙的饱和溶液。

氢氧化钙溶液的浓度c[1/2Ca（OH）2]应在（～）mol/L。

氢氧化钙溶液的浓度可以酚红为指示剂，用盐酸标准溶液[c（HCl）=L]滴定测出。

存放时要防止空气中的二氧化碳的进入。

出现混浊应弃去重新配制

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

0℃

5℃

10℃

15℃

20℃

25℃

30℃

35℃

40℃

不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）

45℃

50℃

55℃

60℃

70℃

80℃

90℃

95℃

-

-

-

-

-

-

注：

为保证pH值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用pH基准试剂配制。

常用pH缓冲溶液的配制和pH值

PreparationandpHValuesofCommonpHBufferSolutions

序号（No.）

溶液名称

（Solutionname）

配制方法

（Preparation）

pH值

（pHvalue）

1

氯化钾-盐酸

mlmol/LHCl与mlmol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml

2

氨基乙酸-盐酸

在500ml水中溶解氨基乙酸150g，加480ml浓盐酸，再加水稀释至1L

3

一氯乙酸-氢氧化钠

在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH，溶解完全后再加水稀释至1L

4

邻苯二甲酸氢钾-盐酸

把mlmol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与mlmol/LHCl混合均匀，加水稀释至100ml

5

邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠

把mlmol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

6

六亚甲基四胺-盐酸

在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g，加浓HCl10ml，再加水稀释至1L

7

磷酸二氢钾-氢氧化钠

把mlmol/L的磷酸二氢钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

8

硼酸-氯化钾-氢氧化钠

把mlmol/L的硼酸-氯化钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

9

氯化铵-氨水

把mol/L氯化铵与mol/L氨水以2：

1比例混合均匀

10

硼酸-氯化钾-氢氧化钠

把mlmol/L的硼酸-氯化钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

11

氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠

把mlmol/L氨基乙酸-氯化钠与mlmol/LNaOH混合均匀

12

磷酸氢二钠-氢氧化钠

把mlmol/LNa2HPO4与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

13

氯化钾-氢氧化钠

把mlmol/LKCl与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml