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检验科15189体系文件11
第三节凝血试验标准
操作程序
b)肝素增多或类肝素抗凝物质存在,如:
SLE、肝病、肾病等;
c)异常纤维蛋白原血症,低(无)纤维蛋白原血症;
d)FDP增多(如DIC);
e)异常球蛋白增多(如多发性骨髓瘤)等。
5.4.2.2TT缩短:
常见于血标本有微小凝块或存在钙离子。
5.5手工检测方法
5.5.1取待检拘橼酸钠抗凝血浆0.1ml,置于37°C水浴中温育5分钟。
5.5.2加入凝血酶溶液0.2ml,记录凝固时间。
如此重复2〜3次,取平均值。
6D-二聚体定量测定(DDI)
6.1原理
使用STAGO公司的STA-REvolution型全自动凝血检测仪,采用免疫比浊法进行D-二聚体的定量检测。
标记的抗D-二聚体单克隆抗体乳胶颗粒同血浆中的D-二聚体发生凝集反应,使得浊度发生改变,测定浊度的强弱,通过标准曲线,可得岀患者血浆中D-二聚体的含量。
6.2试剂准备和保存
6.2.1试剂准备:
STA-LIATESTI>DI缓冲液(I液)和D-DI乳胶(II液)均为液体试剂,从冰箱中取出,在室温(18〜25°C)下放置15分钟即可使用。
超出检测范围的标本,需用STAOwren-koller稀释液进行稀释。
6.2.2试剂保存:
未开瓶的试剂在2〜8°C下可保存至标签上标明的有效日期。
已开瓶并在瓶中放了减蒸器和带孔盖的试剂1和试剂2可在STA-R分析仪(15〜20°C)中稳定15天。
6.3临床意义
D-二聚体是纤溶酶降解交联的纤维蛋白产物,对继发性纤溶具有特异性。
其检测为原发/继发性纤溶的鉴别诊断及弥散性血管内凝血(DIC)、深部静脉血栓、肺栓塞等血栓栓塞性疾病和高凝状态等的诊断提供依据。
6.3.1高见于:
a)继发性纤溶亢进症(如DIC);
b)组织纤溶酶原激活物的纤溶疗法;
c)动脉或静脉血栓性疾病(如深静脉血栓形成、肺栓塞和动脉血栓栓塞)、镰状细胞性贫血、血管阻塞危象等;
d)其他疾病(妊娠尤其产后、恶性肿瘤、感染及组织坏死、手术等)。
3.2原发性或继发性纤溶亢进症鉴别诊断:
由于纤维蛋白原及其降解产物均不与D-二聚体抗体反应,因此,D-二聚体增高可认为是继发性纤溶如DIC或其他血管内血栓形成的证据。
若D-二聚体正常基本可排除血栓形成。
广东省中医院检验科第三节作业指导书
凝血试验标准操作程序
6.3.3D-二聚体测定可作为溶栓治疗有效的观察指标,但陈旧性血栓患者D-二聚体并不升高。
凡有血块形成的出血,都会出现结果增高,因此本试验特异性较低。
6.3.4D-二聚体在急性肺栓塞诊断中的应用价值
D-二聚体对急性肺栓塞诊断的敏感性髙达92%〜100%,而特异性仅为40%〜43%。
所以,在临床应用过程中,D-二聚体对急性肺栓塞有较大的排除诊断价值,若其含量低于500Mg/L,可基本排除急性肺栓塞。
在任何情况下D-二聚体测定值大于500Mg/L都不能作为急性肺栓塞的确诊依据。
由于D-二聚体特异性较差,所以肿瘤、感染、心肌梗死等患者及80岁以上人群D-二聚体升高对急性肺栓塞的诊断并无意义。
6.4影响因素
6.4.1混浊血浆可能导致测出的D-二聚体水平偏低。
6.4.2FDP浓度大于lS^g/ml会导致D-二聚体水平偏高。
6.4.3类风湿因子高于50IU/ml时可能会导致D-二聚体水平值偏高。
6.4.4抗牛白蛋白血清极度缺乏和(或)抗鼠抗体存在时会引起测出的D-二聚体水平偏高。
6.4.5此试剂盒对以下物质不敏感:
血红蛋白达5g/L,胆红素达200mg/L,高分子肝素达2IU/ml,抗Xa的低分子肝素达2IU/ml。
7纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物(FDP)
7.1检验原理
全自动血凝仪利用散射免疫比浊法进行FDP的定量测定。
标本中的FDP与试剂中的鼠抗人FDP单克隆抗体胶乳颗粒产生抗原抗体凝聚反应,在575nm波长下,聚集所产生的浊度上升与FDP浓度成线性关系,根据吸光度变化的检测,求出FDP的浓度。
7.2'上机检测操作
6.2.1FDP试剂装载:
点击试剂画面,点击Open打开试剂仓抽屉。
在ID号空白处手动输人大写FDP1并按回车键确认,批号处输人试剂瓶上的前3个号码(如819),按回车键确认,并把FDP1试剂放在R1试剂区合适位置,红色指示灯亮,表示试剂FDP1装载成功。
同样,在ID号空白处手动输人大写FDP2并按回车键确认,批号处输人试剂瓶上的前3个号码(如819),并按回车键确认,并把FDP2试剂放在R2试剂区合适位置,红色指示灯亮,表示试剂FDP2装载成功。
7.2.2FDP检测:
可选择自动扫描条码或手动输人模式,如为手动输人模式,项目选择P-FDP。
检测结束后,将试剂及时放回临检冰箱。
7.3结果报告
7.3.1参考区间:
血液:
0〜5mg/L,尿液:
0〜10mg/L。
7.3.2线性范围:
0〜124mg/L。
广东省中医院检验科第三节作业指导书
凝血试验标准操作程序
7.3.3当仪器检测结果显示时,在0〜lmg/L之间报任一数值结果即可;当仪器检测结果显示报告FDP>124mg/L。
7.4临床意义
7.4.1原发性纤溶亢进时,FDP含量可明显增高。
7.4.2高凝状态、DIC、肺栓塞、妊娠期高血压疾病、恶性肿瘤、心脏疾病、肝脏疾病、肾脏疾病及静脉血栓和溶栓治疗等所致的继发性纤溶亢进时,血中FDP含量升高。
7.4.3正常尿液内无FDP,尿中FDP增多见于肾小球内有局部凝血及DIC时;肾病综合征I型尿液内FDP为阴性,而n型时常为阳性,可作为分型参考依据;原发性肾小球疾病时尿内FDP出现并有进行性升高,说明肾脏有进展性病变,预后较差。
8生物安全
a)系统中所有与患者的标本接触或有潜在性接触可能的表面与零件都应被作为污染物考虑,在操作、维护STA-REvolution凝血分析仪时有必要穿保护性的外套和戴手套;
b)禁止触摸STA-REvolution凝血分析仪密封面板后的电路,可能造成电击,尤其是用湿手触摸时;
c)使用专用的工具和零件进行系统的检验和维修,禁止使用替代零件,也不可以对STA-REvolution凝血分析仪做任何形式的系统上的修改;
d)在处理废弃标本或组装/拆卸组合零件时不可触摸废弃物。
如果操作人员不小心接触了废弃物或其他生物性的危险物时,立即用清水冲洗被感染区域并遵守实验室的清理及排除污染的步骤;
e)操作STA-REvolution凝血分析仪仪器时必须考虑与操作所在的实验室有关的一切生物安全规则;
f)若皮肤或衣物上沾到了试剂或血样,立刻用清水冲洗。
若眼睛沾到试剂,用大量的清水冲洗并考虑必要的医疗措施。
9参考文献
仪器操作说明书和试剂说明书。
1仪器简介
STA-REvolution是由法国Stago(思塔高)公司生产,用于血栓和止血相关项目检测的全自动凝血分析仪,在临床上主要用于凝血、纤溶和抗凝系统的监测。
2仪器的检测原理
2.1凝固法
利用血浆凝固过程中,测量钢珠的振幅变化来确定血浆的凝固终点。
当血浆黏度不变时,在反应杯两侧有一组驱动线圈,它们在测量探头两边产生恒定的交变磁场,使钢珠沿反应杯底部弯曲的轨道作等幅振荡运动,电磁场频率接近钢珠的振动频率,使系统形成一个较高的检测灵敏度。
在血浆凝固过程中,血浆黏度上升,钢珠运动振幅衰减,利用振幅的变化,可计算出血浆的凝固时间。
2.2发色底物法:
人工合成的特定化合物可被某种酶(如凝血酶、纤溶酶等)催化裂解,反应后释放出产色物质对硝基苯胺(PNA),游离PNA呈黄色,使被检样品中出现颜色变化,加人醋酸终止反应后,在405nm波长下测定吸光度的变化,进而推算岀待检物质的活性。
发色底物法采用酶学方法直接定量,所需样品量小,结果准确,重复性好,便于自动化和标准化。
发色底物法可以对酶(纤溶酶、凝血酶等)、酶原(纤溶酶原等)或酶抑制物(AT-ID等)进行定量测定。
2.3免疫比浊法
定童的血浆样本经过一定时间的孵育后,加人稳定剂和抗体敏感性试剂,用波长540nm的光照射样本,抗原抗体反应导致的吸光率改变可通过检测透射光光强度的改变来测定。
如D-二聚体(DD)就是采用免疫比浊法进行测量。
3仪器运行环境
环境温度:
15〜35°C(最佳温度25°C),相对湿度:
30%〜85%。
电源要求:
115V(士10%)或210V(士10%)或230V(士10%),频率50/60Hz,医院级接地。
其他要求:
避免阳光直射,勿近无线电或其他通讯设备,通风需良好。
4授权操作人
经过授权的检验科工作人员。
5基本资料与性能参数5.1仪器基本性能资料
广东省中医院检验科
作业指导书
第四节STA-REvolution
凝血分析仪标准操作程序
文件编号:
LJ-SOP-007文件版木:
5.0生效日期:
2014-09-01
生产商:
法国DiagnosticaStago公司。
代理商:
广州XXXX有限公司。
技术人员:
XXX。
服务热线:
4006109796、
8008109796(免费)。
检测原理:
凝固法、发色底物法和免疫比浊法。
测试速度:
400测试/小时。
5.2检测性能
5.2.1不精密度(表9-14)
表9-14STA-R不精密度
tiffb
批内不精密度(%)
叹曰
正常血浆
异常血浆
PT
<3.0%
<8.0%
APTT
<4.0%
<8.0%
FIB
<4.0%
<5.0%
TT
<4.0%
<8.0%
DD
<10.0%
<10.0%
5.2.2可报告范围(表9-15)
表9-15STA-R可报告范围
检验项目
可报告范围
PT
最大120s
FIB
0.3〜15.0g/L
APTT
最大180s
TT
最大240s
DD
220〜4000pg/L
6仪器操作
6.1开机
6.1.1打开显示器,打开仪器左边绿色开关至ON,仪器启动,内部电脑启动至Win-
dows界面。
6.1.2双击桌面“STA-R”仪器图标,仪器进行自检,约5分钟。
6.1.3自检完成后,点击“R”6.2试剂准备和保存6.2.1试剂配制和保存一览表
(表9-16)
表9-16试剂配制和保存一览表
项目
试剂
复溶
有效期
静置时间
PT
STA-NeoplastineClPlus
2液倒入1号瓶
20°C±5°C48h,2~8°C8dCaps
30min
中,加磁力搅
拌棒
APTT
STA-PTTAutomate5
加5mlH20
20°C士5°C48h,2~8°C7dCaps
30min
FIB
STA-Fibrinogen5
加5mlH20
20°C土5°C96h,2〜8°C14dCaps
30min
TT
STA-Thrombin10
加10mlH20
20°C士5°C48h,2~8°C14dCaps
DDI
STA-LiatestDDI
1液和2液,直
20°C士5°C15d,Caps+减蒸器
/
接使用
质控物
STA-CoagControlN+P
加1mlH20
20°C士5°C8h,—20°C10d
30min
STA-LiatestControlN+P
加lmlH20
20*C士5°C8h,-20°C10d
30min
定标物
STA-Unicalibrator
加1mlH20
20°C士5°C4h
30min
其他试剂
STA-Owren-Koller
直接使用
20°C士5°C72h
6.2.2试剂标识
图标,等待仪器初始化。
6.2.2.1PT、APTT、TT、FIB等需要复溶的试剂
在瓶身上注明复溶日期和时间、2〜8°C条件下保存的最后效期日、复溶人(姓名之简称,或拼音缩写等),例1:
PT瓶[15/109:
00—23/10胡】表示胡XX在15/109:
00复溶的,在2〜8°C原瓶带盖状态下可保存至23/10的9:
00。
例2:
TT瓶【1/1116:
30—15/11WXZ1表示该瓶TT是吴XX在1/1116:
30溶解,在2〜8°C原瓶带盖状态下可保存至15/1116:
30,超过此日期和时间,试剂失效,不能再用。
6.2.2.2DD、Owren-Koller、CaCl2等直接使用的试剂在瓶身上注明上机启用日期。
6.2.2.3质控品
原瓶质控品溶解后,只需标注溶解日期和操作人。
若质控品分装冷冻保存,子弹头上需注明分装日期、批号、质控类型和浓度水平。
N代表凝血正常水平;P代表凝血异常值水平;DN代表D-二聚体的正常水平;DP代表D-二聚体的高值水平。
6.3装载试剂和质控品
6.3.1点击“试剂装载/卸载”图标,屏幕上显示试剂仓位置,点击“打开”按钮,试剂抽屉将打开。
6.3.2将复溶好的试剂或质控品开盖,在仪器前面左侧的条码阅读器前扫描试剂瓶上的条形码。
如使用的是微量管,先按F8转换“常量/微量”模式,再扫描试剂瓶上的条形码。
6.3.3将试剂瓶放人试剂抽屉中适宜直径大小的孔位(DESORBU要在R0/R1/R2各至少放1瓶,稀释液和质控液放在R0区,中间试剂放在R1区,启动试剂放在R2区。
外周标记红色弧形箭头的试剂位具有磁力搅拌功能(PT试剂应放在R2区具有磁力搅拌功能的试剂位),重复以上操作直至所有试剂或质控品放置完毕。
6.3.4点击“关闭”按钮,试剂抽屉将关闭。
6.4质控检测6.4.1质控品的选择
STA凝血质控品包括正常和异常两个水平,正常水平测量PT、APTT、TT、FIB四个指标,异常浓度测量PT、APTT、Fffi三个指标。
D-二聚体每天测量一个水平(中值/高值)。
6.4.2质控品准备
质控品从冰箱取出放置室温5分钟后用1ml蒸馏水或注射用水溶解,静置10分钟后,才能进行混匀,30分钟后才可上机检测。
未用完的质控品室温保存8小时内有效,2〜8°C冰箱可保存24小时,也可将未用完的质控品分装后置一20°C冷冻保存,可稳定15天。
冷冻保存的质控品使用时需37°C温水浴解冻,恢复至室温后即可上机检测。
6.4.3新批号质控品设置
扫描质控品批号时,如果是新批号的质控品,仪器将会有提示,将试剂盒中附带的相应质控品的条码依次进行扫描,各参数的允许范围会依次读人,完成设置。
6.4.4靶值和标准差的设定
6.4.4.1靶值设置:
新批号质控品需要至少检测10天,至少使用20个检测结果的均值作为靶值。
收集数据后,计算均值、标准差和变异系数,剔除超过3S的数据,重新计算余下数据的均值和标准差,以此均值作为质控图的均值。
6.4.4.2标准差设置:
参考同一浓度水平旧批号半年或一年质控数据的平均变异系数(CV%),乘以设定的粑值,即得到新批号的标准差,3〜6个月后可重新计算累积标准差,作为质控图的控制限。
6.4.5质控图和质控规则6.4.5.1Levey-Jenning质控图
参照LIS操作规程,在LIS中将各质控品的批号、均值、标准差、质控规则等维护好,自动生成Levey-Jenning质控图。
5为IE值线或中心线,5±2s为警告线,S±3s为失控线。
6.4.5.2质控规则
a)l2s警告规则:
1个控制品测定值超过王±2s控制限,在临床检验工作中,常作为警告界限;
b)l3s失控规则:
1个控制品测定值超过x±3s控制限,判定为失控,提示偶然误差;
c)22s失控规则:
2个连续的控制品测定值同时超过5+2s或王一2s控制限,提示系统误差。
6.4.6质控检测
点击“L-J质控”图标,选择项目,点击“质控水平栏(#指不同水平质控的数字),点击“手形”按钮选择相应质控水平,点击“OK”按钮确认。
检测完毕,在“L-J质控”界面,可观察当天结果、当月每天结果和每月均值。
质控结果也会自动传输到LIS的质控界面。
6.4.7失控的分析和处理
a)重新测定同一质控品,用以查明是否有人为误差或偶然误差。
如重测的结果在允许范围内(在控)即为偶然误差,如重测结果仍不在允许范围内,应进行下一步操作;
b)新开一瓶质控品,重测失控项目。
若结果正常,说明原来那瓶质控血清可能失效,或者被污染;若结果仍不在允许范围,则进行下一步;
c)检查试剂,此时可更换试剂以查明原因,如不是试剂问题,进行下一步;
d)重新定标,重测失控项目,排除校准液的问题;
e)进行仪器维护,重测失控项目,检查光源是否需要更换。
如结果仍不在允许范围,则进行下一步;
f)请专家帮助。
如果前六步都未能得到在控结果,则可能是仪器存在更复杂的故障,应与仪器厂家联系,请求技术支援;
g)填写失控报告。
6.4.8质控结果总结及保存
质控结果每月总结一次并归档保存。
电子记录表、计算机中的原始数据和质控图等可代替手工记录。
6.5样本检测
6.5.1点击主菜单栏的“样本”按钮进人样本检测界面,点击“测试面板/testpanel”。
6.5.2标本装载:
将离心好的试管排列在试管架上,将试管架排列在试管架托架上,将试管架放在仪器左侧的标本放置区,标本自动装载进人。
6.5.3仪器条码扫描器扫描标本条码,从LIS中读出检测项目,自动开始进行检测。
6.5.4标本卸载:
标本检测完后,点击主菜单栏的“样本”按钮,点击“卸载/Unloading”按钮,将空的托架放置在仪器左边的标本放置处,选择要卸载的试管架,点击试管架号前的空格,此时空格处出现“V”,点击“卸载”和“OK”按钮确认,等待标本退出仪器后,取出试管架托架。
6.5.5如有标本条形码不能读出,等所有标本全部进人仪器后,先卸载此标本所在的试管架,进行手动编辑。
6.5.6手动编辑样本检测:
在该页面右下方点击“样本”按钮,标本装载可在自动和手动模式之间进行切换。
如前装载标本,标本自动推进。
此时仪器自动出现画面“人工输人患者ID号”,点击画面左下角的“1号”圆圈,此时光标在画面左上角的1号位置处,输人此标本的ID号,在右侧选择所需检测的项目。
依此类推编辑其他标本,编辑完成后点击“进人”按钮,第一排试管架进人仪器。
重复以上操作,直至所有的试管架全进人仪器,开始检测。
6.6关机
6.6.1点击屏幕最左下角的“离开”按钮,弹出仪器退出界面,点击“OK”按钮退出仪器操作界面,回到Windows主菜单。
6.6.2点击屏幕左下角任务栏,单击“开始”按钮,选择“关机”。
6.6.3当出现“现在可以安全地关闭计算机”时,关闭仪器右边绿色开关至OFF。
6.6.4关闭显示器。
7常见问题的处理
7.1DD的检测模式
a)DD的检测范围是220〜400(Vg/L,如超过4000Mg/L,仪器自动稀释5倍后检测。
如果结果显示VSV^,则报告DD>20OOO^g/L;
b)DD/2是样本稀释2倍后的检测模式,如果结果显示VSV^,则报告DD>8000^tg/Lo
c)DD/4是样本稀释4倍后的检测模式,如果结果显示VSV^,则报告DD>16OOOf/g/L。
7.2仪器故障
出现报警时,不要急于不停地点击屏幕,这容易造成死机。
如出现死机,按“Ctrl+Alt+S”退出STA软件,如还不能解决问题,关主机电源,几分钟后重启即可。
7.3复查样本
如该样本还在仪器内没卸载,在结果界面双击“需复查的项目”,选择“重测/Rerun”,仪器自动复查该项目。
如该样本已卸载,则将该样本再自动扫描条码,双击仪器需复查的项目,选择“重测/Rerun”,仪器自动复查该项目。
7.4试剂缺失
仪器自动报警,点击屏幕下方不断闪烁的试剂缺失图标,缺失试剂显示红色。
7.5添加试剂
除非所有项目检测完毕,才能打开仪器主盖,否则检测中的项目将全部中止,浪费
试剂及反应杯。
需添加试剂时,通过试剂界面“打开”打开试剂仓添加试剂,添加完毕后通过试剂界面“关闭”按钮关闭试剂仓,切勿用手强推试剂仓。
8维护
点击“Maintenance(保养)”图标进人保养程序(表9-17)
时间
项目
内容
操作方法
软件菜单
备注
每日集液器触摸屏
每月主空气过滤网光学模块滤网洗针池
检'?
»'f»-'v»tal
倒空内部的液体乙醇
用水冲洗后晾干吸尘器除尘
清洗消毒剂(*),30min
针
清洁
使用相应的通针钢丝通针
试剂抽屉
清洁
温水
测fl模块
清洁
用棉签蘸20%〜40%乙醇擦拭,测量模块表面用温水纱布擦拭
吸杯头
清洁
温水
传送带
清洁
90%乙醇,受血浆污染时使用清洗消毒剂
测fl杯小车
清洁
20%〜40%乙醇
Maintenance
Maintenance
Maintenance
箭头标示朝上
Maintenance
勿清洗,必要时更换
Maintenance/
清洗剂加至洗针池
WellRin
3/4处
Maintenance/
使用清洗消毒剂浸
WellRin
泡通针钢丝30min
Maintenance
试剂瓶破裂致污染
Maintenance
时使用清洗消毒剂
Maintenance手工移动4号臂,勿取下吸杯头
Maintenance
表9-17STA-R保养一览表
注,清洗消毒剂:
活性铽浓度为0.37%
9生物安全
9.1操作中所有与患者血样或与仪器表面的接触都应当做潜在污染物考虑,在使用仪器设备时,必须戴保护性的手套。
9.2如操作人员不小心接触了废弃物或其他生物性的危险物时,立即用清水冲洗被污染区域并遵守实验室的清理及排除污染的步骤。
9.3如皮肤或衣物上沾到了试剂或血样,立刻用清水冲洗。
如眼睛沾到试剂,用大量的清水冲洗并考虑必要的医疗措施。
广东省中医院检验科
作业指导书
第四节STA-REvolution
凝血分析仪标准操作程序
文件编号:
LJ-SOP-007文件版本:
5.0生效日期:
2014-09-01
10参考资料
仪器操作手册。
11记录表格
LJ-SOP-007-01《STA-REvolution全自动凝血分析仪日常使用记录表》LJ-SOP-007-02《STA-REvolution全自动凝血分析仪定时维护保养记录表》
广东省中医院大院检验科
STAREvolution全自动凝血分析仪日常使用记录表
记录时间:
20年表格编号:
LJ-SOP-007-01
日期
时间
清洁
仪器
添加
试剂
检查
集液器
清空
废液
操作者
下午添加试剂时间
操作者
1
2
广东省中医院大院检验科
STA-REvolution全自动凝血分析仪定时维护保养记录表
记录时间:
20年表格编号:
LJ-SOP-007-02
1月
2月
3月
4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
清洁主空气过滤网
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