输血相容性检测室内质控操作规程.docx
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输血相容性检测室内质控操作规程
输血相容性检测室内质控操作规程
输血相容性检测室内质控操作规程
输血相容性检测室内质控操作规程
【目的】规范输血科各级检验人员室内质控操作程序,确保检验结果准确、可靠。
【适用范围】适用于输血相容性检测项目。
【职责】输血科全体员工均遵守执行。
(一)ABO、RhD血型室内质控操作规程
【检验原理】
选择已知型别的红细胞和血清,根据其与在用试剂标准血清:
抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型红细胞及ABO血型抗原检测卡(微柱凝胶)阳性及阴性检测结果,通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测,以监控实验室进行ABO、RhD血型检测过程中应用的试剂、设备及实验流程,并评估实验结果的有效性。
【主要试剂组成】
1.质控品:
样本1A1型RhD(+)红细胞
样本2B型RhD(+)红细胞
样本3A血清
样本4B血清
样本5O型RhD(+)红细胞
样本6RhD(-)红细胞
2.血型鉴定试剂:
标准血清:
抗A,抗B,抗D
ABO血型反定型红细胞:
Ac,Bc,Oc
ABO血型抗原检测卡(微柱凝胶)
【主要仪器】卡式专用离心机
【检验方法】首先将质控品、标准血清及ABO血型反定型红细胞从冰箱取出后平衡至室温。
操作步骤按不同检验方法(平板法、试管法、微柱凝胶法)具体如下:
1.平板法:
在玻片上(或纸片上)按表1加样各1滴(50ul),混匀(直径约20mm大小),前后缓慢摇晃玻片,2分钟左右肉眼判读结果,并记录。
2.试管法:
取13支(95mm×12mm或75mm×12mm)试管做好标记,按表1加样各1滴(50ul),混匀,离心(离心速度和时间可以选择转速1000rpm时间1分钟或转速3400rpm时间15秒),判定结果,并记录。
表1平板法、试管法ABO及RhD血型室内质控加样表
抗A+样本1
抗B+样本1
抗D+样本1
4%Ac+样本3
4%Bc+样本3
4%Oc+样本3
抗A+样本2
抗B+样本2
抗D+样本2
4%Ac+样本4
4%Bc+样本4
4%Oc+样本4
抗A+样本5
抗B+样本5
抗D+样本5
抗D+样本6
3.柱凝胶法:
取4张待检ABO血型抗原检测卡(微柱凝胶)做好标记。
将样本1分别加入第1张卡的1-3孔中各1滴(50ul),将样本2分别加入第2张卡的1-3孔中各1滴(50ul),将样本5分别加入第3张卡的1-3孔中各1滴(50ul),将样本6加入第4张卡的第3孔内。
使用卡式专用离心机离心,取出,肉眼判定结果,并记录。
【建立参考值】
首次使用质控品或不连续使用时,需要连续做三天试验,结果一致,方可定为参考值;更换不同批号质控品时,需新旧质控品同时做,连续两天,旧批号质控品在控,新批号质控品质控品结果一致,可确定参考值;更换试剂时,需新旧批号试剂同时做两次质控品,两次结果一致,可确定参考值;不同仪器或不同方法学均要单独定值。
质控规则:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【失控判定】
阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异,或阴性质控出现阳性结果时,均视为失控。
失控原因分析:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
失控解决方案:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【记录表格】
《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65
《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66
《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67
【注意事项】
1.室内质控品、标准血清、标准红细胞保存在2~8℃,严禁在室温长期存放。
2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合,以防污染,不同批号质控品不得混用。
3.红细胞质控品:
轻拿轻放,避免剧烈震荡;若发生凝集,出血菌落或严重溶血,不得使用;若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤,重新悬浮后使用。
4.质控血清:
出现浑浊或沉淀时,应进行适当离心,去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。
【参考资料】
1.长春愽迅生物技术有限公司《ABO、RhD血型检测质控品(微柱凝胶法)说明书》
2.长春愽迅生物技术有限公司《ABO、RhD血型检测卡(微柱凝胶法)说明书》
3.上海血液生物医药有限责任公司《抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体)说明书》
4.密理博(上海)贸易有限公司《康D(IgM+IgG)血型定型试剂(单克隆抗体)说明书》
(二)不规则抗体筛检室内质控操作规程
【检验原理】
选择已知血清,标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶)中的阳性及阴性结果,通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测,以监控实验室进行不规则抗体筛检过程中应用的试剂、设备及实验流程,并评估实验结果的有效性。
【主要试剂组成】
1.质控品:
样本1O型血清
样本2IgG型抗D(+)AB血清
2.不规则抗体筛检试剂:
抗人球蛋白不规则抗体筛检卡(微柱凝胶)
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检红细胞
【主要仪器】卡式专用离心机
【检验方法】微柱凝胶法,具体操作步骤如下:
1.将质控品、抗体筛检红细胞从冰箱取出后平衡至室温。
2.取1张抗人球蛋白不规则抗体筛检卡做好标记。
3.将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检细胞用低离子强度盐溶液稀释至0.8%,对应加入上述检测
卡1~6管中,50ul/管。
4.分别在前3管加入样本1,后3管加入样本2,50ul/管。
5.将检测卡置37℃孵育器中15分钟。
6.即刻使用卡式专用离心机离心,取出,肉眼判定结果,并记录。
【建立参考值】
首次使用质控品或不连续使用时,需要连续做三天试验,结果一致,方可定为参考值;更换不同批号质控品时,需新旧质控品同时做,连续两天,旧批号质控品在控,新批号质控品质控品结果一致,可确定参考值;更换试剂时,需新旧批号试剂同时做两次质控品,两次结果一致,可确定参考值;不同仪器或不同方法学均要单独定值。
质控规则:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【失控判定】
阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异,或阴性质控出现阳性结果时,均视为失控。
失控原因分析:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
失控解决方案:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【记录表格】
《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65
《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66
《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67
注意事项
1.室内质控品、抗筛细胞、保存在2~8℃,严禁在室温长期存放。
2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合,以防污染,不同批号质控品不得混用。
3.质控血清:
出现浑浊或沉淀时,应进行适当离心,去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。
参考资料
1.长春愽迅生物技术有限公司《不规则抗体筛检质控品说明书》
2.长春愽迅生物技术有限公司《抗人球蛋白检测卡不规则抗体筛检操作说明书》
3.长春愽徳生物技术有限责任公司《不规则抗体检测试剂(人红细胞)使用说明书》
(三)交叉配血室内质控操作规程
【检验原理】
凝聚胺介质法:
红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性聚集,其悬浮在电解质中形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。
而凝聚胺介质法则是首先利用低离子溶液降低介质的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞和血清(血浆)中的抗体结合,其后加入凝聚胺溶液(Polybrene,为高价阳离子多聚物、肝素中和剂),以中和红细胞表面带有的负电荷,使红细胞表面带有的负电荷,使红细胞Zeta电位降低,缩短红细胞之间的距离,使红细胞产生非特异性的凝聚,最后加入悬浮液(Resuspending),
中和凝聚胺(Polybrene)阳离子作用,使正常的红细胞非特异性凝聚散开,试验结果为阴性,但如果红细胞被相应的抗体致敏,则会被凝聚胺凝结,试验结果为阳性。
微柱凝胶法:
选择已知的血清和相应的细胞,标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶)中的阳性及阴性结果,通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测,以监控实验室进行交叉配血过程中应用的试剂、设备及实验流程,并评估实验结果的有效性。
【主要试剂组成】
1.质控品:
样本1AB型RhD(+)红细胞
样本2O型RhD(+)红细胞
样本3RhD(-)红细胞
样本4O血清
样本5IgG抗DAB血清
2.交叉配血检测试剂:
凝聚胺介质试剂:
低离子溶液(LIM)、凝聚胺(Polybrene)、悬浮液(Resuspending)
抗人球蛋白交叉配血检测卡(微柱凝胶)
【主要仪器】卡式专用离心机
【检验方法】
首先将质控品、凝聚胺介质从冰箱取出后平衡至室温。
操作步骤按不同检验方法(试管法、微柱凝胶法)进行。
1.凝聚胺介质法为试管法,操作步骤如下:
1.1取4支(95mm×12mm或75mm×12mm)试管做好标记.
1.2按照组合1(样本4+样本1)、组合2(样本4+样本2)、组合3(样本5+样本1)、组合4(样本5+样本3)分别加入各管,各1滴(50ul)。
1.3各管加入低离子溶液(LIM)0.65ml,混合均匀后,各管加入凝聚胺(Polybrene)溶液2滴(100ul),并混合均匀。
1.4用离心机3400rpm时间10秒,然后把上清液倒掉,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。
1.5轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝聚,如无凝聚,则必须重做。
1.6最后加入悬浮液(Resuspending)2滴(100ul),轻轻摇动试管混合并同时观察结果。
如凝聚散开,表示由Polybrene引起的非特异性凝集,抗体筛检结果为阴性。
如果凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结果的特异性反应,抗体筛检结果为阳性,应进一步作抗体鉴定。
2、微柱凝胶法操作步骤如下:
2.1取1张待检抗人球蛋白交叉配血检测卡(微柱凝胶)做好标记。
2.2交叉配血实验按照组合1(样本4+样本1)、组合2(样本4+样本2)、组合3(样本5+样本1)、组合4(样本5+样本3)加样,各50ul。
2.3将检测卡置37℃孵育器中15分钟。
2.4即刻使用卡式专用离心机离心,取出,肉眼判定结果,并记录。
【结果解释】
交叉配血室内质控根据其检测作用可分为IgG组和IgM组如表2。
表2交叉配血室内质控IgG、IgM分组表
组合
质控品组合
检测结果
检测作用
组合1
样本4+样本1
+
检测IgM类抗原抗体反应
组合2
样本4+样本2
-
检测IgM类抗原抗体反应
组合3
样本5+样本1
+
检测IgG类抗原抗体反应
组合4
样本5+样本3
-
检测IgG类抗原抗体反应
【建立参考值】
首次使用质控品或不连续使用时,需要连续做三天试验,结果一致,方可定为参考值;更换不同批号质控品时,需新旧质控品同时做,连续两天,旧批号质控品在控,新批号质控品质控品结果一致,可确定参考值;更换试剂时,需新旧批号试剂同时做两次质控品,两次结果一致,可确定参考值;不同仪器或不同方法学均要单独定值。
质控规则:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【失控判定】
阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异,或阴性质控出现阳性结果时,均视为失控。
失控原因分析:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
失控解决方案:
按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。
【记录表格】
《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65
《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66
《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67
【注意事项】
1.室内质控品保存在2~8℃,严禁在室温长期存放。
2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合,以防污染,不同批号质控品不得混用。
3.红细胞质控品:
轻拿轻放,避免剧烈震荡;若发生凝集,出血菌落或严重溶血,不得使用;若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤,重新悬浮后使用。
4.质控血清:
出现浑浊或沉淀时,应进行适当离心,去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。
【参考资料】
1.长春愽迅生物技术有限公司《交叉配血质控品(微柱凝胶法)说明书》
2.珠海贝索生物技术有限公司《凝聚胺介质试剂说明书》
3.长春愽迅生物技术有限公司《抗人球蛋白检测卡交叉配血操作说明》
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