蜜炙纹党的炮制新工艺讨论.docx
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蜜炙纹党的炮制新工艺讨论
蜜炙纹党的炮制新工艺讨论
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中药蜜炙法源于蜂蜜与方剂的配伍用药形式,是中药炮制法中较为常见的方法之一。
《神农本草经》论述:
“蜂蜜安五脏之不足,益气补中,止痛解毒,除百病,和百药,久服强志轻身,不老延年”。
药物经蜜炙后可以增强其润肺止咳、补脾益气的作用。
纹党参为素花党参Codonopsispilosulamodesta(Nannf.)L.T.Shen的干燥根,能补中益气、健脾益肺,用于脾肺虚弱、气短心悸、虚喘咳嗽、内热消渴。
蜜炙是党参炮制的常用方法,清《治金》记载党参炮制有“蜜炙”,清代严西亭在《得配本草》中提到“补肺,蜜拌蒸熟”。
现代研究表明蜜炙党参取其甘缓,既可增强补中益气的作用,又能润燥养阴用于气血两虚之证;也有杨中体等通过炭粒廓清实验和游泳实验证明临床补气用蜜炙党参炮制品为佳。
蜜炙法一般均采用传统的炒制法,多以人工锅炒,操作烦琐,工作条件差,柴火烟灰又容易污染药材和环境。
蜜炙的火候、时间难控制,外观质量难以一致,内在质量更难保证。
随着中药现代化的提出和现代医药科技的发展,大量先进设备和技术用于中药的炮制过程中。
现代蜜炙炮制方法包括烘箱烤制蜜炙法、控温鼓风干燥箱法、微波法、机器蜜炙法、远红外烤箱法等,但是蜜炙党参的炮制方法,依然使用传统工艺较多,未与现代科技结合。
基于微波法和烘箱干燥法,研究一种蜜炙党参的新工艺,有助于蜜炙党参向精细化和标准化方向发展。
众所周知,中药通过多成分、多靶点的整体模式发挥作用,以单一活性成分或几种指标性成分定量控制中药的质量,难以反映中药所体现的的整体疗效。
中国药典2015年版关于党参的定量评价仅有醇浸出物的含量一项指标,也有文献报道以党参中党参炔苷、党参多糖和苍术内酯Ⅲ等有效活性成分的含量为指标评价党参药材的品质,这显然存在着一定的局限性。
指纹图谱在药材和饮片的质量控制方面具有优势,可以较为全面地反映中药中所含化学成分的种类与数量,为中药药材和饮片的质量控制提供依据。
本实验以鲜纹党入手,通过比较不同加工方式对饮片中醇浸出物量、水浸出物量、总黄酮、多糖、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ含量的影响,同时考察各样品HPLC指纹图谱中共有峰峰面积与称样量的比值,优选最佳蜜炙纹党炮制工艺。
1仪器与材料
Waterse2695系列高效液相色谱仪(美国Waters公司,配备Waters2998二极管阵列检测器及Empower3色谱管理软件);UV-1700紫外分光光度计(日本Shimadzu);电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);微波炉(格兰仕有限责任公司);电磁炉(美的集团股份有限公司)。
CPA225D分析天平(赛多利斯,精度:
mg);旋转蒸发仪(Eyela,日本)。
对照品党参炔苷(批号:
17-1001,供含量测定用)、苍术内酯Ⅲ(批号:
02-2008,供含量测定用)、芦丁(批号:
05-1001,供含量测定用)均由上海中药标准化研究中心提供;葡萄糖(中国药品生物制品检定所,批号:
110833-200302,供含量测定用);甲醇、乙腈(色谱纯,德国默克公司);乙醇、甲醇(分析纯,天津市光复科技发展有限公司);水为重蒸馏去离子水;蜂蜜(兰州葆春源蜂产品有限公司)。
纹党参药材于2015年10月9号采自甘肃省文县中寨镇大海村踏坪,经兰州大学药学院周印所教授鉴定为纹党参Codonopsis(Nannf.)的根(围径>cm,长>10cm)。
2方法与结果
加工炮制方法
新工艺Ⅰ炼蜜的制备:
取生蜂蜜置锅内,加约为蜂蜜量1/3的沸水,中火加热至沸后,改小火加热至116~118℃,出现浅黄色有光泽的均匀小气泡,用手捻有黏性,手指分开无白丝出现时迅速出锅。
取同一批大小均匀的鲜纹党,均分为6份,每份kg,切片(厚度为mm)。
将纹党片与炼蜜按照5∶1的比例拌匀,闷润至炼蜜被纹党饮片充分吸收。
置微波炉内,于高档功率(750W)加热2min(每隔1min翻动一次),分别在烘箱温度70,80,90,100,110,120℃烘干,制得6个饮片样品,分别编号为S1~S6。
每个样品平行做3份。
加工特征描述及所需时间。
新工艺Ⅱ取kg大小均匀的鲜纹党,切片(厚度为mm)。
将纹党片与生峰蜜按5∶1的比例拌匀,闷润至峰蜜被纹党饮片充分吸收,置炒制容器内,用文火炒至黄棕色不黏手时,取出放凉。
编号为S7。
平行做3份。
加工特征描述及所需时间。
传统蜜炙炮制工艺取同一批纹党鲜药材kg,按药材原料—淘洗—上串—晾晒—揉搓—发汗—揉搓—清洗—整形(修枝)—晾晒至干燥—闷润—切厚片。
将炼蜜加沸水按照1∶1比例稀释后混匀,加入纹党片(为炼蜜质量的5倍)拌匀,稍闷,待蜜水吸尽后,投入热锅内,加热翻动,至纹党饮片呈金黄色,以疏松不黏稠为度,取出放凉。
编号为S8。
加工特征描述及所需时间。
样品中指标成分的测定
醇浸物和水浸物含量测定均按中国药典2010年版附录ⅩA项下的方法进行测定。
总黄酮的测定对照品溶液制备:
精密称取芦丁对照品mg,置25mL量瓶中,加适量甲醇溶解,并以甲醇定容,摇匀,得芦丁对照品储备液,于4℃放置,备用。
供试品溶液制备:
精密称取g样品粉末(过40目筛),置圆底烧瓶中,加10,8倍量的甲醇,回流提取2次,每次40min,过滤,滤液浓缩,定容至10mL。
③标准曲线的建立:
精密量取芦丁对照品溶液0,,,,,,mL分别置于25mL量瓶中,各加水至mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min,加10%的硝酸铝1mL,摇匀,再放置6min,加4%氢氧化钠溶液10mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min。
以无芦丁对照品溶液的阴性试剂为空白,于波长505nm处测定吸光度A,平行测定35,r=次。
以平均吸光度值A为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程为Y=4X1。
样品测定:
精密移取上述供试品溶液1mL,蒸干,加2mL蒸馏水复溶,精密移取mL,置25mL-9,线性范围为0~0mg·mL量瓶中。
按上述方法制备,测定3次,计算平均吸光度值,根据标准曲线计算各样品中总黄酮的含量。
多糖含量的测定供试品溶液的制备:
精密称取g蜜炙纹党粉末(过40目筛),脱脂(加10倍量的95%乙醇,加热回流2次,每次1h)。
弃去醇提液,药渣干燥后,加12,10,8倍量水煎煮,煎煮3次,每次40min。
合并滤液,浓缩后,加入95%乙醇,使溶液中乙醇浓度达到80%,充分搅拌,静置24h后,去上清,沉淀冷冻干燥,得纹党粗多糖。
精密称取粗糖粉末mg于25mL量瓶中,加蒸馏水定容至25mL。
于4℃放置,备用。
标准曲线的建立:
精密称取葡萄糖对照品mg置10mL量瓶中,加蒸馏水定容至刻度。
配成浓度为mg·mL−1的葡萄糖对照品储备液。
精密移取,,,,mL葡萄糖对照品储备液于试管中,加蒸馏水补足至2mL,加5%苯酚溶液1mL,摇匀,迅速加入5mL浓硫酸,摇匀,放置10min。
于40℃水浴中保温15min,取出,冷却至室温。
于波长490nm处测吸光度A。
平行测定3次,以平均浓度值A为纵坐标(Y),葡萄糖质量为横坐标(X)绘制标准曲线,得回归方程为:
Y=1X+4,r=8,线性范围为~mg。
样品中多糖含量测定:
精密移取上述供试品溶液200μL置试管中,加水补足至mL。
后续步骤如上标准曲线的制备所示,测定3次,计算平均吸光度值,根据标准曲线计算样品中多糖的含量。
党参炔苷含量的测定色谱条件:
色谱柱DiamonsilC18(250mm×mm,5μm)。
流动相为乙腈-水(26∶74)。
流速:
1mL·min−1。
柱温:
30℃。
检测波长:
267nm。
进样量10μL。
标准曲线的建立:
精密称取党参炔苷对照品mg,置于2mL量瓶,加甲醇超声溶解并定容至刻度,配成浓度为0mg·mL−1的党参炔苷对照品储备液。
储备液以甲醇稀释,配成浓度为6,2,4,9,8,5,0,0mg·mL−1的对照品溶液,按上述色谱条件进样测定。
以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X)绘制标准曲线,得到回归方程为Y=70450X+1054,r=7,线性范围为6~0mg·mL−1。
样品测定:
取“”项下的供试品溶液,摇匀,用μm微孔滤膜过滤后,取续滤液进样,测定结果。
苍术内酯Ⅲ含量的测定色谱条件:
色谱柱DiamonsilC18(250mm×mm,5μm)。
流动相为乙腈-水(71∶29);流速:
1mL·min−1,柱温30℃,检测波长220nm,进样量10μL。
标准品溶液的建立:
精密称取苍术内酯Ⅲmg,置2mL的量瓶,加甲醇超声溶解并定容,配成浓度为0mg·mL−1的苍术内酯Ⅲ对照品储备液。
储备液以甲醇稀释,配置浓度为3,5,0,0,1,1,3,5mg·mL−1的对照品溶液,按上述色谱条件进样测定。
以峰面积(Y)对浓度(X)作图,得线性回归方程为Y=5189723,r=6。
苍术内酯Ⅲ在3~5-3Xmg·mL−1与峰面积呈良好的线性关系。
样品测定:
取“”项下的供试品溶液,摇匀,用μm微孔滤膜过滤后,取续滤液进样,测定结果见图1。
由结果可知,新工艺制得的各饮片中醇浸物、水浸物、总黄酮、苍术内酯Ⅲ的含量都高于传统蜜炙工艺。
饮片S51)-1)、多糖(%)、党参炔苷(mg·g-的醇浸物(%)、总黄酮(mg·g的含量均高于其他工艺,其水浸物和苍术内酯Ⅲ含量也较高。
综合以上结果,最优工艺为“用炼蜜将鲜纹党片闷润后微波干燥2min,烘箱110℃烘干”。
验证试验
取同一批大小均匀的鲜纹党,精密称取kg,按最佳工艺,用炼蜜将鲜纹党片闷润后,微波干燥2min,每隔1min翻动一次,置烘箱110℃干燥,平行制备3份。
按“”项下各指标成分的含量测定方法进行测定。
验证试验制备的蜜炙饮片的成分含量和方法学研究时的饮片S5传统蜜炙饮片含量)/传统蜜炙饮片含量×100%。
-的结果基本一致。
与传统蜜炙工艺相比,各指标成分含量均有所增加,各指标的增长率,指标增长率=(新工艺饮片含量
蜜炙纹党饮片的指纹图谱研究
色谱条件色谱柱DiamonsilC18(250mm×mm,5μm)。
以乙腈为流动相A,以%乙酸水溶液为流动相B,线性梯度洗脱程序为:
0~15min,10%→20%A;15~25min,20%A;25~35min,20%→30%A;35~45min,30%→45%A;45~50min,45%→100%A;50~55min,100%。
流速:
1mL·min−1,柱温30℃,检测波长267nm,进样量10μL。
对照品溶液的制备对照品溶液用“”项下制备的党参炔苷对照品溶液。
供试品溶液的制备精密移取75mL“”项下的醇提液,浓缩至干,加甲醇定容至5mL,以mL·min−1的吸附速度过大孔吸附树脂柱,用100mL蒸馏水洗脱,弃去水液,再以150mL50%乙醇溶液洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩蒸干用甲醇定容至2mL,于4℃放置,备用。
方法学考察精密度试验:
取同一供试品溶液,在同1d和连续3d进样考察日内精密度和日间精密度,记录指纹图谱,以党参炔苷为参照峰,计算指纹图谱中各共有峰的相对保留时间(RRT)及相对峰面积(RPA)。
结果表明,日内精密度RRT的RSD90%。
P1,P2,P4,P6,P7,P8,P9,P12,P14的9个共有峰的峰面积与称样量比值随着温度先增加后减小,P1*,P2*,P3*,P4*,P5*5个共有峰的峰面积与称样量比值随着温度增加而增大,其中除P1,P2,P63个峰外,其他共有峰的峰面积与称样量比值均在“烘箱110℃干燥”最高。
从共有峰峰面积与称样量(g)的比值相对于传统蜜炙工艺的变化率来看,新工艺与传统蜜炙工艺比较其平均变化率都为正值。
从各峰的变化率来看,除P5,P6,P7,P8,P1*,P3*,P4*,P5*,P13,P14和P1611个峰的峰面积与称样量(g)的比值相对于传统统蜜炙工艺的变化率大多呈正变化率。
其中以“用炼蜜将鲜纹党片闷润后微波干燥2min,置烘箱110℃干燥”的变化率最高,为%。
说明与传统蜜炙工艺相比较,鲜纹党蜜炙工艺能够最大程度保存党参中的有效成分。
3讨论
新工艺Ⅰ考察了用炼蜜将鲜纹党片闷润后微波干燥2min,置烘箱70~110℃烘干对饮片中的指标性成分含量的影响。
由图1A所示,该工艺制得的6个饮片(S1~S6)的醇浸物含量与S8(传统蜜炙工艺)相比均有不同程度的提高,其中饮片S5的醇浸出物的含量最高(%),相比S8提高%。
如图1B所示,S1~S6的水浸物含量与S8相比也有不同程度的提高,提高幅度达%。
如图1C1),与S8-所示,该加工条件下,各饮片样品中总黄酮的含量随着温度的升高而升高,S5的总黄酮含量最高(mg·g相比提高的幅度为%。
由如图1D可见,干燥温度对饮片中多糖的含量无显著影响,以S5的多糖含量最高(%)。
由图1E可见,饮片中党参炔苷含量随着温度的升高而升高,到110℃达最高,之后又逐渐降低,与传统蜜炙工艺相比,以S5提高幅度最高(%)。
苍术内酯Ⅲ的含量因处理方式的差异而变化。
饮片S5在波长267和320nm下的HPLC指纹图谱中22个共有峰峰面积与称样量的比值相对于传统蜜炙工艺的均变化率最高为%。
综合以上结果,优选的工艺为“用炼蜜将鲜纹党片闷润,微波干燥2min(每隔1min翻动1次),110℃烘干”。
其次,新工艺Ⅱ考察采用生峰蜜将鲜纹党片闷润后用小火翻炒对饮片中指标成分含量的影响。
该工艺制得的饮片S7中各指标性成分的含量均高于传统蜜炙炮制品,但低于新工艺Ⅰ制得的饮片。
主要原因如下:
与传统工艺一样,新工艺Ⅱ采用炒制的方法,炒制时间和温度难以控制,外观质量难以一致,内在质量更难掌握,但是该炮制工艺采用了鲜纹党片,整体上更能保持有效成分;新工艺Ⅰ是基于微波法和烘箱干燥法来研究蜜炙纹党。
一方面微波的穿透性较强,而对有效成分破坏较轻,容易透过饮片的惰性干燥表层进入饮片内部,内层的水分接收微波能后迅速蒸发并向外表面迁移,高速的水分传质过程会减弱由水分子的氢键和表面张力作用而引起的药材组织收缩,提高了药材的复水特性,加快了水分向药材内部扩散的速率;另一方面微波干燥对根茎类药材有膨化破壁作用,使药材组织变得疏松多孔,有利于有效成分从饮片内部向表面扩散,从而提高了饮片表面的有效成分的浓度,与炒制方法相比,更有利于饮片中有效成分的溶出。
也有文献报道生用蜂蜜性偏凉,熟则性偏温,以补脾气、润肺燥之力胜,蜜炙法所用的蜂蜜都为加热过的炼蜜,目的是除去杂质与杀死微生物,除去水分增加黏性,炼熟使其能与药物起协同作用,所以使用炼蜜有一定的理论依据。
4结论
本实验优选出的最佳工艺为:
将采收期的新鲜纹党切厚片,将纹党片与炼蜜按照5∶1的比例拌后闷润至炼蜜被纹党片充分吸收,微波加热2min(每隔1min翻动1次),烘箱110℃烘干。
验证试验进一步说明了所建立的纹党蜜炙炮制工艺稳定可行。
该加工条件下制得的蜜炙纹党饮片色泽均匀无焦斑,酥松滋润不黏手,质量稳定性好;又由于微波穿透性好,药材内部水分散失快,杀菌消毒彻底迅速,成品易于储存,不易霉变,虫蛀;同时该炮制工艺省去了传统蜜炙工艺中二次闷润的过程,整体上更能保持有效成分不致流失,尤其是代表主要药效成分的14号峰党参炔苷的含量较高。
运用现代科学技术,可进一步开拓中药蜜炙新工艺的深度和广度,使蜜炙中药在防病治病中发挥更大作用。
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