高中生物实验详细总结.docx
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高中生物实验详细总结.docx
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高中生物实验详细总结
原理
实验材料
试剂
操作
结果
淀粉的检验
淀粉遇碘单质变蓝。
物质氧化碘液,置换碘单质,碘单质与物质发生颜色反应。
马铃薯匀浆
碘液(碘化钾溶液)
①向试管内注入2mL待测组织样液。
②向试管内滴加两滴碘液,观察颜色变化。
样液颜色变蓝,则样液含淀粉。
还原糖的检验
还原糖(葡萄糖,果糖,麦芽糖)与斐林试剂发生作用,生成砖红色沉淀。
苹果或梨匀浆
斐林试剂:
甲液:
质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液;乙夜:
质量浓为0.05g/mL
①向试管内注入2mL待测组织样液。
②向试管内注入1mL斐林试剂(甲液乙液等量混合均匀后再注入)
③将试管放入盛有50~65℃温水的大烧杯中加热约2min
④观察试管中出现的颜色变化
若生成砖红色沉淀,则样液含还原糖。
脂肪
脂肪被苏丹Ⅲ染成橘黄色,被苏丹Ⅳ染成红色
花生种子或花生种子匀浆
苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ
方法一:
向待测组织样液中滴加三滴苏丹Ⅲ染液,观察染液被染色情况
方法二:
制作子叶临时切片①取材②切片③制片:
1.在花生子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ,染色3min(苏丹Ⅳ染色一分钟)2.用吸水纸吸去染液再滴加1~2滴体积分数为50%的酒精溶液,洗去浮色3.用吸水纸吸取花生子叶周围的酒精,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片
④观察花生子叶最薄处
脂肪颗粒被染成橘黄色(红色)
蛋白质
蛋白质(肽键)与双缩脲发生颜色反应,蛋白质含量越高紫色越深
豆浆或鲜肝研磨液
双缩脲试剂:
A液:
质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液;B夜:
质量浓为0.01g/mL的CuSO4
①向试管内注入2mL待测组织样液
②向试管内注入双缩脲试剂A液1mL,摇匀
③向试管内注入双缩脲试剂B液4滴,摇匀
④观察试管内出现的颜色变化
样液变紫
观察DNA和RNA在细胞中的分布
两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色。
人的口腔上皮细胞或洋葱鳞片叶内表皮细胞
①质量分数为0.9%的NaCl溶液②质量分数为8%的盐酸
①去口腔上皮细胞制片:
1.在载玻片上滴一滴NaCl溶液。
2.在口腔内侧轻刮几下,将碎屑在液滴中涂抹。
3.点燃酒精灯,将载玻片烘干
②水解
1.在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸,载玻片放入其中。
2.在大烧杯中加入30℃温水。
3.将小烧杯放在大烧杯中保温5min
③冲洗涂片:
用缓水流冲洗载玻片10s
④染色:
1.吸水纸吸水2.将混合染色剂滴2滴在载玻片上,染色5min3.吸去多余染色剂,盖上盖玻片
⑤观察
真核细胞DNA主要分布在细胞核中,RNA主要分布在细胞质中。
用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
叶绿体散布于细胞质中,可用高倍显微镜观察其形态和分布。
健那绿染液是将活细胞中线粒体染色的专一性染料,使活细胞中线粒体呈现蓝绿色可维持活性数小时
新鲜菠菜叶或黑藻叶;人的口腔上皮细胞
质量分数为1%的健那绿溶液
①制作藓类叶片临时装片:
在载玻片上滴一滴清水,用镊子取一片小叶或菠菜叶带叶肉的下表皮,放入水滴盖上盖玻片
②观察叶绿体
③制作人的口腔上皮细胞临时装片
④观察线粒体
叶绿体随细胞质流动而流动。
代谢旺盛的位置线粒体较多
鉴别死细胞与活细胞
活细胞的细胞膜可以控制物质进出
动物细胞
台盼蓝
用台盼蓝染色,观察细胞是否着色
活的动物细胞不着色
植物细胞的吸水与失水
植物细胞的原生质层相当于一层半透膜;原生质层比细胞壁的伸缩性大;细胞液浓度大于外界溶液的浓度
紫色的洋葱鳞片叶
质量浓度为0.3g/mL的蔗糖溶液
1.制作临时装片2.用低倍显微镜观察液泡大小及原生质层位置3.从盖玻片的一侧滴入蔗糖溶液,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。
4.用低倍显微镜再次观察5.在盖玻片的另一侧滴入清水,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。
6.再次用低倍显微镜观察
细胞发生质壁分离,后又发生质壁分离的复原
探究酵母菌的呼吸方式
酵母菌是兼性厌氧菌;CO2可使澄清石灰水变浑浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄;橙色的重铬酸钾在酸性条件下与乙醇发生化学反应,变成灰绿色。
食用酵母菌
澄清石灰水;质量分数为5%的葡萄糖溶液;澄清石灰水;溴麝香草酚蓝水溶液;重铬酸钾溶液
①酵母菌培养液的制备:
制备两瓶,均注入葡萄糖溶液
②检测CO2的产生:
对A:
让空气间歇性依次通过三个锥形瓶,然后放置25-35℃环境中培养5-8h对B:
封口放置一段时间,再联通盛有澄清石灰水的锥形瓶
③检测酒精的产生:
各取培养液的余液,分别注入两只试管,分别滴加0.1g溶有重铬酸钾的浓硫酸溶液,轻轻振荡,观察试管中溶液颜色变化
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
有丝分裂常见于根尖根芽等分生区细胞,染色体容易被碱性染料如龙胆紫和醋酸洋红溶液染色
洋葱根尖细胞
质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精,龙胆紫溶液或醋酸洋红液
①洋葱根尖的培养
②装片的制作;
1.解离
2.漂洗:
用镊子把根尖放入盛有清水的玻璃皿中
3.染色
4.制片:
根尖放载玻片上,用镊子吧根尖弄碎,盖上盖玻片,用拇指轻轻按压
③根尖细胞有丝分裂的观察
处于间期的细胞最多
低温诱导植物染色体数目的变化
用低温处理植物分生组织细胞,能抑制纺锤体的形成,
洋葱或大葱,蒜
卡诺氏液;改良苯酚品红染液;
质量分数为15%的盐酸溶液;体积分数为95%的酒精溶液
①将洋葱放在装满清水的广口瓶上,待洋葱长出乐1cm不定根时将装置放入冰箱(约4℃),诱导培养36h
②剪取经处理的根尖0.5-1cm放入卡诺氏液中浸泡0.5-1h,以固定细胞形态,然后用体积分数为95%的酒精冲洗两次
③制作装片,包括:
解离,漂洗,染色,制片
④观察
DNA的鉴定
DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成w—羟基—r酮基戊醛,它再和二苯胺作用而显现蓝色(溶液呈浅蓝色)
鸡血或菜花细胞
二苯胺试剂
①取两只20ml试管,各加入量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL。
②将丝状物放入其中一支试管,用玻璃棒搅拌,使物质溶解
③向两只试管个加入4ml二苯胺试剂,混合均匀。
④将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,比较溶液颜色,观察含DNA的试管溶液是否变蓝
鉴定能分解尿素的细菌
在细菌分解尿素的化学方应中,脲酶将尿素分解成氨,是培养基碱性增强,使酚红指示剂变红
能分解尿素的细菌
酚红指示剂
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂将变红,就可以初步鉴定该种细菌可以分解尿素
绿叶中色素的提取与分离
色素能溶解在无水乙醇中;不同色素在层析液中溶解度不同。
溶解度高的扩散快。
菠菜的绿叶
无水乙醇;层析液;二氧化硅(研磨充分);碳酸钙(防色素被破坏)
①提取绿叶中的色素:
1.剪碎绿叶,向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙,再加入10ml无水乙醇,进行迅速充分的研磨。
2.将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤,用棉塞将试管口封严。
②制备滤纸条:
将滤纸条的一端剪去两角,并在距这端1cm处用铅笔画一条细线
③画滤液细线:
用毛细管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀画细线,待干后,再画一两次
④分离绿叶中的色素:
将滤纸条有细线的一端轻轻插入层析液中,随后用棉花紧塞试管口(不能让滤液细线触及层析液)
从上到下:
胡萝卜素:
橙黄
叶黄素:
黄色
叶绿素a:
蓝绿(最多)
叶绿素b:
黄绿
(叶绿素,[3/4]主要吸收蓝紫和红光,类胡萝卜素[1/4]主要吸收蓝紫光)
测定饮用水中的大肠杆菌数目
如果有大肠杆菌,因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体带H+,故菌落被染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
饮用水的滤膜
伊红美蓝培养基
根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数量。
鉴别纤维素分解菌
刚果红可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但不和纤维二糖和葡萄糖反应。
纤维素分解菌
刚果红(CR)
法1:
在长出菌落的培养基上覆盖1g/ml的CR溶液,10-15min后倒去,再加入NaCl溶液,15min后倒去
法2:
1:
200比例将10g/ml的CR溶液加入培养基,混匀后倒平板
通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌
酒精在高中生物中:
1、脱色剂
“探究叶绿体在光照下合成淀粉实验”中,将处理过的天竺葵叶片放入盛有酒精的小烧杯里,隔水加热,使叶片褪色(破坏和溶解叶片中所含的色素).这样就可在滴加碘液后,避免对观察叶片颜色变化的干扰.
2、漂洗剂
酒精是良好的有机漂洗剂.“脂肪的鉴定实验”中,用苏丹Ⅲ染液对脂肪组织进行染色后,可用体积分数为50%的酒精来冲洗浮色,以免干扰对细胞内脂肪颗粒的观察.
3、 提取剂和层析剂
绿叶中色素的提取和分离实验”中,可以用纯酒精作为提取色素的试剂和层析剂.在“DNA的粗提取与鉴定实验”中,采用酒精沉淀法,利用DNA不溶于酒精,而蛋白质、脂肪及磷脂等能溶解其中,可以进一步提出含杂质较少的DNA丝状物.
4、固定剂
在“观察植物细胞有丝分裂实验”中,一般采用质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精按体积比1:
1混合而成的药液作为解离试剂.盐酸能够使洋葱细胞的细胞壁软化,并使细胞间的中胶层物质溶解,从而达到分离细胞的目的.酒精的作用是固定蛋白质,使细胞的原生质凝固,不发生变化,固定细胞的分裂相,以尽可能保持原来的结构供观察.酒精也可与其它试剂混合成复合固定剂,如“低温诱导染色体加倍”中的卡诺固定液就是由无水酒精3份:
冰醋酸1份配制而成,适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖、花药压片及子房石蜡切片等.
5消毒剂选一中所有的70%的酒精都是消毒剂.70%~75%浓度杀菌作用最强,此浓度的酒精与细菌的渗透压近似,在细菌表面蛋白未变性前能不断地向菌体内部渗入,使细菌所有蛋白脱水、变性凝固,最终杀死细菌,以达到消毒杀菌的目的.浓度低于70%,则渗透性降低,达不到灭菌消毒目的.
5.燃烧剂 酒精灯中的燃料
盐酸在高中生物中:
1、“DNA和RNA在细胞在的分布”中8%盐酸的作用
(1)盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;
(2)盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合
2、“有丝分裂观察”和“低温诱导染色体加倍”中15%盐酸能够使洋葱细胞的细胞壁软化,并使细胞间的中胶层物质溶解,从而达到分离细胞的目的.
3、“酶活性受PH影响实验”和“生物组织中PH维持稳定的机制”盐酸用来变PH值。
高中生物常见染色剂
①氧化还原类
1斐林试剂2.重铬酸钾
②络合物类
1.碘2.双缩脲
③有机染色剂:
1.苏丹染色剂2.甲基绿,吡罗红,二苯胺3.龙胆紫,醋酸洋红,刚果红
④酸碱指示剂类:
1.溴麝香草酚蓝水溶液2.酚红指示剂
1斐林试剂检测可溶性还原糖
原理:
还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀
注意:
斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现用现配,条件需要水浴加热.
应用:
检验和检测某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;在医学上进行疾病的诊断,如糖尿病、肾炎.
2苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪
原理:
苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色;苏丹Ⅳ+脂肪→红色
注意:
脂肪的鉴定需要用显微镜观察.
应用:
检测食品中营养成分是否含有脂肪.
3双缩脲试剂检测蛋白质
原理:
蛋白质+双缩脲试剂→紫色
注意:
双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温(不需要加热).
应用:
鉴定某些消化液中含有蛋白质;用于劣质奶粉的鉴定.
4碘液检测淀粉
原理:
淀粉+碘液→蓝色
注意:
这里的碘是单质碘,而不是离子碘.
应用:
检测食品中营养成分是否含有淀粉
5DNA的染色与鉴定
染色原理:
DNA+甲基绿→绿色
应用:
可以显示DNA在细胞中的分布.
鉴定原理:
DNA+二苯胺→蓝色
应用:
用于DNA粗提取实验的鉴定试剂.
6吡罗红使RNA呈现红色
原理:
RNA+吡罗红→红色
应用:
可以显示RNA在细胞中的分布.
注意:
在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色.
7台盼蓝使死细胞染成蓝色
原理:
正常的活细胞,细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;死细胞或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色.
应用:
区分活细胞和死细胞;检测细胞膜的完整性.
8线粒体的染色
原理:
健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色.
应用:
可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在.
9酒精的检测
原理:
橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色.
应用:
探究酵母菌细胞呼吸的方式;制作果酒时检验是否产生了酒精;检查司机是否酒后驾驶.
10CO2的检测
原理:
CO2可以使澄清的石灰水变混浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄.
应用:
根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短,可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况.
11染色体(或染色质)的染色
原理:
染色体容易被碱性染料(如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液)染成深色.
应用:
用高倍镜观察细胞的有丝分裂.
12吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应
原理:
吲哚酚即2,6-二氯酚靛酚钠,其水溶液为蓝紫色,维生素C具有还原性,能将其褪色.
应用:
可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C.
13亚硝酸盐的检测出现玫瑰红
原理:
在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料.
应用:
将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量.
14脲酶的检测
原理:
细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,使PH升高,从而使酚红指示剂变红.
应用:
在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂,培养某种细菌后,看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素.
15伊红美蓝检测大肠杆菌
原理:
在伊红美蓝培养基上,大肠杆菌的代谢产物(有机酸)与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色.
应用:
用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量.
16刚果红检测纤维素分解菌
原理:
刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物.当纤维素被纤维素分解菌分解后,刚果红-纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈.
应用:
筛选纤维素分解菌.
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