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临床免疫学检验
临床免疫学检验
一、免疫球蛋白检测
•概念:
免疫球蛋白(Ig)是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。
由浆细胞产生,存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。
(一)分类
•按重链性质分:
IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、IgG
•于出生后三个月开始合成,3—5岁接近成人水平。
IG是血液中含量最高的Ig,占血清总Ig的75%—80%,是抗感染的主要抗体。
是唯一能通过胎盘的抗体。
IgA:
分为分泌型和血清型,分泌型的合成和分泌部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺,血清型占总Ig的10—20%。
IgM:
是分子量最大的Ig。
占血清Ig的5-10%。
是个体发育过程中最早出现的抗体,在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。
在机体受抗原刺激后,是最先产生的抗体。
IgM是血管内抗感染的主要抗体。
IgE:
是正常人血清中含量最少的Ig。
约0.1—0.9mg/L。
占总血清Ig的0.02%,为亲细胞抗体。
参与Ⅰ型超敏反应,与变态反应、寄生虫病及皮肤过敏有关。
(四)临床意义
⒈免疫球蛋白增高
•
(1)单克隆免疫球蛋白增高(M蛋白血症)
IgG、IgA、IgD或IgE增高。
见于:
多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症.淋巴样异常增生性疾病等。
•
(2)多克隆免疫球蛋白增高
•①感染:
特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染,IgG、IgM增高
②自身免疫性疾病:
SLE以IgG、IgA或IgG、IgM增高多见,类风关以IgM增高为主
③慢性肝病:
IgG、IgA、IgM可增高,慢活肝IgG、IgM增高明显
⑶IgD增高:
见于IgD型多发性骨髓瘤、妊娠末期、大量吸烟者
•⑷IgE增高:
见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综
⒉免疫球蛋白减少
IgG<6.0g/L,IgM、IgA<0.4g/L
(1)先天性:
见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症
•
(2)获得性:
见于大量蛋白丢失性疾病:
肾综、剥脱性皮炎中毒性骨髓病、白血病、淋巴网状系统肿瘤:
淋巴瘤、霍奇金病
长期使用免疫抑制剂
⑶Ig减少易引起反复感染
•IgG缺乏:
易患化脓性感染
•IgM缺乏:
易患革兰氏性阴败血症
•IgA缺乏:
易患呼吸道感染
二、血清M蛋白检测
⏹M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的,具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。
M蛋白检测的临床意义
⏹多发性骨髓瘤
⏹巨球蛋白血症
⏹重链病:
α型、γ型、μ型
⏹半分子病:
一条重链+一条轻链
⏹恶性淋巴瘤
⏹良性M蛋白血症
二、补体检测
•补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白,在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用,也参与免疫病理反应。
㈠CH50测定
㈠CH50临床意义
•主要反应补体经典激活途径的溶血功能,其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关
•增高见于:
急性炎症、组织损伤
•降低见于:
①急、慢性肾小球肾炎
②各种自身免疫病
③感染性疾病
④作为判断肝病严重程度的指标
㈡ C1q测定的临床意义
⏹是补体经典途径激活的始动因素
⏹增加:
见于骨髓炎、类风关、痛风
⏹降低:
见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良
㈢ C3测定的临床意义
⏹补体中含量最高,是经典途径和旁路途径的关键物质,也是一种急性时相反应蛋白
⏹增高见于:
急性炎症或传染病早期、
急性组织损伤、恶性肿瘤、
移植排异反应
㈢ C3测定的临床意义
⏹降低见于:
⑴补体合成能力降低:
慢性肝病、肝坏死
⑵补体合成原料不足:
营养不良
⑶补体消耗或丢失太多:
急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后
⑷先天补体缺乏
•㈣C4测定的临床意义
•增高:
见于各种传染病、急性炎症(如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等)和组织损伤等
•降低:
见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎
•SLE、类风关、IgA型肾病等
•在SLE,C4的降低常早于其他补体成分,且缓解时较其他成分回升迟
•㈤B因子测定的临床意义
•主要反应补体旁路途径的溶血功能
•增高:
见于某些自身免疫性疾病、肾综、
•慢性肾炎、恶性肿瘤
•降低:
见于肝病、急性肾小球肾炎、
•自身免疫性溶贫
•三、细胞免疫检测
•免疫细胞
•泛指执行机体免疫功能的各种细胞,主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。
•不同的细胞群或亚群各有其不同的表面标志和功能,可反映机体的细胞免疫状态或功能
•
•细胞免疫检测的应用
•自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
•骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
•感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
•某些疾病的发病机制研究
•
•T细胞抗原标记:
CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8
•B细胞抗原标记:
CD10、CD19、CD20、CD21、CD22
•髓系(粒-单系)抗原标记:
CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、
CD14、CD15、MPO
•巨核系抗原标记:
CD41a、CD41b、CD42b、CD61
•干细胞抗原标记:
CD34
•祖细胞抗原标记:
CD38
•红细胞抗原标记;CD71、血型抗原A、H
•非谱系抗原标记:
HLA-DR
急性白血病免疫分型
分型基础:
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现,表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。
这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改变,称为造血细胞分化抗原。
分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
T淋巴细胞表面标志检测
一、T淋巴细胞表面标志检测
1.E玫瑰花结形成试验:
CD2+
2.T细胞分化抗原测定:
CD3+、CD4+、CD8+
免疫荧光法和流式细胞术
临床意义:
•自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
•骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
•感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
•某些疾病的发病机制研究
CD3+检测的临床意义:
⏹总T淋巴细胞的重要标志
⏹评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断
⏹自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗
⏹器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗
CD3+CD4+检测的临床意义:
⏹辅助、诱导T淋巴细胞的标志
⏹机体免疫功能检测
⏹白血病、淋巴瘤的分型诊断
⏹免疫抑制治疗效果评价
⏹病毒感染性疾病时常降低
CD3+CD4+检测的临床意义:
CD4+绝对计数
是HIV(+)者/AIDS诊断和分型指标之一。
HIV(+)者分型:
一期:
>500×106/L;
二期:
(200-499)×106/L;
三期:
<200×106/L
CD3+CD8+检测的临床意义
⏹抑制、杀伤性T淋巴细胞的标志
⏹病毒感染性疾病时常增高
CD4+/CD8+减低:
常见于爱滋病、恶性肿瘤进行期及复发时
CD4+/CD8+增高:
在器官移植时预示可能发生
排斥反应、自身免疫病
•二、B淋巴细胞表面标志检测
•1.B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白测定:
•SmIgM、SmIgD
•免疫荧光法、流式细胞术
•2.B淋巴细胞分化抗原检测:
•CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD40
•
•二、B淋巴细胞表面标志检测
•临床意义:
•1.B淋巴细胞膜表面仅表达SmIgM则为未成熟B淋巴细胞,而同时表达SmIgM、SmIgD则为成熟B淋巴细胞
•2.SmIg+细胞增多:
慢淋、毛细胞性白血病、巨球蛋白血症
•3.SmIg+细胞减低:
体液免疫缺陷如丙种免疫球蛋白缺乏症等
•
•二、B淋巴细胞表面标志检测
•临床意义:
•CD19为全部B淋巴细胞共有的表面标志
•CD19增高见于B淋巴细胞系统的恶性肿瘤
•CD19减低见于体液免疫缺陷病
三、淋巴细胞亚群功能检测
㈠淋巴细胞转化试验:
1.形态学方法:
有丝分裂原:
T淋巴细胞---植物血凝素、
刀豆蛋白A、美洲商陆
B淋巴细胞---美洲商陆、
葡萄球菌A蛋白
三、淋巴细胞亚群功能检测
⏹临床意义:
反映机体的细胞免疫功能水平,
估计疾病的疗效和预后
㈢NK细胞的免疫检测
⒈数量检测——免疫荧光法、流式细胞术CD16+56
⒉功能的检测——
⏹NK细胞活性测定:
酶释法、
放射性核素法、免疫荧光法
⏹抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)测定:
㈢NK细胞的免疫检测
临床意义
1.NK细胞活性增高:
病毒感染早期、器官移植患者
2.NK细胞活性减低:
恶性肿瘤、AIDS、联合免疫缺陷病
3.抗肿瘤疗效观察和预后评价
4.免疫调节功能:
释放IFN-γ、TNF-β等,增强抗感染和免疫监视能力
第三节感染免疫检测
一、血清抗链球菌溶血素“O”试验(P434)
⏹链球菌溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的溶血外毒素,可刺激机体产生特异的抗链球菌溶血素“O”(ASO)
一、血清抗链球菌溶血素“O”试验
⏹临床意义
1.链球菌感染1周后ASO开始升高,4-6周达高峰,以后逐渐下降,在体内可持续存在数月甚至数年
2. 增高见于:
风湿性疾病、急性肾小球肾炎、扁桃体炎
3正常人血清中可存在ASO
二、伤寒和副伤寒沙门菌免疫检测
1.肥达反应(WR):
利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原,检测患者血清中有无相应抗体的一种凝集试验。
参考值:
直接凝集法
伤寒“H”<1:
160;“O”<1:
80。
副伤寒甲、乙、丙都<1:
80。
肥达反应的临床意义
⏹WR阳性一般出现在伤寒发病后一周,阳性率10%;第二周上升为60-70%;第四周可达90%以上。
⏹单份血清抗体效价“O”>1:
80及“H”>于1:
160者有诊断意义;
⏹若动态观察,WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。
⏹“O”不高,“H”升高见于预防接种后或非特异回忆反应
⏹“O”升高,“H”不高见于感染早期或其他沙门菌感染
2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定
参考值:
ELISA法正常人为阴性或滴度<1:
20
临床意义:
发病后一周即可出现升高,有早期诊
断价值,若其滴度>1:
20对诊断伤寒带
菌者也有意义。
3.伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定
参考值:
胶乳凝集法为阴性
临床意义:
阳性对确诊沙门菌感染更有重要意义
三、梅毒螺旋体抗体检测(P438)
⏹初筛试验(非特异性反应素):
快速血浆反应素试验(RPR)
不加热血清反应素试验(USR)
美国性病研究实验室实验(VDRL)
⏹确诊试验(特异性抗体):
梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)
荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)
⏹临床意义:
1.USR、RPR法:
感染梅毒螺旋体后1-2周检出率为76%,二期梅毒为95-100%,晚期梅毒为70-95%,隐性感染期为70-80%,SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等可出现阳性反应。
可作定量,用于疗效观察。
2.筛选试验阳性的情况下必须做确认试验,阳性可肯定梅毒的诊断。
确诊试验灵敏度高,特异性强,不受药物治疗的影响,特异性抗体可持续数年甚至终身。
不能用于疗效观察。
四、TORCH试验
⏹TO:
刚地弓型虫
⏹R:
风疹病毒
⏹C:
巨细胞病毒
⏹H:
单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型
⏹这组病毒常引起围产期感染,导致流产、早产、死胎和各种异常,目前已作为妇产科产前常规检查项目
五、C反应蛋白(CRP)(P439)
⏹能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急性时相反应蛋白
⏹细菌感染,尤其G-杆菌感染,CRP明显增高;病毒感染不增高或仅轻度增高
⏹风湿热的疗效观察:
急性期或活动期CRP增高可达200mg/L静止期恢复正常。
三、C反应蛋白(CRP)(P439)
⏹判断组织损伤的敏感指标:
器质性损伤CRP增高,功能性损伤CRP正常。
⏹器官移植后疗效观察指标:
排异反应时CRP增高
⏹超敏CRP对急性冠脉综合症的诊断和危险性评估有意义
第四节自身免疫检测
⏹自身免疫耐受:
在正常情况下,机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答
⏹自身免疫:
当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时,免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答
⏹自身免疫病:
指由自身免疫应答而产生的疾病
⏹自身抗体:
指针对自身组织或成分产生的抗体
㈠类风湿因子(RF)测定
⏹类风湿因子是由变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体,主要存在于类风湿性疾病患者的血清或关节液内。
它有IgM型,也有IgG、IgA、IgD和IgE型。
⏹检测方法:
胶乳凝集法、免疫比浊法、
RIA、ELISA法
㈠类风湿因子(RF)测定
⏹临床意义
1.类风关(RA)时,阳性率可达79.6%,高滴度RF支持对早期RA的诊断,RF滴度与临床表现正相关
2.SLE、多发性硬化、干燥综合征时可见阳性
3.部分老年人可见RF阳性
㈡抗核抗体检测
⏹概念:
抗核抗体(ANA)指抗各种核成分[脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、和可提取的核抗原(ENA)等]自身抗体的总称。
ANA的性质主要是IgG,也有IgM、IgA、IgD,无器官和种族的特异性,ANA主要存在于血清中,也可以存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。
⏹抗核抗体(ANA)检测可作为自身免疫病的筛选试验
㈡抗核抗体检测
㈡抗DNA抗体检测
⏹方法:
间接免疫荧光法、ELISA法和RIA法
⏹临床意义:
•抗dsDNA抗体:
为SLE特征性标志抗体,
特异性95-100%,敏感度30-50%,
抗体滴度与疾病活动度相关(阳性率70-90%)
•抗ssDNA抗体:
阳性见于SLE、药物性狼仓
㈢抗可提取性核抗原(ENA)
多肽抗体谱测定
⏹ 方法:
免疫印迹法
㈢抗可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱测定
⏹临床意义
•抗Sm抗体:
主要见于SLE
•抗nRNP抗体:
主要见于混合性结缔组织病
•抗SSA、抗SSB抗体:
主要见于干燥综合症
•抗Scl-70抗体:
主要见于进行性系统性硬化症
•抗组蛋白抗体:
主要见于药物性狼仓、SLE
三、抗组织细胞抗体检测
㈠、抗肾小球基底膜抗体(抗GBM抗体)
是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体,包括免疫复合物型肾小球肾炎、急进型肾小球肾炎等
㈡抗乙酰胆碱受体抗体测定(AchRA):
是一种针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的自身抗体,阳性主要见于重症肌无力
㈢抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)
⏹ANCA是血管炎患者的自身抗体,是诊断血管炎的一种特异指标
⏹ANCA分胞质型(cANCA)和核周型(pANCA)两型
⏹cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿
⏹pANCA主要与多发性微动脉炎相关
㈣抗心磷脂抗体(ACA)
⏹ACA是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体
⏹SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显著相关,血清及CSF中ACA检测有助神经精神性狼仓患者的临床诊断
⏹高水平ACA是急性脑血管病的预后不良信号
⏹70%未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎,尤其IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标
本章要求:
1.能够概述免疫球蛋白、补体(C3、C4、C1q、B因子)、分化抗原(CD3、CD4、CD8)的概念,检测方法及临床意义。
2.了解T细胞、B细胞数量和功能的检测方法及NK细胞活性检测的临床意义。
3.掌握自身免疫的概念(包括自身免疫耐受、自身免疫病的概念),掌握类风湿因子、抗核抗体的概念及检测的临床意义。
4.掌握ASO、肥达氏反应检测的临床意义。
5.掌握TORCH实验包含的检测项目及临床意义。
6.掌握梅毒检测的方法及临床意义。
7.掌握C-反应蛋白检测的临床意义。
9.了解抗ENA、抗dsDNA、抗GBM、ANCA、ACA检测的临床意义。
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