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中药化学实验指导书
中药化学实验指导书
中药教学部
重庆邮电学院生物信息学院
2005年02月
前言
中药化学是一门运用现代化学理论和方法研究中药化学成分的学科,近年来发展迅速,逐步渗透到中药鉴定、中药制剂、中药炮制等学科中,在药物的研制、中药资源的开发、药品检验、中药生产过程中有广泛的应用。
另一方面,中药化学是中药的基础研究,是中药现代化工作中十分重要的组成部分。
同时,中药化学是中药专业的专业课程,其基本实验技能的培养是本课程的重要组成部分,通过中药化学实验,培养学生的动手操作能力,为学生在中药鉴定、中药分析、制剂分析等专业课上打下坚实的专业基础。
为此,我们根据本课程教学大纲的要求,组织编写了本实验讲义。
生物信息学院中药学教学部
高运玲潘正编著
二OO五年二月
目 录
第一节 实验注意事项………………………………………………………01
第二节 试剂的使用…………………………………………………………04
第三节 实验部分……………………………………………………………06
实验一
层析练习………………………………………………………06
实验二
大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识…………………………10
实验三
秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定………………13
实验四
芦丁的提取和鉴定……………………………………………15
实验五
葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定……………………20
实验六
茴香醚的提取分离和检识……………………………………23
实验七
三七总皂甙的提取和精制……………………………………25
实验八
薯蓣皂甙元的提取分离与鉴定………………………………27
实验九
盐酸小檗碱的提取、精制及检识 ……………………………30
实验十
掌叶防已碱的提取分离及延胡索乙素的制备 ……………34
实验十一
苦参生物碱的提取、分离与鉴定 ……………………………39
实验十二
中药化学成分的系统预试验…………………………………43
附录……………………………………………………………………………53
第一节 实验注意事项
一、教学目的
通过《中药化学》的实验教学,要求学生能够:
1、掌握化学实验中常用的煎煮法、渗漉法、回流法、液-液萃取法等中药提取法的操作技术。
2、掌握薄层层析、纸层析的基本操作,熟悉它们在中药化学成分鉴定、提取、分离和检识中的应用。
3、训练常量、半微量成分的分离,精制及检识方法,并了解有关中药成分研究中的文献检索和工具书查阅的基本方法。
4、初步形成方法自我设计中药中主要有效成分提取的能力,培养独立分析问题、解决问题的能力。
二、中药化学实验的特点
1、实验周期长。
一般一个提取实验需要用去3-5次课的时间,其间相隔数天。
因此,在实验过程中,应该注意仪器、试剂尤其是提取物的妥善保管或者保存。
2、所用溶剂和试剂品种多,而且用量较大。
3、许多有机溶剂易燃、有毒,或有腐蚀性。
个别甚至容易发生爆炸。
4、也有不少实验需要电炉加热或者抽气机减压,学生用到的热源和电器较多,安全教育要跟上。
严防产生中毒、触电、烫伤等意外,谨防火灾、爆炸等重大事故的发生。
三、实验室规则
1、必须遵守实验室的各项制度,听从教师指导,尊重实验室工作人员的职权,实验前应认真预习,明确目的、要求,弄清操作步骤、方法和基本原理。
作好计划,做到心中有数。
在未弄清实验目的及每一实验步骤之前,切勿开始作任何实验。
2、实验时要做到整齐、清洁。
保持桌面、仪器、水槽、地面四洁。
任何固体物质不能投入水槽中,废纸、废屑应投入废纸箱内,废溶液应倒入废液缸内,勿倒可燃或易挥发性溶媒,于水槽或缸内。
3、对公用仪器和试剂(如打孔机、显色剂等)要在指定地点使用,并保持整洁,不能任意挪动。
4、实验进行时不能擅自离开,要认真做好实验记录。
实验室内严禁吸烟。
5、实验完毕离开实验室时,应打扫实验室,检查水、电,关好窗门。
四、实验室安全守则
在中药化学实验中,常使用甲醇、乙醇、乙醚、石油醚等易挥发、易燃烧,有毒的有机溶剂及易碎的玻璃仪器,若操作不慎,很容易发生事故,常见事故有“火灾”、“爆炸”、“外伤”、“中毒”等,为防止事故的发生,必须随时注意以下几点:
1、实验开始应检查仪器是否完整无损,装置是否正规。
回流、蒸馏时,冷凝水是否通畅,干燥管是否阻塞不通。
若在常压下选行蒸馏或回流,仪器装置必须与大气相遇,不能密闭。
(如密闭加热而导致的容器内压力增加,会引起装置爆裂,特别是使用明火时,装置中的可燃液体就会着火)
2、回流或蒸馏低沸点易燃液体时,瓶内的液重只能装三分之二,不能使用明火加热,最好使用水浴或电热套。
液内要放几颗沸石或素烧瓷片,防止过热冲瓶或暴沸。
若在加热后发现未加入沸石,绝不能立即揭开瓶盖补放,而应停止加热,液体冷却后才能加入,加热途中也不得加入活性炭脱色,否则也会发生暴沸。
减压蒸馏使用玻璃仪器,质量要好,最好用圆底烧瓶,防止因机械强度不够,引起爆炸。
3、蒸馏、回流易燃,易挥发,有毒液体时,仪器装置切勿漏气,冷凝管流出液应用弯接管导至接受瓶中,余气应用橡皮管通往室外或水槽里。
4、加压柱层析时,层析柱及储液瓶机械性能要高、连接处要牢,并注意控制压力,以防炸裂装置。
5、使用电气设备(如电烘箱、电冰箱、真空泵、离心机等)及各种分析仪器时一定要弄清电路及操作规程,不懂就问,切勿自作主张。
实验室一旦发生火灾事故时,应保持镇静,切勿惊慌失措,应立即采取各种相应措施,以减少事故损失。
首先,要立即断绝火源(如电源、煤油炉、煤气等),并移开附近的易燃物质。
少量溶剂(几个ml)着火,可任其烧完。
三角瓶内溶剂着火可用石棉网或湿布盖熄。
小火可用湿布或黄沙盖熄。
火较大时应根据具体情况采用下列灭火器材。
泡沫灭火器:
内部分别装有碳酸氢钠溶液和硫酸铝溶液,使用时将筒颠倒,两种溶液立即反应生成硫酸氢钠、氢氧化铝及大量的二氧化碳。
灭火器筒内压力突然增大,大量二氧化碳泡沫喷出,即可灭火。
四氯化碳灭火器:
用以扑灭电器或电器附近之火,但不能在狭小和通风不良的实验室中应用,因为四氯化碳在高温时要生成剧毒的光气,此外,四氯化碳和金属钠接触也要发生爆炸。
使用时须连续抽动唧筒,四氯化碳即会由喷咀喷出,遇热变为气体,此气体比重比空气大,能沉下来把火焰包围住,将火扑灭。
二氧化碳灭火器:
是实验室中最常用的一种灭火器,它的钢筋内装有压缩的液态二氧化碳,使用时打开开关,二氧化碳气体即会喷出,用以扑灭有机物及电器设备的着火使用时应注意,一手提灭火器,一手应握在喷二氧化碳嗽叭筒的把手上。
因喷出的二氧化碳压力骤然降低,温度也骤降,手若把在嗽叭筒上易被冻伤。
无论用何种灭火器,皆应从火的四周开始向中心扑灭。
油浴,和有机溶剂着火时绝不能用水浇,因为这样反而会使火焰蔓延开来。
若衣服着火,切勿奔跑,赶快脱下衣服或用厚的外衣包裹致熄。
较严重者应躺在地上(以免火焰烧向头部)用防火毯紧紧包住,直至火熄,或打开附近的自来水开关用水冲淋熄灭。
五、急救常识
1、玻璃割伤
玻璃割伤是常见的事故,如为一般轻伤,应及时挤出污血,用消毒过的镊子取出玻璃碎片,用蒸馏水洗涤伤口,涂上红药水和碘酒后包扎好。
如为大伤口,应立即用绷带扎紧伤口上部,使伤口停止出血,急送医院。
2、火伤
轻伤涂甘油或硼酸凡士林,重伤送医院。
3、试剂灼伤
酸液或碱液灼伤皮肤时,伤处首先用大量水冲洗。
若为酸液灼伤,再用5%碳酸氢钠溶液洗涤;若为碱液灼伤,再用1%醋酸洗,最后用水洗,再涂上油膏凡士林。
酸液或碱液溅入眼睛中时,抹去溅在眼睛外面的酸液或碱液,立即用大量水冲洗。
若为酸液,再用1%碳酸氢钠溶液冲洗;若为碱液,再用1%硼酸溶液冲洗,最后用水冲洗,滴入蓖麻油。
酸液或碱液洒在衣服上,先用水冲洗。
若为酸液再用稀氨水洗。
若为碱液,再用1%醋酸溶液洗涤,然后用氢氧化铵中和多余的醋酸,最后用水洗涤。
酸液洒在地板上,先撒石灰粉,再用水冲洗。
上述各种急救法,仅为暂时减轻疼痛的措施。
若伤势过重,在急救之后应速送医院。
第二节 试剂的使用
化学试剂分为无机化学试剂和有机化学试剂两大类。
根据用途不同又分通用试剂和专用试剂。
我国生产的有机化学试剂已有百万余种。
无机化学试剂有数十万种,并且正与日俱增。
我国关于试剂的标准有国家标准(GB),化学工业部标准(HG),化学工业部暂行标准(HGB)以及地方企业标准和厂订标准。
根据我们国家的标准,按试剂所含杂质的多少,将试剂分成优级纯、分析纯、化学纯、实验试剂四级。
优级纯杂质含量最少,又称保证试剂(符号GR)为一级品,适用于精密的分析工作和科研工作。
分析纯的杂质比优级纯稍多,又称分析试剂(符号AR)为二级品,适用一般的分析工作、分离鉴定工作和科研工作。
化学纯(符号CP)杂质较多,为三级品,适用一般的提取、分离工作及学生实验的一般工作。
实验试剂(符号LR)杂质多,为四级品,用作粗提工作和实验中的辅助试剂。
除这四个等级之外,对于专用试剂还有光谱纯试剂,基准试剂、色谱纯试剂等。
光谱试剂(符号SP)的杂质的含量用光谱法已测不出或者杂质的含量低于某一限度,这种试剂主要用来作为光谱分析中的标准物质。
基准试剂的纯度相当于或高于保证试剂,用来配制标准溶液,作为容量分析中基准物。
色谱纯试剂用来作为色谱分祈中展开剂。
按照我国化工部标准规定,我国优级纯试剂用绿色标签作为标记;分析纯用红色标签;化学纯用蓝色标签。
在中药化学提取、分离、鉴定实验中,要注意选择纯度相当的试剂,能用低纯度的试剂,绝不要用高纯度试剂,高纯度试剂的制备是复杂的,它们的价格昂贵,要克服任何情况下都采用高纯度试剂的不良习惯。
另外如用高纯度试剂,实验用的水、操作器皿也要配合。
若选用GR级试剂要用重蒸溜水,所用器皿不能有任何杂质自器皿上溶解到溶液中。
在使用化学试剂时除了解它的纯度外,必须了解它的物理性能,试剂的物理性能主要指熔点、沸点、比重、折光率、溶解度、易燃性、毒性及外形等数据。
这些特性一般在试剂的标签上都有注明。
使用试剂的注意事项如下。
1、使用易燃、易爆、有毒的试剂时,要特别注意安全,每次按需要量从原包装容器中取出(固体试剂)或倾出(液体试剂)。
试剂称量必须在清洁而干燥的器皿内进行。
所取的试剂若有剩余,不得倒回原包装容器内,可放适当带盖的小容器中,并用标签注明。
2、取固体试剂应使用玻璃、瓷或铂制药铲,严禁用刀子或钢铲取强碱性或酸性试剂。
取液体试剂用清洁干燥的移液管,需要长时期使用若干液体试剂,最好每种试剂有专用移液管。
取有毒液体或浓酸、浓碱时,绝不许用移液管以口吸的方式取出,应利用真空吸取或带有橡皮气球的移液管吸取或利用量筒取。
在开启试剂的瓶塞之后,应将塞子放于清洁的地方或倒放。
3、使用有毒物质、易挥发的有毒液体,以及易挥发的强酸、氨,应在排气通风橱内进行,应戴有护目镜及橡皮手套。
存放这类试剂时,应远离火源,并封闭于铁柜中。
4、易吸水的试剂,不得开口存放,取出试剂后,应立即盖好塞子,必要时用石蜡熔封。
见光发生变化的试剂应放棕色瓶内,置于暗处。
在空气中能自燃的试剂应保存在盛有适当液体的密闭器中(如金属钠、钾放煤油中,黄磷放水中)。
第三节 实验部分
实验一 层析练习
层析法又称色谱法,色层法或层离法。
它是近几十年迅速发展起来的一种分离方法,具有设备简单、分离效果好、快速等优点,在许多领域中都得到广泛应用。
我们在对中草药进行分析研究时,层析法越来越成为必不可少的、基本的研究手段,因此我们必须熟练地掌握层析法。
层析法按操作形式的不同可分为:
薄层层析(TLC),纸层析(PC)和柱层析(CC)。
一、常用薄层板的制备
(一)实验原理
羧甲基纤维素钠(CMC—Na)和石膏(Gypsum,简称G)均为制备层析板常用之粘合剂,前者为一大分子有机化合物,可溶于水,借助其分子间的作用力而起到粘结作用,使吸附剂在一玻璃片上成一坚固的薄层。
后者则是利用熟石膏吸水后凝固的性质而使吸附剂粘结为一均匀、结实的薄层。
(二)实验内容
1、硅胶-羧甲基纤维素钠(CMC-Na)粘合板的制备:
称取CMC-Na0.8克,溶于100毫升蒸馏水中,加热并充分搅拌至全溶。
取上述溶液37毫升置研钵中,加入薄层层析用硅胶(200目以上)15克,研磨成匀浆,用药勺取一定量倒在薄板上并涂布均匀,然后轻轻振动,使薄层面平整均匀,平放,待阴干后,于烘箱中110℃烘半小时,进行活化,活化后的薄层置干燥器中备用。
2、硅胶G粘合板的制备:
称取硅胶G5克,加蒸馏水15毫升,研磨均匀后,取三分之一倾注在予先洗净晾干的玻璃板上,迅速振动玻璃板,使吸附剂薄层均匀平整,阴干后同上活化备用。
注意:
操作要迅速,以免因石膏吸水凝固而影响薄层的均匀性。
3、硅胶的活度测定:
3.1硅胶活度的测定:
一般选用三种染料以薄层层析法进行。
染料试样配方:
二甲基黄、苏丹红、靛酚蓝各取40mg混溶于100ml苯中即可。
操作:
将上述混合液点于待测的硅胶G或硅胶CMC-Na薄层上,以苯为展开剂,展开10cm(约20mins),三种染料应明显分离。
如果靛酚蓝的色斑接近于起始线,二甲基黄的色斑位于薄层的中间,苏丹红的色斑在靛酚蓝与二甲基黄的色斑之间,则可认为薄层板的活性符合通常使用的薄层要求。
3.2硅胶活度的毛细管测定法:
操作:
取1.0×75cm毛细管一支,将毛细管一端灼烧加热封闭。
取1个用于试剂瓶的滴帽,使吸附剂进入毛细管内,除去滴帽即可,(或采用测熔点法加入吸附剂)。
再用吸管吸1滴苯在毛细管开口端(其目的是为了防止吸附剂从毛细管中掉下),切去毛细管的封闭端,从已被苯浸润的一端蘸取微量的0.5%的染料苯溶液。
然后将毛细管放入盛有几毫升苯的容器中,展开,计算Rf值,从下表中查出吸附剂的活度级别。
硅胶活度与Rf值的关系
吸附剂
含水量%
Rf值
级别
硅胶
0
0.15
3
0.22
6
0.33
9
0.44
12
0.55
15
0.65
二、纸层析练习
(—)实验原理
纸层祈又叫分配纸层析(PC),是利用滤纸本身吸附的水分作固定相,所选用的展开剂作为流动相,根据不同极性化合物在该两相中的分配系数不同,随着展开剂的不断移动,而将各化合物分离开。
(二)实验内容
1、点样:
取15×3厘米中速新华滤纸一张,在距一端2厘米处用铅笔轻轻划一横线,作为起始线,在间隔1厘米处分别点上以下样品:
①1%D-葡萄糖水液②1%L-鼠李糖水液。
展开剂:
正丁醇—醋酸—水(4:
1:
5,上层)
显色剂:
苯胺—邻苯二甲酸试剂喷后于105—110℃烤10分钟,糖显深浅不同的棕色斑点。
支持剂:
新华层析滤纸(中速,20×7cm)
2、样 品:
板蓝根注射液或10%的板蓝根配成5%乙醇溶液
对照品:
精氨酸、亮氨酸、脯氨酸1%的水溶液
展开剂:
正丁醇:
冰醋酸:
水(4:
1:
1或者4:
1:
5的上层液)
显色剂:
0.2%茚三酮乙醇溶液
操 作:
取新华层析滤纸条,在距底边2-3cm处用铅笔画一条直线。
并做四个等分点分别用毛细管点上适量样品或对照品溶液,待溶剂挥干后(可用电吹风吹干),将滤纸用细棉线悬吊在盛有展开剂的层析缸中,使滤纸下端与展开剂接触,上行法展开,至展开剂前沿离起始线15cm左右时取出,并用铅笔画下前沿位置。
热风吹去其上展开剂后,喷显色剂,再加热至100℃左右显色。
如需长期保存,此时可再喷2%硫酸镍水溶液固色。
计算精氨酸、脯氨酸和亮氨酸的Rf值。
三、硅胶柱层析练习
(—)实验原理
柱层析是中草药有效成分研究中的一种常用分离方法。
许多结构相似而不能用一般的萃取,重结晶等方法分离的中草药成分,通过选择一定的吸附剂和洗脱剂,采用柱层析法均可得到满意的分离效果。
常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺、活性炭、淀粉硅藻土等,根据不同的化合物而选用不同的吸附剂。
本实验利用叶色素在硅胶柱上有不同的保留值,故其在柱上的迁移速率不同,选用层析用硅胶(100-140目)作吸附剂,利用干柱层析,对叶绿素等色素类成分进行分离,效果良好。
叶色素中含有β-胡萝卜素、脱镁叶绿色素、叶黄素、叶绿素A、叶绿素B等化合物。
利用硅胶干柱,选用适宜的洗脱剂,可使各组分分次流出。
通过对各流出组分进行层析,,合并,回收溶剂,而得到不同的叶色素部分。
(二)实验内容
1、装置与条件:
层析柱:
玻璃柱
样品:
植物叶
吸附剂:
层析硅胶100-140目
洗脱剂:
环己烷-乙酸乙酯
检识:
硅胶G-CMC板,展开剂同洗脱剂。
显色:
紫外光下观察
2、装柱:
常用装柱方法有两种,即干法和湿法,可根据不同情况选用。
本实验采用干法装柱。
(1)柱的选择和予处理:
根据被分离样品的量及吸附剂的种类,选取一定大小的层析柱,用常水、去污粉、常水、蒸馏水依次洗刷干净,使管壁不挂水珠,晾干备用。
检查磨口号码是否对号,而后在转动活塞处涂少许凡士林,底部塞入松紧适宜的棉花,顶部装上100毫升分液漏斗。
(2)装柱:
称取l00-140目层析硅胶20克,通过玻璃漏斗倒入柱中,用两个橡皮塞轻轻对称敲击层析柱或将下口接抽气泵抽气,使吸附剂实而匀,上部平整。
(3)加样:
称取植物叶5克,溶于10毫升石油醚或乙酸乙酯中,碾磨至色素溶解。
加入柱的上端,压上少量脱脂棉。
将装有流脱剂的分液漏斗通过橡皮塞固定在柱的顶端,柱的出口处放一三角烧瓶进行收集。
3、洗脱与收集:
先打开柱的下端活塞,再开启分液漏斗活塞,使洗脱剂流入柱中,向下浸润。
在整个浸润和洗脱过程中,栓顶液面必须高于吸附剂顶端1厘米以上。
从开始洗脱到洗脱液流出,约需0.5小时。
用试管收集,每份10毫升,共收集15份,标明序号,薄层检识。
流速控制1-2毫升/分。
4、检识与合并:
在10×10厘米硅胶G板的—端1.5厘米处用铅笔轻轻划一横线,每间隔1厘米处作一标记,下面标明序号。
将收集的各流分和标准品按序在薄板上点祥。
若洗脱液浓度太稀,可反复点样(每次点样后必须使溶剂挥干,才能再重复点)。
直至能在紫外灯下观察到明显荧光斑点即可。
然后放入盛有展开剂的标本缸内进行展开至一定距离,将其取出,挥干溶剂,首先在紫外灯下观察荧光,标出荧光位置与颜色,记录结果,合并相同流分。
四、氧化铝柱层析练习
1、装置与条件:
层析柱:
玻璃柱
样品:
0.5MFeCl3、CuCl2、Co(NO3)2混合液0.5ml
吸附剂:
层析用中性氧化铝
洗脱剂:
水
2、装柱:
本实验采用干法装柱。
(1)柱的选择和予处理:
(2)装柱:
(3)加样:
3、洗脱与收集:
4、结果:
Fe3+--棕色层、Cu2+--浅蓝色层、Co2+--淡紫色层
实验二大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识
大黄为泻下、健胃、清热、解毒的常用中药,品种繁多,质优者为寥科植物掌叶大黄(RheumPalmatumL.),药用大黄(R.offIcinaleBeill)和唐古特大黄(R.tanguticumMaxim.exBalf)的根及根茎。
大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物,它们在植物中主要以甙的形式存在,总含量为2~5%,大黄中主要的羟基蒽醌类化合物有大黄酚
(1)、大黄素
(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)及其甙类。
大黄酚(Chrysophanol)为金黄色片状结晶(乙醇或苯),mp.196-197℃,能升华,可溶于丙酮、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液,微溶于石油醚、乙醚,不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液。
大黄素(Emodin)为橙黄色针状结晶(乙醇或冰醋酸),mp.256—257℃,能升华,易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液,可溶于乙醇、丙酮,在乙醚、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小,几乎不溶于水。
大黄酸(Rheine)为黄色针状结晶(升华法),mp.321-322℃,330℃分解,易溶于碱水液、吡啶,微溶于乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、苯、石油醚。
几乎不溶于水。
大黄素甲醚(Physcion)砖红色针状结晶(苯),mp.203-207℃,能升华,溶解性质与大黄酚相似。
芦荟大黄素(Aioeemodin)为橙黄色针状结晶(甲苯),mp.223-224℃,能升华,可溶于乙醚、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
羟基蒽醌甙有大黄素甲醚葡萄糖甙,大黄素葡萄甙,大黄酸葡萄糖甙,大黄酚葡萄糖甙,大黄素-1-O-B-D-葡萄糖甙,芦荟大黄素-ω-O-B-D-葡萄糖甙。
一、实验目的
1.掌握PH梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。
2.掌握羟基蒽醌类成分的主要检识反应及薄层层析检识方法。
3.学习从大黄中提取分离羟基蒽醌类成分的方法。
二、实验原理
根据大黄中羟基蒽醌类成分可溶于热乙醇中,故用乙醇为溶剂加热回流提取总蒽醌类成分,再利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同,采用pH梯度萃取法分离,可得到各单一成分。
三、实验内容
1.乙醇总提取物的制备
取大黄粗粉150g,置于1000ml的园底烧瓶中,加乙醇回流提取三次,第一次加95%乙醇500m1,回流一小时,第二次加95%乙醇300ml,加流半小时,第三次加95%乙醇250ml,回流半小时,趁热过滤,合并三次乙醇提取液,放置后,如有沉淀可再过滤一次;滤液减压回收乙醇至糖浆状,即为乙醇总提取物;趁热转移至250ml的三角烧瓶中备用。
2.总游离蒽醌的提取
在盛有乙醇总提取物的三角烧瓶中,加入乙醚100ml,冷浸半小时,不断振摇,然后静置,将上层乙醚液倾出,置另一500ml三角烧瓶中,瓶内糖浆状物再同法提取4~5次,每次加乙醚50ml及丙酮2ml,至乙自醚液颜色较浅为止,合并乙醚速提取液(注意把水层分离干净),即为含总游离蒽醌的部分,剩余物中则含有蒽醌甙类成分。
3.游离蒽醌的分离
(1)强酸性部分的分离:
将上述乙醚提取液转移至500ml的分液漏斗中,加5%碳酸氢钠水溶液(先用pH试纸测定其pH值)萃取三次,每次加5%碳酸氢钠水溶液40m1(注意萃取时放置分层的时间应稍长些,以免萃取效果不好)。
合并三次碳酸氢钠萃取液,在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2(观察萃取,酸化时溶液的颜色变化),放置沉淀,过滤,沉淀用水洗至近中性,干燥,称重_______g,即为强酸性部分,主要含大黄酸,留作鉴定用。
(2)中等酸性部分的分离:
将上述经碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠水溶液(先用pH试纸测定其pH值)萃取5~6次,每次加5%碳酸钠水溶液40ml,至萃取碱液层颜色较浅为止。
合并碳酸钠萃取液,在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2,放置沉淀,过滤,沉淀用水洗至近中性,干燥,称重_______g,即为中等酸性部分,主要含大黄素,留作鉴定用。
(3)弱酸性部分的分离:
将上述经碳酸钠萃取过的乙醚液用2%氢氧化钠水溶液(先用pH试纸测定其pH值)萃取3~4次,每次加2%氢氧化钠水溶液20m1.合并氢氧化钠萃取液,在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2,放置沉淀,过滤,沉淀用水洗至近中性,干燥,称重______g,即为弱酸性部分,主要含大黄酚和大黄素甲醚,留作鉴定用。
4.蒽醌类成分的检识
(1)碱液试验:
取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各5mg置于小试管中,加95%乙醇1ml溶解,再加10%氢氧化钠水溶液2~3滴,观察溶液颜色变化。
凡具有邻、对位酚羟基的蒽醌类化合物应呈紫-蓝色,其它羟基蒽醌类化合物多为红色。
(2)醋酸镁试验:
取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各5
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