β半乳糖苷酶酶活性酶的固定化毕业论文.docx
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β半乳糖苷酶酶活性酶的固定化毕业论文
摘要
从土壤中筛选出一株产β-半乳糖苷酶的枯草芽孢杆菌,并对菌株和其产生的β-半乳糖苷酶进行了测定。
单菌落的最佳生长时间是10h,最佳接种量是%,最佳培养时间24h;该菌株产生的β-半乳糖苷酶的最适pH是,最适生长温度为37℃,酶的稳定性较高,4h后相对酶活仍能维持85%以上;Mg2+对酶活性的促进作用最强,当浓度为10mmol/L时,酶活力可达%,Cu2+对酶活性抑制作用最强,少量Cu2+(1mmol/L)就可使酶失活。
本实验还进行了β-半乳糖苷酶的固定化实验。
以海藻酸钠为栽体、戊二醛为交联剂,对乳糖酶进行固定化。
研究了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、戊二醛浓度、固定化时间对酶固定化的影响,并对固定化酶酶促反应的最适pH、温度等进行了测定。
结果表明,4%的海藻酸钠,在温度37℃、pH6~7、氯化钙浓度1%、戊二醛浓度%下对乳糖酶的固定化率最高。
酶促反应特性测定结果表明,固定化后乳糖酶的稳定性增强,最适温度范围较非固定化乳糖酶大,最适pH范围与非固定化乳糖酶大致相同。
但固定化酶珠体机械强度较差,尚待改进。
关键词:
β-半乳糖苷酶酶活性酶的固定化
Absract
Astrainisolatedfromsoilinproducingβ-galactosidaseofBacillussubtilis,andstrainsandβ-galactosidaseweremeasuredwhichproduces.Asinglecolonyofthebestgrowthtimeis10h,thebestinoculumwas%,thebestculturetime24h;optimumpHβ-galactosidaseenzymeproducedbythisstrainis,theoptimumtemperatureis37℃,enzymehighstability,4haftertherelativeactivitycanbemaintainedabove85%;Mg2+ontheactivityofpromotingthestrongest,whentheconcentrationof10mmol/L,theenzymeactivityofupto%,Cu2+inhibitionofenzymeactivitymost,asmallamountofCu2+(1mmol/L)caninactivatetheenzyme.
Theexperimentswerealsoβ-galactosidaseimmobilizationexperiments.Thelactasewasimmobilizedonsodiumalginatecarrierbycross-linkwithglutaraldehyde.Theeffectsofflutaraldehydeconcentration,amountoftheenzymeandtemperatureimmobilizationwereanalyzed.Thereactionconditions(optimunpHandtemperature)oftheimmobilizedlactasewerestudied.Theresultsshowthatthehighrecoveryrateofimmobilizedenzymecouldbeobtainedundertheconditionsof%glutaraldegyde,4%sodiumalginateand37℃temperature.
Keyword:
β-galactosidase,enzymesactivity,Immobilizationofenzyme
第1章绪论
研究背景
β-半乳糖苷酶(β-galactosidase),全名为β-D-半乳糖苷水解酶(β-D-galactoside-galcagalcato-hydrolase,),常简称为乳糖酶。
一般说来,该酶有两种催化性质:
一是催化水解反应,将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖;二是催化转移反应,在乳糖分子的半乳糖一侧连接1~4个半乳糖,生成低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS);在乳糖水解产物半乳糖一侧连接果糖,生成乳果糖(lactulose)。
图1乳糖水解机理
β-半乳糖苷酶的分子540kD,为四聚体结构。
其结构基因为LacZ(半乳糖苷酶),与LacY(半乳糖苷透性酶)和LacA(半乳糖苷转乙酰酶)共同组成乳糖操纵子,并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下,支配调节β-半乳糖苷酶的合成。
当培养基中无诱导物质时,每一细胞中虽然没有几个分子的β-半乳糖苷酶,但一旦被诱导,则每一世代都能合成多达几千个分子的酶。
β-半乳糖苷酶可用于治疗乳糖不耐症。
几乎所有的哺乳动物在断奶后将失去分泌乳糖酶的能力,仅有极少数能在其肠道内保持较高的乳糖酶活性。
乳糖酶缺乏症人群的乳糖摄入量超过其胃肠消化能力时,就会导致乳糖代谢不完全。
未被消化的乳糖在渗透压的作用下进入肠内被其他细菌分解代谢,会生成乳酸以及其他有机酸,导致消化不良和胃肠不适。
可见,未被消化的乳糖及有机酸的渗透作用是酸性腹泻的诱发剂。
此外,主要碳水化合物为乳糖的牛奶是一种全价营养食品,可以为人体提供蛋白质、能量、钙、磷和钾等多种营养,促进人体健康。
但是由于乳糖不耐症的存在,很多人难以食用牛奶或其他乳制品,这极大地抑制了乳品行业的发展。
乳糖消化的程度取决于以下几种因素:
乳糖摄入量、在肠胃内停留时间(由饮食时间决定)、β-半乳糖苷酶摄入量以及乳制品摄入量。
科研人员通过对乳糖不耐症与乳糖摄入量关系的大量研究,发现乳糖的摄入量与乳糖不耐症的严重程度具有直接的关系:
摄入较少剂量的乳糖(少于12g或一杯牛奶)不会导致乳糖不耐症,而摄入较高剂量的乳糖(20g~50g)时则会导致较为严重的乳糖不耐症。
因此解决乳糖不耐症最好的办法是将乳糖从食物中去除,以无乳糖配方的形式供给人体。
常见的去除乳糖的方法有大豆配方和水解配方,然而大豆配方对于体重小于的早产儿其营养成分远远不够,因此开发可以分解乳糖的酶或微生物以水解配方解决乳糖不耐症的方法成为研究的主要方向。
课题研究目的和意义
β-半乳糖苷酶可以有效降低乳制品中乳糖含量。
在酸奶发酵中,向牛奶中接种保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp.bulgaricus)和嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)进行发酵,可分解掉牛乳中25~50%的乳糖,使牛奶中乳糖含量降至约4%。
乳酸菌定植于肠道内,它们仍能代谢被摄入人体内的乳糖。
因此,乳酸菌可以广泛用于各种乳品加工生产低乳糖制品。
采用筛选出的菌种进行酸奶加工,验证其加工性能,掌握其工艺加工性能和应用于乳品加工的潜力,从而将其应用于乳品发酵产品,降低乳糖含量,缓解人体普遍存在的乳糖不耐症,扩大乳品的消费量。
具有较高β-半乳糖苷酶活性的乳酸菌能将牛奶中的乳糖分解为葡萄糖和半乳糖,这对于乳品行业的发展具有很大的应用潜力。
此外,β-半乳糖苷酶可被加工成液态、药剂或粉末状形式的产品,用来治疗乳糖不耐症。
这些都为产β-半乳糖苷酶的开发利用提供了潜在的发展市场。
国内外研究现状和发展趋势
历史上,β-半乳糖苷酶的研究为微生物学的发展作出了巨大贡献。
国外对β-半乳糖苷酶的研究较早,许多研究工作主要集中在β-半乳糖苷酶在食品加工中的应用。
1889年,荷兰生物学家Beijerincek第一次报道了β-半乳糖苷酶可水解乳糖。
1944年Whitter[1]就比较全面的讨论了β-半乳糖苷酶的应用。
1948年Caputto[2]等讨论了通过大量培养和纯化脆壁酵母(Saccharimycesfragilis)生产β-半乳糖苷酶的方法。
法国的雅各(Jacob)和莫诺德(Monod)[3]通过对大肠杆菌β-半乳糖苷酶的研究,于1961年提出了乳糖操纵子学说,阐明了酶生物合成的调节机制,使酶的生物合成可以按人们的意志加以调控,为研究其他生物的代谢调控提供了依据。
1972年Rorglun等报道了真菌β-半乳糖苷酶的特性。
进入80年代,Jrodon等[4]首次对小鼠成功的获得了动物基因转移,是纯合子动物分泌的乳汁中完全不含乳糖,为利用基因工程生产低乳糖牛乳奠定了基础。
国内对β-半乳糖苷酶的研究起步较晚,是在20世纪80年代以后开始的。
1980年天津工业微生物研究所[5]组成β-半乳糖苷酶研究组,对β-半乳糖苷酶产生菌的选育、发酵工艺研究、酶的提取纯化、酶学特性的进行了较为全面的研究。
1990年无锡轻工业大学的李强军等选育到黑曲霉菌CWL2NU-3,经发酵条件优化后产酶活力达12u/ml(ONPG单位)。
1985年东北农业大学的万贤生对β-半乳糖苷酶在乳清中的综合利用展开了研究。
上海复旦大学的郭杰炎等以乳酸酵母Y12-1发酵生产的β-半乳糖苷酶活力达40u/ml(ONPG单位),干燥制成的酶粉冰箱保藏半年,酶活残存98%。
目前,β-半乳糖苷酶主要用于低乳糖制品的研制和开发,以满足乳糖不耐症患者对乳制品消费的需求。
工业生产上最直接、有效的方法就是将酶直接加入到牛乳中制得乳糖水解乳,该法水解条件温和(~8,温度50~60℃),产物简单,不会破坏乳中的其他营养成分。
国外已有一些大公司生产商业用乳糖酶制剂,用于生产乳糖水解乳制品。
随着研究的不断深入,微生物发酵法生产的β-半乳糖苷酶活性会进一步得到提高。
如果在国内能够实现β-半乳糖苷酶的工业化生产,其制品的生产和应用成本将会大幅度降低。
因此,β-半乳糖苷酶具有广阔的市场前景,并且会取得相当可观的经济效益和社会效益。
β-半乳糖苷酶的来源及其特性
β-半乳糖苷酶存在于植物(尤其是杏、桃、苹果),细菌(大肠杆菌、乳酸菌等),真菌(米曲霉、黑曲霉、脆壁酵母、乳酸酵母、热带假丝酵母等),放线菌以及哺乳动物(特别是婴儿)的肠道中。
目前仅来源于微生物的β-半乳糖苷酶有工业应用价值,利用微生物发酵法制取β-半乳糖苷酶,酶源丰富,产量高,生产成本低,周期短,而且不受季节、地理位置等因素的影响。
不同微生物来源的β-半乳糖苷酶的性质有所不同[6]。
细菌产生的β-半乳糖苷酶
细菌β-半乳糖苷酶,尤其是嗜热细菌产生的酶正得到广泛的研究,到目前为止,大肠杆菌(Escherichiacoli)产生的β-半乳糖苷酶是研究的最彻底、最深入,并已大量用于生化分析中。
细菌产生的β-半乳糖苷酶是胞内酶,在培养过程中不能分泌到培养基中,它的耐热性较高,这一点有利于固定化酶的制造。
但因产量低及可能的毒性问题,故迄今未用于工业化生产。
酵母菌产生的β-半乳糖苷酶
酵母菌产生的β-半乳糖苷酶通常是胞内酶,制备纯品必须破碎细胞,该酶对酸、热较不稳定,当某些离子存在时,才有最大活性,因此不适于在工业上进行应用。
但是,酵母菌容易培养,在深层培养条件下可以大量生产β-半乳糖苷酶,这些优点掩盖了它的不足,故酵母菌产生的β-半乳糖苷酶才得以成功的进行开发。
酵母菌产生的β-半乳糖苷酶最适pH近于中性,与牛乳的天然pH值接近,最适温度较低,适于处理牛乳和甜乳清中的乳糖。
脆壁酵母和乳酸酵母(Saccharimyceslactic)是生产β-半乳糖苷酶的主要酵母菌种。
霉菌产生的β-半乳糖苷酶
霉菌产生的β-半乳糖苷酶是胞外酶,可以用固态培养也可以采用液态深层培养来生产,在培养过程中酶分泌到培养基中,提取较为方便。
霉菌产生的β-半乳糖苷酶较耐热、耐酸,不需要活化剂和稳定剂,稳定性较高。
等人发现,米曲霉产生的β-半乳糖苷酶即使在45℃高温下贮藏6个月,仍能保存其活力的%。
曲霉β-半乳糖苷酶的最适pH值较低,适用于面包的制造以及分解面团中的乳糖,有利于酵母发酵,并使制品具有良好的色泽。
同时,由于它较为稳定,有很好的耐受性,比酵母β-半乳糖苷酶更适合于固定化酶的制造。
目前应用较多的霉菌β-半乳糖苷酶产生菌主要是米曲霉(Aspergillusoryzse)和黑曲霉(Aspergillusniger)。
β-半乳糖苷酶在食品工业中的应用
水解牛乳和其它乳制品中的乳糖
解决乳糖不耐症患者的乳品消费问题
牛乳中含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物以及几乎全部已知的维生素,尤其是牛乳中含有丰富的钙质,且极易被人体吸收,被誉为“近乎完善的食物”。
但据有关资料报道,有10%的白人,51%的印第安人,81%的非裔加勒人和70%的亚洲人由于肠道内缺乏β-半乳糖苷酶而患有程度不同的乳糖不适症(又称乳糖不耐症)[7]。
用β-半乳糖苷酶水解牛乳中的乳糖以满足乳糖不适症患者的需要,是较为实用、有效的方法。
采用给患者同时服用乳制品和β-半乳糖苷酶片(通常是霉菌β-半乳糖苷酶,它的最适pH值与胃环境相一致),也可以解决这一问题。
提高乳制品的甜度
乳糖的甜度较低,只有蔗糖的20%,水解后,一分子乳糖生成一分子葡萄糖和一分子半乳糖,可以明显提高乳制品的甜度,减少甜味剂的用量,而且不增加食品的热量[8]。
防止乳制品冷冻时出现结晶
乳糖的溶解度较低,只有蔗糖的10%,在制作冷冻乳制品时容易结晶析出,影响产品质量。
若在加工中添加25~30%的乳糖水解乳,可防止这类质量问题的出现[9]。
在酸乳制作中的应用
用β-半乳糖酶水解乳制作酸乳比使用普通脱脂乳省时且节省蔗糖用量,而且能改善酸乳风味和口感,延长酸乳的货价期。
在乳清加工中的应用
乳清中含有乳清蛋白、乳糖、矿物质和维生素等营养成分,其中乳清蛋白是完全蛋白质。
世界年产量约为9⨯107T,其中50%当废水排放,不仅造成浪费,而且污染环境。
用β-半乳糖苷酶将乳清中的乳糖水解,可以提高含乳清饲料的营养价值,同时去除了乳清浓缩时乳糖结晶析出给饲料加工带来的不便。
此外,用此水解物还可生产乳清饮料、糖浆、食品添加剂等[10]。
在乳味面包中的应用
在乳味面包制作中,添加β-半乳糖苷酶水解乳,能够增加面包甜度,提高酵母菌产气量,使面包更加膨胀,而且水解乳中的半乳糖有利于褐变,改善面包色泽。
生产低聚半乳糖(Galactooligosaccharide)
低聚半乳糖是以牛乳或乳清中的乳糖为底物,经β-半乳糖苷酶催化作用而得到的。
低聚半乳糖的热稳定性较好,即使在酸性条件下也是如此,并且具有许多生理功能,如作为双歧杆菌增殖因子;能促进钙质吸收和防止骨质减少;有利于促进有机酸生成,降低肠道pH值,抑制外源菌的生长代谢;有利于B族维生素产生;低能量;低致龋齿性;改善脂质代谢等[11]。
分析食品中乳糖含量
将精制的β-半乳糖苷酶和其它酶(如过氧化物酶、葡萄糖氧化酶)联合使用可以分析冰淇淋、干酪和含牛乳的干制品中的乳糖含量。
该法简便快捷,费用低廉,又可以在样品不除去蛋白的情况下使用,适合于在食品工业上进行应用[12]。
β-半乳糖苷酶在制药工业中的应用
β-半乳糖苷酶是酶类药物,适用于婴儿各种消化不良症,如先天性乳糖酶缺乏症、由胃障碍及缺铁所致的幼儿慢性腹泻、幼儿及新生儿腹泻,由感冒及消化不良等引起的继发性腹泻。
加入牛乳中则可防止由牛乳中乳糖不能吸收而引起的乳糖不耐症。
β-半乳糖苷酶在酶联免疫反应(EIA)中的应用
β-半乳糖苷酶经戊二醛一步标记抗人IgG,建立了ELISA测定程序,已用于人IgG、人群破伤风抗体、单克隆抗体检测,获得满意结果。
同时用于孕酮、皮质醇半抗原标记,初步建立了该酶的液相竞争测定程序。
近年来,又报道了合成该酶的大分子底物,因此,β-半乳糖苷酶不仅可用作超微量荧光酶联分析,而且还可以在酶放大免疫测定(EMIT)和底物标记荧光分析中进行应用(SLFI-A)[13]。
第2章材料和方法
材料
材料与试剂
菌种来源:
春光乳制品厂附近采集的土壤
邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)分析纯
邻硝基苯酚(ONP)分析纯
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)分析纯
二甲基甲酰胺(DMF)分析纯
蛋白胨、乳糖、琼脂、酵母粉、NaCl均为分析纯
仪器与设备
752型紫外/可见分光光度计北京光学仪器厂
HQZ-F全温振荡培养箱哈尔滨东联电子技术开发有限公司
LRH-250-II生化培养箱广州医疗设备厂
PB-10pH计Sartorius
0.20um无菌滤器Sartorius
zC-10恒温水浴槽宁波天恒仪器厂
培养基
分离选择培养基:
蛋白胨2%,琼脂2%,X-gal20mg/ml,酵母粉%,乳糖2%,%,蒸馏水100ml,~,121℃高压蒸汽灭菌15~30min。
液体发酵培养基:
蛋白胨2%,酵母粉%,乳糖2%,%,蒸馏水200ml,pH自然。
产β-半乳糖苷酶菌的筛选
菌株筛选方法
取土样,稀释10倍,置于80℃水浴锅中加热30min,以去除不产芽孢的菌体。
摇床振荡,使土壤颗粒被打散,混合均匀,用无菌水将上述溶液稀释成10-3、10-4、10-5、10-6梯度,各取200μL均匀涂布于乳糖筛选平板上,35~40℃培养20~28小时。
分离纯化
培养后,挑取不同形态的蓝色菌落,通过平板划线进行分离纯化,重复三次;对分离菌株进行培养形态观察和镜检,确定纯培养。
菌种生理生化鉴定
在细菌形态学鉴定的基础上,对所筛菌株进行初步的生理生化鉴定。
β-半乳糖苷酶粗酶液制备
将纯化菌株按体积分数为1%的接种量接种于液体发酵培养基中,37℃静置培养24h。
将培养好的菌液以5000r/min离心10min,弃掉上清液.沉淀经预冷的磷酸缓冲盐溶液洗涤后,在冰浴中进行超声波破碎。
裂解后的菌液在4℃下以12000r/min离心10min,收集上清液,即为粗酶液。
邻硝基苯酚(ONP)标准曲线
用柠檬酸-Na2HPO4缓冲溶液配制5mmol/ml邻硝基苯酚(ONP)。
取7支试管分别吸取0,,,,,,,,,,,,,,5mmol/mlONP,补上述缓冲液至,然后40℃保温15min,加入2mL,1mol/LNaCO3,以第一管为空白,于420nm测定吸光度,以ONP的量为横坐标,以A420为纵坐标绘制标准曲线。
β-半乳糖苷酶酶活力测定
取粗酶液与浓度为mol/L邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)的0.05mol/L磷酸钠缓冲液(pH值为6.5)混匀,37℃反应10min后,加入mL浓度为mol/L的Na2CO3终止液静置5min,于420nm比色测定生成邻硝基苯酚(ONP)浓度。
1个酶活性单位(u)定义为在37℃下每分钟分解出1μmolONP所需的酶量。
β-半乳糖苷酶酶学性质
菌种生长曲线测定
在筛选平板上挑一单菌落接种于装液量30mL培养基的250mL三角瓶中,37℃、225r/min恒温摇床培养,分别于0、2、4、6、8、10、12、14、24、30、36、48、60h取样。
每个处理重复3次。
以未接种的基础培养液为空白对照。
测定菌液的吸光度OD595(即生物量)。
以培养时间为横坐标;OD595为纵坐标绘制生长物线。
培养时间对菌株产酶能力的影响
将种子菌液以2%的比例接种到装有30mL基础培养基的250mL三角瓶中.在37℃、225r/min的条件下培养,分别于0、2、4、6、8、10、12、14、24、30、36、48、60h取样,每个处理重复3次,测定生物量和酶活性并绘制曲线。
接种量对菌株BGJ222产酶能力的影响
将种子菌液以、、、、、、、、、%的比例接种到装有30mL基础培养基的250mL的三角瓶中,于37℃、225r/min恒温摇床培养24h取样测定β-半乳糖苷酶表达量,每个处理重复3次。
pH值对β-半乳糖苷酶活力和稳定性的影响
测定β-半乳糖苷酶粗酶液在不同pH值的浓度为L缓冲液中的酶活力,确定pH值对β-半乳糖苷酶活力的影响。
缓冲液分别为醋酸钠(pH值为,,、磷酸钠(pH值为,,和和Tris—HCl(pH值为,和,相对酶活用百分比来表示。
将β-半乳糖苷酶在上述缓冲液中37℃保温2h和24h后,测残留的酶活力,分析pH值对β-半乳糖苷酶稳定性的影响。
温度对β-半乳糖苷酶活力和稳定性的影响
测定β-半乳糖苷酶粗酶液在不同温度(温度范围为25-75℃)时的酶活力,确定温度对β-半乳糖苷酶活力的影响。
将β-半乳糖苷酶与浓度为mol/L磷酸钠缓冲液(pH值为混匀后,分别在30,40,50,和60℃保温4h,每隔1h测一次残留的酶活,分析温度对β-半乳糖苷酶稳定性的影响。
不同金属离子及离子浓度对β-半乳糖苷酶的影响
将β-半乳糖苷酶与浓度为mol/L磷酸钠缓冲液(pH值为混匀,并添加各种不同的金属离子(K+、Na+、Mg2+、Mn2+、Cu2+、Fe2+、Ca2+、Zn2+和Fe3+),于37℃测定酶活。
第3章β-半乳糖苷酶酶学性质
高产β-半乳糖苷酶细菌的筛选
用土壤为样本,以乳糖为唯一碳源,筛选出乳糖利用菌株。
菌种纯化后测定其β-半乳糖苷酶水解活性,得到酶活较高的菌株8株。
表1列出了筛选获得的9株菌的β-半乳糖苷酶水解活性的测定结果。
表3-110株β-半乳糖苷酶水解活性
菌株编号
特征描述
OD420
酶活(U/mL)
1
乳白偏黄,半透明,边缘圆滑不规则,菌落中等大小
2
乳白色,几乎不透明,边缘圆滑,菌落很小
3
乳白色,半透明,边缘圆滑,菌落中等大小
4
乳白色,半透明,边缘圆滑,菌落很小
5
微红,半透明,边缘圆滑,菌落中等偏小
6
乳白色,半透明,边缘圆滑,菌落较大
7
玫瑰红色,不透明,边缘分枝状,菌落中等偏小
8
淡黄色,半透明,边缘圆滑,菌落中等偏小
从上表中可看出,1号菌株的酶活性最高,所以选择1号菌株作为实验用菌株。
根据菌种的生理生化特点,初步判断其为枯草芽孢杆菌。
邻硝基苯酚(ONP)标准曲线
图3-2邻硝基苯酚标准曲线
Y=+,R2=
菌株生长曲线测定
由图3-3可见,单菌落生长经过6h的迟缓期后,进入对数生长期,12h后达到稳定期,生长到60h后由于营养的耗尽以及环境pH变化和有毒代谢产物的大量积累,细菌生长进入衰亡期。
对数生长期细菌代谢旺盛、酶活性高而且稳定,菌体大小比较一致。
菌株的对数生长期为培养的第l0小时左右。
因此,以下试验均采用单菌落培养10h的菌液作为种子菌液。
图3-3菌株生长曲线
培养时间对菌株产酶能力的影响
由图3-4可见,菌株在基础培养基中经过2h的延缓期后进入对数生长期,经过4h的对数生长后,进入平缓期。
β-半乳糖苷酶在菌株的对数生长前期表达量很低,进入平缓期后β-半乳糖苷酶开始大量表达。
培养24h时β-半乳糖苷酶的表达量达到高峰,为860,之后逐渐下降,整个过程呈现出典型的“S”型。
所以,在以下试验,培养时间均设定为24h时取样。
图3-4培养时间对菌株产酶能力影响
接种量对菌株产酶能力的影响
由图3-5可见,随着接种量的增加,β-半乳糖苷酶表达量逐渐增加,接种量为%时达到最高.以后又随着接种量的增加β-半乳糖苷酶表达量逐渐降低。
接种量太小,菌的生物量不足,对产酶不利,接种量太大,营养不足,同样会影响酶的表达量。
所以接种
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