基础生物化学.docx
- 文档编号:28435411
- 上传时间:2023-07-13
- 格式:DOCX
- 页数:180
- 大小:201.08KB
基础生物化学.docx
《基础生物化学.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基础生物化学.docx(180页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
基础生物化学
基础生物化学
主编王金胜,中国林业出版社,2003年
参考书目:
生物化学主编沈同王镜岩,高等教育出版社,1990年(第二版)
生物化学主编王镜岩,高等教育出版社,2002年(第三版)
生物化学导论主编TrudyMckee,JamesR.Mckee,科学出版社,2000年(第二版)
细胞生物化学主编钱凯先李亚南邵建忠浙江大学出版社
基础生物化学主编吴显荣中国农业出版社
蛋白质化学主编姜涌明赵国骏,扬州大学农学院
基础生物化学主编白宝璋任永信史国安于少华,延边大学出版社
分子酶学导论主编姜涌明等,中国农业大学出版社
联系地点:
农学楼一楼,烛光小区10-3-101
电话:
2171758(H),7521207-808(O),7526176(O)
E-mail:
第一章绪论
一、生物化学及其研究内容
我们所处在的地球充满着无数的生物,从最简单的病毒、类病毒到菌、藻、树、草,从鱼虫鸟兽到最复杂的人类,处处都可以发现它们的踪迹,觉察到生命的活动。
地球上的生物形形色色,千姿百态。
不同的生物,其形态、生理特征和对环境的适应能力各不相同,都经历着生长、发育、衰老、死亡的变化,都具有繁殖后代的能力。
(一)生物化学的概念和研究内容
1.生命的定义
生命的根本特性是什么?
千百年来,人们以许多不同的观点阐述自己对此的看法。
19世纪下半叶时,恩格斯给生命下了一个定义:
“生命是蛋白体的存在方式,这个存在方式的基本因素在于和它周围的外部自然界的不断地新陈代谢,而且这种新陈代谢一停止,生命就随之停止,结果便是蛋白质的分解。
”恩格斯的生命定义在一定程度上揭示了生命的物质基础,即具有新陈代谢功能的蛋白体。
100年来,这个定义一直指导人们认识生命的思想武器。
生命是一个很难下定义:
(1)生理学定义例如把生命定义为具有进食、代谢、排泄、呼吸、运动、生长、生殖等功能的系统。
但某些细菌却不呼吸。
(2)新陈代谢定义生命系统具有界面,与外界经常交换物质但不改变其自身性质。
(3)生物化学定义生命系统包含储藏遗传信息的核酸和调节代谢的酶蛋白。
但是已知某种病毒生物却无核酸(阮病毒)。
(4)遗传学定义通过基因复制、突变和自然选择而进化的系统。
(5)热力学定义生命是个开放系统,它通过能量流动和物质循环而不断增加内部质量。
Horowitz观点:
?
具有复制的能力
?
具有催化的能力
?
具有突变的能力
2.生命的构成
19世纪30年代,德国植物学家施莱登首先指出,所有植物体都是由细胞构成的。
他的这个观点被德国动物学家施旺在动物组织和细胞研究中证实,所有动物也是由细胞构成的。
施旺指出:
“细胞是有机体,整个动物或植物体乃是细胞的集合体。
它们依照一定的规律排列在动物体内。
”在此基础上他们创立了细胞学说。
细胞是组成生物体的基本结构单元,是生物体进行代谢、能量转换、遗传以及其它生理活动的基本场所。
恩格斯把细胞学说、能量守恒和转换定律、达尔文进化论一起誉之为19世纪自然科学的三大发现。
由于细胞的发现,我们不仅知道一切高等有机体都是按照一个共同规律发育和生长的,而且通过细胞的变异,能改变自己,向更高的发育道路迈进。
3.细胞的分类和结构
所有的生物都是由细胞组成的,只是不同的生物体细胞的大小和形状有所不同。
有的细胞人的眼睛可以看得见,如鸟类的蛋,最大的直径近10厘米(鸵鸟蛋)。
有的细胞直径只有0.1微米,要用高倍显微镜才能看到,如原始的细菌。
大多数细胞的直径是10-100微米,用低倍显微镜就能看到。
细胞的大小,即使在同一生物体的相同组织中也不一样。
同一个细胞,处在不同发育阶段,它的大小也是会改变的。
根据生物的进化程度,细胞可以分为两大类:
原核细胞(Prokaryotecell)和真核细胞(Eukaryotecell)
(1)原核细胞
原核细胞是一类进化程度低,结构最简单的一类细胞。
属于原核细胞的有细菌(Bacteria)和蓝藻(blue-greenalgae)等。
原核细胞的特点:
原核细胞的外层是细胞壁和细胞膜(质膜),内部为细胞质。
细胞质的结构非常简单,没有明显的细胞器(由封闭的生物膜包裹的固体质粒),只有原始的细胞核(无核膜和核仁)和其它一些核糖核蛋白体等。
(2)真核细胞
真核细胞是高等植物和动物的基本组织单位。
真核细胞的结构特点:
真核细胞的外层为细胞膜(植物细胞还有一层细胞壁),内部为细胞质。
细胞质的结构非常复杂,含有许多细胞器,主要有:
细胞核、线粒体、核糖核蛋白体、高尔基体和溶酶体等。
植物细胞中还含有质体、叶绿体和液泡等。
各个细胞器具有不同的生物功能,它们之间的协调运作,使细胞内的代谢和各种生理活动能够有条不紊地进行。
4.生物体的化学组成
(1)生命体的元素组成
组成生命体的物质是极其复杂的。
但在地球上存在的92种天然元素中,只有以下元素在生物体内被发现
第一类元素:
包括C、H、O和N四种元素,是组成生命体最基本的元素。
这四种元素约占了生物体总质量的99%以上。
第二类元素:
包括S、P、Cl、Ca、K、Na和Mg。
这类元素也是组成生命体的基本元素。
第三类元素:
包括Fe、Cu、Co、Mn和Zn。
是生物体内存在的主要少量元素。
第四类元素:
包括Al、As、B、Br、Cr、F、Ga、I、Mo、Se、Si等。
自然界所有的生命物体都由三类物质组成水、无机离子和生物分子。
其中生物分子是生物体和生命现象的结构基础和功能基础,是生物化学研究的基本对象。
生物分子的主要类型包括:
糖、脂、核酸和蛋白质等生物大分子及维生素、辅酶、激素、核苷酸和氨基酸等有机小分子。
5.生物化学的概念:
生物化学可以认为是生命的化学,主要是应用化学的理论和方法研究微生物、植物、动物及人体等的化学组成、生命物质各组分的结构和性质、及它们在生命过程中的变化规律的一门科学。
6.生物化学的基本内容包括:
(1)发现和阐明构成生命物体的分子基础---生物分子的化学组成、结构和性质;
(2)生物分子的结构、功能与生命现象的关系;
(3)生物分子在生物机体中的相互作用及其变化规律(物质代谢、能量代谢、信息代谢)
二、生物化学的发展
生物化学作为一门独立的自然科学,只有近200年的历史。
但是其发展非常迅速,目前已成为自然科学领域发展最快、最引人注目的学科之一。
1.我国古代劳动人民的贡献
(1)制饴、酿酒、制醋、制酱技术;掌握生产豆腐的工艺(贾思勰的《齐民要术》;《齐民要术》是我国最早的一部完整的古农书。
(2)对脚气病(多发性神经炎)和甲状腺肿的认识与治疗。
(3)《本草纲目》(李时珍)
2.近代生物化学的发展
(1)萌芽时期(18世纪下半叶—19世纪初)---静态生物化学阶段
Scheele:
瑞典化学家,分离得到甘油、柠檬酸、苹果酸、乳酸、尿酸、酒石酸等。
Lavosier:
法国化学家
a.首次证明动物的呼吸需要氧气;
b.同时证明燃烧过程是物质与氧的结合过程。
Liebig:
德国化学家,是农业化学的奠基人,也是生物化学和碳水化合物化学的创始人之一。
首次提出新陈代谢这个学术名词。
发现了马尿酸、氯仿。
Wohler:
与Liebig在同一个实验室,1828年在实验室合成了尿素。
从而推翻了有机化合物只有在生物体内部合成的错误认识。
从此生物体内糖类、脂类及氨基酸等均被详尽的研究。
ErnstFelixHoppe-Seyler:
德国医生,1877年提出“Biochemie”即英文的“Biochemistry”.(Miescher是他的学生)
(2)奠基时期(19世纪—20世纪)---动态生物化学阶段:
科学家对生物物质代谢、平衡等进行了广泛深入的研究,基本阐明了酶的化学本质以及与能量代谢有关的物质代谢途径。
Summer:
美国科学家,1926年得到脲酶的结晶,证明了酶的化学本质是蛋白质。
Embden:
德国生物化学家,在糖代谢、脂代谢及肝脏合成氨基酸方面做出了巨大贡献,与他人一起证明了糖酵解途径。
Krebs:
英国人,发现了尿素循环和三羧酸循环。
Calvin:
美国人,发现了光合碳代谢途径。
光合磷酸化过程。
Abel:
1902年分离得到肾上腺素并制成结晶。
Went:
1926年从燕麦胚芽鞘中分离出生长素。
Hopkins:
英国剑桥生物化学中心,1912年前后发现维生素
(3)大发展时期(1930-至今)---机能生物化学阶段:
科学家对生物的研究已从整体水平逐步深入到细胞、亚细胞、分子水平。
伴随实验手段、技术的不断改进,使的对生物大分子结构及功能的研究也更加深入。
①糖酵解、三羧酸循环、脂代谢、氧化磷酸化等生化反应过程均被阐述。
②.Watson,Crick首次描绘了DNA双螺旋结构模型,使人们第一次获知基因结构的实质。
③.英国物理学家Perutz用X-射线衍射技术,解析了血红蛋白的三维空间结构;Kendrew测定了肌红蛋白的结构。
英国化学家Sanger利用10年时间完成牛胰岛素的结构测定。
④美国化学家Pauling确认氢键在蛋白质结构中和大分子相互作用中的重要性;还研究了镰刀型红细胞贫血病,提出分子病的名称。
3.我国科学家在近代生物化学发展史中的贡献
①1919-1922,吴宪提出用比色法测定血糖
②1924-1942,吴宪提出蛋白质变性学说
③汤佩松、殷宏章等在呼吸代谢、酶作用机理等方面作出突出的贡献
④1965年,人工合成具有生物学活性的牛胰岛素;1973年,测定了猪胰岛素的空间结构;1983年,完成酵母丙氨酸tRNA的人工合成。
⑤植物收缩蛋白的研究(阎隆飞等)
⑥生物膜结构与功能研究(杨福愉、黄芬等)
⑦蛋白质合成后的转运(信号肽、分子伴侣)
三、生物化学与其他学科间的关系
1.各学科之间的联系
2.生物化学知识的应用
工业方面:
食品工业、化妆品工业、发酵工业、制革工业、国防工业、环保工业等。
农业方面:
优质、高产品种培育、优良品种鉴定、生物肥料、生物农药等。
医药业:
疾病诊治、生化制药、基因治疗等。
生物技术:
基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等。
四、课程安排及其学习方法
第二章蛋白质
蛋白质存在于所有的生物细胞中,是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。
蛋白质是生命活动的物质基础,它参与了几乎所有的生命活动过程。
引言:
蛋白质概述
一、蛋白质的化学组成
1.元素组成:
蛋白质是一类含氮有机化合物,除含有碳、氢、氧外,还有氮和少量的硫。
某些蛋白质还含有其他一些元素,主要是磷、铁、碘、钼、锌和铜等。
这些元素在蛋白质中的组成百分比约为:
碳50%-55%
氢6.5-7.3%
氧19-24%
氮16%
硫0-3%
其他微量
大多数蛋白质的含氮量接近于16%,这是蛋白质元素组成的一个特点,也是凯氏(Kjedahl)定氮法测定蛋白质含量的计算基础。
所以,可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量:
蛋白质含量=蛋白氮x6.25
6.25为蛋白质系数,即1克氮所代表的蛋白质量(克数)
2.分子组成:
经酸、碱和酶处理蛋白质,使其彻底水解得到产物为氨基酸,组成蛋白质的常见20种氨基酸中除脯氨酸外,均为a-氨基酸:
二、蛋白质的大小和分子量
蛋白质是分子量很大的生物分子。
对任一种给定的蛋白质来说,它的所有分子在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度方面都应该是相同的,即所谓均一的蛋白质。
蛋白质分子量的变化范围很大,从大约6000到1000000道尔顿(Da)或更大。
某些蛋白质是由两个或更多个蛋白质亚基(多肽链)通过非共价结合而成的,称寡聚蛋白质。
有些寡聚蛋白质的分子量可高达数百万甚至数千万。
(TMV:
4x107)
三、蛋白质功能的多样性
1酶类
2结构蛋白类
3转运蛋白类
4收缩或运动蛋白类
5保护和防御蛋白类
6营养和储存蛋白类
7调节蛋白类
8其他蛋白(受体蛋白、毒素蛋白、激素蛋白等)
第一节蛋白质的基本结构单位—氨基酸(aminoacid)
一、蛋白质的水解
蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样可以被酸碱或蛋白酶催化水解,酸或碱能够将多肽完全水解,酶水解一般是部分水解。
完全水解得到各种氨基酸的混合物,部分水解通常得到多肽片段。
最后得到各种氨基酸的混合物。
所以,氨基酸是蛋白质的基本结构单元。
大多数的蛋白质都是由20种氨基酸组成。
这20种氨基酸被称为基本氨基酸。
1、酸水解
常用6mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸在105-110℃条件下进行水解,反应时间约20小时。
此法的优点是不容易引起水解产物的消旋化,得到的是L-氨基酸。
缺点是色氨酸被沸酸完全破坏;含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解;天门冬酰胺和谷氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。
2、碱水解
一般用5mol/L氢氧化钠煮沸10-20小时。
由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏,产率不高。
部分的水解产物发生消旋化,其产物是D-型和L-型氨基酸的混合物。
该法的优点是色氨酸在水解中不受破坏。
3、酶水解
目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶(proteolyticenzyme)或称蛋白酶(proteinase)已有十多种。
应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。
水解的产物为较小的肽段。
最常见的蛋白水解酶有以下几种:
胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶。
三、氨基酸的分类
(一)根据来源分:
内源氨基酸和外源氨基酸
(二)从营养学角度分:
必需氨基酸和非必需氨基酸
IleMetValLeuTrpPheThrLys
一家写两三本书来
(二)根据是否组成蛋白质来分:
:
蛋白质中常见氨基酸、蛋白质中稀有氨基酸和非蛋白氨基酸
1、蛋白质中常见氨基酸的结构
(1)脂肪族氨基酸
甘氨酸Glycine
丙氨酸Alanine
缬氨酸Valine
亮氨酸Leucine
异亮氨酸Ileucine
脯氨酸Proline
甲硫氨酸Methionine
半胱氨酸Cysteine
(2)芳香族氨基酸
苯丙氨酸Phenylalanine
酪氨酸Tyrosine
色氨酸Tryptophan
(3)碱性氨基酸
精氨酸Arginine
赖氨酸Lysine
组氨酸Histidine
(4)酸性氨基酸
天冬氨酸Aspartate
谷氨酸Glutamate
(5)含羟基氨基酸
丝氨酸Serine
苏氨酸Threonine
(6)含酰胺氨基酸
天冬酰胺Asparagine
谷酰胺Glutamine
按R基极性分类20种常见氨基酸
(1)非极性R基团氨基酸:
8种—AlaValLeuIlePheProMetTrp(表1-2)
(2)极性不带电荷R基团氨基酸:
7种—SerThrAsnGlnTryCysGly(表1-3)
(3)带负电荷R基团氨基酸:
2种—AspGlu
(4)带正电荷R基团氨基酸:
3种—LysArgHis
硒代半胱氨酸:
第21种
2.蛋白质中几种重要的稀有氨基酸
在少数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸,通常称为不常见蛋白质氨基酸。
这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。
其中重要的有4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、N-甲基赖氨酸、和3,5-二碘酪氨酸等。
这些不常见蛋白质氨基酸的结构如课件。
3.非蛋白氨基酸
广泛存在于各种细胞和组织中,呈游离或结合态,但并不存在蛋白质中的一类氨基酸,大部分也是蛋白质氨基酸的衍生物,如β-丙氨酸、γ-氨基丁酸。
非蛋白氨基酸存在的意义:
①作为细菌细胞壁中肽聚糖的组分:
D-GluD-Ala
②作为一些重要代谢物的前体或中间体:
β-丙氨酸(VB3)、鸟氨酸(Orn)、胍氨酸(Cit)(尿素)
③作为神经传导的化学物质:
γ-氨基丁酸
④有些氨基酸只作为一种N素的转运和贮藏载体(刀豆氨酸)
⑤调节生长作用
⑥杀虫防御作用
绝大部分非蛋白氨基酸的功能不清楚。
三、氨基酸的理化性质
(一)氨基酸的一般物理性质
1.氨基酸的旋光性
除甘氨酸外,氨基酸含有一个手性a-碳原子,因此都具有旋光性。
比旋光度(表1-7)是氨基酸的重要物理常数之一,是鉴别各种氨基酸的重要依据。
2.氨基酸的光吸收
?
构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收,但在远紫外区(<220nm)均有光吸收。
?
在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。
?
酪氨酸的lmax=275nm,
苯丙氨酸的lmax=257nm,
色氨酸的lmax=280nm,
3.高熔点
4.一般均溶于水,溶于强酸、强碱;不溶于乙醚。
5.氨基酸一般有味
(二)氨基酸的两性性质和等电点
1.氨基酸的兼性离子形式
氨基酸的两个重要性质:
氨基酸晶体的熔点高(≥200℃);氨基酸使水的介电常数增高。
H
H3N+CCOO-
R
2.氨基酸的两性解离
在不同的pH条件下,两性离子的状态也随之发生变化。
HHH
H3N+CCOOHH3N+CCOO--H2NCCOO-
RRR
正离子两性离子负离子
等电点pI
氨基酸的等电点:
当外液pH为某一pH值时,氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-数目正好相等,净电荷为0。
这一pH值即为氨基酸的等电点,简称pI。
在等电点时,氨基酸既不向正极也不向负极移动,即氨基酸处于两性离子状态。
(2)氨基酸等电点的计算:
侧链不含离解基团的中性氨基酸,其等电点是它的pK’1和pK’2的算术平均值:
pI=(pK’1+pK’2)/2
同样,对于侧链含有可解离基团的氨基酸,其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值。
酸性氨基酸:
pI=(pK’1+pK’R-COO-)/2
碱性氨基酸:
pI=(pK’2+pK’R-NH2)/2
(3)氨基酸的滴定曲线(以甘氨酸为例)
氨基酸的甲醛滴定
用途:
可以用来直接测定氨基酸的浓度。
(三)氨基酸的化学反应
1与茚三酮反应
用途:
常用于氨基酸的定性或定量分析。
2成肽反应
用途:
是多肽和蛋白质生物合成的基本反应。
3、与2、4-二硝基氟苯反应-
用途:
可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸.亦称Sanger反应
4、与苯异硫氰酸酯反应
用途:
可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸.亦称Edman反应
5、与丹磺酰氯反应
用途:
可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸
6.侧链基团的化学性质
(1)巯基(-SH)的性质
(2)羟基的性质
(3)咪唑基的性质
蛋白质的化学修饰:
是指在较温和的条件下,以可控制的方式使蛋白质与某种试剂(称化学修饰剂)起特异反应,以引起蛋白质中个别氨基酸侧链或功能团发生共价化学改变。
第二节肽(peptide)
一、肽与肽键
一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基之间失水形成的酰胺键称为肽键,所形成的化合物称为肽。
由两个氨基酸组成的肽称为二肽,由多个氨基酸组成的肽则称为多肽。
组成多肽的氨基酸单元称为氨基酸残基。
肽键的特点是:
①氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用。
②组成肽键的原子处于同一平面。
③肽键中的C-N键具有部分双键性质,不能自由旋转。
④在大多数情况下,以反式结构存在。
二、肽链中AA的排列顺序和命名
?
?
?
在多肽链中,氨基酸残基按一定的顺序排列,这种排列顺序称为氨基酸顺序。
通常在多肽链的一端含有一个游离的a-氨基,称为氨基端或N-端;在另一端含有一个游离的a-羧基,称为羧基端或C-端。
氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始,以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。
如上述五肽可表示为:
Ser-Val-Tyr-Asp-Gln
三、肽的重要理化性质
1.每种肽也有其晶体,晶体的熔点都很高。
2.在pH0-14范围内,肽的酸碱性质主要来自游离末端a-NH2和游离末端a-COOH以及侧链上可解离的基团。
3.每一种肽都有其相应的等电点,计算方法与AA一致且复杂。
4.原则:
当溶液pH大于解离侧链的值,占优势的离子形式是该侧链的共轭碱,当溶液pH小于解离侧链的值,占优势的离子形式是该侧链的共轭酸。
(P114例子)
5.肽的化学反应:
也能发生茚三酮反应、Sanger反应、DNS反应和Edman反应;还可发生双缩脲反应。
多肽可与多种化合物作用,产生不同的颜色反应。
这些显色反应,可用于多肽的定性或定量鉴定。
如黄色反应,是由硝酸与氨基酸的苯基(酪氨酸和苯丙氨酸)反应生成二硝基苯衍生物而显黄色。
多肽的双缩脲反应是多肽特有的颜色反应;双缩脲是两分子的尿素经加热失去一分子NH3而得到的产物。
双缩脲能够与碱性硫酸铜作用,产生兰色的铜-双缩脲络合物,称为双缩脲反应。
含有两个以上肽键的多肽,具有与双缩脲相似的结构特点,也能发生双缩脲反应,生成紫红色或蓝紫色络合物。
这是多肽定量测定的重要反应。
四、天然存在的重要多肽
在生物体中,多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。
但是,也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。
这类多肽通常都具有特殊的生理功能,常称为活性肽(activepeptide)。
如:
脑啡肽;激素类多肽;抗生素类多肽;;蛇毒多肽等。
1.谷胱甘肽:
存在与动、植物及微生物中:
(1)参与体内氧化还原反应
(2)作为辅酶参与氧化还原反应,保护巯基酶或含Cys的蛋白质中SH的还原性防止氧化物积累.
2.脑啡肽
3.牛催产素、牛加压素
4.短杆菌肽S(环十肽)
由细菌分泌的多肽,有时也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。
如鸟氨酸(Ornithine,缩写为Orn)。
与真核生物的RNA聚合酶II和III牢固结合
第三节:
蛋白质的分子结构
蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide)链以特殊方式结合而成的生物大分子。
蛋白质与多肽并无严格的界线,通常是将分子量在6000道尔顿以上的多肽称为蛋白质。
蛋白质分子量变化范围很大,从大约6000到1000000道尔顿甚至更大。
一、蛋白质的一级结构
1.定义——1969年,国际纯化学与应用化学委员会(IUPAC)规定:
蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中AA的排列顺序,包括二硫键的位置。
其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序,它是蛋白质生物功能的基础。
2.蛋白质一级结构的测定
蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。
自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来,现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。
(1)测定蛋白质一级结构的要求
①样品必需纯(>97%以上);
②知道蛋白质的分子量;
③知道蛋白质由几个亚基组成;
(2)测定步骤
①测定蛋白质分子中多肽链的数目
通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系,即可确定多肽链的数目。
②多肽链的拆分
由多条多肽链组成的蛋白质分子,必须先进行拆分。
几条多肽链借助非共价键连接在一起,称为寡聚蛋白质,如,血红蛋白为四聚体,烯醇化酶为二聚体;可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理,即可分开多肽链(亚基).
③二硫键的断裂
几条多肽链通过二硫键交联在一起。
可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的β-巯基乙醇(还原法)处理,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂(ICH2COOH)保护生成的巯基,以防止
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基础 生物化学
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)