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保健食品的抗氧化功能
抗氧化功能保健食品的功效成分及检测
一、概述
自由基是指含有未配对的电子的原子、分子或基团,由于自由基中含有未成对电子,具有配对的倾向,具有很高的活性。
自由基若要稳定必须向邻近的原子或分子夺取电子而使自己的电子成对,但也因此使得电子被夺的那个原子或分子成为新的自由基,引发连锁反应,这个过程就是“氧化”。
自由基是人体正常的代谢产物,正常情况下人体内自由基是处于不断产生与清除的动态平衡中,人体内存在少量的氧自由基,不但对人体不构成威胁,而且可以促进细胞增殖,刺激白细胞和吞噬细胞杀灭细菌,消除炎症,分解毒物。
自由基产生过多或清除过慢,它通过攻击生命大分子物质及各种细胞,会造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤,加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。
常见的癌症、动脉硬化、糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆、关节炎等疾病都被认为与自由基过多相关。
抗氧化剂是指能清除自由基或能阻断自由基参与的氧化反应的物质。
抗氧化剂的种类繁多,可分为酶类清除剂和非酶类清除剂两大类。
酶类抗氧化剂一般为抗氧化酶,主要有超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)等。
非酶类抗氧化剂一般包括黄酮类、多糖类、维生素C、维生素E、β-胡萝卜素等物质。
它们是能帮助捕获并中和自由基,从而祛除自由基对人体损害的一类物质。
国家食品药品监督管理局(SFDA)已批准具有抗氧化功能的常用原料有:
维生素A、维生素C、维生素E,硒,OPC(低聚原花青素),SOD(超氧化物歧化酶),辅酶Q10,DHA,茶多酚,β-胡罗卜素,牛磺酸,螺旋藻等。
随着年龄的增长,机体内产生自由基清除剂的能力逐渐下降,从而减弱了对自由基损害的防御能力,使机体组织器官容易受损,加速了机体的衰老,引发一系列的疾病。
为了防止此类现象的发生,可以人为地由膳食补充抗氧化剂,从而达到防御疾病、延缓衰老的目的。
二、主要功效成分介绍
(一)酶类抗氧化剂(Enzymesantioxidant)
1、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)
从1938年Marn[1]等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起,人们对SOD的研究己有七十多年的历史。
1969年IrwinFridovich和JoeMcCord[2]等重新发现这种蛋白,并且发现了它们的生物活性,弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质,所以正式将其命名为超氧化物歧化酶,英文简称为SOD[3]。
(1)性质及结构
SOD是生物体内重要的抗氧化酶,广泛分布于各种生物体内,如动物,植物,微生物等。
SOD是一类含金属的酶,按其所含金属辅基不同可分为含铜锌(分子中同时含有Cu和Zn)、含锰或铁(分子中含有锰或铁)和含镍(分子中含有镍)3种[4](图1、图2)。
含铜锌金属辅基的Cu·Zn-SOD是主要存在于真核细胞的细胞质中或高等植物的叶绿体基质、类囊体内以及线粒体膜间隙中。
广泛存在于动物血液、牛肝、猪肝、牛心、豌豆、麦叶等动植物组织中,是目前应用最广泛的一类酶。
大肠杆菌和其他一些原核细胞生物中一部分含有Fe-SOD,一部分含有Mn-SOD,而另外一些两种抗氧化酶都含有。
图1Cu•Zn-SOD结构图
图2Mn-SOD结构图
(2)理化及生物学特性
SOD是一种酸性蛋白酶,对pH、热和蛋白酶水解等反应较其他蛋白酶稳定。
其酶活性既取决于蛋白质,还取决于结合到活性部位的金属离子。
SOD是生物体内防御氧化损伤的一种十分重要的金属酶,对氧自由基有强烈清除作用,特别对于超氧阴离子(O2·),SOD可将其催化歧化而生成H2O2和O2,故SOD又称为清除超氧阴离子自由基的特异酶。
(3)SOD的生理功能及应用
作为一种体内自由基去除剂SOD能保护DNA、蛋白质和细胞膜免遭O2-·的破坏作用,减轻或延缓甚至治愈某些疾病,延缓因自由基损害生命大分子而引起的衰老现象,如延缓皮肤衰老和老年斑的形成等;同时SOD还能提高人体对自由基外界诱发因子的抵抗力;增强人体自身的免疫力;清除放疗所诱发的大量自由基;消除疲劳等生理功能。
SOD在医疗上对治疗关节炎和类风湿性关节炎疗效显著。
此外,SOD对治疗癌症、缺血后重灌流损伤、肺气肿、白内障、糖尿病、贫血等疾病均有疗效。
SOD在食品方面可作为功能性食品的功能因子或食品营养强化剂,有良好的抗衰老、抗炎、抗辐射、抗疲劳等保健强身的效果。
国内外已把SOD作为食品添加剂应用到多种食品中。
同时还可用富含SOD的原料加工制成功能性食品,如大蒜饮料、刺梨SOD汁等。
(4)生物安全性
超氧化物歧化酶(SOD)目前世界范围内大都从动物血液中提取,不但代价昂贵,而且动物性SOD有排他性、不易常温保存等缺点,同时存在艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险。
2、过氧化氢酶(catalase,CAT)
(1)性质
过氧化氢酶存在于细胞的过氧化物体内,可以催化氧化氢分解成氧气和水,是生物防御体系的关键酶之一。
H2O2浓度越高,分解速度越快[5]。
过氧化氢酶是在1811年被过氧化氢(H2O2)的发现者泰纳尔(LouisJacquesThénard)首次发现。
1900年,OscarLoew将这种能够降解过氧化氢的酶命名为“Catalase”,即过氧化氢酶,并发现这种酶存在于许多植物和动物中。
1937年,詹姆斯·B·萨姆纳将来自牛肝中的过氧化氢酶结晶,并在次年获得了该酶的相对分子质量。
1969年,牛的过氧化氢酶的氨基酸序列得以解出。
1981年其三维结构得以解析[6](图3)。
图3过氧化氢酶结构图
(2)生物学功能
过氧化氢酶广泛存在于能呼吸的生物体内,如植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中,其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。
过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。
过氧化氢酶也被用于食品包装,防止食物被氧化。
在纺织工业中,过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢。
近年来,过氧化氢酶开始使用在美容业中。
一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢,目的是增加表皮上层的细胞氧量。
3、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GPX)
(1)性质
谷胱甘肽过氧化物酶为生物体中清除过氧化氢和其他有机过氧化物的脱毒酶。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是第一个在哺乳动物体内发现的含硒酶(图4),它于1957年被Mills[7]首先发现,1973年由Flohe和Rotruck两个研究小组确立了GPX与硒之间的联系。
图4谷胱甘肽过氧化物酶结构图
(2)生物学功能:
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
硒是GSH-Px酶系的组成成分,它能催化GSH变为GSSG,使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物,同时促进H2O2的分解,从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。
(二)原花青素
1、结构与性质
原花青素是由不同数量的儿茶素(catechin)或表儿茶素(epicatechin)结合而成。
最简单的原花青素是儿茶素、或表儿茶素、或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体,此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体。
按聚合度的大小,通常将二~五聚体称为低聚体(简称OPC),将五聚体以上的称为高聚体(简称PPC)。
原花青素是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮,是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。
一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮提取物。
原花青素一般为红棕色粉末,气微、味涩,溶于水和大多有机溶剂。
2、生物学功能[8,9]
原花青素是当今医学界发现的最安全高效的抗氧化剂、自由基清除剂和紫外线吸收剂,广泛应用于保健食品、药品和化妆品。
其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍,它能有效清除体内多余的自由基,保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤,具有抗心血管疾病、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗炎、抗疲劳、改善视觉功能等药理作用,可用于治疗动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肿瘤等疾病。
(1)通过三条途径保护人体的血液循环系统:
清除血液中存在的氧自由基;帮助机体阻止氧自由基的生成;增强血管壁的完整性
(2)阻抑胶原酶和弹性蛋白酶对结缔组织的降解作用,因而有利于保持皮肤的弹性,发挥抗皮肤衰老的功效。
(3)能增强眼底视网膜毛细血管和四肢末梢毛细血管的微循环。
(4)通过维持血管的健康和改善微循环,使各器官和组织获得较充足的血液供应。
(5)能增强免疫功能,表现在花青素提高喂酒精的小白鼠和感染逆转录病毒的小白鼠细胞介素2的免疫应答能力。
(6)花青素还可增强维生素C的功效,延长维生素C在人体内发生功效的时间。
(7)花青素在水中的溶解性非常好,口服后吸收好,进入人体内起效快,而且作用时间持久。
4、安全性:
Masquelier教授和许多科学家利用花青素,已经做了多年的各种临床、化验、毒性和药物动力学的研究。
多种动物实验和实验系统研究的结果证明,花青素无毒、无致突变性、无致癌性、无致畸胎性、无致敏性,因此花青素是安全的。
(三)类胡萝卜素(Carotenoids)
类胡萝卜素(Carotenoids)是一类重要的天然色素的总称,普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类中的黄色、橙红色或红色的色素之中[10-11]。
类胡萝卜素可分3类:
①胡萝卜素,羟类化合物,特点是溶于石油醚。
多数都具有CH的化学实验式。
最常见的有蕃茄红素和α,β,γ-胡萝卜素。
②叶黄素,亦称胡萝卜醇,是胡萝卜素的非酸性氧衍生物。
含氧基团有羟基、酮基、醚基、环氧基和类呋喃基。
常见的有隐黄质、玉米黄质、叶黄素、辣椒红、辣椒玉红素、虾青素、虾红素、海胆烯酮、蒲公英黄质、新黄质、柠黄质、紫菌红素丁等。
③类胡萝卜素酸,胡萝卜素的羧酸衍生物,能溶于碱溶液。
例如:
藏花素、胭脂树橙和红酵母红素等。
1、番茄红素(Lycopene)
(1)性质:
番茄红素又称ψ-胡萝卜素,属于异戊二烯类化合物,是类胡萝卜素的一种。
番茄红素(lycopene)是一种脂溶性不饱和碳氢化合物,是类胡萝卜素的一种,分子式为C40H56,相对分子质量536.85,熔点174℃(反式),与β-胡萝卜素是同分异构体。
分子结构见图7,番茄红素难溶于甲醇、乙醇,可溶于乙醚、石油醚、己烷、丙酮,易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶剂[12]。
图5番茄红素分子结构图
(2)生物学功能:
研究发现,番茄红素具有优越的生理功能,它不仅具有抗癌抑癌的功效,而且对于预防心血管疾病、动脉硬化等各种成人病、增强人体免疫系统以及延缓衰老等都具有重要意义。
番茄红素具有抗氧化、抑制突变、降低核酸损伤、减少心血管疾病及预防癌症等多种保健功能。
①抗氧化延缓衰老。
番茄红素抗氧化能力是维生素E的100倍,维生素C的1000倍。
是自然界最强的延缓衰老的抗氧化剂。
②防癌抗癌,辅助抑制肿瘤。
番茄红素能清除导致细胞癌变的自由基,达到预防的作用。
对已形成的肿瘤,可促进细胞间隙传输信号,接触抑制、分化诱导癌细胞。
③前列腺保健,提高男性生育能力。
④调节血脂,预防心脑血管疾病。
⑤抗辐射,美容美肤。
⑥乳房子宫保健。
番茄红素可促进女性乳房健康发育,减少乳腺癌发生几率。
(3)生物安全性:
番茄红素雌、雄小鼠LD50均大于20.0g/kg.属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30天喂养试验结果显示番茄红素30天喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用[13]。
2、虾青素(Astaxanthin)
(1)性质及结构:
虾青素是一种端基为酮基类胡萝卜素,化学名称为3,3’-二羟基-4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素,分子式为C40H53O4,又名虾黄素,虾黄质,龙虾壳色素,是一种非维生素A源类胡萝卜素[14],分子结构见图8。
虾青素是从河螯虾外壳,牡蛎和鲑鱼中发现的一种红色类胡萝卜素,在体内可与蛋白质结合而呈青、蓝色。
有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、预防心脑血管疾病作用[14]。
图6虾青素的分子结构图
(2)生物学功能:
虾青素是类胡萝卜组的一种。
也是类胡萝素合成的最高级别产物,β-胡萝卜素、叶黄素、角黄素、番茄红素等都不过是类胡萝卜素合成的中间产物,因此在自然界,虾青素具有最强的抗氧化性[15]。
主要功能有:
①抗癌作用:
虾青素对人大肠癌SW116细胞的增殖有明显抑制作用,对膀胱癌、肝癌、口腔癌、肺癌和由紫外线引起的皮肤癌有一定的抑制作用。
②抗氧化作用:
虾青素具有超强的抗氧化作用,其抗脂肪氧化的能力比β-胡萝卜素高10倍,比维生素E高550倍,是OPC的20倍,故称为超级抗氧化剂。
③虾青素能增强抗体反应和增强体液免疫的功能。
④对心血管系统有显著的保护作用。
⑤虾青素极易通过血脑屏障,故能有效地预防与年龄相关的视黄斑退化和中枢神经系统疾病(如帕金森病、阿尔茨海默病和脊髓损伤)。
(3)生物安全性:
人分别服用3.6mg/d、7.2mg/d、14.4mg/d剂量的虾青素都没有出现不良反应,而且血浆LDL氧化的速率随剂量增加而减慢。
研究表明虾青素无毒副作用[16]。
3、叶黄素(Xanthophylls)
(1)性质及结构:
叶黄素是α-胡萝卜素的衍生物,分子式:
C40H56O2,相对分子质量:
568.85。
它含有二个不同的紫罗酮环:
β-和ε-紫罗酮环,在各紫罗酮环的第3个碳原子上存在一个功能性羟基。
在C23、C23’和C26’处有三个不对称中心,因此理论上有8种立体异构体[17],分子结构见图9。
叶黄素又名“植物黄体素”,在自然界中与玉米黄素(Zeaxanthin)共同存在。
叶黄素与玉米黄素是构成玉米、蔬菜、水果、花卉等植物色素的主要组分,也是构成人眼视网膜黄斑区域的主要色素[18-19]。
图7叶黄素的分子结构图
(2)生物学功能:
叶黄素能抑制活性氧自由基的活性,阻止活性氧自由基对正常细胞的破坏。
叶黄素可通过物理或化学淬灭作用灭活单线态氧,从而保护机体免受伤害,增强机体的免疫能力。
另外叶黄素还能改善老年人视力衰退;预防老年性黄斑变性所导致的盲眼病;保护由日光、电脑等所发射的紫外线所导致的对眼睛和视力的伤害作用;降低白内障的发生率;减轻体内和皮肤退行性老年斑的形成;调节血脂;延缓动脉硬化;抗癌作用等作用。
(3)生物安全性:
叶黄素雌、雄小鼠经口LD均大于21.5mg/kg,根据急性毒性(LD)剂量分级标准,属无毒级。
遗传毒性试验(Ames试验、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)均为阴性,表明叶黄素无致突变作用。
在大鼠30d喂养试验中未见动物健康状况、血液学、血液生化学和器官组织形态的异常变化。
(四)维生素类(Vitamins)
1、维生素E(VitaminE)
(1)性质及结构:
维生素E(VitaminE)是一种脂溶性维生素,又称生育酚,是最主要的抗氧化剂之一[20]。
化学式:
C29H50O2;相对分子质量:
430.69;分子结构见图8;外观:
黄色油状液体;密度:
0.950g/cm³;熔点:
2.5℃~3.5℃;沸点:
200℃~220℃。
图8维生素E的分子结构图
(2)生物学功能:
维生素E能促进性激素分泌,使男子精子活力和数量增加;使女子雌性激素浓度增高,提高生育能力,预防流产,还可用于防治男性不育症、烧伤、冻伤、毛细血管出血、更年期综合症、美容等方面。
近来还发现维生素E可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应,使末稍血管扩张,改善血液循环,预防近视发生和发展。
维生素E可清除自由基,防止油脂氧化和阻断亚硝胺的生成,故在提高免疫能力,预防癌症等方面有重要作用,同时在预防和治疗缺血再灌注损伤等疾病有一定功效[21]。
(3)生物安全性:
美国和欧盟有各自的维生素E安全评价体系。
美国采用的是HACCP评价体系,将动物试验中高剂量维生素E造成的出血(小鼠的出血部位为:
肠道、尿道、脑膜和眼眶)作为最高耐受剂量的关键控制点。
以500mg/(kgBW·d)为LOAEL(最低有害作用水平),并通过安全系数的换算,得出成年人每日维生素E的可耐受最高摄入量为1000mg/d。
人的NOAEL(无明显副作用水平)为540mg/d,通过安全系数换算,成年人每天摄入维生素E的可耐受最高摄入量为270~300mg/d。
2、维生素C(VitaminC)
(1)性质及结构:
分子式:
C6H8O6;相对分子质量:
176.12;分子结构式见图11;酸性,在溶液中会氧化分解;外观:
无色晶体;熔点:
190℃~192℃;紫外吸收最大值:
245nm。
维生素C又称为抗坏血酸,在自然界中存在还原型抗坏血酸和氧化型脱氢抗坏血酸两种形式。
抗坏血酸通过逐级供给电子而转变成半脱氢抗坏血酸和脱氢抗坏血酸,在转化的过程中达到清除O2-·、·OH、ROO·等自由基的作用。
维生素C具有强抗氧活性,能增强免疫功能、阻断亚硝胺生成、增强肝脏中细胞色素酶体系的解毒功能。
人体血液中的维生素C含量水平与肺炎、心肌梗塞等疾病密切相关[22]。
图9维生素C的分子结构图
(2)生物学功能:
维生素C的主要作用是对抗游离基,有助于防癌,降低胆固醇,防止坏血病;提高免疫力,预防心脏病、中风,保护牙齿和牙龈等。
另外,坚持按时服用维生素C还可以使皮肤黑色素沉着减少。
(3)生物安全性:
维生素C的毒性很小,但服用过多仍可产生一些不良反应。
有报告指出,成人维生素C的每日摄入量超过2g,可引起渗透性腹泻。
当每日摄入量小于1g时,一般不引起高尿酸症,当超过1g时,尿酸排除明显增加。
研究发现,每日服用4g维生素C,可是尿液中尿酸的排出量增加一倍,并因此而形成尿酸结石增多。
过量的维生素C还可引起子宫颈粘液中糖蛋白二硫键改变,阻止精子的穿透,造成不育。
妊娠期服用过量的维生素C,可能影响胚胎的发育。
3、维生素A(VitaminA)
(1)性质及结构:
维生素A1主要存在与动物肝脏、血液和眼球的视网膜中,分子式C20H30O;熔点:
64℃;维生素A2主要在淡水鱼中存在,分子式C20H28O;熔点:
17℃~19℃。
维生素A是人体必需的13种维生素之一,是一种脂溶性抗氧化剂,在人体中可以维持视力并且促进骨骼成长[23]。
(2)生物学功能:
维生素A有一定的抗氧化作用,可以中和有害的游离基;维持视觉,维生素A可促进视觉细胞内感光色素的形成;促进生长发育,视黄醇也具有相当于类固醇激素的作用,可促进糖蛋白的合成;维持上皮结构的完整与健全;加强免疫能力;维生素A有助于维持免疫系统功能正常,能加强对传染病特别是呼吸道感染及寄生虫感染的身体抵抗力。
(3)生物安全性:
长期或大量服用维生素A,可引起中毒反应。
成人一次用药超过50万单位,或儿童超过30万单位,可引起急性中毒,表现为头痛、烦躁、多汗、食欲不振等。
不论成人还是儿童,连续用药超过6个月,皆可引起慢性中毒。
三、主要功效成分的检测方法综述
1、免疫学方法
将GPX3抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中依次加入标准品和标本,其中的GPX3与连接于固相载体上的抗体结合,洗板之后加入生物素化的GPX3抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入底物(TMB)显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的GPX3呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,计算样品中谷胱甘肽过氧化物酶的浓度。
2、分光光度法
细胞色素C还原法[24](McCord法)测定SOD:
pH7.8,0.3mol/L磷酸钾缓冲液0.5mL(含1×10-4mol/LEDTA),6×10-5mol/L氧化型细胞色素C液0.5mL,0.3mmol/L黄嘌呤液0.5mL,1.3mL重蒸水,在预保温10min,最后加入1.7×10-3u/mg.port的黄嘌呤氧化酶0.2mL,并立即计时,速率变化在2min内有效,控制黄嘌呤氧化酶浓度,使其在550nm的吸光度为0.25/min,测定SOD活性时,加入0.3mLSOD被测液,重蒸水相应减少到1.0mL,根据抑制程度,计算活性。
邻苯三酚自氧化法[25](简称Marklund法)测定SOD:
邻苯三酚发生自氧化测定:
50mmol/L的Tris-HC1(pH8.2)缓冲液3mL,预热至25℃,加入l0μL50mmol/L的邻苯三酚,充分摇匀,以缓冲液做空白对照,每隔半分钟测一次吸光度。
同样条件,加入l0μL待测SOD液,读取其吸光度。
羟胺发色法[26]测定SOD:
将10mmol/L邻苯三酚,10mmol/LEDTA-Na2,40mmol/L盐酸羟胺和重蒸水按1:
l:
4:
4配制反应液,将90mg/L氨基苯磺酸和1.5mg/LN-甲萘基二氨基乙烯按1:
1配成显色液,取0.95mL0.1mol/L的Tris-HC1和0.05mLSOD待测液,再加0.1mL反应液,室温反应15min,再加2.0mL显色液,550nm处比色。
钼酸铵比色法测定CAT:
过氧化氢酶(CAT)可催化H2O2分解生成H2O和O2,体系中残留的H2O2再与钼酸铵作用生成黄色化合物,反应在很短时间即可达到平衡,并至少可稳定60min,其生成的黄色化合物在405nm处所呈现的吸光度取决于H2O2和钼酸铵的浓度,根据过氧化氢酶分解H2O2的多少间接测定其含量。
改良比色法测定CAT:
CAT分解H2O2的反应可通过加入醋酸重铬酸钾而迅速中止,剩余的H2O2与醋酸重铬酸钾在加热条件下反应生成铬酸醋酸钾,在波长570nm~610nm进行比色测定铬酸醋酸钾的生成量,可反映H2O2的含量。
谷胱甘肽过氧化物酶测定通常采用二硫代二硝基苯甲酸法,其原理是GSH和二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子。
该离子呈现较稳定的黄色,在412nm测定其吸光度,即可计算出GSH的量,以单位时间内GSH减少量来表示GSH-Px活力。
GST具有催化GSH与1氯-2,4-二硝基苯结合的能力,GSH+C6H3(NO2)2Cl(1-巯基-2,4-二硝基苯)+HCl,在一定时间内,活性高低与GSH的减少量呈线性关系。
由于上述反应在非酶条件下仍能进行,故计算酶活力时,必须扣除非酶反应所引起的GSH减少量。
杨万政等[27]用分光光度法测定了沙棘油中类胡萝卜素的含量,检测波长为445nm。
张英宣等[28]采用改进的分光光度法测定了胡萝卜中类胡萝卜素的含量。
在5.00mg/kg~100mg/kg浓度范围内,平均回收率为99.0%,相对标准偏差小于5%。
丁贵平等[29]建立了分光光度法测定保健食品中微囊化β-胡萝卜素,采用正交设计确定了提取β-胡萝卜素的最佳条件,样品经酶解,用氯仿提取后,转至环已烷溶剂中,在454nm波长下测吸收值,通过E值计算其含量。
方法的回收率为92.5%~96.6%,相对标准偏差为2.4%~2.6%。
JafarMuhammadEL-Qudah[30]用分光光度法测定了约旦日常膳食中的总类胡萝卜素含量。
EffatSouri等[31]用三阶导数分光光度法同时测定了花色素甙和β-胡萝卜素,花色素甙和β-胡萝卜素的测定波长分别为625nm和540nm,检出限分别为125μg/mL和6.25μg/mL。
分光光度法是测定番茄红素的常用方法。
番茄红素在不同的有机溶剂里均有类似的吸收峰,最大吸收峰的波长约为472nm~484nm[32],人们经常将样品溶解在石油醚或正己烷中,在最大吸收波长下用分光光度计测定溶液的吸光度,以此来表征番茄红素的浓度,用摩尔消光系数计算其中番茄红素的含量[33-34]。
程杨[35]采用浸提法从试样中提取番茄红素,用苏丹Ⅰ标准品代替番茄红素标准品,通过紫外分光光度法测定试样中番茄红素的含量。
通过比较试验分析石油醚、乙烷、丙酮和氯仿4
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