中药附归参汤修复混合菌所致小鼠输卵管炎性狭窄的病理改变.docx
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中药附归参汤修复混合菌所致小鼠输卵管炎性狭窄的病理改变
中药“附归参汤”修复混合菌所致小鼠输卵管炎性狭窄的病理改变
(作者:
___________单位:
___________邮编:
___________)
【摘要】目的观察中药“附归参汤”灌胃给药后是否可改善混合菌导致的小鼠输卵管炎性狭窄的病理改变。
为临床应用“附归参汤”治疗输卵管炎所致的不孕症提供实验依据。
方法昆明小鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、模型组+生理盐水处理组(n=10)、模型+“附归参汤”处理组(n=20),输卵管炎性狭窄模型采用混合菌(溶血性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌2∶1∶1)输卵管接种法制作,处理组分别胃饲生理盐水和“附归参汤”30天。
应用组织学方法观察各组的病理学改变,评判各处理组病理学转归情况。
结果在使用混合菌接种后,小鼠输卵管管壁结构发生改变,主要包括黏膜层水肿、上皮细胞顶端纤毛变短或消失、固有层炎性细胞浸润、毛细血管充血、管腔狭窄甚至闭塞。
“附归参汤”长期给药后明显使上述病理改变向正常组织转归。
结论中药“附归参汤”能够修复混合菌导致的小鼠输卵管炎性狭窄的病理改变,为临床应用该药治疗输卵管炎所致的不孕症提供了实验依据。
【关键词】中药;输卵管炎性狭窄;不孕;小鼠【Abstract】ObjectiveLongtimeintragastricadministrationof“FuguishenTang”(FGST),atraditionalChinesemedicineusedinclinicalpractice,wasinvestigatedwhetheritrecoveredthepathologicalchangeofoviductalsalpingitisandsterllitycausedbybacteria.TheaimwastoattestanefficiencyofFGSTtotreatthesterilitycausedbysalpingitisforclinicaltherapy.MethodsKunmingmicewererandomdividedintothreegroups:
controlgroup(n=10),modelgroup(n=10),model+salinetreatedgroup(n=10)andmodel+FGSTtreatedgroup(n=20).Themodelgroupwasinducedbymixedbacteria(betastreptococcus,EscherichiacoliandStaphylococcusaureus,ration2:
1:
1).ThetreatmentofsalineandFGSTwereintragastricallyadministratedonceperdayforperiodof30days.Thehistologicalmethodswereusedtoobservethepathologicalalterations.ResultsTheinjectionofmixedbacteriacausedapathologicalalterationofoviductalwall,suchasedemainmucous,shortenedciliaofepithelium,inflammatorycellinfiltrating,dilationandhyperraemiainbloodcapillarywithinlaminapropriaandobstructionofoviductallumen.ThesepathologicalchangeswererecoveredfollowingthetreatmentofFGSTintragastricallyadministrated.ConclusionMixedbacteriainjectedintooviductinmicemayinducesalpingitis.IntragastricadministrationofFGSTimprovesthepathologicalalterationofoviductcausedbybacteria【Keywords】Chinesemedicine;salpingiticstenosis;sterility;mice输卵管因素导致不孕是妇科常见病和疑难病之一,据统计,不孕症患者中30%~50%由输卵管因素引起[1]。
输卵管具有运送精子,摄取卵子,提供受精部位,以及把受精卵运送到子宫腔的作用,因而在生殖中起着关键的作用,任何破坏输卵管结构和功能的因素都可导致不孕症的发生。
而输卵管性不孕症的病因包括慢性输卵管炎、子宫内膜异位症、输卵管结核,其中慢性输卵管炎约占一半以上[2]。
输卵管炎症主要由盆腔感染和性传播疾病引起,盆腔感染被认为是引起输卵管病变最常见的原因。
感染可破坏输卵管内膜结构、形成瘢痕,造成阻塞或使管壁僵硬以及输卵管周围粘连,输卵管扭曲,改变了其与卵巢的关系,从而影响摄卵[2]。
“附归参汤”为新研发治疗输卵管炎导致不孕症的中药。
本研究拟采用混合菌接种小鼠制作了输卵管炎性狭窄模型,观察中药“附归参汤”对模型动物输卵管组织结构的影响,目的是为探明该药作用的机理。
1资料与方法1.1设计完全随机分组设计,对照实验。
1.2单位甘肃省康复中心医院。
1.3材料实验于2006年7月12日在甘肃省康复中心医院完成。
选用雌性昆明小鼠,鼠龄60天,体重20~25g,由兰州大学动物实验中心提供。
小鼠饲养环境温度(20±4)℃,湿度(60±20)%,室内整洁安静,通风良好,自由进食和普通饮水。
1.4设计、实施、评估者为全部作者,均受过专业培训,未采用盲法评估。
1.5方法1.5.1药物及仪器中药“附归参汤”主要由香附、当归、郁金、丹参组成。
煎制的水剂灌胃给药。
MOTICDIGITALMICROSCOPE中国B5PROFESSIONALSERIES,美国AO820ROTRAYMICROTOME切片机。
1.5.2实验细菌菌落溶血性链球菌(ATCC21059)、大肠埃希菌(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌(菌号ATCC29213)按照2∶1∶1比例用无菌生理盐水稀释,配成浓度约为3×109/L的混合菌。
菌种由兰州大学基础医学院微生物教研室提供、培养。
1.5.3造模方法乙醚吸入麻醉小鼠,下腹正中纵切口,切口长大约1cm,打开腹腔后,沿小鼠双角子宫找到双侧输卵管,夹闭双侧输卵管子宫端,在子宫角近输卵管处进针,向输卵管-子宫方向注入混合菌稀释液0.5ml。
手术尽量避免损伤周边组织,然后分层关腹,恢复饮水,正常清洁喂食。
1.5.4分组及给药50只小鼠随机分为五组:
(1)对照组(n=10),同龄同种在常规条件下饲养的正常鼠;
(2)模型组(n=10),输卵管炎造模,与对照组相同饮食;(3)模型+生理盐水处理组(n=10),造模后第16天开始,生理盐水50ml/(kg·d)的剂量灌胃,每天1次,至处死;(4)模型+附归参汤给药组(n=20),造模后第16开始,附归参汤4.5g/(kg·d)的剂量灌胃,每天1次,至处死。
模型+附归参汤给药组分别于第31天、45天处死进行组织学观察。
1.5.5主要观察目标肉眼观察小鼠输卵管形状、色泽改变情况,与周围组织有无粘连,是否增粗或变细,弹性变化,以及有无积水、化脓等情况。
肉眼观察完毕,精确切取输卵管,置于4%中性甲醛溶液中固定,常规切片,HE染色,光镜下观察病理改变。
2结果2.1植入混合菌所致输卵管炎的动物模型以及生理盐水灌胃后输卵管病理学的改变2.1.1肉眼观察与对照组相比,肉眼观察造模组及生理盐水处理组输卵管明显较正常组变粗糙,与周围组织有粘连,色泽鲜红,脆而易于破损,部分输卵管及其周围组织可见积水(图1)。
2.1.2光镜下病理改变对照组:
正常小鼠输卵管管壁由黏膜、肌层、外膜三层构成。
黏膜由单层纤毛柱状上皮和固有层组成,上皮内主要有纤毛细胞和分泌细胞,纤毛细胞表面有较多纤毛,细胞间紧密连接,黏膜层可以形成皱褶,尤其在壶腹部。
管壁其余组织结构清晰,间质细胞排列紧密。
模型组及生理盐水处理组:
小鼠输卵管管壁结构不完整,黏膜层水肿,黏膜柱状上皮细胞变成矮柱状,顶部纤毛显著变短或消失;固有层细胞增生明显,细胞间质内可见嗜中性粒细胞和分叶核细胞及淋巴细胞浸润,毛细血管扩张充血;管壁可见纤维细胞及纤维母细胞增生,致管壁增厚硬化,黏膜皱襞变平、减少,严重者管腔狭窄甚至闭塞(图2)。
2.2附归参汤对小鼠炎性输卵管的作用组织学观察用药15天和30天后,分别处死上述4组小鼠,取输卵管进行观察,主要观察项目及结果如下。
2.2.1肉眼观察附归参汤给药30天后输卵管较模型组细,色泽变淡,与周围组织的粘连减轻,分离容易,弹性较好(图1)。
2.2.2光镜下输卵管组织学改变附归参汤用药15天后小鼠输卵管管腔通畅,纤毛上皮细胞排列整齐,顶端可以看到纤毛,黏膜皱褶增多,炎性细胞减少,血管扩张充血减轻;附归参汤药30天后小鼠输卵管管壁结构清晰,管腔通畅,纤毛上皮细胞排列整齐,纤毛细胞顶端有较多纤毛,黏膜皱褶明显变多;固有层细胞增生减轻,可见个别嗜中性粒细胞,毛细血管扩张充血明显减轻(图2)。
3讨论目前,对输卵管炎性不孕的临床报道多见,但无论是西医还是中医治疗,疗效均不很满意。
近年来,随着对人类盆腔炎及输卵管炎性疾病的研究不断深入,利用动物模型来探讨其发病机理,判定药效已为国内外很多学者所重视。
国外有用大鼠[3]、兔[4]及猴[5]等动物,接种衣原体等病原微生物致炎症建立输卵管炎动物模型的报道。
国内制作慢性输卵管炎症动物模型最初多借鉴输卵管绝育术[6],用苯酚胶浆剂[7]注入单侧大鼠子宫,另侧子宫做自身正常对照,制作子宫内膜粘连模型。
也有采用30%的苯酚糊剂0.05~0.1ml[8]注入家兔双侧输卵管,制作家兔化学损伤性输卵管炎症模型。
虽然病理结果有慢性炎症等一致表现,但一些学者考虑在致病原因方面,化学性炎症与病原体致炎毕竟有所差异,后者所致炎症与人类盆腔炎的患病途径与过程可能更为接近,于是细菌性盆腔炎动物模型应运而生。
而在临床上,输卵管炎性狭窄以细菌感染所致为主,主要为非特异性慢性输卵管炎。
慢性输卵管炎大多是由急性输卵管炎演变而来,其致病菌多为链球菌、化脓性葡萄球菌和大肠埃希菌等[9]。
近来,用β—溶血性链球菌[10]对雌兔双侧输卵管进行接种制作了兔输卵管炎变阻塞模型,以混合菌感染法[11]制作了大鼠细菌性盆腔炎模型。
笔者认为,应该根据不同的研究目的而使用不同的致炎剂,同时应该考虑经济、有利实验进行的条件,选取不同的动物品种,并摸索和确定合适的浓度与剂量。
本实验经长期摸索,最终选取昆明小鼠作为实验动物,最主要是由于造模后成活率高,且易于灌胃给药。
在造模后灌胃给药期间,除因灌胃操作不当而死亡2只外,其余均存活。
另外,本实验造模方法是将混合菌直接注入小鼠子宫内,因此患病率高;且形成的病理变化均匀一致;本模型的致病菌与人类慢性输卵管炎性狭窄致病菌相似,而且病理变化与临床病理非常相似,因此证明使用混合菌感染法可以成功制造小鼠输卵管炎性模型,从而为深入探讨慢性输卵管炎的发病机理和相应药物的治疗作用提供了良好的模型。
“附归参汤”对小鼠输卵管炎性狭窄的影响。
肉眼观察输卵管形态以及与周围组织粘连情况,给药组明显轻于生理盐水处理组,说明附归参汤具有消除积水、松解粘连的作用。
镜下观察输卵管各层炎症改变程度,给药时间较长组明显轻于给药时间较短组,且给药组明显轻于生理盐水处理组,其中输卵管上皮细胞纤毛及形成的皱襞的改变特别明显,说明附归参汤能够对抗上皮变性,还具有减少炎性细胞浸润的作用。
本实验结果提示,附归参汤具有对抗输卵管炎症的作用,本作用可能是通过改善组织细胞代谢,促进其再生、修复、减少炎性浸润等途径来实现。
【参考文献】1吴玉英,冯攒中.输卵管检查和疏通术的进展.生殖与避孕,1995,15(4):
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(1):
20-21.
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