CD83+肿瘤浸润性树突状细胞在胃癌组织的表达及临床意义.docx
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CD83+肿瘤浸润性树突状细胞在胃癌组织的表达及临床意义
CD83+肿瘤浸润性树突状细胞在胃癌组织的表达及临床意义
提 要:
目的 肿瘤组织浸润树突状细胞(tumorinfiltratingdendriticcells,TIDCs)数量和功能对患者预后有显著床意义,但CD83+TIDCs在胃癌组织中的表达情况尚不清楚,需要进行研究。
方法 采用免疫组化、原位杂交及流式细胞术检测45例胃癌TIDCs的CD83蛋白、CD83mRNA以及S-100表达,并分析其临床意义。
结果 免疫组化显示胃癌组织(42/45)中有S100+散在表达;CD83主要表达于胃癌组织癌旁及正常胃黏膜上。
原位杂交显示CD83mRNA在少数标本中(7/45)表达。
流式细胞术检测到低水平CD83表达(4%,45/45)。
S-100和CD83mRNA表达数量与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度、病理分期及淋巴结转移情况无显著相关性。
CD83蛋白免疫组化表达与胃癌TNM分期显著负相关(r=-0.924,P<0.01);CD83流式细胞检查的表达率与胃癌TNM分期及淋巴结转移呈显著负相关(r=-0.879,P<0.01;r=-0.782,P<0.05)。
结论 胃癌TIDCsCD83表达与胃癌TNM分期及淋巴结转移有关,可作为临床研究指标使用。
关键词:
肿瘤浸润树突状细胞;胃癌;CD83;S-100
中图法分类号:
R392.12;R730.23;R735.2 文献标识码:
A
ExpressionsandclinicalsignificanceofCD83+dendriticcellsingastriccancertissueLEIXiao,YUPei-wu,RAOYun,TANGBo,SHIYan,WUMiao,ZHOULi-xin(DepartmentofGeneralSurgery,Southwest
Hospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)
Abstract:
Objective TodetecttheexpressionofS-100andCD83ingastrictumortissuesandevaluatetheirclinicalsignificanceasTIDCsmarkersingastriccancerpatients,sincetheycanreflectthefunctionoftumorinfiltratingdendriticcells(TIDCs).Methods Immunohistochemistry(IHC),insituhybridization(ISH)andflowcytometrywereappliedtodetecttheexpressionofS-100,CD83mRNAandproteinonDCsin45gastricadenocarcinomatissues.TherelationshipsofS-100andCD83expressionwithclinicalpathologicalfeatureswasanalyzed.Results IHCshowedthatS-100xpressionwasunevenlydistributedwithin42casesofcancertissues,butCD83onlyexpressedinpara-canceroustissuesandnormaltissues.ISHshowedthatCD83mRNAwaslimitedlyexpressedin7samples.S-100expressionhadnosignificantcorrelationwithclinicalpathologicalfeatureswhileCD83correlatedwithTNMstagesreversely.Detectedbyflowcytometry,CD83waslowlevelexpressedinall45gastriccancertissuesandnegativecorrelationswerefoundwithlymphoidmetastasisandTNMstagesofgastriccancer(r=-0.879,P<0.01;r=-0.782,P<0.05).Conclusion TIDCsCD83expressioncorrelatedwithlymphoidmetastasisandTNMstagesofgastriccancer,andcouldbeusedasamarkerinfurtherresearch.
Keywords:
tumorinfiltratingdendriticcells;stomachneoplasm;CD83;S-100
树突状细胞(dendriticcells,DCs)是功能强大的抗原递呈细胞,对激发抗肿瘤免疫有重要意义。
检测其在肿瘤组织内的表达数量,对分析患者免疫状况有提示意义。
既往研究中常使用S-100免疫组织化学染色方法进行检测,结果提示肿瘤组织内浸润性树突状细胞(tumorinfiltratingdendriticcells,TIDCs)与患者预后有关。
目前认为,DCs表面分子众多,包括S-100蛋白等在肿瘤局部DCs中有表达。
CD83是成熟DCs的一种相对特异性表面分子,对DCs功能有提示意义。
但目前对CD83作为TIDCs检测指标的报道较少。
为了解其在胃癌中的表达,本研究分别检测S-100蛋白和CD83在胃癌组织中的表达,分析其临床意义,以期为TIDCs在胃癌中的检测提供一定的实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
胃癌标本来源于2003年4月至2005年3月本院住院手术的45例患者,术前均未接受化疗和放疗。
其中男性37例,女
性8例,平均年龄(54±10.2)岁。
患者临床病理情况:
胃底部21例,胃体部15例,胃窦部9例;肿瘤分化程度上,高分化4
例,中分化19例,低分化(包括低分化腺癌和黏液腺癌)22例;肿瘤浸润深度上,浸润黏膜及黏膜下层3例,肌层16例,浆膜面26例;肿瘤淋巴转移阳性者39例,阴性6例;TNM分期上,Ⅰ期2例,Ⅱ期7例。
Ⅲ期15例,Ⅳ期21例。
术中切下胃肿瘤
后立即取材,避开坏死组织,每例两份,分别用于常规石蜡包埋及酶消化处理。
1.2 免疫组化及原位杂交
标本固定液及梯度乙醇均用DEPC(Sigma)处理水配置,常规制备石蜡标本,4μm连续切片,HE染色确定病理类型。
胃癌组织S00及CD83表达以SABC免疫组化方法检测,采用兔抗人S-100,兔抗人CD83,Histostain-Plus试剂盒SP9001,北京中山)。
切片以柠檬酸缓冲液92~96℃修复抗原,PBS代替一抗作为阴性对照,DAB显色,苏木精复染。
胃癌组织CD83mR-NA表达以CD83原位杂交检测试剂盒(武汉博士德)检测,DAB显色。
切片梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜观察拍照。
阴性对照无显色;阳性染色为细胞呈现高于背景的棕黄色,着色位于细胞膜和/或细胞质。
高倍镜下随机计数10个视野中阳性细胞数量,取平均值用于统计分析。
1.3 流式细胞检测
分离肿瘤组织内单个核细胞并检测其中CD83表达。
切取肿瘤组织10g,洗必泰冲洗3次,浸泡于含1000U/ml青霉素、1000μg/ml链霉素、5μg/ml甲硝唑的DMEM培养基(Gibco)中,30min后PBS冲洗。
剪碎后加入含0.1%Ⅵ型胶原酶(Sig-ma)的DMEM10ml中,37℃恒温水浴振荡过夜,200目钢网过滤,离心弃上清,沉淀细胞以PBS洗涤重悬,缓慢加于密度为1.077的淋巴细胞分离液(天津生物技术)上,室温下2500r/min离心30min;吸取界面层细胞,10倍体积PBS稀释后1200r/min离心10min洗涤2次。
沉淀细胞PBS重悬并计数。
取2×106细胞,加入流式细胞检测管,离心弃上清,分别加入抗CD83-FITC及IgG1-FITC同型对照抗体(Immnotech),混匀后室温避光孵育15min,1mlPBS稀释上机。
流式细胞仪(BeckmanCoulter,XL型)以荧光微球调校,对照抗体标记细胞调节非特异性表达率<0.5%后检测CD83表达,每样本检测>5000个细胞。
1.4 统计学处理
数据以-x±s表示,采用SPSS10.0统计程序进行t检验及相关性分析。
2 结果
2.1 胃癌组织S-100、CD83及CD83mRNA表达
45例胃癌组织进行免疫组化检测,42例检测到S-100蛋白阳性表达。
各标本间表达强度及阳性细胞分布不均匀,或在肿瘤细胞间(图1A)、或集中于瘤细胞团边缘组织中(图1B)。
3例黏液腺癌组织中未检测到S-100蛋白表达。
S-100蛋白阳性细胞较大,形态多样不规则,大小不等,染色强弱不一,部分细胞可见较长的细胞突起;CD83免疫组化在肿瘤组织内未检测到表达,远离肿瘤的正常黏膜组织内均有CD83阳性细胞表达(图2A),胞体较大,圆形,无明显细胞突起。
原位杂交检测到7例有CD83mRNA表达,位于远离肿瘤的黏膜下组织近肌层中(图2B)。
阳性细胞分布集中,胞体较小,圆形或不规则形,无明显细胞突起。
A:
不均匀分布;B:
集中于瘤细胞团边缘组织中
图1 胃癌组织低分化癌腺S-100蛋白 (S-P×100)
A:
癌旁正常黏膜(ICH×400);B:
胃癌(S-P×200)
图2 胃黏膜CD83+的免疫组化表达
45例胃癌组织经流式细胞仪均检测到CD83表达,表达率为0.7%~9.61%(4.2±2.3)%。
流式细胞检测结果分析显示,胃癌组织内CD83表达率在不同患者年龄、性别、肿瘤部位、病理类型、分化程度间未见差异显著性。
在淋巴结转移阳性的胃癌中,CD83表达为(3.7±1.8)%,淋巴结转移阴性的CD83表达为(7.8±1.5)%,两种情况间差异有显著性(t=-3.17,P<0.05)。
相关分析显示CD83表达与淋巴结转移情况呈显著负相关(r=-0.782,P<0.05)。
在不同胃癌组织TNM分期间,Ⅰ期+Ⅱ期同Ⅲ期和Ⅳ期间CD83表达均存在差异显著性(t=-3.28,P<0.05,t=-3.35,P<0.05);相关分析表明,CD83表达与胃癌TNM分期间存在非常显著负相关性(r=-0.879,P<0.01)。
3 讨论
DCs在激发机体抗肿瘤免疫中有重要作用。
以DCs为基础的肿瘤生物治疗研究显示,DCs疫苗对体外肿瘤细胞[1]、肿瘤动物模型[2]及临床肿瘤患者[3]都显现出较好的抗肿瘤效果,提示DCs在临床抗肿瘤研究中有较好的应用前景,近年来在临床肿瘤研究中深受重视。
研究表明,肿瘤组织内浸润性树突状细胞(tumorinfiltratingdendriticcells,TIDCs)的数量与功能对机体免疫状态有重要提示意义,与肿瘤患者预后有一定关系。
因此,临床采用一定手段检测肿瘤组织中TIDCs的表达情况,对了解机体免疫状况及说明患者预后有一定意义。
检测S-100蛋白表达情况是既往DCs研究中常用的指标之一。
有报道消化道肿瘤组织内S-100蛋白阳性细胞数量与患者临床病理特点及预后存在显著相关性[4-6]。
由于S-100蛋白是含众多成员的小分
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- 关 键 词:
- CD83 肿瘤 浸润 树突 细胞 胃癌 组织 表达 临床意义