和血益智方对VD大鼠学习记忆和海马的影响.docx
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和血益智方对VD大鼠学习记忆和海马的影响
和血益智方对VD大鼠学习记忆和海马的影响
作者:
田先翔梅琼彬王立袁芳袁尚荣吴正治
【摘要】目的观察和血益智方对VD大鼠行为学和形态学的影响。
方法动物随机分为假手术组和模型组。
VD模型制作成功后随机分为和血益智方小剂量组和大剂量组、思尔明组、生理盐水(NS)组。
用穿梭箱和水迷宫检测大鼠行为学并作海马HE常规染色,光镜观察。
结果和血益智方、思尔明均能缩短VD大鼠穿梭箱实验主动逃避时间和遭受电击时间,减少遭受电击次数;能缩短VD大鼠水迷宫实验时定位航行潜伏期、游泳的路径,增加大鼠空间探索实验中穿越原目标的次数。
NS组海马细胞体积变大、核变小、有核仁消失和核固缩;除假手术组正常外,其余各组海马细胞层次有减少,但细胞排列比较密集、细胞形态尚可。
结论和血益智方可改善VD大鼠的学习记忆能力。
【关键词】血管性痴呆;MORRIS水迷宫;学习记忆;海马
〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectsofHexueYizhiFormulaonlearningandmemoryandthemorphologyofthehippocampalneuronsoftheratswithVascularDementia(VD).MethodsTheratsweresubjectedforischemia-reperfusionrepeatedlybyblockingthebilateralcommoncarotidarteriestoestablishVDmodels.TheyweredividedintofourgroupsrandomlyaftertheestablishmentofVDmodel.ThetreatinggroupswereadministratedwithHexueYizhiFormula(1mL/100g)、HexueYizhiFormula(2mL/100g)、Sermion、NaturalSaltSolution(NS)respectively.Animalswiththeshamed-operationweretakenascontrol.ThebehaviorchangeswereobservedthroughtheShuttleboxtestandwatermazetestattheendoftreatment.ResultsInshuttleboxtestStimulusFrequency(SC)、StimulatedTime(ST)andActiveavoidanceResponseTime(ART)oftheratswerereducedrespectivelyinSermion、HexueYizhiFormula(1mL/100g)、HexueYizhiFormula(2mL/100g)groupsthanthoseinNSgroup.IntheMorriswatermazetest,StageofLatencyandPathwayweredeclinedandthetimeswereincreasedmarkedlyacrossingthetarget.Thestructurelevelsofhippocampalneuronsreduced,butcellsweremorenormalandintensiveintreatedgroupsexceptNSgroup.ConclusionOurstudysuggestthatHexueYizhiFormulacanimprovetheabilityoftheleaningandmemoryoftheratswithvaculardementiaandimprovetheclinicalsymptomsofVD.
〔KeyWords〕Vasculardementia;Morriswatermaze;Learningandmemory;Hippocampus
血管性痴呆(vasculardementia,VD)是老年人多发痴呆之一,系继发于脑血管病变后的缓慢性、渐进性智能障碍。
它不仅给患者带来躯体上的痛苦,也带来精神上的巨大负担。
湖北中医学院名老中医田玉美教授用和血益智方治疗VD有较好的临床疗效。
本实验从行为学和形态学方面研究了和血益智方抗大鼠VD的作用,现报道如下。
1材料和方法
1.1动物及分组
经穿梭箱实验筛选的健康正常SD大鼠,体重220~250g,雄性,随机分为假手术组(10只)和模型组。
将造模成功的VD大鼠40只随机分为HXYZ组1(和血益智方小剂量)、HXYZ组2(和血益智方大剂量)、思尔明(Sermion)组、生理盐水(NS)组,每组各10只。
所用大鼠均由湖北省实验动物中心提供〔SPF级,动物合格证号SCXK(鄂)2003-0003〕。
各组大鼠均常规饲养。
1.2试剂及器材
Sermion(普强苏州制药有限公司,批号为0302005)、染发剂(貂油黑发霜,广东顺德市现代保健用品有限公司)。
和血益智方含当归、川芎、白芍、生地、黄芪、旱莲草、女贞子、益智仁等,生药材均购自武汉市武昌区中药材公司刘有余堂药店,经我院詹亚华教授鉴定为正品。
所有药材一次性水煎浓缩为125%水煎液,用无菌玻璃瓶分装、密封,经Co60照射后4℃保存。
给药前在40℃恒温水温箱中加热备用。
Morris水迷宫、穿梭箱实验系统(中国医学科学院北京药物所)、DR-HW-2电热恒温水温箱(北京医疗设备厂)。
切片机(Leica)、显微镜(Olympus)、显微摄像系统。
1.3方法
1.3.1模型制作及给药
VD模型制作及术后处理按参考文献[1]进行,夹闭大鼠双侧的颈总动脉5min、后复灌1h、连续3次、末次灌注后永久性结扎双侧颈总动脉造VD模型。
假手术组仅分离双侧颈总动脉,既不夹闭也不结扎双侧的颈总动脉,其他与模型组相同。
动物造模成功后,适应性饲养3d后开始给药:
HXYZ组1、假手术组大鼠给予125%和血益智方水煎剂,Sermion组给予0.5mg/100g思尔明混悬液、NS组给予生理盐水,以上各组均按1mL/100g灌胃;HXYZ组2用125%和血益智方2mL/100g灌胃;各组动物均用药30d。
1.3.2行为学检测
从用药第26天起,分别进行大鼠穿梭箱实验和Morris水迷宫实验。
1.3.2.1穿梭箱实验大鼠穿梭箱实验每日1次,连续5d,共5次;每次穿梭箱实验于当天晚6时进行,方法参考文献[1]。
1.3.2.2水迷宫实验Morris水迷宫实验每天2次,连续5d,内容包括学习训练、定位航行(游泳时间设定为120s)、空间探索实验(游泳时间设定为30s),具体操作方法同参考文献[1]。
Morris水迷宫实验于每天白天进行。
每次大鼠穿梭箱实验和Morris水迷宫实验各组别顺序相同。
1.3.3病理学观察
行为学检测完毕,立即断头处死大鼠,取左侧海马甲醛固定,然后作HE常规染色,光镜观察。
1.4统计方法
各组穿梭箱实验电击次数、电击时间、主动回避时间和水迷宫实验潜伏期、穿越目标次数、路径等指标用SPSS10.0软件进行AVON(单因素方差分析)检验。
根据方差齐与否,再选择相应的统计分析方法。
2结果
2.1行为学实验结果
2.1.1穿梭箱实验
和血益智方能明显缩短VD大鼠主动逃避时间和遭受电击时间,减少遭受电击次数(表1),与NS组比较有显著性差异(P<0.05)。
但作用不如Sermion组。
2.1.2水迷宫实验
经过和血益智方治疗30d后,药物组比NS组动物定位航行潜伏期缩短,游泳的路径也缩短(表2);在空间探索实验中,30s内大鼠穿越原目标的次数增加(表3)。
上述指标经统计分析均有显著性差异。
它们的游泳轨迹如图1~5。
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