乳腺癌细胞培养.docx
- 文档编号:27876478
- 上传时间:2023-07-05
- 格式:DOCX
- 页数:6
- 大小:20.44KB
乳腺癌细胞培养.docx
《乳腺癌细胞培养.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《乳腺癌细胞培养.docx(6页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
乳腺癌细胞培养
MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞,造就基用DMEM或RPMI1640均可,10-15%的小牛血清就能长得很好.一般两到三天传一代.传代也很通例.吸出造就基,参加%的胰酶1ml,轻轻晃悠造就瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残存的造就基.再参加2ml胰酶(25ml造就瓶)静置消化2-5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出参加造就基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可.我一般都不必缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除残剩血清的感化,感到后果还不错.因为MCF-7消化较快,一般不放到造就箱中消化,以免消化太甚.须要留意的是MCF-7发展较快如不实时传代可消失整瓶细胞浮起,一般都来不及挽救.
MDA-MB-231人乳腺癌细胞
细胞中文名称人乳腺癌细胞
细胞英文名称MDA-MB-231
物种人
细胞形态特点上皮样
细胞发展特点贴壁发展
细胞特种特点MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水平分别树立的.该细胞表达表皮发展因子EGF受体.TGF-α受体和WNT7B癌基因
造就基L15:
LeibovitzMedium
血清10%FBS
细胞传代办法1:
2~1:
4传代;每周2~3次
细胞传代情况C5
细胞冻存前提MDA-MB-231人乳腺癌细胞基本造就基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测阴性
解释
造就基:
DMEM90%,FetalBovineSerum10%
造就前提:
37℃5%CO2
消化前提:
0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA溶液,消化5-10min
传代的比例:
1:
2~1:
4
换液时光:
2~3天换液一次
冻存液比例:
85%造就基,10%FBS,5%(v/v)DMSO
冻存密度:
1-2×106/管,液氮保管
MDA-MB-231人乳腺癌细胞苏醒办法:
掏出冻存管后,投入37 ℃水浴中,震动解冻2 min,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,参加5 ml 37 ℃预热的造就基,并清洗冻存管一次,将离心管离心(1000 rpm,5 min),弃去上清液,再参加2 ml造就基,转入造就瓶中造就.
产品名称:
人正常乳腺细胞 Hs578Bst规格:
70%密度的25cm2造就瓶的细胞一瓶特色:
细胞代数为4-5代阁下包装:
内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;解释书细胞起源:
ATCC.sciencell.ICLC
货期:
1-2周运输方法:
快递运输售后:
收到细胞后7天,如发明细胞有质量问题(如污染,逝世亡,快递运输等原因)时,应出具书面质量问题陈述并实时传真或E-mail致发卖人员,我们将尽快为您解决.
细胞造就罕有问题剖析细胞造就
1.冷冻管应若何解冻?
掏出冷冻管后,须连忙放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全体熔化,并留意水面不成超出冷冻管盖沿,不然易产生污染情况.另冷冻管由液氮桶中掏出解冻时,必须留意安然,预防冷冻管之爆裂.
2.细胞冷冻管解冻造就时,是否应立时去除DMSO?
除少数特别注明对DMSO迟钝之细胞外,绝大部分细胞株(包含悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新颖造就基之造就角瓶中,待隔天再置换新颖造就基以去除DMSO即可,如斯可防止大部分化冻后细胞无法发展或贴附之问题.
3.能否应用与本来造就前提不合之造就基?
不克不及.每一细胞株均有其特定应用且已顺应之细胞造就基,若骤然应用和本来供给之造就前提不合之造就基,细胞大都无法连忙顺应,造成细胞无法存活.
4.能否应用与本来造就前提不合之血清种类?
不克不及.血清是细胞造就上一个极为重要的养分起源,所以血清的种类和品德对于细胞的发展会产生极大的影响.来自不合物种的血清,在一些物资或分子的量或内容物上都有所不合,血清应用错误常会造成细胞无法存活.
5.何谓FBS,FCS,CS,HS?
FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是雷同的意思,两者都是指胎牛血清,FCS乃错误的应用字眼,请不要再应用.CS(calfserum)则是指小牛血清.HS(horseserum)则是指马血清.
6.造就细胞时应应用5%或10%CO2?
或根本没有影响?
一般造就基中大都应用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲体系,而造就基中NaHCO3的含量将决议细胞造就时应应用的CO2浓度.当造就基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞造就时应应用10%CO2;当造就基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应应用5%CO2造就细胞.
7.何时须改换造就基?
视细胞发展密度而定,或遵守细胞株根本数据上之改换时光,按时改换造就基即可.
8.造就基中是否须添加抗生素?
除于特别筛选体系中外,一般正常造就状况下,造就基中不该添加任何抗生素.
9.附着性细胞继代时所应用之trypsin-EDTA浓度?
应若何处理?
一般应用之trypsin-EDTA浓度为0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na.次开瓶后应连忙少量分装于无菌试管中,保管于–20℃,防止反复冷冻解冻造成trypsin之活性下降,并可削减污染之机遇.
10.悬浮性细胞应若何继代处理?
一般仅需中断参加新颖造就基于原造就角瓶中,稀释细胞浓度即可,若造就液太多时,可将造就角瓶口端稍微举高,直到无法容纳为止.分瓶时掏出一部分含细胞之造就液至另一新的造就角瓶,参加新颖造就基稀释至恰当浓度,反复前述步调即可.
11.欲将一般动物细胞离心下来,其离心速度应为若干转速?
欲收受接管动物细胞,其离心速度一般为300xg(约1,000rpm),5-10分钟,过高之转速,将造成细胞逝世亡.
12.细胞之接种密度为何?
按照细胞株根本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可.细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法发展之一重要原因.
13.细胞冷冻造就基之成份为何?
动物细胞冷冻保管时最常应用的冷冻造就基是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%本来细胞发展用之新颖造就基平均混杂之.留意:
因为DMSO稀释时会放出大量热能,故不成将DMSO直接参加细胞液中,必须应用前先行配制完成.
14.DMSO之等级和无菌过滤之方法为何?
冷冻保管应用之DMSO等级,必须为Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650),其本身即为无菌状况,次开瓶后应连忙少量分装于无菌试管中,保管于4°C,防止反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物资,并可削减污染之机遇.若要过滤DMSO,则须应用耐DMSO之Nylon材质滤膜.
15.冷冻保管细胞之办法?
冷冻保管办法一:
冷冻管置于4℃30~60分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存.冷冻保管办法二:
冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽vaporphase长期储存.*-20℃不成超出1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量逝世亡,亦可跳过此步调直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微下降一些.
15.细胞欲冷冻保管时,细胞冷冻管内应有若干细胞浓度?
冷冻管内细胞数量一般为1x106cells/mlvial,融会瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜.
16.应若何防止细胞污染?
细胞污染的种类可分成细菌.酵母菌.霉菌.病毒和霉浆菌.重要的污染原因为无菌操纵技巧不当.操纵室情况不佳.污染之血清和污染之细胞等.严厉之无菌操纵技巧.干净的情况.与品德优越之细胞起源和造就基配制是减低污染之办法.
17.假如细胞产生微生物污染时,应若何处理?
参加响应抗生素.直接灭菌后丢弃之.
18.支原体(mycoplasma)污染的细胞,是否能以肉眼不雅察出异状?
不克不及.除极有经验之专家外,大多半遭遇支原体污染的细胞株,无法以其外不雅分辩之.
19.支原体污染会对细胞造就有何影响?
支原体污染几乎可影响所有细胞之发展参数,代谢及研讨之任一数据.故进行试验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,试验成果之数据方有意义.
20.CO2造就箱之水盘若何保持干净?
按期(至少每两周一次)以无菌蒸馏水或无菌去离子水改换之.
21.为何造就基保管于4℃冰箱中,色彩会偏暗红色,且pH值会越来越偏碱性?
造就基保管于4℃冰箱中,造就基内之CO2会逐渐溢出,造成造就基越来越偏碱性.而造就基中之酸碱指导剂(平日为phenolred)的色彩也会随碱性增长而更偏暗红.造就基偏碱之成果,将造成细胞发展停止或逝世亡.若造就基偏碱时,可以通入无菌过滤之CO2,以调剂pH值.
22.各类细胞造就用的dish,flask是否均雷同?
不合厂牌的dish或flask,其所coating的polymer不合,制作程序亦不合,虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因应用厂牌不合之dish或flask而有明显之发展差别.
23.购置之细胞冷冻管经解冻后,为何会产生细胞数量太少之情况?
购置之细胞逝世亡或细胞存活率不佳可能原因?
研讨人员在细胞造就时消失存活率不佳,罕有原因可归纳为:
造就基应用错误或造就基品德不佳.血清应用错误或血清的品德不佳.解冻进程错误.冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心.悬浮细胞误以为逝世细胞.造就温度应用错误.细胞置于–80℃太久.
24.收到之冷冻管瓶身决裂,瓶盖有裂纹,或瓶盖脱落之原因?
冷冻管瓶盖裂纹,或瓶身决裂,可能是因为操纵者夹取冷冻管时用力不当,造成冷冻管裂损,建议应用止血钳当心夹取.另冷冻管瓶盖松动或松脱,乃因热胀冷缩之物理现象,冷冻管有可能是以而造成细胞污染,故冷冻管于放入和掏出液氮桶时,均应连忙将冷冻管再一次扭紧.
25.若何选用特别细胞系造就基?
造就某一类型细胞没有固定的造就前提.在MEM中造就的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很轻易发展.总之,首选MEM做粘附细胞造就.RPMI-1640做悬浮细胞造就是一个好的开端,各类目标无血清造就首选AIMV(12005)造就基(SFM).
26.L-谷氨酰胺在细胞造就中重要吗?
它在溶液中不稳固吗?
L-谷氨酰胺在细胞造就时是重要的.脱失落氨基后,L-谷氨酰胺可作为造就细胞的能量起源.介入蛋白质的合成和核酸代谢.L-谷氨酰胺在溶液中经由一段时光后会降解,但是确实的降解率一向没有最终定论.L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性.
27.GlutaMAX-I是什么?
造就细胞若何应用GlutaMAX-I?
这个二肽有多稳固?
GlutaMAX-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳固的alpha-氨基用L-丙氨酸来呵护.一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供应用.GlutaMAX-I二肽异常稳固,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,假如在雷同前提下,L-谷氨酰胺几乎完整降解.
28.什么造就基中可以省去加酚红?
酚红在造就基中被用来作为PH值的指导剂:
中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色.研讨标明,酚红可以模仿固醇类激素的感化,(特别是雌激素).为防止固醇类反响,造就细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的造就基.因为酚红干扰检测,一些研讨人员在做流式细胞检测时,不应用加有酚红的造就基.
29.造就基中丙酮酸钠的感化是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞造就中的替代碳源,尽管细胞更偏向于以葡萄糖作为碳源,但是,假如没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠.
30.二价离子克制胰蛋白酶活性吗?
应用胰蛋白酶时参加EDTA的目标是什么?
二价离子的确克制胰蛋白酶活性.EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持克制胰蛋白酶的活性.建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以清除来自造就基中所有的二价离子.
31.书上说,Hank‘s均衡盐溶液(HBS)要在空气中应用,不须要CO2造就箱.原因是什么?
Hank’s均衡盐溶液(HBS)和Earle‘s均衡盐溶液(EBS)有什么本质的功效不同?
HBS和EBS的重要不同在于碳酸氢钠的程度,在Eagles()中比在Hanks()中高.碳酸氢钠需用高程度的CO2均衡,以保持溶液的PH值.Eagles液在空气程度的CO2中,溶液会变碱,Hanks液在CO2造就箱中会变酸.假如愿望在CO2造就箱中保管组织,须要用Eagles液,.假如仅仅是清洗将要在细胞造就基中储存的组织,用Hanks液就可以了.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 乳腺癌 细胞培养
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)