微生物学检验复习题.docx

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微生物学检验复习题

微生物学检验复习题（供2008级医学检验本科）

名词解释：

凝固酶：

金黄色葡萄球菌可产生游离凝固酶和结合凝固酶两种，前者分泌至菌体外，被血浆中的协同因子激活为凝血酶，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，导致血浆凝固。

后者结合于菌体表面不释放，能与纤维蛋白原结合，使纤维蛋白原变为纤维蛋白而引起细菌凝聚，故又称为凝聚因子。

Vi抗原：

伤寒、希氏沙门菌的表面抗原，是覆盖在LPS外的荚膜多糖抗原。

抗吞噬、抗体、补体，与毒力有关。

能阻止O抗原与相应抗体凝集，可进行噬菌体分型。

肥达试验：

用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验，称为肥大反应。

卫星现象：

当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称为卫星现象。

抗O试验：

抗链球菌溶素O抗体检测，是一种体外毒素抗毒素中和试验。

抗溶血素O抗体ASO可中和溶血素O的活性，常用于风湿热的辅助诊断，活动性风湿热患者抗体效价一般超过400个单位。

MRSA:

1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径<10mm或其MIC>4ug/ml的金黄色片葡萄球菌称为MRSA.

对1ug的苯唑西林抑菌圈<10mm或其MIC>0.5ug/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称MRCNS.

统称为耐甲氧西林葡萄球菌MRS.

HLARE:

氨基糖苷类高水平耐药，

D试验：

克林霉素诱导耐药试验，

外-裴反应:

变形杆菌属中的某些特殊菌株如X19、X2、XK、的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，能出现交叉凝集，临床上用这些变形杆菌代替立克次体与患者血清做凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断试验，称为外-裴反应（Weil-Felixreaction）。

迁徙生长现象：

奇异变形杆菌和普通变形杆菌的大多数菌株在普通琼脂平板上可蔓延成菌接种部位为中心的厚薄交替的波纹状薄膜布满整个培养基表面的现象，称为迁徙生长现象

神奈川试验：

副溶血性弧菌在普通血平板（含羊、兔或马等血液）上不溶血或只产生α-溶血；但在在特定条件下,副溶血性弧菌中某些菌株在含高盐（70g/LNacl）的人O型血或兔血及以D-甘露醇为炭源的我妻（Wagatsuma）血琼脂平板上可产生β溶血,该现象作为鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标.

结核菌素试验：

　结核菌素是结核杆菌的菌体成分，有两种，旧结核菌素（OT）和纯蛋白衍生物（PPD），取5U（0.1ug）PPD或OT0.1mL注射于前臂掌侧皮下，注射后48~72小时后观察，以是否出现红肿、硬结，以及其大小判断结果。

卡介苗：

有毒力的牛型结核分支杆菌在含甘油、马铃薯和胆汁的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株。

抗酸杆菌：

分支杆菌属中大多数细菌，菌体内含有分支菌酸，具有抗酸性，一般不易着色，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，这类细菌又称为抗酸杆菌

有菌免疫：

是指细菌进入机体后对细菌再次入侵有免疫力，而当细菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也随之消失。

细菌外膜：

革兰阴性菌的特有成分，有脂质双层、脂蛋白、脂多糖三部分组成，作为保护屏障可阻止或减缓胆汁盐、抗体及其他可能杀死或损害细菌的有毒物质的进入，也可阻止周质酶等一些细胞成分的损失。

脂多糖：

由脂质双层向细胞外表伸出的是脂多糖，包括磷脂A、核心多糖和O-侧链三个组成部分。

R质粒：

又称耐药质粒，具有编码能够破坏或修饰抗生素的酶基因。

毒性噬菌体：

能在宿主菌细胞内复制增殖,产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌，称为毒性噬菌体。

温和噬菌体：

又称溶原性噬菌体，噬菌体基因与宿主菌染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬菌体DNA能随细菌DNA复制，并随细菌的分裂而传代。

接合：

细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（质粒）从供体菌转移给受体菌。

溶原性转换：

是侵入细菌的噬菌体在溶原期以前噬菌体形式在细菌内与细菌的染色体发生重组，导致细菌的基因型发生改变，溶原性细菌可以获得新的性状。

转导：

以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌中，使后者获得新的性状。

Hfr：

高频重组株，F质粒基因经接合传递后,与染色体重组,整合后的细菌能以高效率转移染色体上的基因，这种染色体被整合进F质粒基因的受体菌称Hfr。

毒血症：

致病菌进入机体后，只能在机体局部生长繁殖不进入血循环，但其产生的外毒素入血。

内素毒：

是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后游离出来。

耐热，有毒性作用（发热、白细胞反应、内毒素血症、DIC），抗原性弱，不可脱毒为类毒素。

外毒素：

是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中，释放到菌体外的蛋白质。

不耐热，毒性强，对组织有选择性作用，抗原性强，可脱毒为类毒素。

中度敏感：

常规用药时，达到平均血药浓度，一般相当于或略高于某种细菌的MIC。

对细菌引起的感染仅在应用高剂量该药物时有效，或细菌处于体内抗菌药物浓集的部位或体液（尿、胆汁、肠腔）中时才被抑制。

对毒性较小药物，可适当加大剂量仍可获得临床疗效。

中介：

不是敏感习性的度量，作为“缓冲碱”，以防止因微小技术因素失控导致的结果偏差，临床意义不确定。

MIC：

最低抑菌浓度（μg/ml），指在体外实验中抗菌药物抑制培养基中某种细菌的生长的最低药物浓度，是药物抗菌活性的指标，提示药物的抑菌能力。

汹涌发酵现象：

在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白胨凝固，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白胨冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵“，是产气荚膜梭菌的特征。

无芽胞厌氧菌：

是指一大群咋爱有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的无芽孢的革兰阳性及革兰阴性的球菌与杆菌。

二相性真菌：

有些真菌可因环境条件（如营养、温度。

氧气等）改变，可由一种形态转变为另一种形态，此真菌称为二相性真菌。

假菌丝：

又称无隔菌丝，是指酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝。

病毒：

是由一个核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。

病毒体：

完整的成熟病毒颗粒，由核酸和蛋白质构成，其核心只有一种核酸（DNA或RNA），外被蛋白质衣壳构成核衣壳，有些病毒的核衣壳外还被有包膜。

病毒衣壳:

包围在病毒核酸外的一层蛋白质，由一定数量壳粒聚合而成。

病毒衣壳的排列呈3种对称型（20面立体对称、螺旋对称、复合对称）可作为病毒鉴定和分类的依据。

包膜：

是病毒以出芽方式从细胞内释放时穿过核膜、胞质膜、空泡膜等，在核衣壳外获得了宿主细胞的膜成分。

血凝素：

又称红细胞凝集素，为包膜上的柱状突起糖蛋白，与病毒吸附和穿入宿主细胞有关，能与人、鸡、豚鼠等多种红细胞表面的N-乙酰神经氨酸受体结合引起红细胞凝集。

反转录病毒：

反转录病毒是带有反转录酶（依赖RNA的DNA聚合酶）的RNA病毒，此病毒在反转录酶的作用下以病毒RNA为模板转录出互补DNA链，单链DNA进入细胞核内互补另一条DNA，形成双链DNA并以前病毒的形式整合于宿主DNA中。

问答题：

1、试述微生物的种类及主要特点

1试述微生物的种类及主要特点答：

微生物的种类有：

非细胞型微生物，原核细胞型微生物，真核细胞型微生物。

主要特点非细胞型微生物：

无细胞结构，无产生能量酶，一种核酸，专性胞内寄生原核细胞型微生物：

拟核，无核仁、核膜，只有核糖体，兼性寄生真核细胞型微生物：

细胞核，有核仁、核膜，细胞器完整，腐生为主种类：

非细胞型微生物、原核细胞型微生物、真核细胞型微生物

特点：

1个体小（um/nm）

2结构简单：

单细胞或简单多细胞结构，无分化。

3代谢能力强、繁殖迅速

4容易变异、种类多、分布广泛

2、简述正常菌群及生理功能

正常菌群：

正常人体的体表及与外界相通的腔道中，都存在着不同种类和数量的微生物。

在正常情况下，这些微生物对人类无害，成为正常菌群。

生理作用*拮抗作用：

正常菌群在生物体的特定部位生长后，对其他的菌群有生物拮抗的作用。

产生这种生物屏障的往往是一些厌氧菌。

正常菌群通过紧密与黏膜上皮细胞结出来占领位置，由于在这些部位数量很大，在营养竞争中处于优势，并通过自身代谢来改变环境的pH值或释放抗生素，来抑制外来菌的生长。

*营养作用：

正常菌群的存在影响着生物体的物质代谢与转化。

如蛋白质、碳水化合物、脂肪及维生素的合成，胆汁的代谢、胆固醇的代谢及激素转化都有正常菌群的参与。

*免疫作用：

正常菌群的抗源刺激可以使宿主产生免疫，从而减少了本身的危害。

已有实验表明，某些诱发的自身免疫过程具有抑癌作用。

*抗衰老作用：

3、简述条件致病菌及致病条件

条件致病菌：

在正常情况下不致病，在特殊情况下能引起疾病的细菌。

致病条件：

1.机体免疫功能低下；2.寄居部位改变；3.菌群失调。

4、比较革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁

细胞壁

革兰阳性菌

革兰阴性菌

强度

较坚韧

较疏松

厚度

20-80nm

10-15nm

肽聚糖层数

可多达50层

1-2层

肽聚糖含量

占细胞壁干重50%-80%

占细胞壁干重5%-20%

磷壁酸

+

—

外膜

—

+

脂蛋白

—

+

脂多糖

—

+

5、革兰染色的步骤及影响因素

（1）步骤：

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1）制片：

涂片、干燥、固定。

2）初染：

草酸铵结晶紫染1分钟。

用细流水水冲洗，甩去积水。

3）媒染：

加卢戈碘液覆盖涂面染1分钟。

用细流水水冲洗，甩去积水。

4）脱色：

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，数秒后水洗，然后斜持玻片，再加酒精，直到流下的酒精无色为止（约30秒），用细流水水冲洗，甩去积水。

5）复染：

加稀释石炭酸复红染30秒。

用细流水水冲洗，甩去积水。

标本干后，置油镜下镜检。

（2）影响因素操作因素：

涂图片太厚或太薄，固定时菌体过分受热以及脱色时间长短，均会影响结果染液因素：

所有染液应防止染液蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用；涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果。

细菌因素：

细菌菌龄不同，革兰染色结果也有差异，一般以18~24小时的培养物染色效果最好，菌龄过长影响细菌染色性。

6、抗酸染色步骤、结果

步骤

1）用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液做成25mm×20mm大小的均匀薄涂片，待自然干燥后用酒精灯火焰固定。

2）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

3）脱色3%盐酸酒精脱色至无红色染液脱下为止，用水冲洗。

4）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。

用油镜检查并记录结果。

结果：

油镜观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红色细长或略带弯曲的杆菌，并有分枝生长趋向，此为抗酸染色阳性菌。

其他细菌或者细胞染成蓝色。

--：

仔细观察至少300个视野未发现抗酸菌。

±：

100到300个视野内发现1-2条抗酸菌（全部涂膜镜检3遍）;

+：

100个视野内发现3-9条抗酸菌（全部涂膜镜检1遍）；

++：

10个视野内发现1-9条抗酸菌；

+++：

每个视野内发现1-9个抗酸菌；

++++：

每个视野内发现9条以上抗酸菌。

7、细菌常用生化试验的培养基、底物、指示剂、结果判断

A碳水化合物代谢试验

一.糖（醇.苷）类发酵试验

底物：

糖．醇．苷产物：

酸／酸和气（Ａ／ＡＧ）

指示剂：

溴甲酚紫（黄←紫）培养基：

肉膏汤Ｐh７.４（含相应

糖．醇．苷）结果：

紫→黄（+）紫（-）　

二.　葡萄糖的氧化／发酵试验

底物：

葡萄糖产物：

有机酸

指示剂：

溴色香草酚蓝（黄←绿→蓝）培养基：

ＨＬ葡萄糖培养管　（开放封闭）　　　　　　　　　　　　

结果：

氧化管（开）发酵管（封）

绿→黄绿→黄发酵型（F）

绿→黄绿氧化型（O）

绿/绿→蓝绿不利用/产碱型（-）

三β-半乳糖苷酶试验

底物：

邻硝基酚β-半乳糖苷（ONPG）产物：

邻硝基酚（黄色）培养基：

ONPG培养基

结果：

黄（+）不变（-）

四七叶甘水解试验

底物：

七叶甘产物：

七叶素指示剂：

Fe2+培养基：

七叶甘培养基

结果：

黑色（+）不变（-）

五．甲基红试验（ＭＲ试验）

底物：

葡萄糖

产物：

酸

　指示剂：

甲基红（红　Ｐh＜４.５

　　　　　　　　　　　　↑　

　　　　　　　　　　　　黄　Ｐh＞５.４）

培养基：

葡萄糖蛋白胨水

结果：

无色→红（+）不变（-）

六VP试验

底物：

葡萄糖产物：

乙酰甲基甲醇

指示剂：

10%KoHа-萘酚（VP甲乙液）

培养基：

葡萄糖蛋白胨水结果：

红色（+）不变（-）

B　蛋白质和氨基酸代谢试验　

一．吲哚试验（靛基质试验）　　　

底物：

色氨酸产物：

吲哚指示剂：

对二氨基苯甲醛（靛基质试剂）

培养基：

蛋白胨水结果：

玫瑰色（+）不变（-）

二.　硫化氢试验（H2S）

底物：

含硫氨基酸产物：

硫化氢

指示剂：

醋酸铅／硫酸亚铁（Fe2+）　培养基：

含铁琼脂

结果：

黑色（+）不变（-）

三．　尿素酶试验

底物：

尿素产物：

氨指示剂：

酚红（黄→红）

培养基：

尿素肉汤／尿素琼脂培养基

结果：

黄→红（+）黄（-）

四．　苯丙氨酸脱氨酶试验

底物：

苯丙氨酸产物：

苯丙酮酸指示剂：

10%三氯化铁

培养基：

苯丙氨酸琼脂斜面结果：

绿色化合物（+）

不变（-）

五．氨基酸脱羧酶试验

底物：

氨基酸产物：

胺和二氧化碳

指示剂：

溴甲酚紫（黄→紫）培养基：

Ｍoeller脱羧培养基

（含葡萄糖和氨基酸）

结果：

对照管不变

试验管黄→紫（+）黄（-）

此试验需做对照（不含氨基酸的培养基）

C碳源利用试验

一枸橼酸盐利用试验　　　　

底物：

枸橼酸盐产物：

碳酸盐

指示剂：

溴色香草酚蓝（绿→蓝）培养基：

枸橼酸盐培养基

结果：

绿→蓝（+）绿（-）

D呼吸酶试验

1细胞色素氧化酶试验（OX试验）

OX

原理：

细胞色素C→氧化型细胞色素C+苯二胺→醌类化合物（红色）

指示剂：

1%盐酸四甲基对苯二胺/盐酸二甲基对苯二胺

产物：

醌类化合物（红色）

结果：

10s内红色（+）不变（-）

二过氧化氢酶试验/触媒（H2O2试验）

原理：

触媒

H2O2→H2O+O2↑

指示剂：

3%H2O2底物：

3%H2O2产物：

O2

结果：

大量气泡O2产生（+）无（-）

注意：

做对照

血细胞中有H2O2，可产生假阳性

三硝酸盐还原试验

原理：

酶系

硝酸盐→亚硝酸盐+а-萘胺+对氨基苯磺酸→N-а-萘胺偶氮苯磺酸（红色）

底物：

硝酸盐产物：

亚硝酸盐

指示剂：

对氨基苯磺酸/а-萘胺（甲液/乙液）培养基：

硝酸盐培养基

结果：

红色（+）不变（-）

注意：

不变色，加入锌粉→红色真阴性不变假阴性

E其他生化试验

一凝固酶试验

原理：

方法；结合型血浆凝固酶→玻片法凝集（+）/不凝集（-）

游离型血浆凝固酶→试管法凝固（+）/不凝固（-）

结果：

金黄色葡萄球菌（+）其他（-）

注意：

做对照试验

二卵磷脂酶试验

原理：

酶+Ca2+

卵磷脂→甘油脂（混浊）

底物：

卵磷脂产物：

甘油脂

培养基：

卵黄琼脂平板结果：

混浊（+）不变（-）

三DNA酶试验

原理：

DNA酶

长链DNA→寡核苷酸链

（被酸沉淀）（溶于酸）

底物：

长链DNA产物；寡核苷酸链

培养基：

DNA琼脂平板结果：

菌落周围透明环（+）

无透明环（-）

四胆汁溶菌试验

原理：

胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，而其他细菌则能耐受。

指示剂：

10%去氧胆酸钠

结果：

加胆盐的培养基变透明，而对照管仍混浊（+）

加胆盐的培养基仍混浊，而对照管仍混浊（-）

五CAMP试验

原理：

胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，而其他细菌则能耐受。

指示剂：

10%去氧胆酸钠

结果：

加胆盐的培养基变透明，而对照管仍混浊（+）

加胆盐的培养基仍混浊，而对照管仍混浊（-）

F复合生化试验

一克氏双糖铁琼脂培养基试验（KIA试验）

培养基：

克氏双糖铁琼脂培养基底物：

乳糖和葡萄糖

指示剂：

酚红产物：

酸

结果：

乳糖葡萄糖产气硫化氢

二动力-靛基质-尿素酶试验（MIU试验）

培养基：

培养基为含尿素、蛋白胨成分的半固体培养基

指示剂：

酚红底物：

蛋白胨中的色氨酸、尿素

结果：

动力吲哚尿素

8、何为细菌的质粒，质粒的主要特点及种类

质粒：

质粒为细菌染色体外的遗传物质，环状双股DNA。

质粒携带有遗传信息，控制某些特定的遗传性状，可独立复制，与细菌的遗传变异有关。

特点：

1）自我复制

2）独立控制特定的性状（F质粒、R质粒、Col质粒、Vi质粒）

3）可在细菌间转移、可丢失、一个细菌体内可带有多个质粒

种类：

致育质粒（F质粒）、耐药质粒（R质粒）、细菌素质粒（Col质粒）、毒力质粒

（Vi质粒）、代谢质粒

9、构成细菌侵袭力的物质基础有哪些？

（1）菌体表面结构：

主要包括荚膜及其他表面物质。

如微荚膜、Vi抗原、K抗原等，都具有抗吞噬、抵抗抗体和补体的作用。

（2）菌毛：

通过与宿主细胞表面的相应受体结合而粘附定居在黏膜表面，有助于细菌侵入。

（3）侵袭性酶：

是某些细菌代谢过程中产生的与致病性有关的胞外酶，分泌到菌体周围，协助细菌抗吞噬或有利于细菌在体内扩散。

主要的侵袭性酶有：

　　1）血浆凝固酶：

使血浆发生凝固。

凝固物沉积在菌体表面或病灶周围，保护细菌不被吞噬细胞吞噬和杀灭。

　　2）透明质酸酶：

又称扩散因子，因而有利于细菌及其毒素向周围及深层扩散。

　　3）链激酶：

使细菌易于扩散。

　　4）胶原酶：

促使细菌在组织间扩散。

　　5）脱氧核糖核酸酶：

有利于细菌扩散。

6）其他可溶性物质：

杀白细胞素，溶血素。

（4）芽孢增强细菌的侵袭力

10、高压灭菌的温度、时间、适用范围，如何对高压灭菌效果进行监测

答：

134℃，13~20min，适用于耐高温耐湿的物品，如普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。

监测：

高压蒸汽灭菌效果的监测：

有以下三种方法。

　　第一种是物理监测。

根据安装在灭菌器上的量器（B-D试验，排气、抽真空，反应压力、温度，时间）、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。

此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。

此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行.。

　　第二种是化学指示监测。

化学指示卡或化学指示胶带100%变色来指示灭菌效果。

利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。

　　第三种是生物指示剂监测。

嗜热脂肪芽孢菌菌片，121℃≦19分钟-溴甲酚紫葡糖蛋白胨培养基-7天培养-显紫色无嗜热脂肪芽孢菌生长，灭菌合格。

11、简述医院感染及其病原学特征。

简述医院感染及其病原学特征。

医院感染:

指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染，但不包括入院前已开始或者入院时已处于潜伏期的感染。

医院工作人员在医院内获得的感染也属医院感染。

病原学特征:

流行基本环节包括三个基本要素，感染源，感染途径，感染者

分外源性医院感染，内源性医院感染

传播途径：

接触传播;空气传播;共同媒介传播（水，食物，医源性（血液）诊疗器械和设备，一次性用品）;生物媒介传播。

流行形式：

散发性，爆发性。

易感人群：

机体免疫功能严重受损者；婴幼儿及老年患者；营养不良者；接受各种免疫抑制剂治疗者；接受各种侵入性操作者；长期应用光谱抗菌药物者；住院时间长着；手术时间长者。

以革阴为主，也有革阳和真菌感染。

12、L型菌及特点

概念：

某些药物作用于细菌，可抑制的肽聚糖的合成或破坏细胞壁的结构，在高渗环境下，细菌仍可存活，成为细胞壁缺陷型

L型细菌的生物学特性：

1、细菌L型的形态和染色性：

细菌L型呈高度多形性，大小不一。

着色不匀，无论其原为革兰阳性或阴性菌，形成L型大多染成革兰阴性。

2、细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。

（3-5%Nacl，10-20%蔗糖，10-20%人或马血清），细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。

3、L型细菌的其他特征：

生化反应和抗原结构不典型，无法进行常规的菌种鉴定；人工传代后可回复为野生型；常引起慢性及反复发作的感染，对作用于细胞壁的常规药物不敏感。

13、K-B法药敏试验的影响因素及质量控制

1.药敏纸片的药量和pH值。

2.纸片的规格药敏纸片的厚度要求在1mm左右，这样适合药物的扩散速度和细菌的生长。

药敏纸片的直径为6.00～6.35mm。

如果纸片的厚度过厚或过薄，药敏纸片直径过大或过小将影响药敏试验的结果。

3.含药纸片保存和含药纸片片间差。

4.药敏纸片应用标准菌株定期监测是否失效。

5试验操作过程中的影响因素

6细菌的纯度

7菌液浓度

8菌液在培养基上的分布

9贴药敏纸片时，每取一种药敏纸片必须烧一下镊子口，避免药敏纸片之间相互混淆，以提高药敏的准确性。

10培养基种类，在大多数情况下，采用WHO组织统一要求的M-H培养基进行的药敏试验效果较好

11孵育的温度和时间

14、液体稀释法的原理

答：

原理：

以水解酪蛋白（M-H）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检菌，定量测定抗菌药物对该菌的MIC。

以外观清晰，肉眼看无细菌生长的最低药物浓度（最高抗生素稀释度）作为MIC。

15、联合抑菌试验可能出现的结果、及判断标准

联合抑菌试验可能出现的结果、及判断标准可能出现的结果有：

1，拮抗作用，2，无关作用3累加作用4协同作用

FIC指数=A药联合时的MIC/A药单测MIC+B药联合时的MIC/B药单测MIC.

判断标准：

FIC指数<0.5为协同作用；0.5~1为相加作用;1~2为无关作用；>2为拮抗作用。

16、细菌产生耐药性的生化机制

答：

1、产生一种或多种水解酶，钝化酶和修饰酶；2、抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点和DNA解旋酶的改变；3、细菌膜的通透性下降，包括细菌生物被摸的形成和通道蛋白丢失；4、细菌主动外排系统的过度表达。

17、β-内酰胺酶的种类及目前临床最常用的检测方法，常规需做直接β-内酰胺酶检测的细菌有哪些？

答：

B-内酰胺酶的种类：

按结构（功能）分为丝氨酸（A、C、D）和金属酶（B）；按分子生物学分类（Bush分类）：

1（C）、2a（A）、2b（A）、2bc（A）、2br（A）、2c（A）、2d（D）、2c（A）、2f（A）、3（B）、4.（其它）。

临床检测方法：

1、纸片法（头孢硝噻吩纸片），10分内观察结果纸片由黄变红为阳性，表示有B-内酰胺酶产生。

2、碘淀粉法，10分后蓝色消失为阳性。

常规需进行B-内酰胺酶的检测的细菌有：

肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌葡萄球菌、肠球菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌、产酸克雷伯菌等。

18、何为ESBL，临床意义及CLSI推荐的检测方法，哪些细菌应常规检测ESBL？

●ESBL为超广谱β内酰胺酶

●临床意义：

①临床上以革兰阴性杆菌产生的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）最受重视，一旦ESBLs阳性，不管体外药敏如何，均应视为对青霉素和所有头孢菌素类耐药，应改用其它抗菌药物。

②产ESBLs菌在体外对多种抗生素敏感而在感染者体内却表达临床意义耐