14学年第一学期应用化学专业实验讲义.docx
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14学年第一学期应用化学专业实验讲义
1、完成一篇关于酶的特性(或活性)的综述,要求:
1)不少于2000字;
2)手写或电子稿都可;
3)要求至少有3篇中文文献;
2、已酪氨酸酶的提取及其催化活性研究和影响酶的活性的因素的实验数据为依据,撰写一篇科技论文;
3、将上述的科技论文做成ppt;
10.1开学后第一周内以班级形式上交,手写版或打印版交到117,电子版发到chenlei1972@
应
用
化
学
专
业
实
验
讲
义
苯丙乳液的制备
一、实验目的:
1、掌握用乳液聚合法制备高分子材料的一般原理和合成方法;
2、了解目标乳合物的设计原理。
二、实验原理(概述):
乳液聚合是以水为连续相(分散剂),在表面活性剂(乳化剂)存在下,使聚合反应发生在由乳化剂形成的乳胶粒内部(即表面活性剂形成的胶束作为微反应器),制备高分子材料的一种方法。
目前,因为在世界范围内采用乳液聚合法制备大量的、各种类型的乳液聚合物和聚合物乳液产品,因此乳液聚合被广泛应用于各个技术领域,成为不可缺少的材料或工作物质。
特别是人们环境保护意识的加强,乳液聚合技术已成为制备“环境友好材料”的主要方法。
在工业生产中有多种用途:
(1)用乳液聚合法可大量生产合成橡胶如丁苯橡胶、丁腈橡胶、氯丁橡胶、聚丙烯酸酯橡胶等。
(2)用乳液聚合法生产合成塑料、合成树脂。
如聚氯乙烯树脂、ABS树脂、聚四氯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂等。
(3)用乳液聚合生产各种用途的聚合物乳液,如各种粘合剂(聚醋酸乙烯脂乳液—白胶等)、涂料(如建筑涂料、金属涂料、木制器涂装涂料等)。
乳液聚合技术较本体聚合、溶液聚合、悬浮聚合相比较,有许多重要特点、优点,既可制备高分子量的聚合物,又有高的聚合反应速率。
反应体系易散热,有利于聚合反应的控制。
生产设备和工艺简单,操作方便,灵活性大,代表了环境保护技术的发展方向,很多场合下,聚合物乳液可直接利用。
因此,近年来乳液聚合技术发展很快,特别是在聚合技术上派生、发展了多种新技术、新方法。
乳液聚合体系主要有四大组分:
单体、分散介层(水)、乳化剂、引发剂,其次还有用了pH调节并改善乳液流动性的电解层,pH调节用的中和剂等。
依据反应单体与反应性质,来选用不同的乳化剂。
乳化剂是决定乳液稳定性的最主要因素,对反应速率、乳液粘度、胶粒尺寸等也有很主要的作用。
乳化剂的选择除单体要求的种类外,一般以体系要求的HLB值决定其配比和用量,而且多以非离子型与离子型乳化剂复配,常用的乳化剂如下:
用于乳液聚合的引发剂主要是以过氧化氢为母体的衍生物,如过硫酸铵(NH4)2S2O8、过硫酸钾K2S2O8、有机过氧化氢,对某些体系,还可采用其他热分解引发剂如芳基偶氮氨基化合物等。
经典的乳液聚合物工艺的定性理论(用以描述乳液聚合体系中各种物料所处的状态及它们之间的相互影响、相互作用和相互转化规律)将乳液聚合过程分为四个阶段:
分散阶段:
乳化剂在分散相(水)中形成胶束:
加入部分单体后,在搅拌作用下,部分形成单体珠滴、部分增溶在乳化剂形成的胶束中或溶解在水相中。
乳化剂、单体化水相、单体珠滴和胶束之间建立动态平衡。
阶段Ⅰ(成核阶段):
水溶性引发剂加入到体系中后,在反应温度下引发剂在水相中开始分解出初始自由基,或扩散到胶束中或在水相引发聚合,或扩散到单体珠滴中。
无论那种情况都可引发单体聚合形成乳胶粒。
在阶段Ⅰ,乳化剂有四个去处,即形成胶束、吸附在乳胶粒表面上、吸附在单体珠滴表面上及溶解在水中。
单体也有四个去向,即形成单体珠滴、分布在乳胶粒中、分布在增溶胶束中,或溶解在水中,此时乳化剂和单体在水相、单体珠滴、乳胶粒和胶束之间建立动态平衡,直到胶束耗尽后,标志阶段Ⅰ结束。
阶段Ⅱ(乳胶粒长大阶段):
聚合反应发生在乳胶粒中,逐渐加入的单体形成单体珠滴,单体由单体珠滴通过水相扩散到乳胶粒中,在其中进行聚合反应,使乳胶粒长大,此时,乳化剂和导体在乳胶粒、水相和单体珠滴间建立动态平衡。
单体珠滴消失。
标志阶段Ⅱ结束。
阶段Ⅲ(聚合反应完成阶段):
在该阶段,胶束和单体珠滴都不见了。
绝大多数未反应的单体集中在乳胶粒内部,只有极少数的单体溶解在水相中,单体和乳化剂在水相和乳胶粒之间建立动态平衡。
水相中的引发剂分解出自由基,扩散到乳胶粒中,在乳胶粒中引发聚合,使乳胶粒中的单体逐渐降低。
使单体转化率达到最大至反应结束。
正是乳胶聚合的定性理论决定了聚合反应反应严格的操作步骤。
因此操作步骤往往是聚合物乳液性能好与坏的重要因素之一。
详细的原理与技术参阅乳液聚合的有关专著和文献资料。
三、实验仪器、设备与试剂
仪器与设备:
250ml三口瓶一个、球形冷凝管一支、玻璃温度计(0~100℃)2支、加料漏斗(250ml50ml)各一只、电动搅拌机一台、电炉、水浴锅、温度控制仪、可调变压器一台、药物天平一台。
试剂:
苯乙烯(工业级)、丙烯酸脂(丙烯酸丁脂、丙烯酸乙脂、甲基丙烯酸甲脂等)(工业级)过硫酸铵(NH4)2S2O8(化学纯)、乳化剂:
OP-10(壬基酸聚氧乙烯(10)醚)、SDS(十二烷基硫酸钠)、氨水(化学纯)、碳酸氢钠(化学纯)、去离子水、pH试纸
四、实验内容:
一、实验参考配方(可在教师指导下,自己调节配方)
Ⅰ水相
Ⅱ单体
去离子水:
62mL
苯乙烯(SA)27mL
乳化剂:
OP-10:
2.3g
丙烯酸丁脂(BA):
31mL
SDS:
4g
丙烯酸(AA):
0.7mL
NaHCO3(2.5%):
5.5mL
甲基丙烯酸甲酯(MMA)10mL
Ⅲ、引发剂
ⅣpH调节
过硫酸铵NPS:
0.12g
氨水(1:
1):
适量
去离子水:
8ml
(二)、实验操作:
1、安装好仪器。
检查搅拌棒与瓶口是否密封,用手转动搅拌轴,试验搅拌轴是否合适(不碰瓶壁、不碰温度计、转动是否自如),用胶管连接好冷凝管的上下水,水浴锅中加水至三口瓶半浸入位置。
连接好电炉与可调变压器,电源。
2、按配方中Ⅰ水相部分的配比量顺序加入乳化剂OP-10(用17mL温水溶解)、水(45mL)、SDS、碳酸氢钠,开启搅拌,调节转速至100转/min左右,搅拌5~10min,同时,加热至水浴65℃,同时打开冷凝水至合适流量。
3、按配方中Ⅱ,将单体计量混匀,加至恒压滴液漏斗中,10min内滴加单体量的1/5,再搅拌20min,同时升温至70℃。
4、将新配制的NPS/H2O溶液加恒压滴液漏斗中,10min内滴加2mL的引发剂,反应逐渐开始,体系温度自升至78~80℃,约在40min左右,反应体系开始呈带兰光的白色乳液,同时单体回流量逐渐变小。
5、至单体回流量很小时,在10min内滴加1/5单体,搅拌10min后,在10min内滴加1mL引发剂,再搅拌20min。
循环4次。
6、全部单体滴加完后,滴入剩余的2mL引发剂(10min内完成),升温至85℃左右(不可高于90℃),保温1小时。
7、保温完后,停止加热,自然降温至60~65℃后,滴加(1:
1)稀氨水,适量。
约在半小时内完成,调pH至7~8,再搅拌自然降温至40℃后,出料。
出料时若有凝胶,应用滤布过滤。
五、注意事项
1、试验完毕后,随即拆卸实验装置,将所有玻璃接头、接口拆卸,以防被粘住。
拆卸后用洗衣粉、自来水将仪器洗净。
2、称量单体时应当在通风橱中进行操作,注意不要将单体、试剂溅在皮肤上。
(配料时应戴乳胶手套)若已溅上,立即用洗衣粉、水洗净。
3、在使用粘度计、粒度仪等测试仪器前,应详细阅读该仪器使用说明书,严格按操作规程操作。
4、实验所及产品,瓶口贴上标签(包括名称、批号、生产日期),交指导教师保存。
六、思考题
1、乳液聚合反应为什么单体采用滴加方式?
2、如何在配方设计时,调节乳液的粘度、流动性?
3、在配方设计时,怎样调节聚合物的玻璃化温度?
4、乳胶粒的粒径、粒径分布与哪些因素有关,如何控制?
预习报告:
1、查阅一篇有关苯丙乳液聚合的文献。
2、列表说明自由基四大聚合的优点、缺点、组成体系和实例。
苯丙乳液性能的指标测试
一、实验目的
1、掌握聚合物乳液理化指标性能测试方法;
2、掌握测定性能仪器的使用方法。
二、实验原理
三、实验原料及仪器
四、实验内容
1、用碘量法测定残留单体含量(方法见附注);
2、按国标测乳液固含量。
五、实验记录与数据处理
六、注意事项
预习报告:
查测固含量的国家标准。
附注乳液中游离单体含量的测定
一、原理
在酸性条件下,试样中游离丙烯酸的双键与溴加成反应,过量的溴与碘化钾作用析出单质碘,以淀粉做指示剂,用硫代硫酸钠标准溶液在中性或弱酸性介质条件下滴定析出的碘。
主要反应式如下:
CH2=CH-COOH+Br2CH2Br-CHBr-COOH
2KI+Br22KBr+I2
I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6
二、试剂和溶液
2.10.1M硫代硫酸钠标准溶液
2.1.1配制:
称取26g硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)或16g无水硫代硫酸钠,溶于1000ml煮沸后冷却的水中,并加入约0.1gNaHCO3放置一周后标定,使用。
2.1.2标定:
称取0.15g于120℃烘至恒重的基准重铬酸钾,称准至0.001g。
置于碘量瓶中,溶于25ml水,加20ml10%的碘化钾溶液及20ml硫酸溶液(20%),摇匀,于暗处放置10min。
加50ml水,用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。
近终点时加3ml淀粉指示液(5g/L),继续滴至溶液由蓝色变为亮绿色。
同时作空白试验。
2.1.3计算
C(Na2S2O3)=m/(V2-V1)/0.04903
C(Na2S2O3):
硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度mol/L
m:
重铬酸钾的质量g
V1:
硫代硫酸钠溶液的用量ml
V2:
空白试验硫代硫酸钠溶液的用量ml
0.04903:
与1.00ml硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3)=1.000mol/L]相当的以克表示的重铬酸钾的质量
2.2硫酸溶液(20%):
将204ml浓硫酸注入796ml蒸馏水中。
2.3碘化钾溶液(10%):
称取100g碘化钾溶于1000ml水中。
2.4淀粉指示液(5g/L即0.5%可溶性淀粉溶液):
称取0.5g淀粉,加5ml水使之成糊状,在搅拌下将糊弄状物加到90ml沸腾的水中,煮1-2min,冷却,稀释至100ml。
使用期为两周。
2.5溴标准溶液C(1/6KBrO3)=0.15mol/L即C(1/2Br2)=0.15mol/L
称取4.5g溴酸钾及37.5g溴化钾,溶于1000ml水中,摇匀。
或者将3ml溴素稀释到800ml水中,并加入60g溴化钾,稀释至1000ml,摇匀。
2.6盐酸溶液(1+1):
量取100ml浓盐酸用蒸馏水稀释至200ml。
三、仪器
酸式滴定管,50ml碘量瓶4个250ml
移液管2支10ml电子天平感量为0.0001g
四、测定步骤
4.1试样的测定:
称取约0.2g试样(精确到0.0001g)到250ml碘量瓶中,加入50ml水和10ml溴标准溶液,5ml盐酸(1+1)溶液,摇匀,置暗处5min,取出,加入10ml碘化钾溶液,摇匀,再加入30ml水,立即以硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色,加入约2ml0.5%的淀粉溶液继续滴定至蓝色消失即为终点。
4.2空白试验
于250ml碘量瓶中,加入50ml水和10ml溴标准溶液,5ml盐酸(1+1)溶液,摇匀,置暗处5min,取出,加入10ml碘化钾溶液,摇匀,再加入30ml水,立即以硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色,加入约2ml0.5%的淀粉溶液继续滴定至蓝色消失即为终点。
五、数据处理
X%=c(Na2S2O3)(V2-V1)M平/m
c(Na2S2O3)硫代硫酸钠溶液的浓度mol/L
V2:
滴定空白所消耗的硫代硫酸钠溶液的体积,ml
V1:
滴定样品消耗的硫代硫酸钠溶液的体积,ml
M平:
体系中单体的平均分子量g/mol
X%:
残留单体的百分含量
酪氨酸酶的提取及其催化活性研究
一.实验目的
认识生物体中酶的存在和催化作用,便学生了解生物体系中在酶存在下的合成或分解与普通的有机合成的不同和相同之处,认识一些生物化学过程的特殊性。
掌握生物活性物质的提取和保存方法,学会使用仪器分析手段研究催化反应特别是生物化学体系中催化过程的基本思想和方法。
二.实验原理
在实验室里,复杂的有机物合成与分解往往要求在高温、强酸、强碱、减压等剧烈条件下才能进行。
而在生物体内,虽然条件温和(常温、常压和接近中性的溶液等),许多复杂的化学反应却进行的十分顺利和迅速,而且基本没有副产物,其根本原因就是由于生物催化剂———酶的存在。
酶是具有催化作用的蛋白质。
按照酶的组成,可将其分为两类:
(1)简单蛋白质其活性仅决定于它的蛋白质结构。
如脲酶、淀粉酶等;
(2)结合蛋白质这种酶需要加入非蛋白质组分(称之为辅助因子)后,才能表现出酶的活性。
酶蛋白质与辅助因子结合形成的复合物称为全酶,例如酪氨酸酶就是以Cu+或Cu2+为辅助因子的全酶。
辅助因子虽然本身无催化作用,但参与氧化还原或起运载酰基载体的作用。
若将全酶中的辅助因子除去,则酶的活性就失去了。
酶参与的多巴转换反应
通常把被酶作用的物质称为该酶的底物。
一种酶催化特定的一个或一类底物的反应,具有很高的选择性和灵敏度,因而引起了广大分析工作者的兴趣。
目前,酶已作为一种分析试剂得到应用。
特别是在生化、医学方面。
例如一些生命物质和液体中的特殊有机成分,用其他方法测定有困难,用酶法分析却有其独到之处。
本实验拟通过从土豆中提取酪氨酸酶并测定其活性,使同学们对酶有个初步的了解。
我们都见过,当土豆、苹果、香蕉、蘑菇受损伤时显棕色的现象,这是由于土豆、苹果等含有酪氨酸和酪氨酸酶。
酶存在于物质内部,当内部物质暴露出来后,在空气中的氧参与下,发生了如图9-6-1所示的一系列反应,生成黑色素。
酪氨酸酶可用比色法测定。
由于多巴转变成多巴红速率很快,再转到下一步产物速率慢得多,故可在酶存在下,测定多巴转变为多巴红的速率而测定酶的活性。
(可用吸光度对时间作图,从所得的直线斜率求酶的活性)。
酶的活性计算:
一般定义在优化的条件下(pH、离子强度等),25℃时在lmin内转化lμmol底物所需要的量为酶的活性单位。
通过下式可计算出所用的酶的活性:
=
×106
式中:
为所用溶液的酶的活性,△A为最大吸收处吸光度的变化,t为时间,k为多巴红的摩尔吸收系数,V为加入的酶体积。
进而计算出所用原料中的酶的活性:
式中:
A为原料中酶的活性,VO为原料所得的酶溶液的总体积,
为原料总质量。
三.实验仪器与试剂
1.仪器:
分光光度计,离心机,研钵,水浴,秒表。
2.试剂:
二羟基苯丙胺酸(多巴),磷酸氢二钠,盐酸,sephedex柱,材料:
土豆(或苹果)。
四.实验步骤
1.溶液配制
0.l0mol·L—1磷酸缓冲溶液(pH=7.2):
50mL0.20mol·L—1磷酸氢二钠+8mL0.lmol·L—1盐酸,稀释到200mL;0.l0mol·L—1磷酸缓冲溶液(pH=6.0):
50mL0.20mol磷酸氢二钠+22mL0.1mol·L—1盐酸,稀释到200mL;0.010mol·L—1多巴溶液,称取0.195g多巴,用pH=6.0的磷酸缓冲溶液溶解并稀释到100mL。
2.酶的提取
在研钵中放入l0g切碎了的土豆,加入7.5mLpH=7.2的磷酸缓冲溶液,用力挤压。
用两层纱布滤出提取液,立即离心分离(约3000rpm,5min)。
倾出上层清液保存于冰浴或冰箱中。
提取液为棕色,在放置过程中不断变黑。
有条件的话,可以经sephedex柱进一步纯化。
3.多巴红溶液的吸收光谱(选做)
取0.4mL已稀释过的土豆提取液,加2.6mLpH=6.0的缓冲液。
加2mL多巴溶液,摇匀。
反应约l0min后,使用lcm比色池于扫描分光光度计上进行重复扫描,即可获得多巴红的吸收光谱。
若使用自动扫描分光光度计,可从混合开始以时间间隔为lmin进行连续扫描,可以观察到吸光度随时间增加的现象。
4.酶的活性测量
取2.5mL上述提取液用pH=7.2的缓冲液稀释至l0mL比色管中,摇匀。
取0.lmL稀释过的提取液于l0mL比色管中,加入2.9mLpH=6.0的缓冲溶液,再加入2mL多巴溶液,同时开始计时,用分光光度计在480nm处测定吸光度。
开始6min内每分钟读1个数,以后隔2min读l个数,直至吸光度变化不大为止。
取0.2mL,0.3mL,0.4mL已稀释过的提取液重复上述实验,[注意总体积为5mL,每次换溶液洗比色皿只能倒很少量溶液洗1次。
以吸光度对时间作图,从直线斜率求出酶的活性。
五.实验结果和讨论
1.不同酶加入量的动力学曲线
以吸光度值为纵坐标,时间为横坐标,可得出在加入酶的作用下多巴的转换动力学过程,再由直线部分得出转换速率,即为酶的活性。
依次得出不同提取液的活性,比较不同体积的提取液加入后相同量的多巴转换速率。
2.酶的活性计算
将不同体积提取液的实验结果填入下表,计算出原料中酶的活性。
已稀释的提取液体积/mL
活性/A·min—1
原提取液活性(mL—1)
原料活性/g—1
0.l0
0.20
0.30
0.40
3.影响酶的活性的因素研究
(1)取0.40mL稀释过的提取液在沸水浴中加热5min,冷却后配成测定溶液,观察现象。
(2)取0.40mL稀释过的提取液,加少量固体Na2S2O3配成测定溶液,观察现象。
(3)取0.40mL稀释过的提取液,加少量固体Na2EDTA振动混合,反应一段时间后配成测定溶液,观察现象。
六.实验说明
若使用自动扫描分光光度计,可使用指定时间间隔扫描。
但建议使用722型分光光度计或类似的型号,用秒表控制时间,这样成本较低。
若没有扫描分光光度计,第3步可以忽略。
也可以使用多巴红溶液直接获得其吸收光谱。
可使用苹果或香蕉代替土豆,亦可安排使用不同土豆(如隔年、当年及新产,或已发芽等),研究土豆不同生长状态时的酶活性。
若有时间的话,亦可研究不同pH、离子强度对酶的活性的影响。
七.思考题
1.酶的活性受何种条件影响?
2.提取物在放置过程中为何会变黑?
3.经热处理后酶的活性为何显著降低?
八.参考文献
[l]KenllnerR,MermetJM,OttoMWindmerHM.AnalyticalChemistry.Chapter6.Weiheim:
WileyVCH,1998;北京大学、吉林大学合译.分析化学.北京:
北京大学出版社,2000.第6章
[2]沈同,王镜岩编.生物化学上册.北京:
高等教育出版社1990.第5章
[3]StryerL编,唐有棋等译.生物化学.北京:
北京大学出版社,1990
[4]FrieclmanME,DaronHH.JChemEdu,1977,(54):
256
[5]叶率官.化学试剂,1981,
(2);6
影响酶活性的因素
一、目的:
观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
二、原理:
人唾液中淀粉酶为α-为淀粉酶,在唾液腺细胞内合成。
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下:
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖
淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。
麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
淀粉与糊精无还原性,或还原性很弱,对班氏试剂呈阴性反应。
麦芽糖、葡萄糖是还原糖,与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。
唾液淀粉酶的最适温度为37—40℃,最适pH为6.8。
偏离此最适环境时,酶的活性减弱。
低浓度的Cl—离子能增加淀粉酶的活性,是它的激活剂。
Cu2+等金属离子能降低该酶的活性,是它的抑制剂。
三、器材及试剂:
1.器材:
①试管
⑦酒精灯
②烧杯
⑧恒温水浴锅
③量筒
⑨冰浴
④玻璃棒
⑩试管夹
⑤白磁板
试管架
⑥铁三角架
唾液淀粉酶液:
实验者先用蒸馏水嗽口,然后含一口蒸馏水于口中,轻嗽一、二分钟,吐入小烧杯中,用脱脂棉过滤,除去稀释液中可能含有的食物残渣。
并将该滤液稀释一倍。
2.试剂:
①1%淀粉溶液(含0.3%NaCl);将1g可溶性淀粉与0.3g氯化钠,混悬于5ml的蒸馏水中,搅动后缓慢倒入沸腾的95ml蒸馏水中,煮沸1分钟,冷却后倒入试剂瓶中。
②碘液:
称取2g碘化钾溶于5ml蒸馏水中。
再加1g碘。
待碘完全溶解后,加蒸馏水295ml,混合均匀后贮于棕色瓶内。
③班氏(Benedict)试剂:
将17.3g硫酸铜晶体溶入100ml蒸馏水中,然后加入100ml蒸馏水。
取柠檬酸钠173g及碳酸钠100g,加蒸馏水600ml,加热使之溶解。
冷却后,再加蒸馏水200ml,最后,把硫酸酮溶液缓慢地倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅拌,如有沉淀可过滤除去或自然沉降一段时间取上清液。
此试剂可长期保存。
④0.4%的HCl溶液
⑤0.1%的乳酸溶液
⑥1%Na2CO3溶液
⑦1%NaCl溶液
⑧1%CuSO4溶液
⑨0.1%淀粉溶液
四、操作步骤:
1.淀粉酶活性的检测:
取一支试管,注入1%淀粉溶液5ml与稀释的唾液0.5~2ml。
混匀后插入1支玻棒,将试管连同玻棒置于37℃水浴中。
不时地用玻棒从试管中取出1滴溶液,滴加在白磁板上,随即加1滴碘液,观察溶液呈现的颜色。
此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。
记录淀粉在水解过程中,遇碘后溶液颜色的变化。
向上面试管的剩余溶液中加2ml班氏试剂,放入沸水中加热10分钟左右,观察有何现象?
为什么?
2.pH对酶活性的影响:
取4支试管,分别加入0.4%盐酸(PH≈1)、0.1%乳酸(PH≈5)、蒸馏水(PH≈7)与1%碳酸钠(PH≈9)各2ml,再向以上四支试管中各加2ml1%淀粉溶液及2ml淀粉酶液。
混合摇匀后置于37℃水浴中,保温15分钟。
向四支试管中各加2ml班氏试剂,在沸水浴上加热,根据生成红棕色沉淀的多少,说明淀粉水解的强弱。
综合以上结果,说明PH对酶活性的影响。
3.温度对酶活性的影响:
取3支试管,各加3ml1%淀粉溶液;另取3支试管,各加1ml淀粉酶液。
将此6支试管分为三组,每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支,三组试管分别置入0℃、37℃与70℃的水浴中。
5分钟后,将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中,继续维持原温度条件5min后,立即滴加2滴碘液,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明温度对酶活性的影响。
4.激活剂与抑制剂对酶活性的影响:
取3支试管,按下表加入各种试剂。
混匀后,置于37℃水浴中的保温。
从1号试管中用玻棒取出1滴溶液,置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。
待1号试管内的溶液遇碘不再变色后,立即取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化,并解释之。
管号
1
2
3
1%NaCl(ml)
1
—
—
1%CuSO4(ml)
—
1
—
蒸馏水(ml)
—
—
1
淀粉酶液(ml)
1
1
1
0.1%淀粉液(ml)
3
3
3
五、分析与讨论:
通过本实验,结合理论课的学习,小结出哪些因素影响唾液淀粉酶活性?
是如何影响的?
六、思考题
1、本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的?
2、如何通过
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- 14 学年 第一 学期 应用化学 专业 实验 讲义