食品添加剂的检测.docx

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食品添加剂的检测

第5章食品添加剂的检测

食品添加剂是指为改善食品品质和色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学物质或天然物质。

目前，全世界发现的各类食品添加剂有14000多种，截止1999年我国允许使用的食品添加剂有1587种，其中包括食用香料和其他（不包括复合食品添加剂）。

食品添加剂按其来源不同，国际上通常将其分为三大类：

一是天然提取物，如甜菜红、姜黄素、辣椒红素等；二是用发酵等方法制取的物质，如柠檬酸、红曲米和红曲色素等；三是纯化学合成物，如苯甲酸钠、山梨酸钾、苋菜红和胭脂红等。

如按食品添加剂的功能、用途划分则可分为22大类：

酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨胀剂、胶姆糖基础剂、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品香料和其他类添加剂。

食品添加剂是食品工业重要的基础原料，对食品的生产工艺、产品质量、安全卫生都起到至关重要的作用。

但是违禁、滥用食品添加剂以及超范围、超标准使用添加剂，都会给食品质量、安全卫生以及消费者的健康带来巨大的损害。

随着食品工业与添加剂工业的发展，食品添加剂的种类和数量也就越来越多，它们对人们健康的影响也就越来越大。

加之随着毒理学研究方法的不断改进和发展，原来认为无害的食品添加剂，近年来又发现还可能存在慢性毒性、致癌作用、致畸作用及致突变作用等各种潜在的危害，因而更加不能忽视。

所以，食品加工企业必须严格遵照执行食品添加剂的卫生标准，加强食品添加剂的卫生管理，规范、合理、安全地使用添加剂，保证食品质量，保证人民身体健康。

而食品添加剂的分析与检测，则对食品的安全起到了很好的监督、保证和促进作用。

5.1防腐剂的测定

防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂；目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。

5．1．1苯甲酸及苯甲酸钠的测定

苯甲酸及苯甲酸钠是目前我国使用的主要防腐剂之一。

它属于酸型防腐剂，在酸性条件下防腐效果较好，特别适用于偏酸性食品（pH4.5~5）。

我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760一1996）规定：

苯甲酸及苯甲酸钠在碳酸饮料中的最大使用量为0.2g/kg，低盐酱菜、酱菜、蜜饯、食醋、果酱（不包括罐头）、果汁饮料、塑料装浓缩果蔬汁中最大使用量为2g/kg（以苯甲酸计）。

1．酸碱滴定法

1）原理

于试样中加入饱和氯化钠溶液，在碱性条件下进行萃取，分离出蛋白质、脂肪等，然后酸化，用乙醚提取试样中的苯甲酸，再将乙醚蒸去，溶于中性醚醇混合液中，最后以标准碱液滴定。

2）仪器和试剂

（1）仪器

碱式滴定管、300mL烧杯、250mL容量瓶、500mL分液漏斗、水浴箱、吹风机、分析天平、锥形瓶。

（2）试剂

①纯乙醚：

将乙醚置于蒸馏瓶中，在水浴上蒸馏，收取35°C部分的馏液。

②盐酸（6mol/L）。

③氢氧化钠溶液（100g/L）：

准确称取氢氧化钠100g于小烧杯中，先用少量蒸馏水溶解，再转移至1000mL容量瓶中，定容至刻度。

④氯化钠饱和溶液。

⑤纯氯化钠。

⑥95%中性乙醇：

于95%乙醇中加入数滴酚酞指示剂，用氢氧化钠溶液中和至微红色。

⑦中性醇醚混合液：

将乙醚与乙醇按1∶1体积等量混合，以酚酞为指示剂，用氢氧化钠中和至微红色。

⑧酚酞指示剂（1%乙醇溶液）：

溶解1g酚酞于100mL中性乙醇中。

⑨氢氧化钠标准溶液（0.05mol/L）：

称取纯氢氧化钠约3g，加入少量蒸馏水溶去表面部分，弃去这部分溶液，随即将剩余的氢氧化钠（约2g）用经过煮沸后冷却的蒸馏水溶解并稀释至1000mL，按下法标定其浓度。

氢氧化钠标准溶液的标定：

将分析纯邻苯二甲酸氢钾于120°C烘箱中烘约lh至恒重。

冷却25min，称取0.4g（精确至0.0001g）于锥形瓶中，加入50mL蒸馏水溶解后，加2滴酚酞指示剂，用上述氢氧化钠标溶液滴定至微红色lmin不褪色为止。

按下式计算氢氧化钠溶液的浓度。

式中：

c——氢氧化钠溶液的浓度，mol/L；

m——邻苯二甲酸氢钾的质量，g；

V——滴定时使用的氢氧化钠溶液的体积，mL；

204.2——邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，g/mol。

3）操作步骤

（1）样品的处理。

固体或半固体样品：

称取经粉碎的样品100g置于500mL容量瓶中，加入300mL蒸馏水，加入分析纯氯化钠至不溶解为止（使其饱和），然后用100g/L氢氧化钠溶液使其成碱性（石蕊试纸试验），摇匀，再加饱和氯化钠溶液至刻度，放置2h（要不断振摇），过滤，弃去最初l0mL滤液，收集滤液供测定用。

含酒精的样品：

吸取250mL样品，加入100g/L氢氧化钠溶液使其成碱性，置水浴上蒸发至约100mL时，移入250mL容量瓶中，加入氯化钠30g，振摇使其溶解，再加氯化钠饱和溶液至刻度，摇匀，放置2h（要不断振摇），过滤，取滤液供测定用。

含脂肪较多的样品：

经上述方法制备后，于滤液中加入氢氧化钠溶液使其成碱性，加入20~50mL乙醚提取，振摇3min，静置分层，溶液供测定用。

（2）提取。

吸取以上制备的样品滤液l00mL，移入250mL分液漏斗中，加6mol/L盐酸至酸性（石蕊试纸试验）。

再加3mL盐酸（6mol/L），然后依次用40、30、3OmL纯乙醚，用旋转方法小心提取。

每次摇动不少于5min。

待静置分层后，将提取液移至另一个250mL分液漏斗中（3次提取的乙醚层均放大这一分液漏斗中）。

用蒸馏水洗涤乙醚提取液，每次l0mL，直至最后的洗液不呈酸性（石蕊试纸试验）为止。

将此乙醚提取液置于锥形瓶中，于40~45°C水浴上回收乙醚。

待乙醚只剩下少量时，停止回收，以风扇吹干剩余的乙醚。

（3）滴定。

于提取液中加入30mL中性醇醚混合液，l0mL蒸馏水，酚酞指示剂3滴，以0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴至微红色为止。

4）结果计算

式中：

X1——样品中苯甲酸钠的含量，mg/kg；

X2——样品中苯甲酸的含量，mg/kg；

V——滴定时所耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL；

C——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；

m——样品的质量，g；

144.1——苯甲酸钠的摩尔质量，g/mol；

122.1——苯甲酸的摩尔质量，g/mo1。

2．高效液相色谱法

本法可同时用于苯甲酸及山梨酸的测定。

1）原理

样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2）仪器和试剂

（1）仪器高效液相色谱仪（带紫外检测器）。

（2）试剂

方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。

①甲醇：

优级纯，经滤膜（0.5μm）过滤。

②稀氨水溶液（1+1）：

氨水加水等体积混合。

③乙酸铵溶液（0.02mol/L）：

称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜（0.45μm）过滤。

④碳酸氢钠溶液（20g/L）：

称取2g碳酸氢钠（优级纯），加水至100mL，振摇溶解。

⑤苯甲酸标准储备溶液：

准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入l00mL容量瓶中，加水定容至100mL，摇匀。

此溶液每毫升含苯甲酸lmg。

⑥山梨酸标准储备溶液：

准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，摇匀。

此溶液每毫升含山梨酸为lmg。

⑦苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：

吸取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。

此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。

经滤膜（0.45μm）过滤。

3）操作步骤

（1）样品处理

汽水：

称取5.00~10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调pH约7。

加水定容至10~20mL，经滤膜（0.45μm）过滤。

果汁类：

称取5.00~10.0g样品，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45μm）过滤。

配制酒类：

称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜（0.45μm）过滤。

（2）高效液相色谱分析参考条件

色谱柱：

YWG-C184.6mm×l5Omm5μm，或其他型号C18柱。

流动相：

甲醇+乙酸铵溶液（0.02mol/L）（5+95）。

流速：

1.0mL/min。

进样量：

l0μL。

检测器：

紫外检测器，波长23nm，灵敏度0.2AUFS。

根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

4）结果计算

式中：

X一一样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；

m1一一进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg；

V2一一进样体积，mL；

V1一一样品稀释液总体积，mL；

m一一样品质量，g。

5．1．2山梨酸及山梨酸钾的测定

山梨酸是一种直链不饱和脂肪酸，可参与人体内的正常代谢，并被同化而产生CO2，和水，所以几乎对人体没有毒性。

山梨酸与山梨酸钾是目前国际上公认的安全防腐剂；已被很多国家和地区广泛使用。

我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760一1996）规定：

山梨酸及山梨酸钾用于肉、鱼、禽类制品时的最大使用限量为0.075g/kg；水果、蔬菜及碳酸饮料为0.2g/kg；胶原蛋白肠衣、低盐酱菜类、蜜饯、果汁饮料、果冻等为0.5g/kg；果酒为0.6g/kg；塑料桶装浓缩果蔬汁、软糖、鱼干制品、即食豆制品、糕点、面包、乳酸菌饮料等为1.0g/kg。

当山梨酸及山梨酸钾同时使用时，以山梨酸计，不得超过最大使用量。

1．硫代巴比妥酸比色法

1）原理

利用自样品中提取出来的山梨酸及其盐类，在硫酸及重铬酸钾的氧化作用下产生丙二醛，丙二醛与硫代巴比妥酸作用产生红色化合物，其红色深浅与丙二醛浓度成正比，并于波长530nm处有最大吸收，符合比尔定律，故可用比色法测定，反应为

2）仪器和试剂

（1）仪器

721型分光光度计、组织捣碎机、l0mL比色管。

（2）试剂

①硫代巴比妥酸溶液：

准确称取0.5g硫代巴比妥酸于100mL容量瓶中，加20mL蒸馏水，然后再加入l0mL氢氧化钠溶液（lmol/L），充分摇匀。

使之完全溶解后再加入l1mL盐酸（lmol/L），用水稀释至刻度。

此溶液要在使用时新配制，最好在配制后不超过6h内使用。

②重铬酸钾-硫酸混合液：

以0.1mol/L重铬酸钾和0.15mol/L硫酸以1∶1的比例混合均匀配制备用。

③山梨酸钾标准溶液：

准确称取250mg山梨酸钾于250mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，使之成为lmg/mL的山梨酸钾标准溶液。

④山梨酸钾标准使用溶液：

准确移取山梨酸钾标准溶液25mL于250mL容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀，使之成为0.lmg/mL的山梨酸钾标准使用溶液。

3）操作步骤

（1）样品的处理：

称取100g样品，加蒸馏水200mL，于组织捣碎机中捣成匀浆。

称取此匀浆100g，加蒸馏水200mL继续捣碎lmin，称取l0g于250mL容量瓶中定容摇匀，过滤备用。

（2）山梨酸钾标准曲线的绘制：

分别吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL山梨酸钾标准使用溶液于200mL容量瓶中，以蒸馏水定容（分别相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的山梨酸钾）。

再分别吸取2.0mL于相应的l0mL比色管中，加2.0mL重铬酸钾-硫酸溶液，于l00°C水浴中加热7min，立即加入2.0mL硫代巴比妥酸溶液，继续加热l0min，立即取出迅速用冷水冷却，在分光光度计上以530nm测定吸光度，并绘制标准曲线。

（3）样品的测定：

吸取样品处理液2mL于l0mL比色管中，按标准曲线绘制的操作程序，自"加2.0mL重铬酸钾-硫酸溶液"开始依次操作，在分光光计530nm处测定吸光度，从标准曲线中查出相应浓度。

4）结果计算

式中：

X1——样品中山梨酸钾的含量，g/kg；

X2——样品中山梨酸的含量，g/kg；

c——试样液中含山梨酸钾的浓度，mg/mL；

m——称取匀浆相当于试样的质量，g；

2——用于比色时试样溶液的体积，mL；

250——样品处理液总体积，mL；

1·34——山梨酸钾换算为山梨酸的系数。

2．紫外分光光度法

1）原理

样品经氯仿（三氯甲烷）提取后，再加入碳酸氢钠，使山梨酸形成山梨酸钠而溶于水溶液中。

纯净的山梨酸钠水溶液在254nm处有最大吸收，经紫外分光光度计测定其吸光度后即可测得其含量。

2）仪器和试剂

（1）仪器

紫外分光光度计、组织捣碎机。

（2）试剂

①三氯甲烷：

以三氯甲烷体积50%的碳酸氢钠（0.5mol/L）提取2次，而后以无水硫酸钠干燥，过滤备用。

②0.5mol/L碳酸氢钠：

称取21g碳酸氢钠于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，移至500mL容量瓶中加水定容至刻度。

③0.3m0l/L碳酸氢钠。

④山梨酸标准溶液：

准确称取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氢钠定容至250mL。

⑤山梨酸标准使用液：

准确吸取山梨酸标准溶液25.00mL，用0.3mol/L的碳酸氢钠定容至250mL，即为100μg/mL的标准使用液。

3）操作步骤

（1）样品的处理：

称取50.0g样品，加450mL蒸馏水于组织捣碎机中，粉碎5min，使成匀浆。

称取10.0g此匀浆于50mL容量瓶中，并以水定容。

移取l0mL此溶液于250mL分液漏斗中，用100mL氯仿提取lmin。

静置分层。

将氯仿层分至125mL锥形瓶中，加入5g无水硫酸钠，振荡后静置。

（2）标准曲线的绘制：

分别吸取山梨酸标准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于100mL容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氢钠定容（分别相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的山梨酸）。

于紫外分光光度计中254nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

（3）样品的测定：

移取样品氯仿提取液50mL于125mL分液漏斗中，用25mL碳酸氢钠（0.3mol/L）提取1min。

静置分层后，小心弃去氯仿层。

将碳酸氢钠提取液于紫外分光光度计中254nm处测定吸光度。

从标准曲线上查出相应的山梨酸含量。

4）结果计算

式中：

X一一山梨酸的含量，g/kg；

m1一一试液中山梨酸的含量，mg/mL；

V1一一试样碳酸氢钠提取液总量，mL；

V2——吸取试样氯仿提取液体积，mL；

V3一一试样氯仿提取液总体积，mL；

m一一用于测定的试样水提取液相当于样品的质量，g。

3．气相色谱法

本法可同时用于山梨酸和苯甲酸的测定。

1）原理

样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，然后与标准系列进行比较定量。

2）仪器和试剂

（1）仪器气相色谱仪（具有氢火焰离子化检测器）。

（2）试剂

①乙醚：

不含过量氧化物。

②石油醚：

沸程30~60°C。

③盐酸。

④无水硫酸钠。

⑤盐酸（1:

1）：

取100mL盐酸，加入稀释至200mL。

⑥氯化钠的酸性溶液（40g/L）：

于氯化钠溶液（40g/L）中加少量盐酸（1:

1），使之酸化。

⑦山梨酸和苯甲酸标准储备液：

准确称取山梨酸和苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3:

1）混合溶剂溶解后，稀释至刻度，lmL此溶液相当于200mg山梨酸或苯甲酸。

⑧山梨酸和苯甲酸的标准使用液：

吸取适量的山梨酸和苯甲酸的标准溶液，以石油醚-乙醚（3:

1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、250mg山梨酸或苯甲酸。

3）操作步骤

（1）样品的处理：

称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸（l:

1）酸化，依次用l5mL和l0mL乙醚提取，每次振摇lmin后，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。

用3mL氯化钠的酸性溶液（40g/L）洗涤2次，静置l5min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，加乙醚至刻度，混匀。

准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置于40°C水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3:

1）混合溶剂溶解残渣，备用。

（2）色谱参考条件

①色谱柱：

玻璃柱，内径为3mm，长为2m，内装涂以5%（质量分数）DEGS+l%（质量分数）H3PO4固体液的60~80目ChromosoybWAW。

②载气：

载气为氮气，气流速度为50mL/min（氮气、空气及氢气按各仪器型号不同，选择各自的最佳比例条件）。

③温度：

进样品温度为230°C，检测器温度为230°C，柱温为170°C。

（3）测定

①进样2μL标准系列中各浓度的标准使用液于气相色谱仪中，测得不同浓度的山梨酸和苯甲酸的峰高。

以浓度为横坐标，以峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。

山梨酸和苯甲酸的标准色谱图如图5-1所示，山梨酸的保留时间为173s，苯甲酸的保留时间为368s。

②进样2pL样品溶液，测得峰高，然后与标准曲线比较定量。

4）结果计算

式中：

X一一样品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg；

m1一一测定用样品溶液中山梨酸或苯甲酸的质量，μg；

V1一一加入石油醚-乙醚（3∶1）混合溶剂的体积，mL；

V2一一测定时进样的体积，μL；

m2一一样品的质量，g；

图5-1山梨酸和苯甲酸标准色谱图

5一一测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；

25一一样品乙醚提取液的总体体积，mL。

由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为样品中苯甲酸钠的含量。

5．1．3过氧乙酸的测定

过氧乙酸又叫过醋酸，是过氧化氢、醋酸与微量硫酸的混合水溶液。

过氧乙酸对细菌繁殖体、芽抱、真菌、病毒都具有高度杀灭效果，是一种广谱、高效、速效的杀菌剂。

1）原理

在酸性条件下，过氧乙酸中含有的过氧化氢（H2O2）用高锰酸钾标准滴定溶液滴定，然后用间接碘量法测定过氧乙酸的含量。

反应方程式为

2KMnO4十3H2SO4十5H2O2====2MnSO4十K2SO4十5O2十8H2O

2KI十2H2SO4十CH3COOH====2KHSO4十CH3COOH十H2O十I2

I2十2Na2S2O3====2NaI十Na2S4O6

2）仪器和试剂

（1）仪器

250mL碘量瓶、50mL棕色滴定管、分析天平。

（2）试剂

①硫酸溶液（1十9）：

量取lmL硫酸与9mL水混合。

②碘化钾溶液（100g/L）。

③硫酸锰溶液（100g/L）。

④铂酸铵溶液（30g/L）。

⑤高锰酸钾标准溶液[c（l/5KMnO4）=0.lmol/L]。

⑥硫代硫酸钠标准滴定溶液[c（Na2S2O3）=0.lmol/L]。

⑦淀粉指示液（10g/L）。

3）操作步骤

称取约0.5g试样（或称取相当于含过氧乙酸约0.07g的试样），精确至0.000lg，置于预先盛有50mL水，5mL硫酸溶液和3滴硫酸锰溶液并已冷却至4°C的碘量瓶中，摇匀，用高锰酸钾标准溶液滴定至溶液呈稳定的浅粉色。

随即加入l0mL碘化钾溶液和3滴钼酸铵溶液，轻轻摇匀，于暗处放置5~l0min，用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定，接近终点时（溶液呈淡黄色）加入lmL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并保持30s不变为终点。

记录消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积数。

4）结果计算

式中：

X——过氧乙酸的质量分数，%；

V——消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL；

c——硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度，mol/L；

m——试样的质量，g；

M——与l.00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液（c=1.000mol/L）相当的过氧乙酸的摩尔质量（M=0.03803g/m01）；

取2次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果之差不得大于0.3%。

5．1．4对羟基苯甲酸酯类的测定

对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲丁酯，又名尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯。

三者均为苯甲酸的衍生物，分别是由对羟基苯甲酸与乙醇、丙醇和丁醇，以硫酸为触媒酯化而成的结晶性粉末。

易溶于丙酮和乙醇，难溶于水，不易受pH影响，在pH4一8范围内防腐效果很好。

我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760一1996）规定：

对羟基苯甲酸乙酯、丙酯和丁酯用于果蔬保鲜时的最大使用量（以对羟基苯甲酸计）为0.012g/kg;，食醋0.l0g/kg；碳酸饮料、蛋糕、蛋黄馅0.20g/kg；果汁饮料、果酱（不包括罐头）、酱油等为0.25g/kg；糕点馅为0.5g/kg。

1．高效液相色谱法

1）原理

样品中对羟基苯甲酸酯类，用乙腈提取，经过滤后进高效液相色谱仪进行测定，与标准比较，以保留时间定性，以峰高定量。

2）仪器和试剂

（1）仪器

组织捣碎机、离心机、高效液相色谱仪（带紫外检测器）。

（2）试剂

①乙腈。

全玻蒸馏。

②对羟基苯甲酸酯类的标准溶液：

称取50mg相应的对羟基苯甲酸酯，溶于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀。

分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL上述溶液，置于l00mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。

该系列标准溶液中每毫升分别含5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的对羟基苯甲酸酯。

3）操作步骤

（1）样品提取称取约20g样品，粉碎。

准确称取2g样品于10mL具塞离心管中，加入5.0nL乙腈，塞上塞子。

振摇30s后，于500r/min离心5min，将上清液转移至25.0mL容量瓶中，重复操作3次，用乙腈稀释至刻度。

用0.45μm滤膜过滤，供色谱测定用。

（2）高效液相色谱分析参考条件

①色谱柱：

μBondapakC1830cmX4.6mm。

②流速：

1.4mL/min。

③检测波长：

254nm。

（3）测定方法

分别进样10μL对羟基苯甲酸酯标准系列中各浓度的标准溶液，以浓度为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线。

同时进样10μL样品溶液，与标准曲线比较定性、定量。

对羟基苯甲酸酯、丙酯的保留时间分别约为4.2min和7.6min，其标准色谱图如图5-2所示。

图5-2对羟基苯甲酸酯类标准色谱图

4）结果计算

式中：

X——样品中对羟基苯甲酸酯类的含量，mg/g；

ml一一被测样品液中对羟基苯甲酸酯类的含量，μg/mL；

m一一样品的质量，g；

25一一样品溶液的体积，mL。

2．气相色谱法

1）原理

样品经酸化后，对羟基苯甲酸酯类用乙醚提取浓缩后，用具氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

2）仪器和试剂

（1）仪器

K-D浓缩器、气相色谱仪：

具氢火焰离子化检测器。

（2）试剂

除特别注明外，本标准所用试剂均匀分析纯试剂，水为蒸馏水。

①乙醚，重蒸。

②无水乙醇。

③无水硫酸钠。

④饱和氯化钠溶液。

⑤碳酸氢钠溶液（1g/100mL）。

⑥盐酸（1+1）：

量取50mL盐酸，用水稀释至100mL。

⑦对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的标准溶液：

准确称取对羟基苯甲酸乙酯、丙酯各0.050g，溶于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，该溶液每毫升相当于lmg对羟基苯甲酸乙酯、丙酯。

⑧对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的使用溶液：

吸取适量的