丙二醛MDA总抗氧化能力超氧化物歧化酶SOD的测定.docx
- 文档编号:27610169
- 上传时间:2023-07-03
- 格式:DOCX
- 页数:9
- 大小:39.51KB
丙二醛MDA总抗氧化能力超氧化物歧化酶SOD的测定.docx
《丙二醛MDA总抗氧化能力超氧化物歧化酶SOD的测定.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《丙二醛MDA总抗氧化能力超氧化物歧化酶SOD的测定.docx(9页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
丙二醛MDA总抗氧化能力超氧化物歧化酶SOD的测定
丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)的
测定
丙二醛MDA测定
测试所需仪器设备:
可见光分光光度计,可调到95c左右的恒温水浴箱(或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐,将罐壁及底部穿数十个孔,以便水的进入,用来代替水浴箱)。
离心机。
100T试剂盒组成与配制:
试剂一:
液体20mL*1瓶,室温保存.(天冷时会凝固,每次测试前
适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。
试剂二:
液体12mL*1瓶,用时每瓶加340mL双蒸水混匀,4c冷藏。
试剂三:
粉剂*1支,4c冷藏。
1,按规范操作方法来配制MDA算试剂J:
将1支100T的MDA算粉剂倒入烧杯内加90c〜100c的热蒸储水64mL,充分溶解
(溶解过程中可适当加热)。
冷却后加冰醋酸60mL混匀。
2.再将上述配好的MDA算试齐用50%冰醋酸按2:
1进行稀释,用多少配多少。
例如您需要用微量法测MDAT要试剂三为15mL则可以取上
述按规范操作法配好的试剂三10mL加冰醋酸5mL混匀即可。
配好的试剂避光4c冰箱冷藏(冰醋酸自备)
注:
因蒸储水热胀冷缩,加热过程要蒸发,本应加60mL现多加
4mL冷却后在60mL
50%冰醋酸白配制是50mLM蒸水加50mL冰醋酸混合而成的c
冰醋酸又名乙酸,一般的医药公司、化剂公司均有售,要购
AR级分析纯级的乙酸较好,乙酸含量为99%以上。
用时将粉剂加入到90c〜100c的热双蒸水60mL中,(在溶解过
程中可适当加热),充分溶解后用双蒸水补足至60mL再加冰醋酸60mL混匀,配好的试剂避光冷藏。
冰醋酸自备。
标准品:
10nmoL/mL四乙氧基丙烷5mL*1瓶,4c冷藏。
测试盒冷藏至少可保存一年。
操作步骤:
标准管
标准空白
管
测定管
测定空白管
**
10nmoL/mL标准品
(mL)
a*
无水乙醇(mL)
a*
测试样品(mL)
a*
a*
试剂一(mL)
a*
a*
a*
a*
混匀(摇动几下试管架)
试齐二(mL)
1.5
1.5
1.5
1.5
试齐ij三(mL)
1.5
1.5
1.5
50%冰醋酸
(mL)
1.5
旋涡混匀器混匀,试管口用保鲜薄膜扎紧,用针头刺一小孔,95c水浴(或用锅开盖煮沸40分钟),取出后流水冷却,然后3500〜4000转/分,离心10分钟,取上清***,532nm处,1cm光径,蒸储水调零,测各管吸光度值。
a*表示所取的样品量,标准品量,无水乙醇的量、试剂一的量,四者均相等,例如样品取0.1mL,则标准品、无水乙醇及试剂一也取0.1mL,若样品取0.2mL,则标准品、无水乙醇及试剂一也取0.2mL。
因吸光度与加样量呈正比曲线,因而结果不受影响。
**一般情况下,标准管、标准空白及测定空白管每批只需做1〜2只,若测定管中蛋白量不是太高,则测定空白管可以不测,用标准空白管来代替测定空白管。
***吸取上清比色时了好用移液器吸取上清加入比色皿中,尽量避免倾倒,以免沉淀进入比色皿,影响吸光度。
注1.用此方法,所测各管吸光度值比规范操作方法要高,但不影响最终结果。
注2.5%组织匀浆a*取0.1〜0.2mL进行检测较好。
注3.若发现检测样本吸光主盖低,可以将水浴时间40分钟延长至
80分钟,但您的同一课题中MDA的检测都必须延长至80分钟,以免造成批间差异。
注4.此方法标准管参考吸光度:
当标准品取样量为0.1mL时,则标准管吸光度减去标准空白管吸光度为0.103〜0.112。
当标准品取样量为0.2mL时,则标准管吸光度减去标准空白管吸光度为0.206〜0.224。
计算公式
1.计算公式:
(1)血清中MDA含量计算公式:
血清中MDA含量(nmoL/mL)
白管吸光度
白管吸光度
(2)组织中MDA含量计算公式:
组织中MDA含量(nmoL/mgprot)*
父标准品浓度(10nmoL/mL)+蛋白含量(mgprot/mL)
*nmol/mgprot为纳摩尔/毫克蛋白
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒
100管试剂盒的组成与配制
试剂一:
贮备液:
10mL*1瓶(天冷时或放冰箱会有部分结晶析出,
需热水浴溶解后再用),试剂一应用液的配制:
用时每瓶加蒸储水稀释至100mL,4c保存。
试剂二:
液体10mL*1瓶,4c〜10c保存。
试剂三:
液体10mL*1瓶,4c〜10c保存。
试剂四:
液体350L*2支,4c保存,不可冷冻;4号稀释液10mL*1
瓶,4c保存。
用时二者按1:
14稀释,可以一次稀释,也可以分次稀释。
配好的试剂四4c保存,不可冷冻。
配好后可保存2〜3个月。
注:
所用吸嘴最好为专用且消毒处理过。
试剂五:
粉剂*1支,用时加70c〜80c热双蒸水75mL配好后的试剂避光4c冷藏。
试剂六:
粉剂*1支,用时加蒸储水75mL溶解后备用,配好后的试剂
避光4c冷藏保存。
显色剂的配制:
按照试剂五:
试剂六:
冰乙酸=3:
3:
2的体积比配
成显色剂,4c冷藏。
操作
总SOD(T-SO取力的测定:
试齐1」
测定管
对照管
试剂一(mL)
1.0
1.0
样品(mL)
a*
蒸储水(mL)
a*
试剂二(mL)
0.1
0.1
试剂三(mL)
0.1
0.1
试剂四(mL)
0.1
0.1
用旋涡混匀器充分混匀,
置37c恒温水浴40分钟
显色剂(mL)
2
2
混匀,室温放置10分钟,于波长550nm处,1cm光径比色杯,蒸储
水调零,比色。
计算
(一)血清总SOD活力计算:
1.定义:
每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量
为一个SOD活力单位(U)。
2.血清总SOD活力计算公式:
曲〜>7壬由,I、对照管吸光度-测定管吸光度-UC0/M后巾张克的建媒企:
用
总SOD活力(U/mL)=4…巾I-丁50%M反应体系的稀释倍数
对照管吸光度
M样本测试前的稀释倍数
3.计算举例:
测血清中总SOD的活力,取血清30pL,测定对照管吸光度为
0.465,测定管吸光度为0.298。
将数据代入计算公式:
T-SOD活力(U/mL)=
0.465-0.298广八。
/3.33(反应液总量)
—046500.03(所取样品量)
=79.73U/mL(活力单位/毫升)
(二)组织匀浆中总SOD的活力计算:
1.定义:
每毫克组织蛋白在1mL反应液中SOD抑制率达50%时所
对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。
2.计算公式:
组织匀浆中SOD活力3,0,)=对照管7晨吸*吸光度+5阴
对照官吸光度
V反应液总体积.用加出7H白人且,一I、
黑打.“二丁组织中蛋白含里(mgprot/mL)
取样量(mL)a
3.计算举例:
取1%肝组织匀浆10pL测总SOD的活力,对照管吸光度为0.510,测定管的吸光度为0.242,测得组织蛋白为1.075mg/mL。
则计算结果为:
总SOD活力(U/mgprot)=0.510-0.242;50%父双工1.075
0.5100.01
-323.60U/mgprot
Mgprot为毫克蛋白数
总抗氧化能力的测定
所需仪器设备
721或722分光光度计、水浴箱
测试盒组成与配制:
(50T)
试剂一:
液体60mL*2瓶,4c保存。
试剂二:
粉剂*2支,用时每支加双蒸水至120mL室温保存。
试剂三:
黄色贮备液10mL*1瓶,避光冷藏保存。
贮备液的稀释液
60mL*1瓶。
试剂三应用液的配制:
临用前取贮备液以稀释液稀释,比例为1:
19。
需多少配多少。
试剂四:
溶液24mL*1瓶,室温保存。
试剂五:
溶液24mL*1瓶,室温保存(天冷时会凝固,每次测试前适当加温以加速溶解,直至透明方可使用)。
简便操作表
1.混合试剂的配制:
测试前,将试剂一、二、三每种试剂所用量乘以样本数(n)再乘以2(因每只测定管均需做对照管),然后再加上放宽的4只,即n*2+4,混合试剂的具体配制见下表:
试剂名称
试剂一
试剂二
试剂三
试剂用量(mL)
(n*2+4)*1
(n*2+4)*2
(n*2+4)*0.5
将上面所有试剂按顺序加在一起混匀制成混合试剂。
混合试剂需现用
现配。
2.血清、全血简便操作表:
对照管
测定管
待测样本(mL)
a
混合试剂(mL)
3.5
3.5
旋涡混匀器充分混匀,37c水浴30分钟
试剂四(mL)
0.1
0.1
待测样品(mL)
a*
旋涡混匀器充分混匀,放置10分钟,双蒸水调零,1cm光径,520nm
处,测各管吸光度
3.组织样本简便操作表
对照管
测定管
10%组织匀浆(mL)
a
混合试剂(mL)
3.5
3.5
旋涡混匀器充分混匀,37c水浴30分钟
试剂四(mL)
0.2
0.2
10%组织匀浆(mL)
a*
试剂五(mL)
0.2
0.2
旋涡混匀器充分混匀,放置10分钟,双蒸水调零,1cm光径,520nm
处,测各管吸光度
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 丙二醛 MDA 氧化 能力 超氧化物歧化酶 SOD 测定
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)