微生物检验方法验证方案.docx

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微生物检验方法验证方案

微生物限度检查方法（平皿法）

验证方案

目录

一、验证方案的制定

二、验证方案的起草与审批

三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案

1．验证目的和原理

2．验证方法步骤

3．试验实施

3.1试验前的准备

3.2验证试验操作

3.3试验结果

4．验证结果评价分析

5．附件

微生物限度检查方法（平皿法）验证文件

一、验证方案的制定

验证项目名称

微生物限度检查方法（平皿法）验证

编号

VF-PR-17-A

验证小组组员

成员职务

姓名

主要工作职责

组长

方案设计责任人

副组长

方案实施负责人

组员

操作人

操作人

操作人

操作人

验证方案组织实施进度

步骤

实施日期

二、验证方案的起草与审批

1验证方案的起草

验证项目名称

微生物限度检查方法（平皿法）验证

编号

VF-PR-17-A

起草部门

起草人签名

日期

生产部

年月日

质控部

年月日

2．验证方案的审核与批准

验证方案审核人：

审核日期：

年月日

验证方案批准人：

批准日期：

年月日

三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案

1．验证目的和原理

1.1验证目的

为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理

通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2．验证方法步骤

2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。

3．试验实施

3.1试验前的准备

3.1.1主要仪器设备：

高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱、霉菌培养箱。

3.1.2操作环境：

操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：

尿素维生素E乳膏：

批号批号批号

3.1.4稀释液和试剂：

PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌十四烷酸异丙酯

3.1.5器具无菌培养皿：

（直径90mm）无菌移液管（5ml）

3.1.6验证用微生物名称及其编号

实验菌株的来源：

菌株名称

内控编号

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成

3.1.7培养基

名称

生产商

培养基批号

配制日期

有效期

营养琼脂

培养基

改良马丁琼

脂培养基

3.2验证试验操作

3.2.1试验菌的制备和稀释

将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～28℃下培养24～48小时。

将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在23～28℃下培养5～7天小时。

将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50～100cfu的菌悬液。

3.2.2用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组

A样品试验组准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。

然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：

10的供试液。

用移液管准确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种2个平皿，按照平皿法测定其菌数。

B菌液组在平皿中注入1ml的菌液立即倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。

C供试品对照组取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数。

D稀释剂对照组取相应稀释液1ml加入试验菌，使最终菌浓度为每ml供试液含50～100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数。

3.2.3培养将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～50℃下培养48小时将白色念珠菌、黑曲霉在23～28℃下培养72小时，点计菌落数。

并将结果记录于附件1。

3.3试验结果

3.3.1稀释剂对照组菌的回收率

接入菌种

尿素维生素E乳膏批号

菌落计数（cfu/皿）

回收率

稀释剂对照组

菌液组

大肠埃希菌

平均值

金黄色葡萄球

平均值

枯草芽孢杆菌

平均值

白色念珠菌

平均值

黑曲霉

平均值

表中：

回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%。

3.3.2试验组的菌的回收率

接入菌种

尿素维生素E乳膏批号

菌落计数（cfu/皿）

回收率

试验组

供试品对照组

大肠埃希菌

平均值

金黄色葡萄球

平均值

枯草芽孢杆菌

平均值

白色念珠菌

平均值

黑曲霉

平均值

表中：

回收率=（试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数的值）÷菌液组的平均菌落数×100%。

4．验证结果评价分析

质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结果进行评价（附件2），起草验证报告（附件3），报验证委员会。

（附件4）

验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书（附件5）。

对验证结果的评审应包括：

（1）验证试验是否有遗漏？

（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？

修改原因、依据以及是否经过批准？

（3）验证记录是否完整？

（4）验证试验结果是否符合标准要求？

偏差及对偏差的说明合理？

是否需进一步补充试验？

5．附件

附件1

产品试验组的微生物生长检查记录：

菌种名称

产品试验组计数结果（cfu/皿）

平均值

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

供试品对照组的微生物生长检查记录

菌种名称

供试品对照组计数结果（cfu/皿）

平均值

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

稀释剂照组的微生物生长检查记录

菌种名称

阳性对照计数结果（cfu/皿）

平均值

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

菌液组

菌种名称

阳性对照计数结果（cfu/皿）

平均值

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

测试人/测试日期：

复核人/复核日期：

附件2

验证结果评价表

验证名称

微生物限度检查方法

（平皿法）验证

编号

VF-PR-17-A

验证

结果

评价

及建议

确

认

验证小组：

年月日

附件3

验证报告

年月日至年月日，验证小组根据批准的编号为“VF-PR-17-A”的微生物限度检查方法（平皿法）验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：

1．验证方案在实施过程中未做修改；

2．验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内；

3．验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实；

4．验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。

以上情况，请验证委员会审批！

验证小组

年月日

附件4

试验报告审批表

验证名称

微生物限度检查方法

（平皿法）验证

编号

VF-PR-17-A

验证内容

审阅会签

质

量

部

审核人：

年月日

验证委员会意见：

批准人：

年月日

附件5

上海安都药业有限公司

验证格证书

编号：

VF2005—017

项目名称：

微生物限度检查方法（平皿法）验证

根据我国药品GMP规范要求，依据

我厂《验证管理制度》，经对该项目进行

验证，结果符合要求。

特发此证。

有效期：

自年月日至年月日

签发人：

年月日