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酶工程复习题
酶工程复习题
一、填空题(1‘×20)
1、戊二醛,二氨基丁烷,乙二氨是酶分子修饰中分子内交联最常用的交联剂。
2、固定化对酶反应系统的影响主要有:
酶构象改变,立体屏蔽,微扰效应,分配效应,扩散限制。
3、根据酶催化的反应性质可以将酶分为:
氧化还原酶,转移酶,水解酶,裂解酶,异构酶,合成酶6大类。
4、1961年,国际酶委会规定的酶活力单位为:
在特定的条件下(25oC,PH及底物浓度为最适宜)1min内,催化1umol的底物转化为产物的酶量为一个国际单位,即1IU。
5、1960年,查柯柏(Jacob)和莫洛德(Monod)提出了操纵子学说,认为DNA分子中,与酶生物合成有关的基因有四种,即操纵基因、调节基因、启动基因和结构基因。
6、SDS-PAGE是利用蛋白的分子量不同进行分离,离子交换层析是利用蛋白的静电吸附能力不同进行分离。
7、酶活力的测定方法可用终点法,动力学法,酶偶联测定法和电化学法。
8、决定酶催化活性的因素有两个方面,一是酶的结构 ,二是反应条件。
9、求Km最常用的方法是双倒数作图法。
10、可逆抑制作用可分为非竞争性抑制作用,反竞争性抑制作用,争性抑制作用。
11、酶活力的测定方法可用终止反应法和连续反应法。
12、通常酶的固定化方法有吸附法,载体偶联法,交联法,包埋 法。
13、酶分子的体外改造包括酶的表面修饰和内部修饰。
14、模拟酶的两种类型是全合成酶和半合成酶。
15、抗体酶的制备方法有细胞融合法,抗体结合位点化学修饰法,用生物工程方法产生抗体法,引入辅助因子法和 拷贝法。
16、根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有选择性热交性法,选择性酸碱交性法和选择性表面法。
17、酶的生产方法有提取法,发酵法,化学合成法。
18、日本称为“酵素”的东西,中文称为酶,英文则为Enzyme,是库尼(Kuhne)于1878年首先使用的。
其实它存在于生物体的细胞内与细胞外。
19、酶分子修饰的主要目的是改进酶的性能,即提高酶的活力、减少酶的抗原性,增加稳定性。
20、借助多功能或多功能试剂使微生物与微生物之间发生交联作用,制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。
21、酶的分离纯化方法中,根据目的酶与杂质分子大小差别有胶过滤法,超速离心法和超滤法三种。
22、由于各种分子形成结晶条件的不同,也由于变性的蛋白质和酶不能形成结晶,因此酶结晶既是一种酶是否纯净的标志,也是一种酶和杂蛋白分离纯化的平段。
二、名词解释(3‘×7)
1、酶的定向固定化:
由于酶蛋白多点附着在载体上,从而引起了固定化酶蛋白无序的定向和结构变形的增加。
另外,当酶随意固定化在载体上时一般是发生多位点的结合,这样就会降低酶的固定化量。
如果通过不同的方法,把酶和载体在酶的特定点上连接起来,使酶在载体表面按一定得方向排列,使它的活性位点面朝固体表面的外侧排列,就有利于底物进入到酶的活性位点里去,从而显著提高固定化酶的活性,通过这样提高固定化酶的活性的方法叫酶的定向固定化。
2、模拟酶:
利用有机化学合成的方法合成的比酶结构简单的具有催化作用的非蛋白质分子叫模拟酶。
3、抗体酶:
通过改变抗体中与抗原结合的微环境,并在适当的部位引入相应的催化基团,所产生的具有催化活性的抗体。
可由两种途径获得抗体酶:
①采用过渡态的底物类似物诱导;②在现有的抗体基础上,通过化学修饰或通过蛋白质工程向其配体结合部位导入催化基团。
4、酶的抽提:
是把酶从生物组织或细胞中以溶解状态释放出来的过程,以供进一步从中分离纯化出来所需要的酶。
5、分子印迹:
是把酶从生物组织或细胞中以溶解状态释放出来的过程,以供进一步从中分离纯化出来所需要的酶。
6、离子交换层析:
利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同,经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法。
7、生物工程酶:
是由活细胞产生的具有催化作用的有机物,大部分为蛋白质,也有极少部分为RNA。
8、膜型反应器:
膜生物反应器一种由膜分离单元与生物处理单元相结合的新型水处理技术。
而生物膜反应器是在反应器中添加各种填料以便微生物附着生长使在填料上形成了一层生物构成的类似于膜的结构,这样的反应器才被称为生物膜反应器。
9、酶工程:
简而言之,酶工程就是将酶或者微生物细胞,动植物细胞,细胞器等在一定的生物反应装置中,利用酶所具有的生物催化功能,借助工程手段将相应的原料转化成有用物质并应用于社会生活的一门科学技术。
它包括酶制剂的制备,酶的固定化,酶的修饰与改造及酶反应器等方面内容。
酶工程的应用,主要集中于食品工业,轻工业以及医药工业中。
10、酶活性中心:
一般认为活性中心主要由两个功能部位组成:
第一个是结合部位,酶的底物靠此部位结合到酶分子上;第二个是催化部位,底物的键在此被打断或形成新的键从而发生一定的化学变化。
组成功能部位的是酶分子中在三维结构上比较靠近的少数几个氨基酸残基或是这些残基上的某些基团,它们在一级结构上可能相距甚远,甚至位于不同肽链上,而是通过肽链的盘绕、折叠在空间构象上相互靠近;对于需要辅酶的酶来说,辅酶分子或辅酶分子的某一部分结构也是功能部位的组成部分
11、酶的比活力:
比活力为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数,一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。
酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度,对于同一种酶来说,比活力越大,酶的纯度越高。
利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力,是表示酶的纯度高低的一个重要指标。
12、固定化酶:
水溶性酶经物理或化学方法处理后,成为不溶于水的但仍具有酶活性的一种酶的衍生物。
在催化反应中以固相状态作用于底物。
(2)固定在载体上,并在一定空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。
13、酶分子修饰:
酶分子修饰通过对蛋白酶主链的剪接切割和侧链的化学修饰对酶分子进行改造,改造的目的在于改变酶的一些性质,创造出天然酶不具备的某些优良性状,扩大酶的应用已达到较高的经济效益。
14、鼓泡式反应器:
气体鼓泡通过含有反应物或催化剂的液层以实现气液相反应过程的反应器。
15、凝胶层析:
凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。
它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。
对于高分子物质有很好的分离效果。
凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术,又称之凝胶过滤,分子筛层析或排阻层析。
16、固定化增殖细胞:
固定化细胞是指固定在水不溶性载体上,在一定的空间范围进行生命活动(生长、繁殖和新陈代谢等)的细胞。
它是用于获得细胞的酶和代谢产物的一种方法,起源于20世纪70年代,是在固定化酶的基础上发展起来的新技术。
由于固定化细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢,所以又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。
通过各种方法将细胞和水不溶性载体结合,制备固定化细胞的过程称为细胞固定化。
17、别构酶:
当某些化合物与酶分子中的别构部位可逆地结合后,酶分子的构象发生改变,使酶活性部位对底物的结合与催化作用受到影响,从而调节酶促反应速度及代谢过程,这种效应称为别构效应。
具有别构效应的酶称为别构酶。
别构酶常是代谢途径中催化第一步反应或处于代谢途径分支点上的一类调节酶,大多能被代谢最终产物所抑制,对代谢调控起重要作用。
18、肽酶:
肽酶通常被俗称为蛋白水解酶(肽酶与蛋白酶的区别是:
蛋白酶将蛋白质水解为多肽,而肽酶将蛋白质水解为氨基酸。
)肽酶是一种能够水解肽链的酶。
他们是所有生物存活所必需的一种酶,而且在所有蛋白质的编码中,编码肽酶的基因占了2%。
在对500个人的肽酶的调查中发现,有14%的的肽酶可以作为药物的靶点(Southan,2001)。
肽酶在许多生物过程中扮演重要的角色,包括消化食物蛋白、胞内蛋白循环、凝血级联系统、抗原提呈作用及活化各种蛋白质,包括酶、肽类激素及神经递质等。
19、抗体酶:
通过改变抗体中与抗原结合的微环境,并在适当的部位引入相应的催化基团,所产生的具有催化活性的抗体。
可由两种途径获得抗体酶:
①采用过渡态的底物类似物诱导;②在现有的抗体基础上,通过化学修饰或通过蛋白质工程向其配体结合部位导入催化基团。
20、酶反应器:
酶反应器是根据酶的催化特性而设计的反应设备。
其设计的目标就是生产效率高、成本低、耗能少、污染少,以获得最好的经济效益和社会效益。
21、液体发酵法:
液体发酵法是借助于液体介质来完成面团的发酵,即先将酵母置于液体介质中,在液体中经几个小时的繁殖,制成发酵液,然后用发酵液与其他原辅料搅拌成面团。
22、别构酶:
活性受别构调节物调控的酶。
23、诱导酶:
在正常细胞中没有或只有很少量存在,但在酶诱导的过程中,由于诱导物的作用而被大量合成的酶。
24、离子交换层析:
利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同,经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法。
25、修饰酶:
能催化稀有碱基参入RNA或DNA,或对原有碱基进行修饰的酶。
以防止限制性内切酶的破坏。
26、酶回收率:
酶纯化后的总活力除以纯化前的总活力。
27、酶纯化比:
酶的纯化比是之某纯化步骤后的酶的比活力与该步骤前的比活力之比。
28、酶的变性:
酶的变性是指酶分子结构中的氢键、二硫键及范德华力被破坏,酶的空间结构也受到破坏,原来有序、完整的结构变成了无序,松散的结构,失去了原有的生理功能。
29、酶的失活:
当酶不处于适宜的温度或适宜的pH溶液时,酶的活性会降低,甚至失去活性。
三、问答题(5小题,共49分)
1、举出四例,说明酶在医学上有广阔的用途。
答:
(1)医药用酶:
a.消化用酶:
α、β-淀粉酶、胰酶、胰蛋白酶
b.消炎用酶:
木瓜蛋白酶、菠萝酶c.溶纤维酶:
尿酸酶、链激酶、溶栓酶
d.肿瘤用酶:
L-天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶
(2)诊断用酶:
a.尿酸酶:
用于检测血液和尿液中的尿酸含量
b.甘油激酶:
由于检测血液中甘油三酯的含量
(3)检测用酶:
a.脱羧酶:
由于检测L-赖氨酸和L-谷氨酸b.虫荧光素酶:
用于检测ATP
2、如何检查一种酶的制剂是否达到了纯的制剂?
试用所学过的知识加以论述。
答:
要检测酶的制剂是否达到纯的制剂(即不含杂质及杂质酶),可以有以下几种方法:
(1)层析法:
包括纸层析、凝胶层析、柱层析及亲和层析
(2)电泳法:
包括SDS凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(3)超离心法:
不同的酶分子大小不同,在重力场中具有不同的沉降系数,从而可以通过超离心方法分离目的酶与杂质酶。
(4)免疫反应法:
由于酶分子可作为一种抗原物质,而抗原与抗体之间具有专一的亲和力,故可选用目的酶的抗体与酶制剂进行免疫扩散或免疫电泳,从而判断酶的制剂是否纯净。
(5)氨基酸序列分析法:
采用特定的化学物质从酶的N末端将氨基酸残基逐个水解下来,最终可获知该酶的氨基酸序列,从而也可以判断出酶制剂是否纯净。
3、酶的催化特性。
答:
(一)酶催化的高效性
(二)酶催化的高度专一性(三)酶催化的反应条件温和
(四)酶活性的可调控性(五)酶催化的活性与辅酶、辅基和金属离子有关
4、固定化细胞有哪些优缺点?
答:
优点:
1、可增殖,细胞密度大,可获得高度密集而体积小的生产菌集合体。
2、发酵稳定性好,可以较长时间反复使用或连续使用。
3、发酵液中含菌体较少,有利于产品分离纯化。
4、有利于需要辅酶和多酶系统才能进行的反应。
缺点:
固定后的细胞与反应物不容易接近,可能导致反应效果下降。
由于大分子物质难以自由通过细胞膜,因此固定化细胞的技术也受到限制。
5、简述生物印迹酶的种类及制备过程。
答:
分为有机相生物印迹酶、水相生物印迹酶,其中水相生物印迹酶又可分为:
酯水解生物印迹酶、HF水解生物印迹酶、具有谷胱甘肽过氧化物活性的生物印迹酶。
制备过程:
6、固定化酶和游离酶相比,有何优缺点?
答:
固定化酶比游离酶更稳定、利用率高、产物容易纯化,更适合多酶反应。
但固定化酶由于固定化方法不同,有些固定不牢固,对大分子底物有一定的空间位阻,还可能由于共价结合而影响酶的空间构象,因此有些固定化酶比游离酶的活性低、专一性可能改变,与底物的亲和力较小。
7、酶分子修饰的方法有哪些?
酶分子修饰的目的是什么?
答:
酶分子修饰的方法主要有:
1.酶分子的主链修饰;2.酶分子的侧链基团修饰;3.酶分子组成单位的置换修饰;
4.金属离子置换修饰;5.酶分子的物理修饰。
或者酶分子修饰的方法有:
1.金属离子置换修饰2.大分子结合修饰3.侧链基团修饰4.肽链有限水解修饰
5.核苷酸链剪切修饰6.氨基酸置换修饰7.核苷酸置换修饰8.物理修饰
酶分子修饰的目的是:
提高酶的活性;增强酶的稳定性;降低酶的免疫原性;阐明结构与功能的关系。
8、简述酶的催化特点和催化机理。
答:
(1)改变化学反应速率,本身不被消耗;
(2)只能催化热力学允许进行的反应;
(3)加快化学反应速率,缩短达到平衡时间,但不改变平衡点;
(4)降低活化能,使速率加快;(5)高效性,指催化效率很高,使得反应速率很快;
(6)专一性,任何一种酶只作用于一种或几种相关的化合物,这就是酶对底物的专一性;
(7)多样性,指生物体内具有种类繁多的酶;
(8)易变性,由于大多数酶是蛋白质,因而会被高温、强酸、强碱等破坏;
(9)反应条件的温和性,酶促反应在常温、常压、生理pH条件下进行;
(10)酶的催化活性受到调节、控制;(11)有些酶的催化活性与辅因子有关。
酶催化机理:
1.趋近效应(approximation)和定向效应(oientation)酶可以将它的底物结合在它的活性部位由于化学反应速度与反应物浓度成正比,若在反应系统的某一局部区域,底物浓度增高,则反应速度也随之提高,此外,酶与底物间的靠近具有一定的取向,这样反应物分子才被作用,大大增加了ES复合物进入活化状态的机率。
2.张力作用(distortionorstrain)底物的结合可诱导酶分子构象发生变化,比底物大得多的酶分子的三、四级结构的变化,也可对底物产生张力作用,使底物扭曲,促进ES进入活性状态。
3.酸碱催化作用(acid-basecatalysis)酶的活性中心具有某些氨基酸残基的R基团,这些基团往往是良好的质子供体或受体,在水溶液中这些广义的酸性基团或广义的碱性基团对许多化学反应是有力的催化剂。
4.共价催化作用(covalentcatalysis) 某些酶能与底物形成极不稳定的、共价结合的ES复合物,这些复合物比无酶存在时更容易进行化学反应。
9、举例说明固定化酶(细胞)的制备过程及原理。
答:
包埋法的原理是将微生物细胞截流在水不溶性的凝胶聚合物孔隙的网络空间中。
通过聚合作用或者离子网络形成,或通过沉淀作用,或改变溶剂、温度、pH值使细胞截流。
凝胶聚合物的网络可以阻止细胞的泄漏,同时能让基质渗入和产物扩散出来。
1、制备过程:
称取0.3g海藻酸钠和0.1g淀粉酶溶入10毫升蒸馏水中。
2、配置2%氯化钙溶液50ml
3、将1滴加至2中,固化30mins
4、过滤得白色球体
5、清洗至中性(清洗5-6次),自然风干
6、得到微体即固定化的淀粉酶
测定固定化淀粉酶的重量
10、简述抗体酶的制备方法及应用。
答:
抗体酶的制备方法有细胞融合法、抗体结合位点化学修饰法、引入辅助因子法、用生物工程方法产生抗体、拷贝法。
抗体酶的应用:
抗体酶在有机合成中的应用、阐明化学反应机制、在医疗上的应用。
11、固定化方法有哪几种?
并阐述各自的机理。
答:
有包埋法、吸附法、共价结合法,以及交联法等
包埋法的原理是将微生物细胞截流在水不溶性的凝胶聚合物孔隙的网络空间中。
通过聚合作用或者离子网络形成,或通过沉淀作用,或改变溶剂、温度、pH值使细胞截流。
凝胶聚合物的网络可以阻止细胞的泄漏,同时能让基质渗入和产物扩散出来。
吸附法又称载体结合法,其原理是通过物理吸附、化学或者离子键的结合,将微生物固定于非水溶性载体。
这种方法操作简单,对微生物活力影响小,但所结合的微生物数量有限,反应稳定性和反复使用性差。
共价结合法的原理是细胞表面上功能团和固相支持物表面的反应基团之间形成化学共价键连接,成为固定化细胞,该法的连接键很牢固。
交联法的原理是使用双功能或多功能试剂,直接与细胞表面的反应基团如氨基、羧基等进行交联,形成共价键来固定细胞,其结合力是共价键。
12、阐述酶工程的应用并分别举例说明。
答:
酶工程主要应用在以下几个领域:
1、发酵工艺:
生产葡萄糖、生产氨基酸、生产核苷酸、生产生物柴油、生产抗生素、生产有机酸、甾体激素等;
2、医药领域:
①疾病诊断方面应用:
根据体液内酶活力的变化诊断疾病、用酶测定体液中某种物质的量诊断疾病等;
②疾病治疗方面的应用:
生产蛋白酶、溶解酶、超氧化物歧化酶等;
③药物制造方面的应用:
生产青霉素酰化酶、β-酪氨酸酶、核苷磷酸化酶等;
3、分析检测:
酶试纸、酶柱和酶管、酶传感器等的应用都有重大贡献;
4、基础理论研究:
阐明酶反应机制、生物工程中去除细胞壁等方面的应用;
5、环境保护领域:
环境监测、三废处理、生物脱墨等;
6、其他方面:
洗涤剂工业、酿酒工业、乳制品工业、饼干、纺织工业、化妆品等工业中都有应用。
13、对酶进行化学修饰时,应考虑哪些因素?
答:
修饰反应尽可能在酶稳定条件下进行,并尽量不破坏酶活性功能的必需基团。
需考虑以下几方面:
①pH与离子强度:
决定了酶蛋白分子中反应基团的解离状态;
②修饰反应的温度与时间:
严格控制温度和时间可以减少以至消除一些非专一性的修饰反应;
③反应体系中酶与修饰剂的比例:
控制二者的比例,防止酶的过度修饰而导致的活性完全丧失。
14、某酶的初提取液经过一次纯化后,经测定得到下列数据,试计算比活力,回收率及纯化倍数。
体积(ml)
活力单位(u/ml)
蛋白氮(mg/ml)
初提取液
100
250
2.5、
硫酸铵沉淀
8
800
1.6
答:
(1)起始总活力:
250×100=25000(单位)
(2)起始比活力:
250÷2.5=100(单位/毫克蛋白氮)
(3)纯化后总活力800×8=6400(单位)
(4)纯化后比活力800÷1.6=500(单位/毫克蛋白氮)
(5)产率(百分产量):
6400÷25000=25.6%
(6)纯化倍数:
500÷100=5
15、写出三种分离纯化酶蛋白的方法,并简述其原理。
答:
1凝胶过滤:
凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。
是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,小分子物质能进入其内部,流下时路程较长,而大分子物质却被排除在外部,下来的路程短,当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
2等电点沉淀:
在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。
3吸附层析:
利用固定相吸附中对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离,吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。
4盐析沉淀法利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加一定浓度的中性盐,使酶或杂质从溶液中析出沉淀,从而使酶与杂质分离
5离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力,使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程。
6过滤是借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程
16、填充床反应器和流化床反应器的优缺点?
答:
填充床反应器优点是:
容积负荷高,抗冲击负荷能力强;微生物活性高;传质效果好。
缺点:
设备的磨损较固定床严重,载体颗粒在湍流过程中会被磨损变小。
设计时存在着生产放大的问题,如防堵塞等。
流化床反应器优点是:
高效率、易操作、结构简单等,因而,PBR是目前工业生产及研究中应用最为普遍的反应器。
它适用于各种形状的固定化酶和不含固体颗粒、黏度不大的底物溶液,以及有产物抑制的转化反应。
缺点是:
传质系数和传热系数相对较低。
当底物溶度含固体颗粒或黏度很大时,不宜采用PBR.
17、酶固定化后性质会发生什么变化?
答:
变化:
①酶活性下降。
酶结构变化、空间位阻。
②稳定性提高。
酶分子与载体多点连接,活性缓慢释放,抑制自降解;
③最适pH的变化。
载体+-,ph酸碱移动;产物酸,固定Eph>游离Eph;
④最适温度也上升;
⑤底物特异性变化:
作用于低分子底物的酶特异性无明显变化;可作用于低分子、大分子底物的酶→特异变化;
⑥Km值随载体性质变化:
载体与底物带相同电荷,Km’>Km,降低了酶的亲和力;电荷相反,静电作用,Km' 18、酶分离纯化的技术路线。 答: 细胞破碎(动物、植物或微生物细胞)→酶提取(发酵液)→酶分离纯化(离心、过滤、沉淀、层析、电泳、萃取、结晶)→酶浓缩→酶贮存。 19、常用沉淀法的种类及原理。 答: 盐析法: ①原理: 酸性或碱性化合物还可加入某种试剂使之生成水不溶性的盐类等沉淀析出,与其他水溶性较大的杂质分离 等电点沉淀法: 在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。 等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。 有机溶剂沉淀法的原理①亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数,使溶质分子之间的静电引力增加,聚集形成沉淀;②水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度,压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度,降低了它的亲水性,导致脱水凝集. 有机聚合物沉淀法: 其作用原理可能与有机溶剂类似。 聚丙烯酸可以沉淀带正电蛋白质。 聚丙烯酸分子上有相当多的羧基,碱性蛋白质含较多的碱性基团,羧基和碱性基团形成盐键,则把聚丙烯酸和碱性蛋白结成成很大颗粒沉淀下来。 沉淀时碱性蛋白与溶液分开,加入钙离子后,聚丙烯酸成钙盐,蛋白质则游离出来。 选择性变性沉淀法: 这一方法是利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异,选择一定的条件使杂蛋白等非目的物变性沉淀而得到分离提纯. 20、比较各类酶反应器的优缺点。 答: 答: ①按照结构的不同可以分为: 搅拌罐式反应器、填充床式反应器、流化床反应器、鼓泡式反应器、膜反应器、喷射式反应器。 按操作方式分为: 分批式反应、连续式反应、流加分批式反应。 将结构和操作方式结合一起分为: 连续搅拌罐式反应器、分批搅拌罐式反应器。 ②各类优缺点: ⑴分批搅拌罐式反应器 优点: 设备简单,操作容易,酶与底物混合均匀,传质阻力较小,反应较为完全,反应条件容易调节控制。 缺点: 用于游离酶,酶难以回收;用于固定化酶,反应器利用率较低,而且可能对固定化酶的结构造成破坏。 ⑵连续搅拌罐式反应器
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