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微生物课后习题题目及答案
微生物学课后习题及答案
第一章绪论
1.什么是微生物和微生物学
答:
微生物是指肉眼难以看清的微小生物,包括病毒,亚病毒,细菌,古生菌,真菌,单细胞藻类和原生动物。
微生物学指研究微生物在一定条件下的形态结构,生理生化,遗传变异,基因和基因组以及微生物的进化,分类,生态等生命活动规律以及其应用的一门学科。
2.微生物的主要特征是什么
答:
个体小,结构简单,繁殖快,易培养,易变异,分布广
3.为什么说微生物与人类的关系非常重要并不能被其他生物所代替
答:
微生物给人类带来了巨大的利益,也涉及到人类的生存。
许多重要产品如面包,奶酪,抗生素,疫苗,维生素和酶的生产离不开微生物,同时参与地球上的物质循环,是人类生存环境中必不可少的成员。
但它也给人类带来许多灾难,许多疾病及食品腐败等也是由微生物引起的。
4.虎克,巴斯德和柯赫对微生物学形成与发展的重要贡献
答:
虎克:
利用自制显微镜发现了微生物世界
巴斯德:
a.彻底否定了“自然发生”学说b.发现将病原菌减毒可诱发免疫性,首次制成狂犬病疫苗,进行预防接种c.证实发酵是由微生物引起的d.创立巴斯德消毒法
柯赫:
a.证实了炭疽病菌是炭疽病的病原菌b.证实肺结核的病原菌c.提出柯赫原则d.创立了分离纯化微生物的技术等
5.简述微生物学在生命科学发展中的地位,根据你的观点描述发展前景
答:
a.20世纪40年代,随着生物学的发展,许多生物学难以解决的理论和技术问题十分突出,特别是遗传学上的争论问题,是微生物这样一种简单而又具有完整生命活动的小生物成了生物学研究的“明星”,微生物学被推到生命科学发展的前沿,获得迅速发展,为声明科学的发展做出了突出贡献。
b.未来微生物学更加绚丽多彩,多学科交叉,基因组研究的深入和扩展将使微生物的基础研究及其应用将呈现前所未有的局面
第二章微生物的纯培养和显微技术
1、为什么要进行微生物的分离纯化?
什么叫无菌技术?
因为在天然条件下,所采集的用于培养的材料中,多种微生物呈共生关系,而一般情况下只有纯培养物才能提供可重复的结果,故需进行微生物的分离纯化。
无菌技术指在分离、转接及培养纯种微生物时,防止其被环境中微生物污染,其自身也不污染环境的技术,它是保证微生物研究正常进行的关键。
2、采用固体培养基和液体培养基分离纯化细菌的主要方法。
固体培养基分离纯化细菌方法:
涂布平板法;稀释倒平板法;平板划线法;稀释摇管法;
液体培养基分离纯化细菌方法:
稀释法;富集培养。
3、微生物的保藏方式有哪些?
传代培养保藏;冷冻保藏法;干燥保藏法。
4、显微镜有哪几种类型?
明视野显微镜;暗视野显微镜;相差显微镜;荧光显微镜;共聚焦显微镜;透射显微镜;扫描电镜;隧道扫描显微镜;原子力显微镜。
5、产芽孢的细菌主要属于哪些细菌?
目前发现的最大和最小的细菌是什么细菌?
产芽胞的细菌主要属于好氧性的芽孢杆菌属和厌氧性的梭菌属;最大细菌:
纳米比亚硫磺珍珠菌;最小细菌:
纳米细菌。
6、举例说明单细胞藻类和蓝细菌对人类有益和有害方面。
单细胞藻类和蓝藻有益:
进行光和作用,合成有机物和释放氧气;
有害:
在湖泊和近海中大量繁殖,产生水华和赤潮,导致鱼类和其它生物窒息死亡;还会产生有害毒素,如微囊藻毒素。
第三章微生物细胞的结构与功能
1、革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁的组成和差异是什么?
革兰氏阳性细菌细胞壁组成:
肽聚糖、壁磷壁酸、膜磷壁酸
革兰氏阴性细菌细胞壁组成:
肽聚糖、脂蛋白、磷脂、脂多糖、外膜蛋白(包含孔蛋白)、周质空间、外膜与内膜间的黏合位点。
差异:
革兰氏阳性菌肽聚糖含有肽桥且肽尾第三个氨基酸为L-Lys。
革兰氏阴性菌肽聚糖无肽桥,且第三个氨基酸为m-DAP且含有脂蛋白、磷脂、脂多糖、孔蛋白。
2、细胞贮藏物有哪些?
各有什么作用?
贮藏物作用
聚—β—羟丁酸贮藏能量、碳源和降低细胞内渗透压
多糖类贮藏能量、碳源
异染粒贮藏磷元素和能量、降低细胞渗透压
藻青素贮藏氮源、能量
3.革兰氏染色步骤和原理
革兰氏染色步骤:
结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色、沙黄(番茄红)复染。
原理:
1)革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌由于细胞壁化学成分的差异而引起物理特性(脱色能力)的不同,从而决定了染色反应的不同。
2)等电点不同引起,革兰氏阳性菌等电点pH2~3革兰氏阴性菌等电点4~5,则革兰氏阳性菌带负电荷比革兰氏阴性菌多,对于碱性碱性染料草酸氨结晶紫染色,革兰氏阳性菌与草酸氨结晶紫结合牢固。
细节:
通过结晶紫粗染和碘液媒染后,在细胞膜内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。
革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密,故遇乙醇或丙醇作脱色处理时,因失水反而是网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会溶出缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色。
反之,革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层的类质含量高、肽聚糖层薄和交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此,通过乙醇脱色后细胞退成无色。
再经沙黄等红色染料进行复染,就是革兰氏阴性菌呈现红色,而革兰氏阳性菌仍保留紫色。
4.芽孢形成包括那些阶段?
构造有什么特点?
研究芽孢的意义。
P56-57
芽孢形成阶段:
1)DNA浓缩成串状染色体2)开始形成前芽孢3)前芽孢形成双层隔膜4)形成皮层5)合成芽孢衣6)芽孢形成7)芽孢释放
结构特点:
有胞外壁、芽孢衣、皮层和核心组成,其中核心又由芽孢壁、芽孢质膜、芽孢质膜、芽孢质和核区组成。
研究意义:
a.芽孢的存在和特点成为细菌分类,鉴定的重要指标b.芽孢具有高度耐热性和其他抗逆性,能否消灭芽孢成为各种消毒灭菌手段的最重要的指标c.产芽孢菌可用其芽孢作为保藏d.可以提高长芽孢微生物的筛选效率e.是研究生物抗逆性和生物学机制的良好材料。
部分芽孢菌有产生伴孢晶体的特性,用做生物杀虫剂凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌是益生菌,可以制药。
5.青霉素主要杀灭那些细菌?
作用机制是什么?
青霉素主要杀灭革兰氏阳性菌,作用机制为:
青霉素为D-Ala-D-Ala的结构类似物,能与转肽酶结合,使五肽末端的Ala不能被转码,Gly无法与Lys结合。
肽桥不能形成,即抑制了TPG合成的最后一步交联作用。
6.什么是真核微生物?
主要包括那些类型?
真核微生物是指细胞核具有核膜细胞能进行有丝分裂,细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微生物。
微生物中的真菌、显微藻类、原生动物和地衣均为真核微生物。
7.真核生物细胞壁、膜、和鞭毛组成上与原核有哪些不同?
原核细胞
真核细胞
细胞壁组成
肽聚糖,假肽聚糖等
维生素、几丁质等
细胞膜
不含甾醇(支原体除外)
含呼吸或光和组分
含甾醇
不含呼吸或光和组分
鞭毛
由鞭毛Pr亚基组成,基体由L、P、S、M或S、M环组成。
作旋转运动
鞭杆为“9+2”型结构,基体为“9+0型结构,作挥鞭式运动”
8.叶绿体和线粒体结构与功能
线粒体
叶绿体
结构
由内外两层膜包围着基质;内膜伸向基质形成许多山脊,脊上有ATP酶和电子传递系统
分叶绿体膜,类囊体和基质,类囊体层层相叠形成基粒。
膜上含电子传递系统和光和色素,由双层膜包裹的绿色颗粒状细胞器。
功能
进行氧化磷酸化产生ATP
利用CO2和H2O合成糖类和O2
9.酵母的繁殖方式有哪些?
答:
出芽生殖、裂殖、产生无性孢子、产子囊孢子进行有幸生殖。
10.真菌的有性生殖与无性生殖孢子类型有哪些?
答:
有性生殖:
卵孢子、子囊孢子、接合孢子。
无性生殖:
厚垣孢子、担孢子、节孢子、分生孢子、孢囊孢子、游动孢子。
第四章微生物的营养
1.什么叫营养物质?
微生物六大营养要素?
组成微生物的主要元素和微量元素。
营养物质之能够满足微生物集体生长,繁殖,完成各种生理活动所需的物质。
六大营养要素:
碳源,氮源,生长因子,无机盐,水,能源
主要元素:
C,H,N,P,S,K,Mg,Cu,Fe
微量元素:
Zn,Mn,Na,Cl,Mo,Se,Co,Cu,Ni,B
2.微生物主要有哪些营养类型?
特点是什么?
光能无机自养型,光能有机异养型,化能无机自养型,化能有机营养型特点见P84
营养类型
电子供体
碳源
能源
光能无机自养型
H2、H2S、S或H2O
CO2
光能
光能有机异养型
有机物
有机物
光能
化能无机自养型
H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-
CO2
化学能(无机物氧化)
化能有机营养型
有机物
有机物
化学能(有机物氧化)
3.什么叫培养基?
主要类型有哪些?
培养基时人工配置的,适合微生物生长繁殖或者生产代谢产物的营养物质。
主要类型:
按成分分:
天然培养基,合成培养基
按物质状体分:
固体培养基,液体培养基,半固体培养基
按用途分:
分离培养基,加富培养基,鉴别培养基,选择培养基
4.培养细菌,放线菌,酵母菌,霉菌常用培养基。
培养细菌:
牛肉膏蛋白胨培养基放线菌:
高氏合成1号培养基酵母菌:
麦芽汁葡萄糖培养基霉菌:
查氏合成培养基
5.营养物质进入细胞有哪些方式,是比较其特点。
运输方式
特点
扩散
运输力来自膜内外被运送物质的浓度差,顺浓度梯度运输,不需载体,不消耗能量
促进扩散
运输力来自膜内外被运送物质的浓度差,顺浓度梯度运输,需载体,不消耗能量
主动运输
需要提供能量,需载体,逆浓度梯度运输
膜泡运输
细胞膜内陷包裹营养物质,一般运输大颗粒物质
第五章微生物的代谢
1.糖酵解底物脱氢的途径有哪些?
脱氢途径:
EMP途径HM途径ED途径磷酸解酮酶途径即WD途径。
具体特点如下:
EMP途径:
可分为两个阶段:
第一阶段不涉及氧化还原反应,能量的释放准备阶段,只生成两分子的甘油醛—3—磷酸,第二阶段发生氧化还原反应,合成ATP并形成两分子丙酮酸。
其生理功能是:
1.提供ATP和还原力NADH,2为生物合成提供多种中间产物。
3.连接其他代谢途径。
4.通过逆反应进行糖原的逆生。
HM:
该途径是从葡萄糖-6-磷酸开始,最终生成6分子NADPH,3分子CO2和一分子甘油醛-3-磷酸。
其中甘油醛-3-磷酸又可进入EMP途径,HM途径不是产能途径,而是为生物合成提供大量还原力(NADPH)和大量中间代谢产物。
HM途径存在于大多数好氧和兼性厌氧微生物中,且同一生物中往往同时存在HM和EMP途径。
ED途径:
该途径中,葡糖-6-磷酸脱氢产生葡糖酸-6-磷酸,并在脱水酶和醛缩酶的作用下生成一分子甘油醛-3-磷酸和一分子丙酮酸,它在革兰氏阴性菌中分布较广,特别是假单胞菌和固氮菌。
ED途径可不依赖于EMP和HM途径单独存在。
WD途径:
该途径根据解酮酶不同分为PK途径和HK途径,PK途径含有磷酸戊糖解酮酶,HK途径含有磷酸己糖解酮酶。
2.酵母发酵乙醇的三种类型,细菌与酵母乙醇发酵有什么优缺点?
酵母发酵乙醇的三种类型为:
一型发酵、二型发酵和三型发酵。
细菌和酵母乙醇发酵的优缺点各:
酵母菌乙醇发酵产物单一,很少产生其他的有机化合物,但受环境影响较大如在NaHSO3存在时不能形成乙醇;而细菌发酵产物有多种,所得乙醇中常含有其他有机酸,但发酵速度快
3.呼吸作用主要类型及特点。
呼吸作用的主要类型有:
(1)有氧呼吸
(2)无氧呼吸
特点:
(1)有氧呼吸以分子氧作为电子最终受体,糖酵解过程中产生的丙酮酸直接进入三羧酸循环中,被彻底氧化成CO2和水,释放出大量能量。
(2)无氧呼吸的最终电子受体不是氧,而是像NO3-、NO2-、SO42-、S2O32-和CO2等外源受体,无氧呼吸也有细胞色素等电子传递体,能量分级释放过程中伴随磷酸化作用,但由于部分能量
4.能量转换的主要类型
能量转换主要类型:
(1)底物水平磷酸化
(2)氧化磷酸化(3)光合磷酸化。
5.卡尔文循环包含哪三个阶段?
(1)CO2固定
(2)被固定的CO2的还原(3)CO2受体的再生。
(存在于所有化能自养微生物和大部分光合细菌中)
6.微生物细胞通过控制酶的作用进行微生物代谢调节方式有哪些?
(1)酶活性调节:
1.变构调节
2.修饰调节
(2)分支合成途径调节:
(1)同工酶
(2)协同反馈抑制(3)累积反馈抑制(4)顺序反馈抑制。
(3)酶合成的调节。
7.初级代谢与次级代谢有哪些不同?
(1)存在范围及产物类型不同
a.初级代谢系统途径,产物在各类生物中基本相同。
是一种普通存在各类生物中的代谢途径。
b.次级代谢只存在于某些生物中,代谢产物与途径因微生物不同而不同。
(2)不同微生物产生不同的次级代谢产物。
(3)相同微生物在不同条件下的次级代谢产物不同。
(4)初级代谢自始至终存在于一切活的机体中。
同机体生长过程是平行关系。
次级代谢是在生命历程一定时期进行的。
(5)初级代谢与次级代谢相关的酶专一性不同。
第六章微生物生长繁殖及其控制
1.什么叫生长曲线?
每个生长期的特点。
1)生长曲线:
以时间为横坐标,菌数为纵坐标,根据不同培养时间里菌数数量的变化,做出一条反应细菌在各个培养期间菌数变化规律的曲线。
2)迟缓期中细胞体积增大,细胞内RNA、蛋白质含量增高,合成代谢活跃,细菌对外界不良条件反应敏感。
迟缓期细胞处于活跃生长中,但分裂迟缓。
对数期中细菌以最快速度生长和分裂,细菌呈对数增加,细胞内所有成分以彼此相对稳定得的速率合成,细菌平衡生长。
稳定期中活细菌数量最高并保持稳定,细菌开始储存内含物。
衰亡期细菌代谢活性降低,细胞衰老并出现自溶释放出一些产物,细胞呈多种形态,细胞大小悬殊,菌体形态多变大小不一,革兰氏染色不明显。
2.如何缩短生长延迟期?
获得同步培养物的主要方法是什么?
1)通过遗传学方法改变菌种的遗传特性使延迟期缩短
2)利用对数期细胞作为种子
3)尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大
4)适当扩大接种量
获得同步培养的方法:
1)机械法:
离心法、过滤分离法、硝酸纤维素滤膜法
2)环境条件控制技术:
温度、培养基成分控制、其它(如光照黑暗交替处理)
3.比较灭菌,消毒,防腐和化疗的异同点。
作用对象
作用效果
举例
灭菌
物体内芽孢和所有微生物
杀灭芽孢及营养体
高压蒸汽灭菌
消毒
物体表面微生物
杀死或灭活微生物营养体
巴斯德消毒法
防腐
微生物
防止或抑制微生物生长
盐腌
化疗
微生物感染组织或病变细胞
杀死病原微生物和病变细胞
抗生素治疗
4.实验室微生物培养基高温灭菌主要采用哪些方法及其具体条件。
灭菌方法
具体条件
高压蒸汽灭菌
121℃105kpa20min
煮沸消毒
T>=15mi水中加入1%GaCO3或2%-5%H2CO3
间歇灭菌法
用流通蒸汽反复灭菌几次
干热灭菌法
温度高时间长160-170℃2-3h
5.抗生素杀死微生物主要作用机制有哪些?
(1)抑制细菌细胞壁的合成
(2)破坏细胞质膜(3)作用于呼吸链以及干扰氧化磷酸化(4)抑制蛋白质和核酸合成
6.微生物如何产生抗药性?
如何避免抗药性的产生?
微生物如何产生抗药性:
(1)细胞质膜的通透性改变
(2)药物作用靶改变,对抗生素不敏感(3)合成了修饰抗生素的酶(4)抗性菌株发生遗传变异
如何避免抗药性的产生:
1.第一次使用的药物剂量充足2.避免长期多次使用同种抗生素
3.不同抗生素混用4.对抗生素进行改造5.筛选新的更有效的抗生素
第七章病毒
1、病毒区别于其他微生物的主要特点:
(1)结构简单只有核算和蛋白质组成无完整的酶系统和能量合成系统,不能进行独立的代谢活动,无细胞结构
(2)繁殖方式独特通过核酸复制合成蛋白质组装形成子代毒粒
(3)绝对细胞内寄生
(4)生命形式具有二重性
(5)个体极小,能通过细胞滤器
(6)对抗生素不敏感,对干扰素敏感
2、从不同角度分析病毒有哪些类型?
毒粒的形态结构有哪些?
病毒类型:
按宿主范围分:
噬菌体植物病毒动物病毒
按核酸类型分:
dsDNA病毒ssDNA病毒 DNA和RNA逆转录病毒 dsRNA病毒 负意ssRNA病毒 正意ssRNA病毒 裸露RNA病毒 类病毒
毒粒形态结构:
裸露螺旋对称毒粒和十二面体毒粒\有包膜的螺旋毒粒\和二十面体毒粒\复杂毒粒
3.以噬菌体为例,说明病毒复制过程。
病毒复制阶段:
吸附,侵入,脱壳,病毒大分子合成,装配与释放
4.引起非增殖性感染有哪些类型,叙述宿主与噬菌体关系。
非增殖性感染类型:
流产感染,限制性感染和潜伏感染。
噬菌体与宿主关系:
大多数噬菌体感染宿主后,在宿主内复制并最终杀死细胞,但有些噬菌体以溶源状态存在于细胞中,随细胞增殖而复制,宿主细胞不被杀死。
抑制宿主细胞大分子合成。
宿主限制系统的改变。
5.亚病毒有哪些,各有什么特点?
亚病毒类型
特点
类病毒
裸露的低相对分子质量侵染RNA,元蛋白质外壳无编码功能,利用宿主RNA聚合酶Ⅱ进行复制
卫星病毒
有核酸基因组,依赖辅助病毒复制,特异性外壳壳体化
卫星RNA
低相对分子质量RNA,被辅助病毒的质外壳包装,依赖辅助病毒复制
朊病毒
蛋白质侵染颗粒,无核酸,为亚急性海绵状脑病的病原因子。
能独立复制。
第八章微生物遗传
1.哪些实验证明DNA是遗传物质?
证明DNA是遗传物质的实验:
格里菲斯Griflith细菌转化实验Avery实验T2噬菌体感染实验
2.染色体之外的遗传因子有哪些?
转座子包括那些类型?
染色体之外的遗传因子:
质粒,转座因子
转座因子类型:
插入顺序,转座子,某些特殊病毒
3.基因突变类型有哪些?
基因突变(碱基变化)的类型:
同义突变,错义突变,无义突变,移码突变
4.Ames实验原理及步骤
Ames实验原理:
致癌物质能引起细菌产生突变。
用化学诱变剂处理突变菌株,通过检测回复突变率就可以判断该化学药物是否具致癌性。
步骤:
1)菌株鉴定2)斑点试验3)平板掺入试验
细节:
5.全基因鸟枪法测序的原理和方法是什么?
全基因组鸟枪测序法原理和方法:
(1)用超声波将基因组打断成相当小的片段,再用这些片段与质粒载体结合,产生质粒克隆文库。
(2)制备这些克隆和提纯DNA后,数千个细菌DNA片段自动被测序,一般用特殊燃料标记引物。
(3)用专门的计算机程序将已测序的DNA片段通过片段之间核苷酸序列重叠的比较,将其装配成较长的DNA序列,如果这些序列在其末端重叠,那么两个片段连在一起形成更长的一段DNA。
(4)最后,将这些重叠群按合适顺序排队,填补两个重叠群之间可能留下的缺口,形成完整的基因组序列。
6.代谢工程育种的主要方法有哪些?
代谢工程育种的主要方法:
1.改变代谢途径2.扩展代谢途径3.构建新的代谢途径
7.原生质融合的主要步骤和方法。
步骤:
(1)原生质体制备:
将两亲株分别用酶处理,使细胞壁全部消化或使薄弱部分破裂,即可得到原生质体。
(2)原生质体融合和再生:
原生质体融合可采用化学因子诱导和电场诱导。
再生须将融合原生质体涂布于再生培养基上。
(3)融合子的选择:
选择方法有营养缺陷型标记选择,灭活原生质,荧光染色
方法:
原生质体融合可采用化学因子诱导和电场诱导
第九章微生物基因的表达与调控
1.什么是操纵子和启动子?
操纵子:
由操纵区同一个或几个结构基因联合起来,形成一个在结构上功能上协调作用的整体,作为协同表达的单位,受同一调节基因和启动子的调控。
启动子:
基因起始区的DNA片段,RNA结合酶和CAP(分解物激活蛋白)的结合位点,控制转录的起始。
2.什么是负转录调控和正转录调控。
负转录调控:
调节基因的产物是阻遏蛋白,起着阻止结构基因转录的作用,按作用性质又分为负控诱导和负控阻遏两大类。
在负控系统,阻遏蛋白不和效应物(诱导物)结合时,阻止结构基因的转录。
阻遏蛋白作用的部位是操纵区。
正转录调控:
调节基因的产物是激活蛋白。
根据激活蛋白的作用性质分为正控诱导系统和正控阻遏系统,在正控诱导系统中,效应物分子(诱导物)的存在使激活蛋白处于活动状态,在正控阻遏系统中,效应物分子的存在使激活蛋白处于不活动状态。
3.乳糖操纵子的基因调控诱导机制:
调节基因的产物阻遏蛋白与操纵区(lacO)结合时,RNA聚合酶便不能转录结构基因,因此当环境中缺乏诱导物(乳糖或其类似物IPTG)时,乳糖操纵子是受阻的。
当环境中有乳糖时,进入细胞的乳糖在细胞内尚存在极少量的β-半乳糖苷酶的作用下,发生分子重排,由乳糖变成异乳糖。
异乳糖作为诱导物与阻遏蛋白紧密结合,使后者的构型发生改变而不能识别lacO,也不能与之结合,因而RNA聚合酶能顺利转录结合基因,形成大分子的多顺反子mRNA,继而在翻译水平上合成了种不同的蛋白质:
β-半乳糖苷酶。
透性酶以及乙酰基转移酶。
5.二组分调控系统,分解代谢阻遏调控过程,λ噬菌体的溶原化合裂解途径的转录调节机制。
书P254,251,256
6.转录后调控有哪些方面?
1.翻译起始的调控2.mRNA的稳定性3.稀有密码子和重叠基因4.反义RNA的调控5.翻译的阻遏调控6.ppGpp对核糖体蛋白合成的影响7.细菌蛋白质分泌的调控
第十章微生物与基因工程
1基因工程的基本步骤与过程
基因工程的基本步骤:
(1)基因的分离或合成
(2)外源基因与载体DNA的体外重组(3)重组DNA导入宿主细胞(4)目的基因克隆的筛选与鉴定(5)控制外源基因的表达
2PCR反应需要哪些物质参与?
主要的反应步骤。
(1)PCR进行反应所需的成分:
模板引物TaqDNA聚合酶核苷酸
(2)PCR反应步骤和原理
变性:
高温下,模板DNA热变性,双链被揭开成两条单链
退火:
系统降温,使引物与模板DNA两端碱基配对
延伸:
DNA聚合酶使引物3’端向前延伸,合成模板互补的新链
3克隆载体的基本要求。
(1)载体是一个独立的复制子,含有复制起点,可在细胞中进行自主复制
(2)含有多克隆位点,并且位于载体复制的非必需区,便于外源基因插入
(3)含有选择标记,便于对阳性克隆的筛选和鉴定
(4)具有一定安全性,在胞内不发生重组与转移在胞外不能自由扩散
4克隆载体对宿主的基本要求:
(1)能高效吸收外源DNA
(2)不具有限制修饰系统,外源DNA不被降解
(3)应为重组缺陷型菌株
(4)根据载体类型选择相应宿主
(5)根据载体的标记选择合适的宿主。
(6)具有安全性
5.为什么说微生物学为基因工程提供了理论基础和操作技术。
(1)微生物的多样性,尤其是抗高温,高盐,高碱,低温等基因,为基因工程提供了极其丰富而独特的基因资源,目的基因的获得可以通过构建基因文库或CNDA文库来刷选目的基因片段,或通过PCR技术进行体外的扩增,包括对活的不可培养微生物基因的体外扩增,并对基因进行定点诱变和分子定向进化。
(2)基因工程所用克隆载体主要是用病毒,噬菌体和质粒改造而成。
(3)基因工程所用的千余种工具酶大多数是从微生物中分离纯化得到的。
(4)微生物细胞是基因克隆的宿主,基因工程中最重要,最广泛应用的克隆载体宿主是原核生物的大肠杆菌及真核生物的酿酒酵母
(5)大规模表达各种基因产物,从事商品化生产,通常都是讲外源基因表达载体导入大肠杆菌,酵母菌或者哺乳动物细
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