天 然 药 物 化 学 实 验 讲 义1系列.docx
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天然药物化学实验讲义1系列
天然药物化学
实验讲义
苏州大学药学系
天然药物化学实验讲义
目录……………………………………………………………………1
实验一氧化铝活度测定………………………………………………2
实验二薄层层析展开剂的选择………………………………………5
实验三麻黄中麻黄碱的提取、分离,检识…………………………6
实验四槐米中芸香苷的提取、分离,检识…………………………9
实验五虎杖中大黄素提取、分离、检识……………………………13
实验六中药中化学成分的预试………………………………………17
实验一氧化铝活度测定
一、目的要求
1.掌握薄层层析制板方法
2.了解吸附剂的活度测定法
二、实验原理
薄层板根据在制备过程中是否加入粘合剂分为粘合薄层和非粘合薄层二种,加入粘合剂的为硬板,不加粘合剂的多为软板(亦有为硬板,如纤维素板)。
粘合剂常用的有羧甲基纤维素钠(CMC-Na)或煅石膏(G)。
加羧甲基纤维素钠制备的板机械强度较好,但对一些需加热的腐蚀性显色剂不适用。
加石膏制备的板性能相反,机械强度较差,但适合于使用需加热的腐蚀性显色剂。
对层析用吸附剂活度的测定,主要是利用吸附剂自身对某些偶氮染料吸附力的大小和在薄层板上展开距离来确定,故用测量比移值的方法来确定吸附剂的极性大小和强度级数.
三、实验材料
1.材料:
氧化铝(层析用,中性70~325目)、四氯化碳(重蒸馏)、偶氮苯(Ajobenjene)、对甲氧基偶氮苯(P-methoxyajobenjene)、苏丹黄(sudanIbenjen-azo--naphthot)、苏丹红(SudanIItetra-ajobenjen---naphthot)、对氨基偶氮苯(P-aminoajobenene)、薄层层析用硅胶G、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)
2.仪器:
天平、研钵、药匙、玻璃板(大、中、小)、烘箱、干燥器、点样毛细管、小层析缸
四、实验内容
(一)薄层层析薄层板的制备
1.氧化铝薄层
取表面光滑,直径均一的玻璃棒一支,依据所制备薄层的宽度、厚度要求,在玻璃棒两端各包上橡皮胶,也可以套上塑料管或橡皮管,一般以0.25(用于分析分离)~1mm(用于制备分离)为宜。
在一端已包好的橡皮胶上,再多包5~6层橡皮胶或一段橡皮管,作为涂铺时的固定边,以防止滑动时边缘不整齐。
操作时,将氧化铝粉均匀地铺在玻璃板上,再用玻棒压在玻板上将吸附剂自一端推向另一端,推移时,不宜太快,也不应中途停顿,否则厚薄不均匀,影响层析效果。
2.硅胶G薄层
取硅胶G1份,置研钵中加水3~4份,研磨均匀,放置片刻,随即用药匙取一定量,分别倒在一块大玻璃板上(或倒入涂布器中,推动涂布),均匀涂布成0.25~0.50mm厚度,轻轻振动玻璃板,使薄层面平整均匀。
或取两块2.5mm厚度的玻璃长板,中间夹一至几块2mm厚的薄层板,将适量硅胶糊倒在中间,用药匙适当涂匀,另取一块边缘平整的玻璃片将硅胶糊刮平,推出薄层板,水平放置,待薄层发白近干,于烘箱中110℃烘干活化1~2小时,冷后贮于干燥器内备用。
活化烘干温度、时间可依需要调整,一般鉴别水溶性化合物或一些极性大的化合物时,所用薄层板只在空气中自然干燥,不经活化即可贮存备用。
3.硅胶G-羧甲基纤维素钠薄层
取羧甲基纤维素0.2g,溶于25ml蒸馏水中,加热搅拌使完全溶解,倒入研钵中加硅胶细粉(一般300目的硅胶细粉约用6~8g,200目的则用10~12g),研磨成糊,照硅胶G薄层涂布法制备薄层板。
(二)氧化铝、硅胶活度的测定
1.氧化铝活度的测定,一般可用4~5种偶氮染料以薄层层析法进行测定。
(1)染料试剂的配制
取偶氮苯60mg,对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯各40mg,分别溶于100ml重蒸馏的四氯化碳中。
(2)实验方法
①制板:
按上述方法制备氧化铝薄层软板两块,大小约20×6cm。
②点样:
以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端2~3cm处,轻轻触及薄层再作起
始线标记,间隔lcm左右点上5个可以看清的小点,然后分别用毛
细管蘸取各种染料分别点在原点上,点样的斑点直径不得超过0.5cm。
③展开:
将点样的软板轻轻置于预先加入重蒸馏四氯化碳的层析槽中(事先垫高
层析槽的下行端),勿使展开剂与薄层板接触,盖好槽盖放置半小时,
以进行饱和。
半小时后,调换层析槽下支撑物,再垫高层析槽的上行端,
使薄层板与容器底部交角为10~40℃之间,令展开剂流集于层析槽的
下行端,使与薄层板相接触(以不淹没点样原点为度)以进行展层,当展开剂展至薄层板全长的三分之二时,即可取出薄层板,迅速量出前沿至原点的总长度和原点至各个色斑的长度,依以下公式计算各色点的比移值(Rf)
Rf=
④结果判断
根据测量结果计算结果(Rf值),可以下表中查出相应活度级数,以判断该氧化铝的活性大小。
表1氧化铝活度的Hermanck定级法
(按Brockmenn和Schodder划分的活度)
偶氮染料
氧化铝活度级(Rf值)
Ⅱ级
Ⅲ级
Ⅳ级
Ⅴ级
偶氮苯
0.59
0.74
0.85
0.95
对甲基偶氮苯
0.16
0.49
0.69
0.89
苏丹黄
0.10
0.25
0.51
0.78
苏丹红
0.00
0.10
0.33
0.56
对氨基偶氮苯
0.00
0.03
0.03
0.19
五、实验说明
1.进行层析时,要想得到比较理想的结果,在各步操作中都应严格要求。
如点
样量的多少及点样的原点直径不应超过0.5mm;展层时起始线不能浸在展开
剂中;层析板或层析纸不能和展开容器接触;层析缸应密闭以及选择灵敏的
显色剂等。
2.羧甲基纤维素钠的溶液一般用0.5~1%浓度,宜预先配制后静置,取上层澄
清溶液应用,则所制备的薄层表面较为细腻平滑。
3.点样量的多少,对有色化合物可直接观察,对无色化合物可预先取一个薄层
板,按常规方法进行层析操作。
但在点样时可分别在不同原点点上不同量的
样品溶液,展层显色后,根据斑点的大小和颜色的深浅以确定最佳点样量。
4.进行氧化铝软板活度测定时,在各步操作中应避风,以防吹散吸附剂。
六、思考题
1.根据偶氮苯、对甲基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红和对氨基偶氮苯的结构式,判
断其在氮化铝薄层板上以苯为展开剂的顺序和位置。
2.欲使你的实验得到满意的结果时,操作(薄层层析)中应注意什么问题?
以氧化铝活度测定为例说明之。
实验二薄层层析展开剂的选择
一、目的要求
1.掌握薄层层析的操作方法。
2.了解展开剂与吸附剂和被分离物质的三者关系。
二、实验原理
薄层层析在一般情况下是一种吸附层析,利用吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离,吸附剂吸附能力的大小和化合物极性的大小有关。
在硅胶等极性吸附剂薄层上化合物极性大,被吸附剂吸附得牢,Rf值小;反之化合物极性小,Rf值大。
一个化合物在硅胶薄层上的Rf值的大小主要取决于展开剂的极性大小,即展开剂极性大,化合物Rf值大;展开剂极性小,化合物Rf值小。
三、实验器材
硅胶CMC-Na薄层板三块、薄荷油、薄荷脑的乙醇溶液、石油醚、乙酸乙酯、香草醛、浓硫酸、毛细管、层析缸、显色喷嘴瓶
四、实验内容
硅胶薄层层析法检查挥发油
吸附剂:
硅胶CMC-Na薄层板
样品:
薄荷油、薄荷脑的乙醇溶液
展开剂:
石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯(85∶15)
显色剂:
香草醛-浓硫酸试剂
操作:
取CMC-Na薄层板,用软铅笔在距1.2~2cm处划起始线及原点,用毛细管点适量的样品溶液,待溶剂挥干后,进行上行法展层,当展开剂接近顶部时,取出,用铅笔绘下溶剂前沿,挥干展开剂,喷洒显色剂,必要时可适当加热促进显色。
计算薄荷脑的Rf值,并比较在三种展开剂中的展开情况,由结果判断何种展开剂最适合分离薄荷油,亦可用压板法显色。
五、实验说明及注意事项
1.实验用各展开剂试瓶、量筒、层析缸必须干燥无水,不能混淆。
2.压板法操作:
点样展层后,稍干,反扣在一块同样大小并涂布一层显色剂的
玻璃板上,再将玻璃片反转,使薄层面向上,观察颜色变化。
六、思考题
l.挥发油在硅胶薄层板上用石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯(85∶15)三种展开剂分别展开时,结果不同,其原因是什么?
2.欲进行薄层层析鉴定时,应如何选择一个比较理想的层析条件?
实验三麻黄中麻黄碱的提取、分离与检识
麻黄是一种常用中药,为我国特产的药材之一。
为麻黄科植物草麻黄(Epheclrasinicastapf)、木贼麻黄(E.equssetinaBunge)和中草麻黄(E.intermediaSchrenkexMeyer)的干燥草质茎。
具有发汗、解表、镇咳、平喘等作用。
它的主要成份是生物碱,在草麻黄中的含量为1.3%以上,木贼麻黄中则达1.75%,这些生物碱已知的有六种以上,主要为:
(-)麻黄碱(L-ephedrine)一般占总碱60%以上,其次为(+)伪麻黄碱(d-pseudophedrine)和少量甲基麻黄碱、去甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱、去甲基伪麻黄碱等。
它们以盐酸盐的形式存在于植物体中。
一、麻黄中已知主要成份的理化性质
1.(-)麻黄碱:
为无色蜡状固体或晶形固体,也可能是颗粒。
无臭,常含半分子
结晶水,熔点40℃。
易溶于水(1∶20)或乙醇,可溶于氯仿、乙醚、苯或甲苯。
有挥发性,可随水蒸气蒸馏而不分解。
其水溶液呈强碱性(pkb4.42),能与无机酸或酸性较强的有机酸结合成盐,这些盐大多易溶于水(草酸盐难溶于冷水),要溶于乙醇,但几不溶于氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。
2.(+)伪麻黄碱:
由乙醚结晶出来的为长斜方形晶体,易溶于乙醇、乙醚、苯或
甲苯等有机溶剂,而难溶于水。
碱性较(-)麻黄碱略强(pkb4.26),可应用离
子交换层析法将两者分离。
(+)伪麻黄碱的盐类均易溶手水,但其盐酸盐能溶
于丙酮或氯仿,草酸盐易溶于冷水,而与盐酸(-)麻黄碱不同.
二、目的要求
1.掌握水溶性生物碱类溶剂提取和分离方法。
2.熟悉用离子交换树脂法纯化处理水溶性生物碱的操作技术。
3.了解麻黄碱的性质和检识方法。
三、实验原理
本实验是利用麻黄生物碱的盐酸盐可溶于水的性质,而采用稀盐酸水溶液为提取溶剂,对麻黄草进行蒸煮或浸渍,提取液经碱化后转化为游离麻黄碱,可为氯仿所萃取。
麻黄碱的氯仿溶液又可为稀盐酸转溶成盐,于此盐酸麻黄碱的水溶液中加入适量乙醚,则可降低盐酸麻黄碱的水中溶解度而析出结晶。
所得盐酸盐结晶系盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱混合物,再利用盐酸伪麻黄碱可溶于氯仿的特性,用氯仿转溶此混合物,即可使之与盐酸麻典碱相分离。
此外,用强酸型阳离子交换树脂去处理麻黄的酸水提取液,可以得到较纯的
麻黄生物碱。
四、实验器材
麻黄(选择实验用材,通常以山西产较好)、0.5%盐酸水溶液、广泛PH试纸、乙醚、95%乙醇、甲醇、氨水、茚三酮试剂、硅胶-CMC层析板、1%盐酸麻黄碱标准品的醇溶液、离子交换树脂、1000ml烧杯、电热套(1000ml)、1000ml圆底烧瓶、冷凝管、抽滤瓶、布氏漏斗、圆形滤纸、树脂柱、层析缸、循环水泵、旋转蒸发器、索氏提取器、大张滤纸、电吹风
五、实验内容
(一)总生物碱的提取、分离
称取麻黄粗粉100g,先后以12倍量、10倍量0.5%盐酸溶液加热回流提取各1小时,滤过,合并两次滤液。
所得酸水液通过已经预处理的阳离子交换树脂,再用水洗树脂柱直至中性,接着用95%乙醇约500ml通过树脂柱直至洗出液无色为止,并使乙醇全部流出,然后将树脂柱中的树脂全部倒出,摊在搪瓷盘中于通风处晾干。
所得到的含麻黄碱树脂用氨水碱化,边加氨水边搅拌,以手试之有潮湿感,捏之成团,触之即散(氨水用量控制在10%左右)为度,再将碱化后的树脂移入滤纸筒中,用脱脂棉花塞堵滤纸筒口,装入索氏提取器内,以乙醚约500ml为溶剂,于水浴上连续回流提取5~6小时,直至提尽生物碱为止,回收乙醚至约ml,放置析晶,所得麻黄碱粗品用于鉴别、检识实验。
(二)离子交换树脂制取法
1.离子交换树脂的选择和处理
取强酸1号或723型(磺酸氢型聚苯乙烯)阳离子交换树脂(交联度为3~6%)适量,可根据麻黄中生物碱含量和树脂的交换容量加以计算。
通常树脂的取用量应比计算量多1~3倍。
如90~100g树脂,先用常水浸泡12小时以上(或于80℃水浴上加热半小时),使树脂充分膨胀后,再装入树脂柱(在装柱前可先在柱底垫少许玻璃纤维,以防树脂颗粒漏出),装柱时,可将树脂连同水分一起倒入柱内,使树脂随同水分流出而下沉,自然形成树脂柱。
柱内若有空气泡存在时,应设法使其排出,放出多余水分,只保持树脂柱面有1cm高度水层,以免空气进入树脂内。
2.转型处理
取树脂用量4倍的2N盐酸溶液,使全速通过树脂柱,再取用2倍量的5N盐酸溶液全速通过树脂柱,不等酸水流尽树脂柱面,立即用蒸馏水全速通过树脂柱进行洗涤,除去余酸,直至洗出水显中性为止(注意:
树脂柱上面始终应保持1cm高的水层)。
3.提取液中生物碱成份的交换
将上述麻黄的盐酸提取液全部通过转型后的离子交换树脂,调节流速为10~15ml/min,交换后的流出液作生物碱沉淀反应检查:
若仍呈阳性反应时,说明生物碱尚未被全部交换完全,应当重复操作或加大树脂的用量,直至交换完全为止。
待提取液交换完全之后,随即用蒸馏水冲冼树脂柱,直至洗成中性后,再用95%乙醇洗至醇流出液为无色为止,并使乙醇全部流出。
4.生物碱洗脱
将树脂柱内的树脂全部倒出,摊在搪瓷盘内于通风处晾干,收集于大烧杯内,用氨水碱化,加氨水量不宜过多,可随加随搅拌,以手试之有潮湿感,捏之成团,触之即散(氨水用量控制在10%左右)为度,再将碱化后的树脂移入连续回流提取器的滤纸筒中,用脱脂棉花塞堵滤纸筒口,装入提取器内,以乙醚为溶剂,于水浴上连续回流提取5~6小时,直至提尽生物碱为止,回收乙醚,即得纯制麻黄总生物碱。
(四)麻黄碱的检识
层析材料:
硅胶-CMC硬板
展开剂:
甲醇∶氨水(10∶1)
显色剂:
茚三酮试剂(喷洒后需加热)
对照品:
1%盐酸麻黄碱醇溶液
六、实验说明及注意事项
1.麻黄中麻黄碱的含量,往往与产地和采收季节有密切联系,通常以山西麻黄
含生物碱较高(2%)左右,可用作实验材料。
而其它麻黄或市售加工的饮片麻黄,含生物碱量多数较低(1%以下),不可供实验用,尤其贮存一年以上的麻黄,多数难以提出麻黄碱。
2.存在于麻黄中的鞣质成份较多,若用冷浸法提取,则较加热煮沸法提取的鞣
质量有明显地减少,所得产品亦易纯化。
唯冷浸法提取费时较长,如果采用
酸水煮沸法提取(提取三次,每次1小时),再配用阳离子交换树脂处理提取液,可以收到满意的实验效果。
3.麻黄碱为非氮环类生物碱,分子量较小,游离体可随水蒸汽挥发,而且麻黄
碱不与一般生物碱沉淀剂发生沉淀反应。
4.用酸水冷浸法提取液常含有较多的钙盐,若使用离子交换法处理提取液,则
对离子交换树脂的交换率影响甚大,为此,在取用离子交换树脂时,取量应较理论计算值大得多,甚至需要加倍。
如果要降低树脂的用量,就必须避开钙盐的干扰。
可将酸水浸液在交换之前进行碱化,作水蒸汽蒸馏,收集蒸馏液并用盐酸调PH4~6,再进行离子交换树脂处理。
5.麻黄碱的铜络盐显色反应灵敏度较差,若直接用麻黄浸液做此试验往往不能
得到明显的结果,因此,需要适当提纯之后再试,就可得到正确反应结果。
七、思考题
1.利用酸水浸渍提取麻黄碱时应注意什么问题?
本次实验提取方法有什么特点?
2.麻黄碱与伪麻黄碱二者在性质上有何差异?
除本实验外还可用何种方法将其
二者分离?
3.麻黄碱的铜络盐反应原理是什么?
试写出反应式。
4.麻黄碱性质能否用生物碱沉淀剂进行检识?
为什么?
实验四槐花米中芸香甙的提取、精制和检识
芸香甙亦称芦丁(Rutin),广泛存在于植物界,已发现的芦丁植物至少在70种以上,以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多,本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物SophorajoponiaL的未开放花蕾,其中芦丁含量高达23.5%,槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外,还可作为制药原料,用于制造槲皮素(Ruercetin)、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外,还含有白桦脂醇(Betulin)、槐二醇(Sophoradiol)、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素(SophorinA、B、C)和多糖粘液质等。
芸香甙
一、槐花米主要成份的理化性质
1.芦丁:
是槲皮素3位羧基与芸香糖(Rutinose)脱水缩合成的甙。
浅黄色粉末或极细的针状结晶,含3分子结晶水(C27H36O16·3H2O),mpll7~178℃。
在110℃10mmHg下真空干燥12小时变成无水物,无水物易吸湿,可从大气中吸收约2.5分子水份。
无水芦丁在125℃变褐,在190~192℃变成胶状,当温度升至214~215℃发泡分解。
[]XX+1382(乙醇)
芦丁溶解度在冷水中1∶10000,热水中1∶200,冷乙醇中1∶300,热乙醇中1∶30,沸甲醇中1∶7,冷吡啶中1∶12,微溶于丙酮、乙醇乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
UVmaxnm:
259,266(sh),299(sh),3590IRvmaxcm-2,3400(OH),1670(C∶O),1620∶1520,1470(Ar-)。
lXCNMR(DMSO-d6):
156.4(C2),133.6(C3),177.4(C4),161.2(C5),98.8(C6),163.9(C7),93.6(C8),156.6(C9),104.2(C10),121.6(C1),115.3(C2),144.6(C1),148.3(C4),116.5(C5),67.1(C6),100.7(C1),70.4(C2),70.4(C1),72.2(C4),68.2(C5),17.5(C6)。
芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液中,酸化后又析出,因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基,性质不太稳定,暴露空气中,在光的作用下,能缓缓分解,变为暗褐色,在碱性条件下更容易被氧化分解,硼酸盐能与邻二酚羟基结合,达到保护的目的,故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时,往往在加入少量硼砂,就是保护芦丁减少氧化分解。
2.槲皮素:
从稀醇中结晶出来为黄色针状结晶,含2分子结晶水(C15H10O7
2H2O),在95~97℃变为无水物,失水的槲皮素在空气中可重新获得失去的结晶水。
含2分子结晶水的分解点为313~314℃,无水物的分解点为316~317℃。
槲皮素溶于碱水,乙酸和沸醇,在无水醇中的溶解度:
冷时1∶290,沸时1∶23,200mg槲皮素在20℃时溶于5ml丙酮或吡啶;在50℃时溶于20ml甲醇,不溶于苯、乙醚、石油醚。
在常温下不溶于水,也难溶于热水。
UVmaxnm(㏒):
258(2.75),375(2.75)。
HNMR(DMSO-d6):
6.19(1H,d.d,J=2.20,8.06H2,H-6’),12.48(1H,S,5-OH)。
1XCNMR(DMSO-d6):
146.9(C2),135.6(C3),175.7(C4),160.7(C5),98.2(C6),163.9(C7),93.4(C8),156.2(C9),103.0(C10),122.0(Cl’),115.3(C2’),145.0(C3’),147.6(C4’),115.6(C5’),120.0(C6’)。
3.皂甙:
粗制品为白色粉末,分解点为210~220℃。
易溶于起水、吡啶,能溶于甲醇。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇、葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯。
4.白桦醇酯:
无色针状结晶,mp251~252℃,能溶于乙酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、苯等中,难溶于水、石油醚中。
5.槐二醇:
无色针状结晶,mp219~220℃或224℃,能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中,难溶于水。
6.槐花米甲素:
青黄色针状结晶,熔点不定,181~182℃开始发泡,186℃变形发泡完,198~203℃透明有质变色,244~245℃分争融熔。
溶解度:
冷水中1∶60000,热水中1∶167,冷甲醇中1∶108,热甲醇中11.2%,冷乙醇中1∶290,热乙醇中3.5%,冷二氧六环中1∶30,热二氧六环中1∶15,易溶于吡啶,微溶于乙醚、乙酸乙酯,不溶于冰乙酸、石油醚和氯仿。
7.槐花米乙素:
无色六面体结晶,mp272~274℃,易溶于浓硫酸,难溶于85%磷酸,略溶于热甲醇及乙醇,但冷时难溶,在其它非极性溶剂中均不溶,也不溶于水、5%盐酸、5%氢氧化钠溶液。
8.槐花米丙素:
无色棒状结晶,mp235~237℃,易溶于甲醇、乙醇及二氧六环,稍溶于乙醚及丙酮,不溶于水、沸水、5%盐酸、5%氢氧化钠、85%磷酸。
溶于浓硫酸中呈红色,放置后转变为紫色。
二、目的要求
1.掌握用槐花提取,精制芸香甙的原理和方法。
2.熟悉芸香甙的主要性质和检识方法。
三、实验原理
根据芸香甙具弱酸性易溶于碱水,加酸分化后又析出结晶的特性进行提取;又利用芸香甙对冷水或热水的溶解度相差较大的特性进行精制。
四、实验器材
槐花米、0.4%硼酸水溶液、(2%)石灰乳、6N盐酸、PH试纸、2%硫酸溶液、氢氧化钡细粉(或碳酸钡)、正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶1或4∶I∶5上层)、苯胺-邻苯二甲酸试剂、1%葡萄糖水溶液、1%鼠李糖水溶液、l%氢氧化钠、1%盐酸、镁粉、1%芸香甙乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、三氯化铝试剂、500cc烧杯、聚酰胺薄膜、1000cc圆底烧瓶、抽滤装置、玻璃漏斗、脱脂棉、250cc圆底烧瓶、冷凝管、层析缸、电热套、循环水泵、试管。
五、实验内容
(一)芸香甙的提取
取槐花米20g,置于1000cc圆底烧瓶中,加0.4%硼砂水溶液200ml,在搅拌下加石灰乳调PH8,加热微沸30分钟,静置几分钟倾出上清液,用棉花过滤,药渣同上重复一次。
合并滤液用6N盐酸调PH2~3,放置(一夜以上)抽滤,得粗芦丁(滤饼用水洗3~4次),放置空气中自然干燥得粗品,称重、计算提取率。
(二)精制
取2g加蒸馏水400ml,加热煮沸溶解,趁热抽滤,滤液放置过夜,析晶,抽滤,得精制芸香甙。
烘干。
(三)芸香甙的检识反应
1.成盐反应:
取芸香甙10mg左右,置试管中加蒸馏水2ml,振摇,观察试管
有无变化,滴加1%氢氧化钠溶液数滴,振摇使芸香甙全部溶解成为黄色澄
明溶液,然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性反应,溶液则由澄明转为混
浊状态(若当时不出现混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再观
察)。
2.盐酸镁粉反应:
取芸香甙少许,置试管中,加乙醇2ml置热水浴中至溶解后,
加入金属镁粉少许,浓盐酸2~3滴,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至
深红色。
(四)芸香甙的水解
取芸香甙1g,置250cc圆底烧瓶中2%H2SO4溶液80ml,加热回流30分钟至1小时,开始加热10分钟为澄清液,逐渐析出黄色小针状结晶,既为槲皮素,抽滤得结晶,滤液保留检查糖(单糖),沉淀物用蒸馏水洗至中性,抽干水份,晾干称重,得粗制槲皮素。
(五)糖的纸层析检识
样品液的制备:
取水解滤液20ml,水浴上加热,于搅拌下加Ba(OH)2(或BaCO3)
细粉中和至中性,滤除白色硫酸钡沉淀(玻璃漏斗、棉花少许)),滤液浓缩至1~2ml作层析点样用。
对照品:
1%葡
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