常用试剂配制及显色方法详解.docx
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常用试剂配制及显色方法详解
常用试剂配制及显色方法详解
(一)通用显色剂
1.重铬酸钾--硫酸
一般有机物均能显色,不同化合物显示不同颜色。
喷洒剂:
5克重铬酸钾溶于100ml,40%硫酸中。
喷洒后加热至150oC斑点出现。
2.碘:
检查一般有机物
(1)碘蒸汽:
在一个密闭玻璃皿先放入碘片,使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色,有时在缸内放一盛水的小杯,增加缸内的湿度,可提高显色的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液,取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。
3.碘--碘化钾溶液:
很我有机物虽黄色(配法见后)。
4.5%--磷钼酸乙醇溶液:
喷后120oC烤,还原性物质显兰色,再用氨气熏,则背景变为无色。
5.20%磷酸乙醇溶液:
喷后120oC,还原性物质显兰色。
6碱性高锰酸钾试剂:
还原性物质在淡红背景上显黄色。
溶液I:
1%高锰酸钾溶液。
:
5%碳酸钠溶液。
溶液II
溶液I和溶液II等量混合使用。
7.中性0.05%高锰酸钾溶液:
易还原性物质在淡红背景上显黄色。
8.硝酸银--氢氧化铵(Tollen's--zoffaronl)试剂,喷后105oC烤5~10分钟,还原性物质显黑色。
溶液I:
0.1N硝酸银溶液。
溶液II:
氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和溶液II以1:
5混合。
注意:
放久则形成爆炸性的叠氦化银。
9硝酸银--高锰酸钾试剂:
还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。
溶液I:
0.1N硝酸银溶液:
2N氢氧化铵溶液:
2N氢氧化钠(1:
1:
2)。
临用前配制。
溶液II:
高锰酸钾0.5g,碳酸钠1g,加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。
10.四唑试剂:
还原性物质,在室温或微加热时显紫色。
溶液I:
0.5%四唑兰甲醇溶液。
溶液II:
6N氢氧化钠溶液。
临用前溶液I和溶液II等量混合。
11.铁氰化钾:
三氯化铁试剂:
还原性物质显兰色,再喷射2N/L盐酸溶液,则兰色加深。
溶液I:
1%铁氰化钾溶液。
溶液II:
2%三氯化铁溶液。
临用前溶液I和溶液II等量混合。
12.浓硫酸:
甲醇(1:
1)溶液,或5%硫酸的乙醇溶液,喷后100oC烤15分钟,各种不同物质显不同颜色。
13.萤光显色剂溶液:
试喷以下一溶液,不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。
A:
0.2%2.7--二氯萤光素乙醇溶液。
B:
0.01萤光素乙醇液
C:
0.1%桑色素乙醇溶液
D:
0.05罗丹明B乙醇溶液
E:
萤光素一溴,检不饱和化合物。
萤光素乙醇溶液
(1)0.1%
(2)5%溴的CCL4溶液。
喷洒
(1)以后,放置
(2)溶液的缸内,可在UV光下检查萤光,萤光素与溴化
,而光饱和化合物则与溴加成,保留了原来的萤光;合成曙红(ensln)(无萤光)
若点样量较多,则成黄色斑点,底板成红色。
14.碱式醋酸铅试剂(可做喷洒或沉淀试剂,多种有机化合物均反应)。
取Pbo14g置乳钵内,加蒸馏水10ml,研后成糊状后,倾入玻璃瓶中,乳钵用10ml蒸馏水洗净,洗液并入瓶中,加醋酸铅溶液(取醋酸铅22g,加蒸馏水70ml制成)70ml,用力振摇,放置七天,滤过,并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。
(二)生物碱显色剂
通用显色剂:
1.改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂:
生物碱和某些含氯化合物显橙红色。
溶液I:
碱式硝酸铋0.85g,溶于冰乙酸10ml和40ml.
溶液II:
碘化钾0.8g溶于水20ml.
储存液:
溶液I和溶液II等量混合(置棕色瓶中杨以长期保存)。
显色剂:
储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合,用前配制。
2.碘化铂钾(碘铂酸)试剂,不同的生物碱显不同的颜色。
10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀,临用前配制。
3.碘-碘化钾(Wagner)试剂:
生物碱显棕褐色。
碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中,加热,加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。
4.改良碘化铋钾:
碘,碘化钾(1:
1)试剂;生物碱显紫棕色或灰黑色。
5.硫酸铈--硫酸试剂(改良sonnensclein试剂):
喷后110oC烤几分钟,不同的生物碱显不同的颜色。
硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中,加三氯化乙酸1g,加热煮沸,放冷,逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。
6.碘化氯钾(vmayer)试剂(沉淀试剂):
取HgCL2(毒)1.35g加蒸馏水60ml溶解后,量取碘化钾5g,加碘馏水10ml使溶解将两液混合,加蒸馏水稀释使成100ml即得。
7.硅钨酸(Bertrand)试剂(沉淀试剂):
5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中,加稀盐酸使呈酸性反应即得。
(三)强心甙显色剂
1.碱性3.5--二硝基苯甲酸试剂:
强心甙显紫红色、几分钟后褪色。
2%3.5--二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液,用前按劳1:
1混合。
2.碱性三硝基苯:
在浅橙色背景上显橙红色。
溶液I:
间三硝基苯100mg。
溶于二甲基甲酰胺40ml,加浓HCL3~4滴,加水至100ml,避光能长期保存。
溶液II:
5%碳酸风溶液
先喷溶液I,再喷溶液II,喷后90~103.0oC烤5分钟。
3.三氯乙酸试剂:
喷后110oC烤7~10分钟,紫外光下观察萤光。
试剂I:
25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液,配制后可放置数日。
或用试剂II:
上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4:
1混合。
4.三氯化锑试剂:
喷后100oC烤5分钟,日光下或紫外光下观察。
25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。
5.磷酸--溴试剂
溶液I:
10%磷酸溶液。
溶液II:
溴化钾饱和溶液:
25%盐酸溶液(1:
1:
1)。
薄层用溶液I喷洒后,在125oC烤12分钟(薄层太湿时则烤的时间可适当延长),在紫外光下观察一次,将薄层再烤热,趁热喷溶液II,再在紫外光下观察。
6.Keller--Kllianl试剂:
(检查α--去氧糖)
试液:
100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀,试样1ml混匀。
试样1ml加试液2ml溶解后,沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。
渐变浅绿,兰色。
最后HAC层全部染成兰色。
(四)黄酮甙显色剂
黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色,用氨熏,喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液,则颜色变深或变色。
1.氨气
2.10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。
3.1%或5%碳酸钠溶液。
4.1%或5%三氯化铝乙醇溶液。
5.2%乙酸镁甲醇溶液。
6.饱和三氯化锑的氯仿溶液,100oC烤5分钟。
以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。
7.1~2%三氯化铁乙醇溶液。
中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。
8.1%
9.0.1N硝酸银溶液。
10.铁氰色钾--三氯化铁试剂。
溶液I:
2%铁氰化钾溶液。
溶液II:
2%三氯化铁溶液。
临用前溶液I与溶液II等量混合。
11.硼氢化钾试剂:
双氢黄酮化合物显红、橙红色。
溶液I:
1~2%硼氢化钾(钠)异丙醇溶液,必须新鲜配制。
溶液II:
浓盐酸
先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。
12.Shinoda试剂:
在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸,黄酮醇显红紫色。
制备硅胶薄层时,加入2%w/w锌粉混合,薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性,可在展开后先喷锌--丙酮混悬液,再喷盐酸溶液。
罗丹明--氨试剂。
溶液I:
0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。
溶液II:
浓氨溶液。
先喷溶液I,然后再将薄层放入氨汽槽内。
14.对氨基苯磺酸试剂。
溶液I:
对氨基苯磺酸盐溶液。
溶液II:
5%亚硝酸钠溶液。
将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中,到紫溶液25ml用冰冷却,加预冷的溶液II1.5ml。
15.硼酸--柠檬酸试剂
溶液I:
饱和硼酸的丙酮溶液。
溶液II:
柠檬酸丙酮溶液。
先喷溶液I,再喷溶液II。
福林试剂(FolinCiocalteu试剂)16.
钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中,再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml,将混合液回流煮沸10小时,然后加硫酸锂15g,水5ml及溴1滴,再回去流煮沸15分钟,所得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度(贮备液),溶液应不显绿色。
溶液I:
20%碳酸钠溶液。
溶液II:
临用前上述贮备液1份用水三分稀释。
先喷溶液I,稍干再喷溶液II。
(五)皂甙灶显色剂
1.25%磷钼酸乙醇溶液:
喷后在140oC加热5~10分钟皂甙元均呈深兰色。
2.三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液:
喷后在90oC烤10分钟(应在通风厨中进行),不同的皂甙元在可见光或紫外光下显出各种颜色。
3.硫酸:
甲醇(1:
2)溶液,喷后加热,不同的皂甙元可显红褐色、紫色、黄色或黑色,所显颜色与温度无关。
4.氟磺酸:
乙酸(1:
1)溶液,喷后130oC加热5分钟。
各种皂甙元可显天兰紫、粉红、淡棕等色,在紫外光下也显不同萤光。
5.碘蒸汽:
薄层置于碘蒸汽筒中,皂甙无皆显棕黄色斑点。
6.三氯快乙酸或三氯乙酸:
乙酸(1:
2)溶液,喷后在100oC加热20分钟皆显黄色。
7.2%血球生理盐水混悬液(溶血试验、检皂甙)。
取新鲜兔血(由心脏或静脉取血)适量,用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白,并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后,量取沉降红血球(可以管的离心管通接读取)用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用(贮存期2~3天)。
(六)蒽醌甙显色剂
蒽醌及其甙本身在日光下显黄色,在紫外光下则显黄,红橙色萤光。
在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液,则颜色变深或变色。
1.氨气
2.10%氢氧化钾、甲醇溶液。
3.3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
4.50%哌啶的苯溶液。
5.饱和喷酸锂溶液。
6.饱和硼砂溶液。
7.0.5%乙酸镁甲醇溶液:
喷后90oC烤5分钟。
8.0.5%乙酸铝溶液,喷后紫外光下看萤光。
9.0.5%牢固兰B试剂,喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。
也可先喷本试剂,再喷稀氢氧化钠溶液而显色。
也用于酚类及能偶芳香胺的显色。
溶液I:
新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。
溶液II:
0.1N/L氢氧化钠溶液。
先喷溶液I,喷溶液II。
(七)香豆精甙显色剂
1.0.5%碘的碘化钾溶液,香豆精各种颜色,很多其他类型的化合显色。
2.重氟化氨基苯磺酸试剂,香豆精显黄、橙、红、棕紫等颜色也用于酚类,芳香胺反转偶合的朵环化合物的显色。
对氨基苯横酸0.9g克加热溶于12N盐酸9ml,用水稀释到100ml,取此溶液10ml用冰冷却,加冰冷的4.5%亚硝酸钠溶液10ml,0oC放15分钟(在0oC可保存三天),用前加等体积1%碳酸钠溶液。
3.重氮化对硝基苯胺试剂、香豆精显黄、红、棕、紫等颜色,也用于酚类的显色。
对硝基苯苯胺0.7g溶于12N盐酸9ml,用水稀释到100ml,将此溶液逐渐滴加到冰冷的1%亚硝酸钠溶液5,再用冰冷的水稀释到100,需临用时新配。
4.4--氨基安替比林--铁氰化钾试剂:
香豆素和酚类显橙红至深红色。
溶液I:
2%4--氨基安替比林乙醇溶液。
溶液II:
8%铁氨化钾溶液。
先喷溶液I,再喷溶液II,再用氨气熏之。
5.稀氢氧化钠:
喷前喷后薄层在短波长的紫外光下观察萤光。
(八)挥发油显色剂
1.茴香醛--浓硫酸试剂:
喷后150oC烤。
挥发油中各成分显不同颜色。
浓硫酸1ml加到冰醋酸50ml中,冷后加茴香醛0.5ml必须临时配制。
2.萤光素--溴试剂:
检出含乙烯化合物。
(配法及使用见前)。
3.碘化钾--冰乙酸--淀粉试剂:
斑点显兰色则为过氧化物。
溶液I:
4%碘化钾溶液10ml与冰乙酸40ml混合,再加锌粉--小勺过滤。
溶液II:
新制的1%淀粉溶液。
先喷溶液I,5分钟后大量喷溶液II,直喷到薄层透明为止。
4.对二甲氨基苯甲醛剂;检出菌与菌前体在室温或80oC烤10分钟显深兰色。
对二甲氨基苯醛0.25克,溶于冰乙酸50g,85g磷酸5克和水20ml的混合液中,此试剂储于棕色瓶中能稳定数月。
5.异羟肟酸铁试剂:
斑点显淡红色,可能是酯和内酯。
溶液I:
盐酸羟胺5克溶于水12ml,乙醇稀释到50ml,冷处。
溶液II:
氢氧化钾10g溶于很少量水,再用乙醇稀释到50ml,储于冷处。
溶液III:
溶液I和溶液II以1:
2混合,滤去氯化钾沉淀,所得滤液必须放入冰箱中,可稳定两星期。
溶液IV:
三氯化铁(FeCL36H2O)10克溶于36%盐酸20ml,与乙醚200ml振摇,得均匀的溶液,密塞储存可长久使用。
先喷溶液III,在室温先干燥后,再喷溶液IV。
6.2.4--二硝基苯肼试剂,醛和酮化合物显黄色。
36%盐酸10ml加到2.4--二硝基苯肼试剂1克在乙醇1000ml的溶液中。
7.0.3%邻联二茴香胺冰乙酸溶液,醛和酮化合物显各种颜色。
8.三氯化铁试剂:
酚性物质显兰绿色。
1~5%三氯化铁的0.5N盐酸溶液。
9.4--氨基安替比林--铁氰化钾试剂:
酚性物质显橙红色至深红色。
溶液I:
2%4--氨基安替比林乙醇溶液。
溶液II:
8%铁氰化外溶液。
先喷溶液I,再喷溶液II,再用氨气熏之。
10.硝酸铈试剂:
醇在黄色背景显棕色。
硝酸铈铵6g溶于4N硝酸溶液100ml。
11.钒酸铵(钠)8--羟基喹啉试剂:
醇在兰灰色背景显淡红色,有时需做加热。
酸铵(钠)溶液1ml和25%8--羟基喹啉的6%乙醇溶液,1ml用苯30ml振1%
摇,争出灰兰色的苯溶液使用。
12.溴甲酚绿试剂:
有机酸显黄色。
双甲酮30mg溶于乙醇90ml,慢慢加入85%磷酸10ml,配制后的试剂放置于冷处能用几个星期,但新配的效果较好。
13.酚--硫酸试剂:
喷后110oC烤10~15分钟,糖显棕色,酚3g及浓硫酸
。
5ml溶于乙酸95ml
14.3.5--二氨基苯甲酸--硫酸试剂:
喷后100oC烤15分钟,2--去氧糖在日光下显红棕色,在紫外光下显黄绿色萤光。
甲基红1g及溴酚兰3g溶于95%乙醇1000ml。
15.溴粉兰指示剂,显黄色。
0.04mol/L溴酚兰乙醇溶液,用氢氧化钠溶液调至微碱性。
16.溴甲酚绿指示剂:
如展开剂中含乙酸,则喷前薄层在120oC烘烤除去,在兰色背景上显黄色。
溴甲酚绿0.04克溶于乙醇100ml,加0.1N氢氧化钠溶液至兰色刚刚出现。
17.溴甲酚紫指示剂,喷前薄层在100oC烤10分钟,冷到室温后,喷显色剂。
在兰色背景上显黄色。
溴甲酚紫0.04克溶于50%乙醇100ml,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH10.0。
18.溴甲酚紫柠檬酸试剂
溴甲酚紫25ml及柠檬酸100mg溶于丙酮:
水(9:
1)混合液100ml。
19.焦红栖溶液:
在灰或灰兰色背景上白色。
0.1%焦酚红水溶液:
2%氢氧化钠溶液(1:
1)混合。
百里酚酞碱溶液:
在灰或兰色背景上显红色或白色。
百里酚酞50mg.20.
21.二氯靛酚试剂:
喷后加热片刻,在天兰色背景上显粉红色如加热时间延生,则钼酸转变为白色,而其色羧不变故可识别酮酸。
2.6三氯靛酚0.1g溶于95%乙醇100ml。
22.芳香胺--还原糖试剂
芳香胺(如苯胺5g)和还有糖(如木糖5g)溶于95%乙醇
23.碘化物淀粉试剂:
在白色或浅兰色背景上显深兰色,灵敏度为2μg。
8%碘化钾溶液,2%碘酸钾溶液及1%淀粉溶液等到量混合,用前新鲜配制。
24.硝酸铈铵--引朵乙醇溶液。
溶液I:
10%硝酸铈铵溶液。
溶液II:
吲哚乙醇溶液。
25.联苯胺--亚硝酸钠试剂:
喷后在紫外光灯下254毫微米观察萤光。
溶液I:
联苯胺2.5克溶于浓盐酸7毫升及水500ml。
溶液II:
10%亚硝酸溶液。
临用前溶液I3份和溶液II2份混合。
(九)氨基酸显色剂
通用试剂
1.茚三酮试剂,用于氨基酸,氨及打官司基糖,喷后110oC加热泪盈眶至显出颜色。
试剂I:
茚三酮0.3g溶于下丁醇100ml中,加乙醇3ml或试剂II,茚三酮0.2g溶于乙醇中100ml。
为了使茚三酮的颜色稳定,采用下法:
硝酸酶试剂:
饱和硝酸酮溶液1ml与10%硝酸溶液及96%乙醇100ml混合。
方法:
用茚三酮剂显色后用硝酸酮试剂喷,斑点由兰紫色转成红色。
2.吲哚醌试剂:
吲哚醌于乙醇100中,加冰乙酸10。
3.茚三酮--硝酸酮试剂(Moffatt--Lytle反应)喷后在电炉上烤至刚刚显色,颜色在日光灯中逐渐加深,某些氨基酸首先显出颜色,用笔立刻将色点记下,许多氨基酸赕出特殊的颜色,不同的氨基酸显出的速度也有差别,。
4.2--萘醌--4--磺酸试剂(Folin试剂)喷后在室温干燥不同的氨基产生各种颜色。
1.2萘醌--4--碘酸钠的0.62克溶于5%碳酸钠溶液100ml制备。
5.氯气--联甲苯胺试剂。
氯化作用,薄层放在氯气中,假如氯气要从气筒中得到的放置5~10分钟,假如由1.5%高锰酸钾溶液及10%盐酸(1:
1)的混合物制得的,则需放置5~20分钟,然后将薄层置空气中顾委分钟以除去过量的氯气,再喷试剂。
试剂配制:
邻联甲苯胺160mg溶于乙醇酸30ml中,溶液用蒸馏水500ml稀释,然后再加碘化钾1克。
(十)糖显色剂
1.茴香醛--硫酸试剂:
喷后100~105oC烤,各种糖显不同颜色,浓硫酸1ml加到含茴香醛的乙醇溶液50ml中需临用前配。
2.1.3--二羟基苯萘酚--硫酸试剂:
在110oC予热的薄层上喷试剂几分钟后在白色背景显不同颜色,再加热,颜色加深背景也变深。
3.苯胺--二苯胺--磷酸试剂:
喷后85oC烤10分钟各种糖不同颜色。
二苯胺4g,苯胺4ml及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。
4.茴香胺--邻苯二甲酸试剂:
喷后100oC烤10分钟。
已糖显颜色。
去氧已糖显色,戊糖显红紫色,醛酸显棕色。
0.1M对茴香胺和0.1M邻二甲酸的乙醇溶液。
5苯胺--邻苯二钾酸试剂:
喷后105~110oC烤10分钟,糖显红棕色。
6.α--苯胺--邻苯二钾酸试剂:
喷后100oC烤3~6分钟,多数糖显兰色。
鼠李糖显橙色,所显颜色于室温稳定2~3天。
15%萘酚乙醇溶液21ml,浓硫酸13ml,乙醇87ml,及水8ml混匀后使用。
7.3--二羟基嗪酚--磷酸试剂:
喷后105oC烤5~10分钟,酮糖显红色,醛糖显淡兰色。
0.2%1.3--二羟基试剂:
喷后120oC烤15~20分钟,多数糖在白色背景上显暗红色,继续加热则变成浅紫色。
8.百里酚及浓硫酸5ml溶于乙醇95ml。
9.双甲酮--磷酸试剂:
喷后110oC烤15~20分钟,仅酮显暗绿灰色。
10.Kellev--Killani试剂:
(检查α--去氧糖)
配法及使用见附录二(强心甙项下)
11.3.5二氨基苯甲酸二盐酸1克溶于80%磷酸25毫升磷酸25毫升加水稀释至60毫升。
喷后100oC烤10~15分钟,糖显棕色,在紫外光下显黄绿色萤光。
12.酚--硫酸试剂
酚3克及浓硫酸5毫升溶于乙醇95毫升。
喷后100oC烤10~15分钟,糖显棕色。
13.对硝基苯胺--过碘酸试剂。
:
饱和偏高碘酸溶液1份加水2份稀释。
溶液I
溶液II:
1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。
先喷溶液II:
放置10分钟,再喷溶液II,去氧糖显黄色,紫外先下显强
萤光,再喷5%氢氧化钠醇溶液,颜色转绿乙二醇同样显色。
(十一)鞣质
检查鞣质的试剂除检一般酚性物试剂均能反应以外,现列出二种较专一的
沉淀如下:
1.氯化钠明胺试剂
取明胺1克溶于50水中,然后加1.0gNaCL使溶解后,加水稀释至100ml
即得。
保存期2~3个月(10oC左右)。
2.铁铵明矾试液:
即硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O
取硫酸铁铵结晶1克加蒸馏水溶解后,使成100ml即得。
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