实验水分活度的测定.docx
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实验水分活度的测定
实验一、水分活度的测定
一、原理
水分活度(WaterActivity)主要反映物料平衡状态下的水分状态。
AW—1型智能水分活度测定仪由高精密度传感器采样,单片机为核心,进行信号采集和处理,并用标准盐饱和溶液分段校准。
可在短时间内精确测定样品的水分活度。
图1整机连接示意图图2前面板示意图
二、操作方法
⒈将测量头小心接入主机(见图1)。
⒉接通电源开关,电源指示灯亮,蜂鸣器鸣叫两声,数码显示亮,表示开机正常。
数秒后,根据当时温度,自动重新设置测量时间,秒点开始闪烁,进入稳定的测量周期。
⒊校准
⑴估计样品Aw值,选择Aw最为接近的标准盐进行校准。
按“标准”键(见图2),每按一次分别选中“氯化钾”、“碘化钾”、“硝酸镁”和“自选”,对应红灯亮。
标准盐饱和溶液Aw值与温度的关系见表一。
表一、三种盐在不同温度下的Aw值
温度(℃)
硝酸镁
碘化钾
氯化钾
0
0.604
0.744
0.885
5
0.598
0.733
0.877
10
0.574
0.721
0.868
15
0.559
0.710
0.859
20
0.544
0.700
0.851
25
0.529
0.689
0.843
30
0.514
0.679
0.836
⑵选中的标准饱和盐溶液倒入玻璃器皿中约1/3~1/2的高度(玻璃器皿中应有沉淀物),把器皿放入测试盒,顺时针方向旋紧密封,然后将测试盒小心与主机相连。
⑶按“样品”键,使“样品”显示为对应的插座号,按“-”键,则倒计时开始计时。
当环境温度在20℃以下时,测量时间为1.5小时,在20℃以上时(含20℃),为1小时。
⑷同时按“+”、“-”键,校准红灯亮,当时间到00后,测量时间到,蜂鸣器鸣报数秒钟,校准红灯熄灭,这时Aw显示为该标准液的Aw值。
⑸取出标准液,清洗并干燥器皿。
⑹自选标准液Aw的设定:
按“标准”键,选中“自选”,灯亮,按“自选”键,Aw的最末一位闪烁,这时按“+”,Aw的最末一位增加1,按“-”,则减少1。
如按“+”或“-”键的时间超过2秒,可快速增减。
调到预定值后,按“自选”键,Aw设定完毕,停止闪烁,显示测量值,其它步骤按⑵、⑶、⑷、⑸做。
⒋测量样品
校准完毕后(如无需再校准,可直接进行测量,不必每次都先校准后测量),可测量样品,把样品放入玻璃器皿中,块状样品要碾成芝麻粒大小,越小越好。
然后顺时针方向旋紧密封,将测试盒小心与主机相连。
重复步骤⑶,当时间到00后,测量时间到,蜂鸣器鸣报数秒钟,这时Aw显示为该样品的Aw值。
⒌从玻璃器皿中取出样品,清洗并干燥器皿。
三、使用注意事项
⒈测量头(测试盒内器件)为贵重的精密器件,需轻拿轻放,严禁直接接触样品和水,不能用手触摸。
如不小心接触了液体,需自动蒸发干后方能使用。
⒉为提高测量精度,测试盒及玻璃器皿应是干燥和清洁的,每次用毕后应清洗干燥处理。
测量Aw>0.95样品时,测量Aw结束后应立即把测量头放在通风处,经10分钟后方能重新测量。
⒊配制饱和盐溶液时,应用蒸馏水稀释,放置几天后有固体沉淀物,才能使用。
不必每次测量之前校准,一般在隔几天或要求测量结果特别正确时进行校准。
实验二、总糖的测定
一、原理
样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质,在碱性溶液中能将铁氰化钾还原。
根据铁氰化钾的浓度和检液滴定量可以计算出样品中糖的含量。
反应式如下:
C6H12O6+6K3Fe(CN)6+6KOH→(CHOH)4·(COOH)2+6K4Fe(CN)6+4H2O
当滴定到终点时,稍微过量的转化糖立即将次甲基蓝还原为无色的隐色体,此时颜色消失。
反应如下:
二、试剂与器材
⒈1%的次甲基蓝指示剂。
⒉盐酸:
分析纯。
⒊20%和30%氢氧化钠溶液。
⒋1%铁氰化钾溶液:
置棕色瓶中保存。
每次使用前按下述方法标定铁氰化钾的浓度。
准确称取经105℃烘干并冷却之后的蔗糖1.000g,用少量水溶解并移入500ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。
取出此液50ml于100ml容量瓶中,加盐酸5ml摇匀,置65~70℃水浴上加温30min,取出,迅速冷却至室温。
用30%氢氧化钠溶液中和,加水至刻度,摇匀,倒入滴定管中。
吸取已配制好的铁氰化钾溶液5ml于150ml三角瓶中,加入2.5ml10%氢氧化钠溶液、12.5ml水和洁净的玻璃珠数个,于石棉网上加热至沸腾,保持1min。
然后加入次甲基蓝指示剂1滴,立即以糖液滴定至蓝色消失为止,记录用量。
正式滴定时,先加入比预实验少0.5ml的糖液,煮沸1min,加入次甲基蓝指示剂1滴,再用糖液滴定至无色。
按下述公式计算铁氰化钾的浓度:
式中C:
相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g);
V:
滴定时消耗糖液的体积(ml);
W:
称取的蔗糖重量(g);
0.95:
换算系数(1g蔗糖可转化为0.95g转化糖)。
主要器材:
滴定管,容量瓶、三角瓶。
三、操作步骤
称取样品5~10g(视含糖量多少而增减),用200ml左右的水洗入250ml容量瓶内(样品中如含有较多的蛋白质、色素、胶体等可逐渐加入20%醋酸铅溶液10~15ml,至沉淀完全为止。
并加入10~15ml10%磷酸二氢钠溶液,至不再产生沉淀为止)。
加水至刻度,摇匀过滤。
吸取滤液50ml于100ml容量瓶中,按上述铁氰化钾标定方法进行转化、中和及滴定(以样液代替糖液,其余操作相同)。
按下述公式计算总糖含量:
式中A:
相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g);
V:
滴定试样液消耗体积(ml)。
四、注意事项
⒈当滴定到达终点时,过量的转化糖将指示剂次甲基蓝还原为无色的隐色体。
这种隐色体容易受空气中的氧所氧化,很快又变为次甲基蓝而显色。
⒉整个加温过程应在低温电炉上操作,这样重现性好、准确、误差小。
滴定要迅速,否则滴定终点不明显。
实验三、蜂蜜中果糖含量的测定
一、原理
果糖是具有酮基的还原糖(酮糖)。
测定时可用直接滴定法测定样品中总的还原糖含量,然后用碘量法测定样品中醛糖的含量,总的还原糖含量减去醛糖的含量即是果糖的含量。
二、蜂蜜中总还原糖含量的测定(直接滴定法)
⒈原理
将一定量的硫酸铜液(菲林试剂甲)和碱性酒石酸钾钠液(菲林试剂乙)等量混合,硫酸铜液与氢氧化钠作用,生成兰色氢氧化铜沉淀,氢氧化铜立即与酒石酸钾钠作用,生成可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下(煮沸),以次甲基蓝作指示剂,用处理好的样品液滴定,样品液中还原糖与酒石酸钾钠铜反应,生成红色的氧化亚铜沉淀,达到终点时,稍过量的还原糖把次甲基蓝还原,溶液由蓝色变为无色,即为终点。
根据样液消耗量可计算还原糖含量,反应过程如下:
CuSO4+2NaOH=2Cu(OH)2↓
⒉试剂
⑴菲林试剂甲:
称取硫酸铜34.63g,加蒸馏水溶解后,置于500ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。
⑵菲林试剂乙:
称取酒石酸钾钠173g及氢氧化钠50g,加蒸馏水溶解后置于500ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀,过滤后使用。
⑶标准还原糖液(2mg/ml):
称取纯蔗糖9.5g,溶于50ml水中,加6mol/L盐酸5ml,在20~25℃室温下静置5d(或煮沸15min),使蔗糖转化,冷却后移入1000ml容量瓶中,加水稀释至刻度,再从稀释了的糖液中吸取100ml放入500ml容量瓶中,加1%酚酞2~3滴,以6mol/L氢氧化钠溶液中和后加水稀释至刻度,即为转化糖溶液。
此液1ml含转化糖2mg。
⑷1%次甲基蓝溶液。
⒊操作步骤
⑴菲林试剂的标定。
准确吸取配好的菲林试剂甲、乙各5ml混于三角瓶中,加次甲基蓝指示剂2滴,加热至沸,由滴定管中滴入糖液,至蓝色完全褪尽,溶液呈清亮为止,根据滴定所用转化糖的体积校正菲林试剂10ml相当的转化糖的克数。
⑵称样品10g,小心转入100ml容量瓶中,蒸馏水定容,吸10ml样品液放入250ml烧杯中,加水50ml,加2.5ml浓盐酸(12mol/L)在沸水中煮40min,取出冷却,此时样品中的蔗糖水解成还原糖,然后加1滴1%的酚酞,加6mol/L氢氧化钠中和至微红色,转移至100ml容量瓶中,定容,摇匀。
准确取菲林试剂甲、乙各5ml,放入三角瓶中,加次甲基蓝指示剂2滴,加热至沸,用样品溶液进行滴定,直至样品转化液将菲林试剂滴定至沸腾的泡沫为清亮,同时有红棕色沉淀出现为终点。
记录样品液的体积,再重复一次。
⒋计算
还原糖的含量(%)=
式中A:
10ml菲林试剂所相当的还原糖的质量(g);
V:
滴定时所用样品液的体积(ml);
m:
所称样品的质量(g)。
⒌注意事项
因次甲基蓝在碱性溶液中被过量的还原糖还原成无色,在常温下又极易被大气中的氧氧化成蓝色,影响终点的确定,故滴定时瓶中须保持沸腾状态,同时滴定时要快速,尽可能在短的时间内滴定到终点。
三、蜂蜜中醛糖含量的测定(碘量法)
1.原理
凡是含有游离醛基的和半缩醛羟基的糖,在碱性溶液中与碘作用,被氧化为相应的一元酸。
由于加入的碘量是已知过量的,没参加反应的碘与氢氧化钠作用生成次碘酸钠,存在于溶液中,当加入酸时,次碘酸钠与碘化钠(碘与氢氧化钠作用产生)反应又析出碘。
用硫代硫酸钠标准溶液滴定剩余的碘,就可计算出糖在氧化时消耗的碘量,由消耗的碘量就可计算出醛糖的含量。
I2(过量部分)+2NaOH=NaIO+NaI+H2O
NaIO+NaI+2HCl=2NaCl+I2+H2O
I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6
2.试剂
⒈0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液。
⒉0.1mol/L碘标准溶液。
⒊0.1mol/L氢氧化钠溶液。
⒋0.5mol/L盐酸。
⒌0.5%淀粉指示剂。
3.操作步骤
准确称取样品10.00g,加蒸馏水转移到250ml容量瓶中,加水定容,摇匀,放置30min,过滤,取滤液50ml于碘量瓶中,准确加入0.1mol/L碘标准溶液25ml,在不断振摇下,加入37.5ml0.1mol/L氢氧化钠溶液,加塞摇匀,放于暗处15min。
取出,加8ml0.5mol/L盐酸,摇匀后用0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定,直至溶液由棕色变为淡黄色时,加入淀粉指示剂1ml,摇匀,继续滴定到溶液蓝色消失为止(在半分钟内不再显蓝色),记录硫代硫酸钠标准溶液用量。
以同样步骤作试剂空白实验。
4.计算
式中c:
硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol/L);
V1:
空白滴定时所消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(ml);
V2:
样液滴定时所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积(ml);
m:
样品质量(g);
180.12:
葡萄糖的摩尔质量(g/mol)。
5.注意事项
⑴样品中不可含有乙醇、丙酮等成分,因为它们会消耗碘。
蔗糖、丙三醇、甘露醇等也与碘反应,但影响较小。
⑵样品中醛糖含量较高时,此法测定误差为±0.5%。
四、蜂蜜中果糖含量计算
果糖含量=总还原糖含量-醛糖含量
实验四、蔗糖转化度的测定
一、原理
蔗糖的转化反应一般是在H+的催化下进行,其化学方程式为:
C12H22O22(蔗糖)+H2O=C6H12O6(葡萄糖)+C6H12O6(果糖)
因水量较多,在反应进行中,水的浓度基本不变,所以反应速度只与蔗糖的浓度有关。
蔗糖、葡萄糖、果糖都具有旋光性,但旋光能力不同,故可以从反应过程中体系旋光性的变化,测定反应速度。
当反应开始时,体系为右旋,随着反应的进行,葡萄糖和果糖逐渐增多。
由于果糖的左旋程度大于葡萄糖的右旋程度,所以,在反应过程中,体系的旋光性,由右旋逐渐变成左旋,因此可以根据体系旋光度的变化,测定反应速度。
设体系的起始旋光度为a。
,反应终了时体系的旋光度为a∞,反应到t时刻的旋光度为at,若蔗糖的起始浓度为a,在t时刻反应掉的蔗糖浓度为X,
即为此时反应了的蔗糖分数,
表示剩余的蔗糖分数。
at即应为:
将上式两边各减a∞,通过运算,即得:
通过此式可求出某时t的转化量X。
二、仪器药品
旋光仪1台,秒表1块,容量瓶(50ml)1只,锥形瓶(150ml)2只,蔗糖(分析纯),HCl溶液(3mol/L)。
三、实验步骤
⒈调节旋光仪。
使用方法见附录。
⒉用天平称取10g蔗糖于烧杯中,先加入少量蒸馏水溶解之。
然后转入50ml容量瓶中,用水稀释至刻度;用移液管吸取25ml3mol/LHCl溶液于锥形瓶中,用另一移液管吸取蔗糖溶液25ml于另一锥形瓶中。
⒊洗净旋光管,将一端加上盖,盛满蒸馏水,使液体在另一端形成一凸出的液面,然后从旁边推上玻璃片,以免管内存在空气泡。
再旋上套盖,使玻璃片紧贴于旋光管,勿使漏水。
但必须注意,旋紧套盖时不能用力过猛,以免压碎玻璃片。
用滤纸将旋光管擦干,再用擦镜纸将旋光管两端的玻璃片擦净,将旋光管放入旋光仪内。
打开钠光灯,调整目镜聚焦,使视野清楚,然后旋转检偏镜至观察到两个分视野暗度相等为止。
记下检偏镜之旋转角a0,重复测三次,取其平均值。
此平均值即为零点,用来校正仪器的系统误差。
⒋将HCl溶液倒入蔗糖溶液中,当倒入一半时,按下秒表,作为反应起点。
再将溶液倒回盛HCl溶液的瓶中,摇匀。
取少许溶液,淋洗旋光管2~3次,再将溶液装入旋光管中,盖好盖子并擦净,立即放入旋光仪中,测定旋光度at。
每隔5分钟读数一次。
整个实验进行90~100分钟。
⒌开始测at时,立即将锥形瓶中剩余的溶液置于50~60℃恒温箱中,恒温40min。
然后冷至实验温度,测其旋光度,此即a∞。
必须注意,恒温箱的温度不可太高,否则会产生副反应,溶液颜色变黄。
实验结束后,立即将旋光管洗净。
在整个实验过程中,应注意避免旋光仪被盐酸腐蚀。
五、数据处理
将实验的测定结果列入下表:
a∞=
t(min)
at
at-a∞
X
附录旋光仪的使用方法
⒈基本原理
旋光仪的光学系统如图1所示,它采用三分视野的方法确定光学零位。
当钠光灯源射出的光线经聚光镜、滤色镜、起偏镜后,变成平面偏振光。
它在半波片外产生三分视界。
操作者通过检偏镜及物镜、目镜组可以观察到三分视界的三种变化(图2)。
转动检偏镜,当其在零度时(出厂时已调好),视界中的三部分光度(c)是一致的。
当放入装有旋光性物质的旋光管时,由于样品的旋光性,致使平面偏振光产生一定角度的旋转,从而使零度视界(c)发生变化(失去c,出现a、b)。
转动检偏镜,再次出现零度视界的亮度,此时检偏镜旋转的角度就是该样品的旋光度,通过放大镜可以从度盘上读取旋光度值。
⒉使用方法
(1)接通电源,开启开关,预热5分钟,调节目镜焦距,使两个半圆十分清晰后,开始工作。
(2)零位校证。
测定前在末放入旋光管或放进充满蒸馏水的旋光管时,观察零度视界是否一致,如不一致,说明有零位误差,应在测量时加减此偏差值;或者,放松度盘盖背面的四个螺丝,微微转动度盘盖进行校正。
一般校正不得大于0.5左右。
(3)装样。
将旋光管先用蒸留水洗净,擦净旋光管两端的玻璃片,旋紧旋光管一端的盖子,从另一端管口注入待测液,使液面凸出管口少许,取玻璃片沿管口推入盖好,不能留有气泡。
(4)旋光值的测定。
转动度盘和检偏镜。
当视界中的亮度一致时,才能从度盘上读数。
刻度盘上的旋转方向为顺时针时,读为“+”值,是右旋物质;相反时为“-”值,是左旋物质。
(5)双游标的读数按下式计算:
式中Q:
计算值,A、B:
从两游标窗上分别读取的数值,当A=B时,说明没有偏心差。
3.注意事项
⑴旋光仪连续使用不能超过2小时,如需长时间测定,应在中间关熄仪器15分钟,并给与降温条件使钠光灯冷却,以免钠光亮度及寿命下降。
⑵旋光管用后,一定洗净、吹干,镜片要防止生霉,用柔软绒布擦净,不能用手直接擦,旋光管上的橡度垫要涂滑石粉。
⑶镜面要防污,用二甲苯擦净后,放入布套内保存。
仪器要在干燥、通风及防尘的条件下存放。
实验五、焦糖的制备及色率测定
一、原理
焦糖生产主要有两种途径:
一是羰氨反应(即美拉德反应),指糖(羰基)在有氮(氨基)化合物参与下一起加热所起的反应,经过一系列的过程,最终生成结构复杂的高分子类黑色素的过程。
二是焦糖化反应,是指糖类在没有氨基化合物参与下,加热到其熔点温度以上时,生成黑褐色色素物质的反应。
焦糖色的深浅,用EBC单位表示。
根据欧洲啤酒酿造学会(EBC)规定,0.1%焦糖色,用1cm的比色皿,于610nm处吸光度为0.076时,相当20000EBC单位。
二、试剂与材料
⒈蔗糖、葡萄糖。
⒉10%硫酸铵溶液:
称取10g硫酸胺,加水溶解至100ml。
⒊pH4.5的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液:
称取2.1g柠檬酸,加水溶解至100ml,加氢氧化钠至溶液pH=4.5。
⒋6%醋酸溶液:
取6.0ml冰醋酸,加水稀释至100ml。
⒌80%乙醇。
⒍氯化钠。
三、操作方法
㈠焦糖的制备
⒈称取蔗糖10g放入磁蒸发皿中,加水0.5ml,用电炉缓慢加热至170℃左右,关闭电炉,在190~195℃条件下恒温10min,观察颜色的变化及黑色素的形成。
然后把30ml的热水少量多次的慢慢加入焦糖液中,不断搅拌使之溶解(加水速度不应过快,以免焦糖结块),再加热、加一定量的水使之完全溶解。
冷却,加水定容至100ml,可制得10%焦糖的稀释液,过滤备用。
编号为Ⅰ号。
⒉称取葡萄糖10.0g,放入瓷蒸发皿中,加水1ml,在搅拌下缓慢加热至糖液温度为125~130℃时,关闭电炉,待糖液温度升至140℃时,小心加入0.5ml10%(NH4)2SO4溶液,然后继续搅拌加热至155℃时,关闭电炉,在155~165℃条件下恒温10min。
按上述方法加热溶解后,定容至100ml。
可制得10%焦糖的稀溶液,过滤备用。
编号为Ⅱ号。
㈡焦糖色率(EBC单位)的测定
⒈用刻度吸管吸取Ⅰ、Ⅱ号滤液1.0ml,分别移入100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,配成0.1%样品稀释液。
⒉用分光光度计,以蒸馏水调零,用1cm比色皿,于610nm波长处分别测定其吸光度。
⒊计算
式中X:
色率,EBC单位;
A:
610nm处测定样品的吸光度;
0.076:
0.1%焦糖标准色于610nm处的吸光度。
实验六、果胶的制备及性质测定
一、果胶的制备
㈠原理
果胶物质可分为三类,即原果胶、果胶及果胶酸,其基本结构是多聚半乳糖醛酸,通常以部分甲酯化状态存在,分子量高达20000左右。
原果胶不溶于水,主要存在于初生的细胞壁中,在稀酸长时加热或煮沸条件下,果皮中的原果胶发生水解,甲酯化程度降低及苷键断裂而溶于水,根据果胶不溶于乙醇的性质,用酒精沉淀提取果胶。
㈡试剂及材料
⒈0.5%HCl溶液:
量取12ml浓盐酸,加水稀释至1000ml。
⒉1mol/LNaOH溶液。
⒊95%乙醇。
⒋柑桔皮或柚子皮。
㈢操作方法
⑴称取果皮50g,切碎,放入沸水中煮2min,而后用清水漂洗,以除去色素、苦味物质等非胶物质。
⑵把上述处理好的果皮放入500ml烧杯中,加0.5%HCl250~300ml,一般以浸没果皮为度,在搅拌下提取20min。
⑶趁热用4层纱布过滤,用少量50℃的热水分次将滤渣洗涤2~3次,洗液并入滤液,最后滤液总体积控制在150ml,冷却至室温。
⑷用1mol/LNaOH调滤液pH为3~4。
⑸在搅拌下缓慢加入95%酒精100ml,待果胶呈棉絮状沉淀后,用四层纱布过滤,除去大量水分,滤渣即是粗制果胶产品。
二、果酱的制备
㈠原理
果胶是亲水性胶体,在pH=2.0~3.5,蔗糖含量65~70%的条件下,适当浓度的果胶水溶液(0.3~0.4%)可形成具有一定强度的三维网状结构凝胶,其主要作用力是分子间的氢键及静电引力。
果酱、果冻等食品就是利用这些特性生产的。
㈡试剂及材料
白糖,柠檬酸,自制果胶,柠檬酸钠。
㈢操作方法
⑴配方。
70g蔗糖;柠檬酸钠0.4g;柠檬酸0.5g;水20ml;自制果胶适量。
⑵将柠檬酸钠、柠檬酸溶于20ml温水中,用蔗糖把果胶充分拌匀,加入柠檬酸水溶液中。
⑶在不断搅拌下,小火加热至沸,再熬煮10~15min,以糖液能挂珠为度。
冷却,观察凝胶的形成。
实验七、固形物含量的测定
(折光仪法)
一、原理
折射率和平均色散是物质的重要光学常数之一,能借以了解物质的光学性质、纯度、浓度及色散大小等。
折射仪是一种能测量透明、半透明的液体或固体折射率和平均色散的仪器,并能测定糖溶液内含糖量浓度和不纯糖溶液中的固形物含量,所以用折射仪可直接测定样品中的固形物含量。
二、材料、仪器
⒈材料:
苹果、梨、果汁等。
⒉仪器:
阿贝折射仪、分析天平、研钵、滴管。
三、操作步骤
⒈取50.00g样品放入研钵中磨碎,果汁过滤后备用。
⒉打开折光仪,先用标准玻璃块校准读数,方法如下:
将标准玻璃块之抛光面上加一滴溴代萘,贴在折射棱镜之抛光面上,标准玻璃块之抛光面之一端应向上,以接受光线,打开小反光镜4,旋转棱镜转动手轮2,使读数镜内指示于标准玻璃块上之刻度值,观察望远镜内明暗分界线是否在十字线中间,若有偏差,则用附件方孔调节扳手转动示值调节螺钉9,使明暗分界线调至中央,在以后的测量中示值调节螺钉9不许再动。
然后,取下标准玻璃块,擦净进光棱镜和折射棱镜,以免留有其它物质影响测量精度。
⒊把被测液体用滴管加在进光棱镜的磨砂面上,旋上棱镜锁紧手柄12,要求液体均匀无气泡并充满视场(若被测液体为易挥发物则在测量过程中须用针筒在棱镜组侧面的下孔内加以补充)。
⒋调节两反光镜使二镜筒视场明亮。
⒌旋转手轮
(2)使棱镜组(13)转动,在望远镜中观察明暗分界线上下移动,同时旋转阿米西棱镜手轮(10)使视场中除黑白二色外无其它颜色,当视场中无其它颜色且分界线在十字中心时,观察读数镜视场左边所指示刻度值即为固形物含量或糖的含量。
⒍仪器使用完毕后必须做好清洁工作。
附录:
WAY——1型阿贝折射仪结构示意图
1底座2棱镜转动手轮3圆盘组4小反射镜5支架6读数镜筒7目镜8望远镜筒9示值调节螺钉10阿米西棱镜手轮11色散值刻度圈12棱镜锁紧扳手13棱镜组14温度计座15恒温器接头16保护罩17主轴18反射镜
实验八、脂质的提取及薄层层析
一、原理
生物组织含有多种脂质成分,包括三酰甘油、胆固醇、脑磷脂和卵磷脂等,它们大多与蛋白质结合成疏松的复合物。
要将这类脂质提取出来并与蛋白质分离,所用提取剂必须包含亲水性成分和形成氢键的能力,氯仿-甲醇(2∶1,V/V)混合液就是符合要求的生物组织提取剂之一。
生物组织脂质提取液,经过多次水洗,弃去含蛋白质的水层,留下溶有脂质的氯仿层。
通过硅胶G薄层层析,氯仿层中的脂质成分可被一一分开、检出。
二、试剂与器材
⒈脂质提取剂:
氯仿-甲醇(2∶1,V/V)。
⒉200目的硅胶G粉。
⒊无水硫酸钠。
⒋乙酸。
⒌碘。
⒍展层剂:
氯仿∶甲醇∶乙酸∶水=170∶30∶20∶7(V/V)。
主要器材:
刻度试管、玻璃板、烘箱、干燥箱、点样器、电吹风、层析缸等。
三、操作步骤
⒈脑组织(或蛋黄)脂质的提取:
称取脑组织(或煮熟的蛋黄)2g,放于研钵中磨细。
另取5倍量氯仿-甲醇(2∶1,V/V)混合溶剂,一边研磨,一边慢慢加入混合溶剂,在保持均匀的状态下提取10min。
然后经滤纸过滤到刻度试管中,于滤液中加入1/2体积的水振摇后静置,于是逐渐分为两层,上层为水层,下层为氯仿层,弃去水层,留下氯仿层,继续
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- 实验 水分 测定