移植免疫及其免疫检测.ppt
- 文档编号:2703468
- 上传时间:2022-11-08
- 格式:PPT
- 页数:73
- 大小:871.50KB
移植免疫及其免疫检测.ppt
《移植免疫及其免疫检测.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《移植免疫及其免疫检测.ppt(73页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
第二十六第二十六章章移植免疫及其免疫检测移植免疫及其免疫检测移植移植(transplantation)是指将健康细胞、组织)是指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和(或)功能的用以替代或补偿机体所丧失的结构和(或)功能的现代医疗手段。
被移植的细胞、组织或器官称移植现代医疗手段。
被移植的细胞、组织或器官称移植物(物(graft),提供移植物的个体称为供体),提供移植物的个体称为供体(donor),接受移植物的个体称为受体(接受移植物的个体称为受体(recipient)。
)。
自体移植自体移植同系移植同系移植同种异体移植同种异体移植异种移植异种移植原位移植原位移植根据移植部位分类根据移植部位分类异位移植异位移植器官移植器官移植移植物种类分类移植物种类分类支架组织移植支架组织移植细胞移植细胞移植根据移植物来源分类根据移植物来源分类移植的类型移植的类型移植名称移植名称供者、受者关系供者、受者关系举例举例自体移植自体移植同一个体同一个体自体皮片移植自体皮片移植同系或同基因移植同系或同基因移植同系或同基因同系或同基因人的单卵双生子间的器官移植人的单卵双生子间的器官移植的个体间的个体间同品系小鼠的皮片移植同品系小鼠的皮片移植同种异基因移植同种异基因移植同种不同基因同种不同基因人与人之间的肾移植人与人之间的肾移植的个体间的个体间不同品系小鼠间的皮片移植不同品系小鼠间的皮片移植异种移植异种移植异种动物间异种动物间狗的器官移植给猩猩狗的器官移植给猩猩猪的器官移植给狗猪的器官移植给狗移植种类和命名移植种类和命名第一节第一节器官移植与移植免疫的特点器官移植与移植免疫的特点移植手术后移植物能否存活取决于:
移植手术后移植物能否存活取决于:
1.移植器官在移植过程中活力的保存;移植器官在移植过程中活力的保存;2.手术时血管吻合和血液循环重建的质量;手术时血管吻合和血液循环重建的质量;3.移植排斥反应的控制。
移植排斥反应的控制。
一、器官和组织移植的一般规律一、器官和组织移植的一般规律1.移植器官或组织的抗原性异物属性移植器官或组织的抗原性异物属性2.排斥移植物的记忆特性排斥移植物的记忆特性3.负向免疫调节的必要性负向免疫调节的必要性二、二、HLA是诱导排斥反应最强的靶抗原是诱导排斥反应最强的靶抗原主要组织相容性复合体(主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)编码的人类白细胞抗原()编码的人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA),是不同个体间进行器官或组织),是不同个体间进行器官或组织细胞移植时发生排斥反应的主要成分,这种代表个体特异细胞移植时发生排斥反应的主要成分,这种代表个体特异性的同种抗原又称组织相容性抗原性的同种抗原又称组织相容性抗原(histocompatibility)或移或移植抗原植抗原(transplantationantigen)。
HLA是人体多态性最丰富的基因系统。
是人体多态性最丰富的基因系统。
HLA的遗传特征的遗传特征HLA分型分型要比要比ABO血型血型复杂的多,每个人不是从父母分别得到一个复杂的多,每个人不是从父母分别得到一个基基因因,而而是是得得到到一一串串基基因因(HLA单单倍倍型型)。
每每人人遗遗传传到到二二串串“冰冰糖糖葫葫芦芦,其其上的上的“红果红果”(基因基因)以以A、B、C、D、DR、DQ和和DP为序。
为序。
A有有28种种红果红果(分别记为分别记为A1、A2、A3、A9.),B有有61种种(记为记为B5、B7、B8、B12.),DR有有24种种(记为记为DR1、DR2、DR3、DR4.)等。
等。
七七彩彩红红果果共共有有164种种编编号号,如如不不同同遗遗传传排排列列的的红红果果随随机机组组合合,按按理理论论推推算,算,“冰糖葫芦冰糖葫芦”有五亿多种变化,能组合有五亿多种变化,能组合33亿多种亿多种HLA分型分型。
理论推测的理论推测的HLA分型分型数量巨大,但对一个具体的民族来说并非如此。
数量巨大,但对一个具体的民族来说并非如此。
在三类在三类HLA分子中,分子中,、类分子是触发移植排斥反类分子是触发移植排斥反应的首要抗原,尤其是应的首要抗原,尤其是HLA-DR位点的抗原分子位点的抗原分子HLA的识别方式的识别方式:
直接识别直接识别间接识别间接识别HLA发挥双重作用发挥双重作用:
介导宿主抗移植物反应介导宿主抗移植物反应(HVGR);参与移植物抗宿主反应参与移植物抗宿主反应(GVHR)。
第第二二节节HLA配型与应用分析配型与应用分析HLA分型方法的改进和不断完善,使得分型方法的改进和不断完善,使得HLA复杂的多态性更加显现,亦推动了复杂的多态性更加显现,亦推动了HLA与群体与群体及自然选择关系的研究,更促进了人们对疾病及自然选择关系的研究,更促进了人们对疾病本质的认识。
本质的认识。
一、HLA配型
(一)血清学分型法
(一)血清学分型法应应用用一一系系列列已已知知抗抗HLA的的特特异异性性标标准准分分型型血血清清与与待待测测淋淋巴巴细细胞胞混混合合,借借助助补补体体的的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
耗时长耗时长不同批号抗血清结果不同批号抗血清结果常有不同常有不同操作简便易行操作简便易行节约试剂、结果可靠、重复性好节约试剂、结果可靠、重复性好无需特殊设备无需特殊设备用于用于HLA分型的微量细胞毒试验分型的微量细胞毒试验死(着染)细胞(死(着染)细胞(%)记分记分结果判断结果判断0101阴性阴性11202可疑阴性可疑阴性21504弱阳性弱阳性51806阳性阳性808强阳性强阳性0未试验或不能读数未试验或不能读数微量细胞毒试验判定标准微量细胞毒试验判定标准
(二)细胞学分型法
(二)细胞学分型法以以混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养(mixedlymphocyteculture,MLC)或称)或称混合淋巴细胞反应混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereaction,MLR)为基本技术的)为基本技术的HLA分分型法。
能用本法测定的抗原称为型法。
能用本法测定的抗原称为LD抗原抗原(lymphocytedefinedantigen),包括包括HLA-D、-DP。
MLC分为分为单向单向MLC和和双向双向MLC将已知将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素型别的分型细胞用丝裂霉素C或或X线照射预处线照射预处理,使其失去增殖能力仅作为刺激细胞;而以具有增殖能力理,使其失去增殖能力仅作为刺激细胞;而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。
两者混合培养时,的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。
两者混合培养时,反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖,用反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖,用3H-TdR掺入法掺入法测定细胞增殖强度,从而判断受检细胞的测定细胞增殖强度,从而判断受检细胞的HLA型别。
型别。
根据选用的刺激细胞类型分为:
根据选用的刺激细胞类型分为:
11阴性分型法阴性分型法22阳性分型法阳性分型法1.单向单向MLC遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时,由于两者养时,由于两者HLA不同,能相互刺激导致对方淋不同,能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖,故称双向巴细胞增殖,故称双向MLC。
在此试验中,各自的。
在此试验中,各自的淋巴细胞既是刺激细胞,又是反应细胞,反应后形淋巴细胞既是刺激细胞,又是反应细胞,反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象,可通过形态法计态上呈现的细胞转化和分裂现象,可通过形态法计数转化细胞数转化细胞。
2.双向双向MLC本法不能判断型别,只能说明供、受体本法不能判断型别,只能说明供、受体HLA抗原配合程度抗原配合程度(三)分子生物学分型法(三)分子生物学分型法分子生物学技术的迅速发展,使得分子生物学技术的迅速发展,使得HLA的的DNA分型技术应运而生,并在开展分型技术应运而生,并在开展DNA限制性片限制性片段长度多态性分析、段长度多态性分析、DNA指纹图、等位基因特异指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交等基础上,引入多聚酶链反应技性寡核苷酸杂交等基础上,引入多聚酶链反应技术,使术,使HLA分型得以在更精密的水平上进行。
分型得以在更精密的水平上进行。
限限制制性性片片断断长长度度多多态态性性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)分分析析:
最最早早建建立立的研究的研究HLA多态性的多态性的DNA分型技术分型技术PCR-RFLP分分型型法法:
对对DNA片片段段进进行行体体外外扩扩增增,然然后后再再用用限限制制性性内内切切酶酶进进行行酶酶切切分分析析,可可使使限限制性长度分析的敏感度大大增加制性长度分析的敏感度大大增加1.RFLP与与PCR-RFLP分型法分型法序序列列特特异异性性寡寡核核苷苷酸酸-聚聚合合酶酶链链反反应应(PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO)是是以以PCR为为基基础础,将将凝凝胶胶上上扩扩增增的的HLA基基因因DNA转转移移至至硝硝酸酸纤纤维维膜膜或或尼尼龙龙膜膜,进进而而用用放放射射性性核核素素或或酶酶、地地高高辛辛等等非非放放射射性性物物质质标标记记的的寡寡核核苷苷酸酸探探针针与与之之进行杂交,从而对扩增产物作出进行杂交,从而对扩增产物作出HLA型别判断。
型别判断。
2.PCR-SSO分型法分型法分类:
分类:
斑点或印渍法斑点或印渍法反向斑点或印渍法反向斑点或印渍法PCR-SSO是是类类HLA分型应用最广泛的方法,分型应用最广泛的方法,能够鉴定所有已知序列的能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、DQ、DP等位基因等位基因是是近近年年发发展展起起来来的的一一项项新新技技术术,将将其其与与PCR-SSO结结合合应应用用于于HLA分分型型,可可使使分分型型趋趋于于规规模模化化和和自自动动化化,尤尤其其在在HLA多多态态性性和和疾疾病病遗遗传传背背景景分分析析等等方方面面更更具具优优势势。
HLA的的基基因因芯芯片片分分型型法法,实实际际上上是是PCR-SSO反反向向斑斑点点或或印印渍渍法法的的微微型型化化。
目目前前,基基因因芯芯片片在在HLA分型领域的应用尚属起步阶段。
分型领域的应用尚属起步阶段。
基因芯片基因芯片(genechip)原原理理:
应应用用设设计计的的一一套套HLA等等位位基基因因的的序序列列特特异异性性引引物物(sequencespecificprimer,SSP),对对待待测测DNA进进行行PCR扩增,从而获得扩增,从而获得HLA型别特异性的扩增产物型别特异性的扩增产物3.PCR-SSP分型法分型法HLA基因扩增的特异性包括:
基因扩增的特异性包括:
座位特异性(座位特异性(locus-specific),如),如HLA-A、B、-DRB1等;等;组特异性(组特异性(group-specific),如),如DRB1-01、DRB1-02等;等;等等位位基基因因特特异异性性(allele-specific),如如DRB1*0401、DRB1*0402等。
等。
4.PCR-SSCP分型法分型法单单链链构构象象特特异异性性聚聚合合酶酶链链反反应应(PCR-singlestrandconformationpolymorphism,PCR-SSCP)是是以以待待测测基基因因PCR扩扩增增为为基基础础,对对扩扩增增的的单单链链DNA(ssDNA)的)的HLA分型方法。
分型方法。
原原理理:
对对ssDNA进进行行无无变变性性剂剂的的聚聚丙丙烯烯酰酰凝凝胶胶电电泳泳时时,因因其其序序列列的的差差异异可可形形成成不不同同的的空空间间构构象象而而导导致致电电泳泳迁迁移移率率的的差差异
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 移植 免疫 及其 检测