主管检验技师考试微生物检验讲义第14章肠杆菌科及检验.docx
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主管检验技师考试微生物检验讲义第14章肠杆菌科及检验
肠杆菌科及检验
一、概述和通性
肠杆菌科(enterobacteriaceae)是由多个菌属组成,其生物学性状相似,均为革兰阴性杆菌。
这些细菌常寄居在人和动物的消化道并随粪便等排泄物排出体外,广泛分布于水和土壤中。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌(埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属)和常导致院内感染的细菌(枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属),以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。
(一)分类
肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手册》(1984年)将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。
(二)生物学特性
1.形态与染色肠杆菌科的细菌均为革兰阴性杆菌,其菌体大小为(1.0~6.0)μm×(0.3~1.0)μm。
多数有周鞭毛,能运动,少数菌属如志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛,无运动能力。
均不形成芽胞,少数菌属细菌可形成荚膜。
2.培养和生化反应需氧或兼性厌氧,营养要求不高,在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的菌落,表面光滑,液体培养基中呈混浊生长。
发酵葡萄糖产酸、产气,触酶试验阳性,除少数菌外,氧化酶阴性。
硝酸盐还原为亚硝酸盐,但欧文菌属和耶尔森菌属的某些菌株例外。
3.抗原构造肠杆菌科细菌的抗原构造复杂。
包括菌体(O)抗原,鞭毛(H)抗原和表面抗原(如Vi抗原、K抗原)3种。
0抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分群和分型的依据。
表面抗原为包绕在0抗原外的不耐热的多糖抗原,可阻断0抗原与相应抗体之间的反应,加热处理能破坏其阻断作用。
4.变异包括菌落S~R变异和鞭毛H~0变异。
肠道杆菌易出现变异菌株,表现为耐药性或生化反应性质的改变。
肠道杆菌易变异在细菌学诊断,治疗方面具有重要意义。
5.抵抗力不强。
加热60℃,30分钟即被杀死。
不耐干燥,对一般化学消毒剂敏感。
对低温有耐受力,能耐胆盐。
6.肠杆菌科的初步分类可根据苯丙氨酸脱氨酶试验和葡萄糖酸盐试验(也可用V-P试验)将肠肝菌科初步分为三大类。
见下表。
如表:
肠杆菌的初步分类
菌属名
苯丙氨酸
葡萄糖盐酸
变形杆菌属
普罗维登斯均属
+
+
-
-
摩根菌属
+
-
克雷伯菌属
-
+
肠杆菌属
-*
+*
沙雷菌属
-
+
哈夫尼亚菌属
-
+
埃希菌属
-
-
志贺菌属
-
-
沙门菌属
-
-
枸橼酸杆菌属
-
-
爱德华菌属
-
-
耶尔森菌属
-
-
*有例外
(三)致病性肠杆菌科细菌种类多,可引起多种疾病:
1.伤寒和副伤寒由伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌引起。
2.食物中毒由部分沙门菌(如丙型副伤寒沙门菌,鼠伤寒沙门菌)或变形杆菌引起。
3.细菌性痢疾由志贺菌引起。
4.其他感染由大肠埃希菌、变形杆菌及克雷伯菌等条件致病菌可引起泌尿生殖道、伤口等部位的感染。
(四)微生物检验
1.分离培养
将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离;血、尿或脓汁等其他标本原则上不使用选择培养基。
分离纯菌后,根据菌落特点,结合革兰染色及氧化酶反应结果作进一步鉴定。
2.鉴定
(1)初步鉴定:
原则是:
①确定肠杆菌科的细菌,应采用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别;②肠杆菌科细菌的分群,多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验,将肠杆菌科的细菌分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群;③选择生化反应进行属种鉴别。
有很多临床实验室习惯将选择培养基或鉴别培养基上的可疑菌落分别接种于克氏双糖铁琼脂(KIA)和尿素-靛基质-动力(MIU)复合培养基管中,并根据其六项反应结果,将细菌初步定属。
(2)最后鉴定:
肠杆菌科各属细菌的最后鉴定是根据生化反应的结果定属、种,或再用诊断血清做凝集反应才能作出最后判断。
二、埃希菌属
埃希菌属包括5个种,即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。
临床最常见的是大肠埃希菌。
大肠埃希菌俗称大肠杆菌,是人类和动物肠道正常菌群。
(一)生物学特性(性状)
1.形态与染色为革兰阴性短杆菌,(1.0~3.0)μm×(0.4~0.7)μm。
多数有周鞭毛,能运动,有菌毛、荚膜或微荚膜。
2.培养特性
营养要求不高,在普通营养肉汤中呈浑浊生长。
普通营养琼脂上,呈圆形,凸起,边缘整齐,灰白色的光滑型菌落,直径2~3mm。
血琼脂平板上,少数菌株产生溶血环。
在伊红亚甲蓝琼脂上,由于发酵乳糖,菌落呈蓝紫色并有金属光泽。
麦康凯和SS琼脂中的胆盐对其有抑制作用,耐受菌株能生长并形成粉红色菌落。
本菌为兼性厌氧菌。
3.生化反应发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气,分解蔗糖因菌株而异,尿素酶试验阴性,吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验(IMViC试验)为++--,有些菌株如碱性异型菌群,微产碱,不产气,无动力,易与志贺菌混淆。
克氏双糖铁琼脂(KIA)上斜面和底层均产酸产气,H2S阴性,动力、吲哚、尿素(MIU)培养基的生化反应为++-。
4.抗原结构大肠埃希菌的抗原由菌体抗原(O)、表面抗原(K)和鞭毛抗原(H)三种构成。
现已知有171种O抗原,100种K抗原和56种H抗原。
一个菌株的抗原类型由特殊的0、K和H抗原的代码表示,其血清型别的方式是按0:
K:
H排列,例如O111:
K58(B4):
H2。
(二)致病性
主要是侵袭力、内毒素、肠毒素等致病因素引起各种炎症(如胆囊炎、泌尿系感染、肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、菌血症及腹泻等)。
内毒素还可引起发热、休克、DIC等。
1.肠道外感染以泌尿系统感染常见,高位严重尿道感染与特殊血清型大肠埃希菌有关。
还有菌血症,胆囊炎,腹腔脓肿。
stand站立stoodstood 2.肠道感染引起肠道感染的大肠埃希菌有下列五个病原群。
(1)肠产毒性大肠埃希菌(ETEC):
引起霍乱样肠毒素腹泻(水泻)。
(2)肠致病性大肠埃希菌(EPEC):
主要引起婴儿腹泻。
(3)肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC):
可侵入结肠黏膜上皮,引起痢疾样腹泻(黏液脓血便)。
(4)肠出血性大肠埃希菌(EHEC):
又称产志贺样毒素(VT)大肠埃希氏菌(SLTEC或UTEC),其中O157:
H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征(HUS)。
临床特征为严重的腹痛、痉挛,反复出血性腹泻,伴发热、呕吐等。
严重者可发展为急性肾衰竭。
(5)肠黏附性大肠埃希菌(EAggEC):
也是新近报道的一种能引起腹泻的大肠埃希菌。
3.CDC将大肠埃希氏菌O157:
H7列为常规检测项目EHEC的血清型>50种,最具代表性的是O157:
H7。
在北美许多地区,O157:
H7占肠道分离病原菌的第二或第三位,是从血便中分离到的最常见的病原菌,分离率占血便的40%,6、7、8三个月O157:
H7感染的发生率最高。
且0157是4岁以下儿童急性肾衰的主要病原菌,所以CDC提出应将大肠埃希氏菌0157:
H7列为常规检测项目。
let让letlet (三)微生物检验
1.标本采集肠道感染可采集粪便;肠道外感染可根据临床感染情况采集中段尿液、血液、脓汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液等。
2.检验方法及鉴定
(1)涂片与镜检:
脓汁及增菌培养物发现单一革兰阴性杆菌,可初步报告染色、形态、性状供临床用药参考。
(2)分离培养:
粪便标本可用弱选择鉴别培养基进行分离,脓汁等可用血平板分离,取可疑菌落进行形态观察及生化反应。
weep哭泣;流泪weptwept (3)鉴定
1)初步鉴定:
根据菌落特征,涂片染色的菌形及染色反应,取纯培养物作生化反应。
2)最后鉴定:
一般常规检验做到初步鉴定即可,必要时可作系列生化反应最后鉴定。
其中主要的鉴定试验为:
氧化酶阴性、发酵葡萄糖产酸产气或只产酸、发酵乳糖产酸产气或迟缓发酵产酸、不发酵肌醇、IMViC反应为++--(占94.6%)、脲酶阴性、H2S阴性、苯丙氨酸脱氨酶阴性、硝酸盐还原阳性、动力多数阳性。
bite咬bitbitten/bit 3)某些大肠埃希菌,尤其是无动力的不发酵乳糖株,应与志贺菌相鉴别,两者的主要鉴别试验可用醋酸钠和葡萄糖铵利用试验及粘质酸盐产酸三种试验。
大肠埃希菌均为阳性,而志贺菌均为阴性。
肠道外感染,经涂片染色,分离培养后,生化鉴定到种;由于大肠埃希菌是超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要产酶株,该酶由质粒介导。
应对ESBLs产酶株进行确认,根据药敏试验结果选用的有活性的抗生素进行治疗。
对ESBLs产酶株所致感染需要采用碳青酶烯类β-内酰胺类抗生素/酶抑制剂或头霉菌素类进行治疗。
肠道内感染还需做血清分型、毒素测定或毒力试验。
食物、饮料、水等卫生细菌学检查,主要进行大肠菌群指数检测。
beat击打beatbeaten 4)血清学鉴定
EPEC的血清学鉴定。
EIEC的血清学鉴定。
ETEC毒素的检测:
采用改良Elek法测定LT并采用乳鼠胃内灌注法检测ST。
EHEC的血清学鉴定。
EAEC的鉴定:
检测细菌对HEP-2细胞或Hela细胞的黏附性。
三、志贺菌属
志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌,通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群,CDC分类系统(1989)将生化性状相近的A、B、C群归为一群,统称为A、B、C血清群,将鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。
catch捕捉caughtcaught
(一)生物学特性
1.形态与染色革兰阴性短小杆菌,(2~3)μm×(0.5~0.7)μm,无荚膜,无芽胞,无鞭毛,有菌毛。
2.培养特性需氧或兼性厌氧,液体培养基中呈混浊生长,在普通琼脂平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑型菌落,宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落。
3.生化反应志贺菌属的细菌分解葡萄糖产酸不产气,不分解乳糖(宋内志贺菌可迟缓分解乳糖),吲哚试验阴性,H2S阴性,MR试验阳性,VP试验阴性,不产生赖氨酸脱羧酶,不能利用柠檬酸盐,氧化酶试验阴性,动力检验阴性。
4.抗原结构志贺菌属只有O抗原而无鞭毛抗原,个别菌型及新分离菌株有K抗原。
O抗原分群特异性抗原和型特异性抗原两类。
根据抗原构造可将志贺菌分为四个血清群,40余种血清型(包括亚型)。
K抗原存在时能阻断O抗原与相应抗血清的凝集作用。
加热100℃、60分钟可消除K抗原对O抗原的阻断作用,在一定条件下可产生S-R变异及耐药性变异。
(二)所致疾病
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
(三)微生物检验
1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便,选择脓血便或黏液便,必要时可用肛拭子采集。
hit打hithit 2.检验方法及鉴定
(1)分离培养:
取粪便(黏液或脓血部分)或肛拭标本进行分离培养。
一般同时接种强弱选择性不同的两个平板。
强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基(SS);弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。
培养18~24h后选取可疑菌落进行下列鉴定。
upset扰乱upsetupset
(2)鉴定
1)初步鉴定:
挑选可疑菌落3~4个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。
将试探性凝集试验阳性的菌落至少接种2~3支KIA和MIU,经35℃培养18~24h,凡符合KIA:
K/A、产气一/+、H2S-,MIU:
动力一、吲哚+/一、尿酶一,氧化酶一,并结合试探性玻片凝集试验阳性结果可鉴定为志贺菌属。
2)最后鉴定:
增加甘露醇(+/一)、蔗糖(一/十)(宋内志贺菌迟缓阳性)、柠檬酸盐
(一)、苯丙氨酸脱氨酶
(一)、ONPG及鸟氨酸脱羧酶
(一)(宋内志贺菌为阳性);用志贺菌属的诊断血清作群型鉴定。
A群痢疾志贺菌,甘露醇阴性,10个血清型。
B群福氏志贺菌,有6个血清型和X、Y2个变种。
C群鲍特志贺菌,15个血清型。
D群宋内志贺菌,仅有一个血清型,有光滑型(S)和粗糙型(R)两种菌落。
get得到gotgot 3.与大肠埃希菌的鉴别
(1)无动力,不发酵乳糖,靛基质阴性,赖氨酸阴性;
(2)发酵糖产酸不产气(福氏志贺菌6型、鲍氏志贺菌13和14型、痢疾志贺菌3型除外);
(3)分解黏液酸,在醋酸盐和枸橼酸盐琼脂上产碱。
4.与类志贺邻单胞菌和伤寒沙门菌的鉴别可用动力和氧化酶试验加以鉴别,志贺菌均为阴性,而类志贺邻单胞菌为阳性。
伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性,能与沙门菌属因子血清(O多价A-F群或Vi)凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。
(四)临床意义
致病因素为侵袭力、内毒素及外毒素(志贺菌A群/Ⅰ型和Ⅱ型产生志贺毒素,具有细胞毒、肠毒素、神经毒)。
可引起人类细菌性痢疾,其中可分急性、慢性两种,小儿易引起急性中毒性痢疾。
慢性菌痢可人-人传播,污染水和食物可引起暴发流行。
(五)防治原则
人工主动免疫用于预防目前尚不理想。
预防的主要措施是防止进食被污染的食品、饮料及水,及早发现及早积极治疗携带者。
临床治疗要根据体外药敏试验结果选用抗生素及其他抗痢疾药物,保持水和电解质平衡。
对于中毒性菌痢患者应采取综合性治疗措施,如升压、抗休克、抗呼吸衰竭等。
治疗细菌性痢疾一般首选氟喹诺酮类抗生素。
四、沙门菌属
(一)生物学特性
1.形态与染色本属菌为(0.7~1.5)μm×(2.0~5.0)μm无芽胞,无荚膜的革兰阴性直杆菌。
除鸡沙门菌外都有周身鞭毛,能运动,多数有菌毛。
2.培养特性营养要求不高,在普通琼脂培养上即能生长,在液体培养基中呈均匀混浊生长。
在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上35~37℃24h可形成直径约2~4mm的透明或半透明菌落,对胆盐耐受。
产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心菌落。
3.生化反应除亚利桑那菌外均不能发酵乳糖,不产生靛基质,不分解尿素,甲基红反应阳性,V-P试验阴性。
大多数菌株产生H2S,发酵葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌产酸不产气)。
4.抗原结构主要由O抗原和H抗原组成,部分菌株有类似大肠杆菌K抗原的表面抗原,与细菌的毒力有关,故称Vi抗原。
(1)O抗原:
即菌体抗原。
沙门菌属的菌体抗原有58种,以阿拉伯数字依次标记,根据沙门菌有共同的O抗原这一特点,分类学者将有共同抗原的细菌归为一组,这就使沙门菌分成42个群(或组),即A、B、C……Z和O16~O67群。
每群都有群特异性抗原,如A群02、B群O4、D群O9等。
(2)H抗原:
即鞭毛抗原。
H抗原是定型的依据。
沙门菌H抗原有两相,第Ⅰ相为特异性抗原,用a、b、c……表示;第Ⅱ相为共同抗原,用1、2、3……表示。
(3)表面抗原:
已证实沙门菌属有Vi、M和5抗原三种。
Vi抗原加热60℃30分钟或经苯酚处理被破坏,Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集。
5.变异性
(1)S~R变异,菌落光滑型经人工培养传代后逐渐变成粗糙型。
此时菌体表面的特异多糖抗原丧失,在生理盐水中可出现自凝。
(2)H~O变异,指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。
(3)相位变异,具有双相H抗原(第Ⅰ相为特异相,第Ⅱ相为非特异相)的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌,称相位变异。
(4)V~W变异,失去全部Vi抗原的变异。
wear穿着woreworn
(二)致病性
致病因素有侵袭力、内毒素和肠毒素3种。
临床上可引起胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症等。
其中肠热症属法定传染病。
1.肠热症 即伤寒与副伤寒病。
由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。
为法定传染病之一。
2.食物中毒 引起食物中毒的沙门菌以鼠伤寒、肠炎、汤卜逊、猪霍乱、乙型及丙型副伤寒沙门菌为常见。
3.慢性肠炎 沙门菌可引起老人和儿童的慢性肠炎。
4.败血症 多由猪霍乱沙门菌引起。
5.沙门菌的局部感染如颈部、腰部等。
有鼠伤寒沙门菌引起儿童的医院感染报道。
(三)微生物检验
1.标本采集根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。
肠热症的第1、2周采血液,第2、3周采粪便与尿液。
整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。
食物中毒采集食物与粪便。
2.检查方法及鉴定
(1)分离培养
1)粪便:
一般将粪便或肛拭直接接种于SS和麦康凯平板上,用两种培养基的目的是为提高标本的阳性检出率。
2)血液和骨髓:
抽取患者血液5ml或骨髓0.5ml,立即接种于含0.5%胆盐肉汤或葡萄糖肉汤50ml中进行增菌,48h将培养物移种到血平板和肠道鉴别培养基上,若有细菌生长取菌涂片革兰染色并报告结果。
对增菌培养物连续培养7天,仍无细菌生长时,则报告阴性。
3)尿液:
无菌取中段尿液2~3ml经硫磺酸盐肉汤增菌后,再接种于肠道菌选择培养基或血平板上进行分离培养,亦可将尿液离心沉淀物分离培养。
(2)鉴定:
沙门菌属的鉴定与志贺菌属相同,须根据生化反应和血清学鉴定两方面进行。
1)初步鉴定:
如为革兰阴性杆菌时作氧化酶试验,阴性时,挑取可疑菌落分别移种于KIA和MIU上,并作生化反应。
以沙门菌多价诊断血清作玻片凝集试验。
凡符合KIA:
K/A(K碱性,A酸性;葡萄糖发酵,乳糖不发酵)、产气+/一、H2S+/一,MIU:
动力+、吲哚一、脲酶+,氧化酶一,触酶+,硝酸盐还原+,以沙门菌多价血清作玻片凝集试验阳性,鉴定为沙门菌属。
2)最后鉴定:
沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌O抗原多价血清与O、H、Vi抗原的单价因子血清。
(3)血清学诊断:
肥达试验:
用已知的伤寒沙门菌0、H抗原,副伤寒甲、乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验,以检测患者血清中抗体的含量,来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。
(四)防治原则
加强饮食卫生,防止污染食品及水源经口感染,携带者的积极治疗,皮下注射死菌苗或口服减毒活菌苗是预防沙门菌属细菌传染的几个主要措施。
临床治疗是根据体外药敏试验结果选用合适抗生素,保持水及电解质的平衡,对并发症积极处理,如肠出血、肠穿孔、胆囊炎、心肌炎等。
对于伤寒沙门菌感染,可选择的抗生素有氯霉素、氟喹诺酮类、氨苄西林、复方磺胺甲口恶唑、三代头孢等。
五、变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属
变形杆菌属包括四个种,即普通变形杆菌、奇异变形杆菌、产黏变形杆菌和潘氏变形杆菌。
普罗威登斯菌属有四个种:
即产碱普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌、雷极普罗威登斯菌和P.rustigianii。
摩根菌属只有一个种,即摩根菌。
这三个属的细菌为肠道寄居的正常菌群,在一定条件下能引起各种感染,也是医源性感染的重要条件致病菌。
(一)生物学特性
1.形态与染色为革兰阴性杆菌。
两端钝圆,有明显的多形性,呈球状或丝状,有周身鞭毛,运动活泼;摩根菌属的部分菌株在30℃以上培养条件下不形成鞭毛,无芽胞,无荚膜。
2.培养需氧或兼性厌氧,对营养无特殊要求,生长温度10~43℃。
在营养琼脂和血琼脂平板上普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长现象,即迅速形成波纹状薄膜而布满整个平板培养基表面。
这种迁徙生长现象可被0.1%苯酚、4%硼酸、5%~6%琼脂以及同型血清或胆盐所抑制。
产黏变形杆菌具有产生黏液状薄膜层的能力及溶血性质。
普罗威登斯菌和摩根菌无迁徙生长现象。
在含有胆盐的培养基表面菌落呈扁平、圆形、半透明。
在含有铁或铅离子的培养基中产硫化氢菌株的菌落中心呈黑色。
SS培养基上有与沙门菌、志贺菌相似的菌落特征。
在液体培养基中迅速生长,早期培养物呈混浊,可有部分沉淀。
3.生化反应三个属菌共同特点是氧化酶阴性,苯丙氨酸脱氨酶阳性的革兰阴性杆菌。
三个属菌的区别:
变形杆菌属迁徙生长。
硫化氢、明胶液化和脂酶(玉米油)均阳性,普罗威登斯菌属和摩根菌属均阴性;普罗威登斯菌属鸟氨酸脱羧酶阴性、枸橼酸盐利用阳性,摩根菌属前者为阳性,后者阴性。
变形杆菌属的种鉴别:
普通变形杆菌靛基质和麦芽糖均阳性,鸟氨酸脱羧酶阴性;奇异变形杆菌靛基质和麦芽糖均阴性,鸟氨酸脱羧酶阳性;产黏变形杆菌靛基质和鸟氨酸脱羧酶均阴性,麦芽糖阳性。
普罗威登斯菌属的种鉴别:
产碱普罗威登斯菌脲酶和蕈糖均阴性,侧金盏花醇阳性;斯氏普罗威登斯菌脲酶可阴性可阳性,蕈糖阳性,侧金盏花醇阴性;雷氏普罗威登斯菌脲酶和侧金盏花醇均阳性,蕈糖阴性。
(二)致病性
1.变形杆菌属普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起尿道、创伤、烧伤的感染。
普通变形杆菌还可引起多种感染及食物中毒;奇异变形杆菌还可引起婴幼儿肠炎。
产黏变形杆菌尚无引起人类感染的报道。
本菌属细菌具O抗原及H抗原,普通变形杆菌OX19、OX2、0Xk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原,这就是外-斐(Weil-Felix)反应,是用以诊断某些立克次体病的依据。
2.普罗威登斯菌属本属菌可引起烧伤、创伤与尿道感染。
3.摩根菌属本属细菌为医源性感染的重要病原菌之一。
(三)微生物检验
1.标本采集根据病情采集尿液、脓汁、伤口分泌物及婴儿粪便等。
2.检验方法及鉴定
(1)直接涂片:
尿液、脑脊液、胸腹水等离心沉淀后,取沉淀物涂片;脓液和分泌液可直接涂片,行革兰染色后,观察形态及染色性。
(2)分离培养:
将各类标本分别接种于血琼脂平板和麦康凯或伊红亚甲蓝(EMB)琼脂平板;或SS琼脂和麦康凯或EMB琼脂平板上,孵育35~37℃18~24h后挑选可疑菌落。
为了抑制变形杆菌属菌的迁徙生长,可于血琼脂中加入苯酚或苯乙醇,使其最终浓度为1g/L和0.25%,这并不影响其他细菌的分离。
变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长,在肠道菌选择培养基上形成不发酵乳糖菌落,在SS琼脂上常为有黑色中心的菌落。
(3)鉴定:
接种前述生化培养基,并作氧化酶试验,进行此三个属和属、种鉴定。
六、耶尔森菌属
耶尔森菌属包括11个种,其中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病有关。
(一)鼠疫耶尔森菌
鼠疫耶尔森菌俗称鼠疫杆菌,是烈性传染病鼠疫的病原菌。
鼠疫是自然疫源性传染病,通过直接接触染疫动物或节肢动物叮咬而感染。
临床常见腺鼠疫、败血型鼠疫和肺鼠疫。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
鼠疫耶尔森菌为革兰阴性杆菌,形态短而粗,两端钝圆,两极浓染,大小为(1.0~2.0)μm×(0.5~0.7)μm。
有荚膜,无鞭毛,无芽胞。
陈旧培养物或3%氯化钠琼脂培养基上呈明显多形性。
(2)培养:
需氧和兼性厌氧,在普通培养基上即可生长但发育迟缓。
最适生长温度是28~30℃,培养基最适pH为6.9~7.1。
培养16~18h,用显微镜观察可见一层形状不一,浅灰色小菌落,这是鼠疫耶尔森菌培养初期的菌落特征,这对本菌的鉴定有一定意义。
在培养24~48h后可形成直径0.1
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