微生物的实验室培养.ppt
- 文档编号:2691416
- 上传时间:2022-11-07
- 格式:PPT
- 页数:41
- 大小:19.02MB
微生物的实验室培养.ppt
《微生物的实验室培养.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《微生物的实验室培养.ppt(41页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
一、基础知识:
一、基础知识:
(一)培养基
(一)培养基培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专供供生长繁殖生长繁殖使用的混合营养液。
使用的混合营养液。
培养基可分为培养基可分为固体培养基固体培养基和和液体培养基液体培养基。
琼脂作琼脂作2.2.不管哪种培养基,不管哪种培养基,一般都含有一般都含有、源源、和、和源源、等等营养物质,营养物质,另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对、营养物质营养物质,例例如如:
生长因子生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及、以及、等的要求。
等的要求。
1.1.培养基的类型培养基的类型微生物微生物水水碳碳氮氮无机盐无机盐pHpH特殊特殊氧气氧气凝固剂凝固剂1.制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基碳源碳源、氮源、磷酸盐和维生素、氮源、磷酸盐和维生素氮源氮源和维生素和维生素无机盐无机盐凝固剂凝固剂阅读“无菌技术”,回答下列问题:
n获得纯净培养物的关键是获得纯净培养物的关键是。
n无菌技术包括:
无菌技术包括:
n(11)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清清洁和洁和;n(22)将培养器皿、接种用具和培养基等器具)将培养器皿、接种用具和培养基等器具n进行进行;n(33)为避免周围微生物污染,实验操作应在)为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精酒精灯灯旁进行;旁进行;n(44)避免已灭菌处理的材料用具与)避免已灭菌处理的材料用具与相相接触。
接触。
阅读“无菌技术”,回答下列问题:
n获得纯净培养物的关键是获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵。
n无菌技术包括:
无菌技术包括:
n(11)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清清洁和消毒洁和消毒;n(22)将培养器皿、接种用具和培养基等器具)将培养器皿、接种用具和培养基等器具n进行进行灭菌灭菌;n(33)为避免周围微生物污染,实验操作应在)为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精酒精灯火焰附近灯火焰附近旁进行;旁进行;n(44)避免已灭菌处理的材料用具与)避免已灭菌处理的材料用具与周围物品周围物品相接相接触。
触。
(二)无菌技术
(二)无菌技术条件条件结果结果常用的方法常用的方法消毒消毒灭菌灭菌较为较为温和温和的物理或的物理或化学方法化学方法强烈强烈的的理化因理化因素素仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部一部分对或内部一部分对人体有害的微生人体有害的微生物,不包括芽孢物,不包括芽孢和孢子和孢子杀死物体内外杀死物体内外所所有的微生物有的微生物,包,包括芽孢和孢子括芽孢和孢子煮沸消毒法、巴氏煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或消毒法、紫外线或化学药物消毒法化学药物消毒法灼烧灭菌、干热灭灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌菌、高压蒸汽灭菌消毒方法:
消毒方法:
n(11)日常生活经常用到的是)日常生活经常用到的是消毒法;消毒法;100煮沸煮沸5-6minn(22)对一些不耐高温的液体,则使用)对一些不耐高温的液体,则使用消毒法消毒法70-75下煮下煮30min或或80下煮下煮15minn(33)对接种室、接种箱或超净工作台)对接种室、接种箱或超净工作台n首先喷洒首先喷洒等溶液以增强消毒效果,等溶液以增强消毒效果,然后使用然后使用进行物理消毒。
进行物理消毒。
n(44)实验操作者的双手使用)实验操作者的双手使用进行消毒;进行消毒;n(55)饮水水源用)饮水水源用进行消毒。
进行消毒。
消毒方法:
消毒方法:
n(11)日常生活经常用到的是)日常生活经常用到的是煮沸煮沸消毒法;消毒法;100煮沸煮沸5-6minn(22)对一些不耐高温的液体,则使用)对一些不耐高温的液体,则使用巴氏巴氏消毒法消毒法70-75下煮下煮30min或或80下煮下煮15minn(33)对接种室、接种箱或超净工作台)对接种室、接种箱或超净工作台n首先喷洒首先喷洒石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果,等溶液以增强消毒效果,然后使用然后使用紫外线紫外线进行物理消毒。
进行物理消毒。
n(44)实验操作者的双手使用)实验操作者的双手使用75%酒精酒精进行消毒;进行消毒;n(55)饮水水源用)饮水水源用氯气氯气进行消毒。
进行消毒。
灭菌方法:
n(11)接种环、接种针、试管口等使用)接种环、接种针、试管口等使用灭菌法;灭菌法;n(22)玻璃器皿、金属用具等使用)玻璃器皿、金属用具等使用灭菌法,所用灭菌法,所用器械是器械是干热灭菌箱干热灭菌箱;n(33)培养基、无菌水等使用)培养基、无菌水等使用灭菌法,所用灭菌法,所用器械是器械是高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅。
灭菌方法:
n(11)接种环、接种针、试管口等使用)接种环、接种针、试管口等使用灼烧灼烧灭菌法;灭菌法;n(22)玻璃器皿、金属用具等使用)玻璃器皿、金属用具等使用干热干热灭菌法,所用灭菌法,所用器械是器械是干热灭菌箱干热灭菌箱;n(33)培养基、无菌水等使用)培养基、无菌水等使用高压蒸汽高压蒸汽灭菌法,所用灭菌法,所用器械是器械是高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅。
11、灼烧灭菌、灼烧灭菌22、干热灭菌:
、干热灭菌:
160-170160-170下加下加热热1-2h1-2h。
33、高压蒸气灭菌:
、高压蒸气灭菌:
100kPa100kPa、121121下维持下维持15-30min.15-30min.
(2)灭菌的方法:
灭菌的方法:
1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?
被其他外来微生物污染外,还有什么目的?
2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。
如果需要,请选择合适的方法。
菌。
如果需要,请选择合适的方法。
(11)培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿(22)玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管(33)实验操作者的双手实验操作者的双手答:
无菌技术还能有效答:
无菌技术还能有效避免操作者自身被避免操作者自身被微生物感染微生物感染。
答:
(答:
(11)、()、(22)需要灭菌;()需要灭菌;(33)需要消毒)需要消毒。
PP15-1615-16旁栏思考旁栏思考n先将混合菌液稀释先将混合菌液稀释1010倍倍100100倍倍10001000倍倍等等几个梯度几个梯度,然后用接种环蘸这些液体在培养基然后用接种环蘸这些液体在培养基中接种总会有一个梯度接种时可以蘸取单个的中接种总会有一个梯度接种时可以蘸取单个的细菌细菌.大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养n稀释!
稀释!
n平板划线法是通过划线进行稀释,而稀释平板涂布平板划线法是通过划线进行稀释,而稀释平板涂布法是通过稀释培养液达到稀释的目的。
法是通过稀释培养液达到稀释的目的。
n大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养11、牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制、牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制22、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌
(1)计算()计算
(2)称量)称量(3)溶化)溶化(4)灭菌)灭菌(5)倒平板)倒平板
(1)平板划线法)平板划线法
(2)稀释涂布平板法)稀释涂布平板法1.制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基碳源、氮源、磷酸盐和维生素碳源、氮源、磷酸盐和维生素氮源和维生素氮源和维生素无机盐无机盐凝固剂凝固剂牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制n11计算:
计算:
根据根据比例,计算比例,计算100mL100mL培养基各成分用量。
培养基各成分用量。
n22称量:
称量:
准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,目的是防止牛肉膏蛋白胨目的是防止牛肉膏蛋白胨。
n33溶化:
溶化:
加水加热溶化加水加热溶化;加入加入和和继续加继续加热;热;加入加入;用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到。
整个过程不断用玻。
整个过程不断用玻棒棒,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯。
n44调调pHpH:
用:
用1mol/LNaOH1mol/LNaOH溶液调节溶液调节pHpH至偏碱性。
至偏碱性。
n55灭菌:
灭菌:
n将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用灭菌灭菌锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用灭菌。
灭菌。
n66倒平板:
倒平板:
待培养基冷却至待培养基冷却至左右时在左右时在附近操作进附近操作进行。
行。
n其过程是:
其过程是:
n在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞;在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞;n右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过;n左手将培养皿打开一条左手将培养皿打开一条,右手将培养基倒入培养皿,立刻,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上盖上。
n待平板待平板后,将平板倒过来放置。
后,将平板倒过来放置。
牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制n11计算:
计算:
根据根据配方配方比例,计算比例,计算100mL100mL培养基各成分用量。
培养基各成分用量。
n22称量:
称量:
准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,目的是防止牛肉膏蛋白胨目的是防止牛肉膏蛋白胨吸潮吸潮。
n33溶化溶化:
加水加热溶化加水加热溶化牛肉膏牛肉膏;加入加入蛋白胨蛋白胨和和氯化钠氯化钠继续加继续加热;热;加入加入琼脂琼脂;用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL100mL。
整个过程不断用玻。
整个过程不断用玻棒棒搅拌搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂破裂。
n44调调pHpH:
用:
用1mol/LNaOH1mol/LNaOH溶液调节溶液调节pHpH至偏碱性。
至偏碱性。
n55灭菌:
灭菌:
n将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌干热灭菌箱灭菌。
箱灭菌。
n66倒平板:
倒平板:
待培养基冷却至待培养基冷却至5050左右时在左右时在酒精灯火焰酒精灯火焰附近操作进附近操作进行。
行。
n其过程是:
其过程是:
n在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞;在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞;n右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰火焰;n左手将培养皿打开一条左手将培养皿打开一条缝隙缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖。
盖上皿盖。
n待平板待平板冷却凝固冷却凝固后,将平板倒过来放置。
后,将平板倒过来放置。
配制培养基配制培养基市场常见琼脂条市场常见琼脂条包器材包器材包器材包器材条件:
条件:
121121、100kPa100kPa20-30min20-30min灭菌灭菌倒平板倒平板1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到5050左右时,左右时,才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度?
温度?
答:
答:
可以用可以用手触摸手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。
行倒平板了。
2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?
为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?
答:
通过灼烧灭菌,答:
通过灼烧灭菌,防止防止瓶口的瓶口的微生物微生物污染污染培养基。
培养基。
P17问题讨论问题讨论3.3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?
平板冷凝后,为什么要将平
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 微生物 实验室 培养