高三一轮复习系列课件微生物的培养与应用.ppt
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第第4949课时课时微生物的培养与应用微生物的培养与应用考点一考点一微生物的实验室培养微生物的实验室培养1.1.培养基的种类培养基的种类(11)按物理性质分类)按物理性质分类高频考点突破高频考点突破培养基种类培养基种类特点特点用途用途液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固体培养基固体培养基加凝固剂加凝固剂(如琼脂)(如琼脂)微生物分离、鉴定,微生物分离、鉴定,活菌计数,菌种保藏活菌计数,菌种保藏(22)按功能分类)按功能分类种类种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例选择选择培养培养基基培养基中加培养基中加入某些化学入某些化学物质物质依据某些微生物依据某些微生物对某些物质的抗对某些物质的抗性而设计性而设计从众多微从众多微生物中分生物中分离所需的离所需的微生物微生物加入青霉加入青霉素分离得素分离得到酵母菌到酵母菌和霉菌和霉菌鉴别鉴别培养培养基基培养基中加入培养基中加入某种试剂或化某种试剂或化学药品学药品依据微生物产生依据微生物产生的某种代谢产物的某种代谢产物与培养基中的特与培养基中的特定试剂或化学药定试剂或化学药品反应,产生明品反应,产生明显的特征变化而显的特征变化而设计设计鉴别不同鉴别不同种类的微种类的微生物生物伊红伊红美美蓝培养基蓝培养基可以鉴别可以鉴别大肠杆菌大肠杆菌2.2.培养基的配制原则和营养构成培养基的配制原则和营养构成(22)培养基的营养构成)培养基的营养构成各种培养基的具体配方不同,但一般都含有水、碳各种培养基的具体配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
源、氮源和无机盐。
不同培养基还要满足不同微生物对不同培养基还要满足不同微生物对pHpH、特殊营养物、特殊营养物质以及氧气的要求。
质以及氧气的要求。
目的要明确:
根据微生物的种类、培养目的目的要明确:
根据微生物的种类、培养目的选择不同的原料配制培养基选择不同的原料配制培养基营养要协调:
配制培养基时要注意各营养营养要协调:
配制培养基时要注意各营养物质的浓度和比例、物质的浓度和比例、pHpH要适宜要适宜(11)培养基)培养基的配制原则的配制原则3.3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项(11)步骤:
计算称量溶化灭菌倒平板)步骤:
计算称量溶化灭菌倒平板(22)注意事项)注意事项倒平板的温度一般倒平板的温度一般5050左右适宜,温度过高会左右适宜,温度过高会烫手,过低培养基又会凝固。
烫手,过低培养基又会凝固。
平板需倒置,这样既可使培养基表面的水分更平板需倒置,这样既可使培养基表面的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
造成污染。
4.4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项(11)原理:
在培养基上将细菌稀释或分散成单个细)原理:
在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
的细菌菌落。
(22)方法:
平板划线法、稀释涂布平板法。
)方法:
平板划线法、稀释涂布平板法。
(33)平板划线操作的注意事项)平板划线操作的注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。
灭菌。
灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。
免温度太高杀死菌种。
划线时最后一区域不要与第一区域相连。
划线时最后一区域不要与第一区域相连。
划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。
划破。
拓展提升拓展提升1.1.自养微生物和异养微生物的营养比较自养微生物和异养微生物的营养比较营养类型营养类型碳源碳源氮源氮源生长生长因子因子自养型自养型微生物微生物COCO22、NaHCONaHCO33等含碳无机物等含碳无机物NHNH33、铵盐、铵盐、硝酸盐等硝酸盐等一般不一般不需要需要异养型异养型微生物微生物糖类、脂肪酸等糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、蛋白质等蛋白质等有些微有些微生物需生物需要要2.2.划分依据:
自养微生物与异养微生物类型划分的划分依据:
自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源,而与氮源无关。
自养微生物以碳源,而与氮源无关。
自养微生物以COCO22或碳酸或碳酸盐为唯一碳源进行代谢生长;异养微生物必须以盐为唯一碳源进行代谢生长;异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。
有机物作为碳源进行代谢生长。
3.3.自养微生物的能源自养微生物的能源利用光能,如蓝藻等。
利用光能,如蓝藻等。
依靠物质氧化过程中释放的能量,如硝化细菌,依靠物质氧化过程中释放的能量,如硝化细菌,能利用能利用NHNH33氧化过程中释放的化学能,氧化过程中释放的化学能,NHNH33既作为既作为氮源,又作为能源。
氮源,又作为能源。
4.4.异养微生物的能源异养微生物的能源主要来源于有机物的氧化分解,碳源不仅为异养主要来源于有机物的氧化分解,碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质,而且提供完成整个微生物提供构成细胞的物质,而且提供完成整个生命活动所需的能量。
生命活动所需的能量。
5.5.微生物的类型微生物的类型营养类型营养类型主要(或唯主要(或唯一)碳源一)碳源能源能源代表菌代表菌光能自养型光能自养型COCO22光能光能蓝藻蓝藻光能异养型光能异养型有机物有机物光能光能红螺菌红螺菌化能自养型化能自养型COCO22无机物无机物硝化细菌硝化细菌化能异养型化能异养型有机物有机物有机物有机物大肠杆菌大肠杆菌对位训练对位训练1.1.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒化学消毒灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌紫外紫外线消毒线消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法A.A.B.B.C.C.D.D.A2.2.有关稀释涂布平板法的叙述中有关稀释涂布平板法的叙述中,错误的是(错误的是()A.A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释首先将菌液进行一系列的梯度稀释B.B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面培养基的表面C.C.适宜条件下培养适宜条件下培养D.D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落结果都可在培养基表面形成单个的菌落D考点二考点二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.1.筛选菌株的原理筛选菌株的原理微生物的选择培养:
在选择培养基的配方中,把微生物的选择培养:
在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
利用尿素的微生物才能够生长。
2.2.统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(11)显微镜直接计数法)显微镜直接计数法原理:
利用特定细菌计数板或血细胞计数板,原理:
利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
方法:
用计数板计数。
方法:
用计数板计数。
缺点:
不能区分死菌与活菌。
缺点:
不能区分死菌与活菌。
(22)间接计数法(活菌计数法)间接计数法(活菌计数法)原理:
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生原理:
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
含有多少活菌。
操作操作aa.设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
bb.为了保证结果准确,一般选择菌落数在为了保证结果准确,一般选择菌落数在3030300300的平板进行计数。
的平板进行计数。
计算公式:
每克样品中的菌株数计算公式:
每克样品中的菌株数=(=(CCVV)MM,其中其中CC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数数,VV代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mLmL),),MM代表稀释倍数。
代表稀释倍数。
3.3.细菌分离与计数的实验流程细菌分离与计数的实验流程土壤取样土壤取样样品稀释样品稀释取样涂布取样涂布微生物的培养微生物的培养观察并记录结果观察并记录结果细菌计数细菌计数4.4.课题延伸课题延伸菌种的进一步鉴定菌种的进一步鉴定(11)原因:
由于分离分解尿素的细菌的选择培养)原因:
由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以基上可能生长着以分解尿素的细菌的代射产物为氮分解尿素的细菌的代射产物为氮源的其它微生物。
源的其它微生物。
(22)原理:
)原理:
COCO(NHNH22)22+HH22OCOOCO22+2+2NHNH33;由于;由于NHNH33的产生,培养基碱性增强,的产生,培养基碱性增强,pHpH升高,因此可升高,因此可通过检测通过检测pHpH的变化来判断该化学反应是否发生。
的变化来判断该化学反应是否发生。
(33)方法:
以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚)方法:
以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则pHpH升高,说明该种细菌能分解尿素。
升高,说明该种细菌能分解尿素。
脲酶脲酶5.5.该实验中的注意事项该实验中的注意事项(11)设立重复组:
统计某一稀释度下平板上的菌落)设立重复组:
统计某一稀释度下平板上的菌落数时,要至少涂布数时,要至少涂布33个平板作重复组,增强实验结个平板作重复组,增强实验结果的说服力与准确性。
果的说服力与准确性。
(22)对照原则)对照原则判断培养基中是否有杂菌污染,需将未接种的培判断培养基中是否有杂菌污染,需将未接种的培养基同时进行培养。
养基同时进行培养。
判断选择培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉判断选择培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养,观察两种培养基膏蛋白胨培养基进行接种后培养,观察两种培养基上菌落数目,进行对比得出结论。
上菌落数目,进行对比得出结论。
牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照,即不涂布菌液,目的是验证培各有一个空白对照,即不涂布菌液,目的是验证培养基中是否含杂菌。
养基中是否含杂菌。
样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。
样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。
误区警示误区警示对位训练对位训练3.3.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是()加尿素加尿素不加尿素不加尿素加琼脂加琼脂不加琼脂不加琼脂加葡萄糖加葡萄糖不加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐加硝酸盐不不加硝酸盐加硝酸盐A.A.B.B.C.C.D.D.C4.4.在做分离分解尿素的细菌实验时,在做分离分解尿素的细菌实验时,AA同学从对应同学从对应106106培养基上筛选出大约培养基上筛选出大约150150个菌落,而其他同学个菌落,而其他同学只选择出大约只选择出大约5050个菌落。
产生个菌落。
产生AA同学结果的原因可同学结果的原因可能有能有()由于土样不同由于土样不同由于培养基污染由于培养基污染由于操由于操作失误作失误没有设置对照没有设置对照A.A.B.B.C.C.D.D.A考点三考点三分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离1.1.纤维素酶纤维素酶纤维素酶是一种复合酶,它包括纤维素酶是一种复合酶,它包括CC11酶、酶、CCXX酶和葡酶和葡萄糖苷酶,具有催化分解
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