PCR荧光定量检测记录.docx
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PCR荧光定量检测记录.docx
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PCR荧光定量检测记录
PCR荧光定量检测记录
编号:
RE-ZL-TY-082NO:
1、样本信息
样本编号
姓名
住院号
年龄
血液状态(良好√;异常×)
备注
备注
血清提取仪器:
SC-3610低速离心机
乙型肝炎病毒(HBV)检测
使用仪器
PCR仪器:
;高速离心机:
;
恒温金属浴:
;5-50μL移液枪:
;
20-200μL移液枪:
;100-1000μL移液枪:
;
试剂盒来源:
中山大学达安基因股份有限公司;批号:
;
将待测样本与阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品进行同步处理。
在1.5ml的无菌离心管内加入200µl样品;再加入450µlDNA提取液,盖紧管盖,漩涡振荡15秒以充分混匀,瞬时离心数秒,100℃10±1分钟恒温处理。
取出后12000转离心5分钟;离心管内即为病毒核酸溶液,吸取样本及阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品核酸溶液各20µl加入到PCR反应管中,盖紧管盖,8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测,以循环扩增条件:
93℃2分钟;93℃45秒→55℃60秒,10个循环;93℃30秒→55℃45秒(收集荧光),30个循环进行扩增。
扩增曲线
标准曲线
孔位号
样本名称
样本ID
样本类型
标准浓度
计算浓度
Ct值
结论
HBV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HBV标准
2.00e+03
HBV标准
2.00e+04
HBV标准
2.00e+05
HBV标准
2.00e+06
备注
样本DNA浓度<500UI/ml则低于检测下限;浓度≥500UI/ml则高于检测下限
检验人:
复核人:
检验日期:
复核日期:
丙型肝炎病毒(HCV)检测
使用仪器
PCR仪器:
;高速离心机:
;
恒温金属浴:
;5-50μL移液枪:
;
20-200μL移液枪:
;100-1000μL移液枪:
;
试剂盒来源:
中山大学达安基因股份有限公司;批号:
;
将待测样本与阴性质控品、HCV强阳性质控品、HCV临界阳性质控品进行同步处理。
在1.5ml的无菌离心管内加入50µl的蛋白酶K;取样本200µl加入离心管中;再加入200µl的裂解工作液(即已含CarrierRNA的病毒裂解液),盖紧管盖,漩涡振荡15秒以充分混匀,高速离心10秒(防止温育时产生气泡),72℃10分钟。
同时可将洗脱液置于72℃预热;再加入250µl无水乙醇,盖紧管盖,振荡15秒;将混合液全部吸至离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将500µl的抑制物去除液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将500µl的去离子液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;再次将500µl的去离子液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将离心柱-收集管于室温下14,000rpm离心3分钟以除去残余的乙醇;将离心柱取出,放置于新的1.5ml离心管。
打开离心柱盖子,72℃放置2分钟(使用干式恒温器,不能使用水浴锅);在离心柱的膜的正上方小心加入72℃预热的洗脱液35µl,盖紧离心柱管盖,室温静置1分钟后,14,000rpm离心1分钟,离心管内即为病毒核酸溶液,吸取核酸溶液及HCV阳性定量参考品各20µl加入到PCR反应管中,盖紧管盖,8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测。
,以循环扩增条件:
50℃15分钟,1个循环;95℃15分钟,1个循环;94℃15秒→55℃45秒(收集荧光),45个循环进行扩增。
扩增曲线
标准曲线
孔位号
样本名称
样本ID
样本类型
标准浓度
计算浓度
Ct值
结论
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HCV标准
1.00e+04
HCV标准
1.00e+05
HCV标准
1.00e+06
HCV标准
1.00e+07
备注
样本RNA浓度<80UI/ml则低于检测下限;浓度≥80UI/ml则高于检测下限
检验人:
复核人:
检验日期:
复核日期:
人类免疫缺陷病毒病毒(HIV)检测
使用仪器
PCR仪器:
;高速离心机:
;
恒温金属浴:
;5-50μL移液枪:
;
20-200μL移液枪:
;100-1000μL移液枪:
;
试剂盒来源:
中山大学达安基因股份有限公司;批号:
;
将待测样本与阴性质控品、HIV强阳性质控品、HIV临界阳性质控品进行同步处理。
在1.5ml的无菌离心管内加入50µl的蛋白酶K;取样本200µl加入离心管中;再加入200µl的裂解工作液(即已含CarrierRNA的病毒裂解液),盖紧管盖,漩涡振荡15秒以充分混匀,高速离心10秒(防止温育时产生气泡),72℃10分钟。
同时可将洗脱液置于72℃预热;再加入250µl无水乙醇,盖紧管盖,振荡15秒;将混合液全部吸至离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将500µl的抑制物去除液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将500µl的去离子液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;再次将500µl的去离子液加入离心柱,室温下12,000rpm离心1分钟,将离心柱装至新的收集管;将离心柱-收集管于室温下14,000rpm离心3分钟以除去残余的乙醇;将离心柱取出,放置于新的1.5ml离心管。
打开离心柱盖子,72℃放置2分钟(使用干式恒温器,不能使用水浴锅);在离心柱的膜的正上方小心加入72℃预热的洗脱液50µl,盖紧离心柱管盖,室温静置1分钟后,14,000rpm离心1分钟,离心管内即为病毒核酸溶液,吸取核酸溶液及HIV阳性定量参考品各20µl加入到PCR反应管中,盖紧管盖,8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测。
,以循环扩增条件:
50℃15分钟,1个循环;95℃15分钟,1个循环;94℃15秒→55℃45秒(收集荧光),45个循环进行扩增。
PCR扩增曲线
标准曲线
孔位号
样本名称
样本ID
样本类型
标准浓度
计算浓度
Ct值
结论
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
------
□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV
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□低于检测下限
□高于检测下限
HIV标准
1.00e+04
HIV标准
1.00e+05
HIV标准
1.00e+06
HIV标准
1.00e+07
备注
样本RNA浓度<500UI/ml则低于检测下限;浓度≥500UI/ml则高于检测下限
检验人:
复核人:
检验日期:
复核日期:
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- 关 键 词:
- PCR 荧光 定量 检测 记录