实验室生物安全讲座课件(二).ppt
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实验室生物安全实验室生物安全第四章第四章实验室生物安全的主要实验室生物安全的主要设备与仪器设备与仪器23常用可防护生物危害的仪器装备常用可防护生物危害的仪器装备移液器生物安全柜高压灭菌锅灭菌器一次性接种环护目镜防护服目的:
隔离操作者和感染性样本,防止操作人员被感目的:
隔离操作者和感染性样本,防止操作人员被感染染安全设备安全设备-生物安全柜生物安全柜个体防护装备个体防护装备-防护服;安全眼睛;手套鞋套;呼吸防护装置;紧急冲洗装置等。
防护服;安全眼睛;手套鞋套;呼吸防护装置;紧急冲洗装置等。
华盛顿大学中学生游戏防护4第一节第一节生物安全柜生物安全柜5一、生物安全柜概述一、生物安全柜概述
(一)概念:
生物安全柜生物安全柜(biologicalsafetycabinet,BSC)是操作有感染性的材料时,用来保护操作者本人、实验室环境及实验材料,使其避免暴露于操作过程中产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的负压排气柜。
6n生物安全柜的基本设计已经历了多次改进。
n主要的变化是在排风系统增加了HEPA(HighEffieiencyParticulateAirFilter)过滤器。
对于直径0.3m的颗粒,HEPA过滤器可以截留99.97%,而对于更大或更小的颗粒则可以截留99.99%。
HEPA过滤器能够有效地截留所有已知传染因子,并确保从安全柜中排出的是完全不含微生物的空气。
n生物安全柜设计中的第二个改进是将经HEPA过滤的空气输送到工作台面上,从而保护工作台面上的物品不受污染。
7生物安全柜的选择生物安全柜的选择生物安全柜生物安全柜保护类型保护类型保护对象保护对象I级第二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境级A1型第二、三和四类病原微生物操作者,环境和样品外排风型级A2型第二、三和四类病原微生物;痕量挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品级级B1型型第二、三和四类病原微生物;少第二、三和四类病原微生物;少量挥发放射性核素量挥发放射性核素/化学品化学品操作者,环境和样品操作者,环境和样品级B2型第二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品III级第一、二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品81.I级生物安全柜级生物安全柜I级级生生物物安安全全柜柜能能够够为为人人员员和和环环境境提提供供保保护护,但但不不提供产品保护。
提供产品保护。
用用途途:
I级生物安全柜被用作特殊的密封设备(例如离心、收获设备或小的发酵设备)或可能产生气溶胶的操作过程(例如倒笼子的垃圾,通气培养或组织搅拌)。
也可用来操作放射性核素和挥发性有毒化学物品。
9B型2.II级生物安全柜级生物安全柜II级生物安全柜能级生物安全柜能够为人员、环境和够为人员、环境和产品提供保护。
产品提供保护。
用途:
用途:
进行生物安全水平1、2、3级相关的操作。
A型10II级生物安全柜的种类级生物安全柜的种类11II级级A2型生物安全柜型生物安全柜室内空气污染的空气HEPA滤过的空气正压污染空气123.III级生物安全柜级生物安全柜III级生物安全柜是一级生物安全柜是一个没有开放式观察窗个没有开放式观察窗的气密性的结构。
的气密性的结构。
对环境、产品和操作对环境、产品和操作者提供最大的保护。
者提供最大的保护。
用途:
用途:
操作4级生物安全水平的微生物病原体。
13生物安全柜的选择生物安全柜的选择生物安全柜生物安全柜保护类型保护类型保护对象保护对象I级第二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境级A1型第二、三和四类病原微生物操作者,环境和样品外排风型级A2型第二、三和四类病原微生物;痕量挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品级B1型第二、三和四类病原微生物;少量挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品级B2型第二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品III级第一、二、三和四类病原微生物;挥发放射性核素/化学品操作者,环境和样品14二、生物安全柜的使用二、生物安全柜的使用
(一)个人防护要求:
(一)个人防护要求:
使用生物安全柜时必须穿个人防护服,戴手套(手套应套在隔离衣的外面)最好带口罩和帽子,根据需要带防护眼罩或者面罩。
工作之前,操作者应调节凳子高度确保自己的脸在开口之上。
15
(二)生物安全柜内物品摆放原则:
(二)生物安全柜内物品摆放原则:
按照从洁净区到污染区的方向摆放。
所有物品尽可能放在远离前格栅,靠近操作台后缘的位置。
将废弃物袋、盛放废弃吸管的托盘以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧。
前格栅不能被实验记录本、仪器设备或者其他物品阻挡。
16(三)生物安全柜的操作流程(三)生物安全柜的操作流程:
开启生物安全柜外排风机电源开关缓慢打开操作窗口,窗口开启距离200mm或设定值,一般生物安全柜有窗口极限报警10分钟后即可以开始实验操作操作完毕后注意对生物安全柜进行消毒清洗工作17(四)生物安全柜的使用注意事项(四)生物安全柜的使用注意事项安全柜只有在工作正常时才能使用。
双臂垂直缓慢进入前面的开口,在生物安全柜中等待大约一分钟,以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。
废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中,避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出,以免干扰气流。
尽量避免污染的物品进入洁净区。
在生物安全柜内进行操作时,不能进行文字工作。
柜内所有的工作要在工作面的中部或后部进行,并能从观察面板中看到。
前送风格栅不得被便签、滴管、或其他材料堵住,否则会干扰气流从而可能使材料受到污染,使人员处在暴露状态。
清洁和消毒:
应在每次工作完成后及一天结束时,使用合适的消毒剂清洁安全柜的表面。
柜子的风扇在工作开始前和工作完成后要再各运行5分钟。
181920三、超净工作台三、超净工作台超净工作台超净工作台是为保护试验样品而设计,为保护试验样品而设计,通过吹过工作区域的层流空气防止试验样品受粉尘或细菌的污染。
21水平层流的洁净台原理图垂直层流洁净台原理图超净工作台中不能操作感染性的材料,超净工作台中不能操作感染性的材料,因其气体是正压直接排放。
一旦感染性样品放置于工作区域,层流空气将把带有微生物介质的空气吹向前台正在操作的工作人员而产生危险。
22生物安全柜与超净工作台的区别生物安全柜与超净工作台的区别名称名称结构构气体气体压力力气体排放气体排放保保护对象象生物安全柜生物安全柜复杂复杂负压负压净化后排放净化后排放操作者、样操作者、样品、环境品、环境超净工作台超净工作台简单简单正压正压直接排放直接排放样品样品23n除了了解安全柜各项性能指标,最好最快最方便鉴别安全柜安全性能的方法是了解您购买的安全柜是否获得过以下几项主要的国际安全柜认证:
nEN12469(欧洲生物安全柜统一标准)nNSF49(美国生物安全柜标准-二级生物安全柜)nAS2252.2(澳洲生物安全柜标准-二级生物安全柜)nJISK3800(日本生物安全柜标准)24第二节第二节灭菌器灭菌器25一、概念:
一、概念:
泛指能达到灭菌要求的一切设备,即能在一定时间内杀灭一切活的微生物(包括细菌芽胞)的设备,灭菌的保证水平为106(即一件物品经灭菌处理后仍然有微生物存活的概率为106)。
二、灭菌器的种类:
二、灭菌器的种类:
1.高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器最常用最常用2.干热灭菌器3.环氧乙烷灭菌器和过氧化氢等离子体灭菌器。
26三、使用高压蒸汽灭菌器的注意事项三、使用高压蒸汽灭菌器的注意事项1.需要灭菌的各种包裹不应过大过紧。
2.放入灭菌器内的包裹不能排得太紧。
3.定期做好灭菌效果检测。
4.易燃易爆物品禁用高压蒸汽灭菌法。
5.瓶装液体灭菌时,所盛液体不超过瓶体积的3/4。
6.每次灭菌前,应检查安全阀的性能是否良好,使用中也应密切观察运行是否正常,及时发现问题,以免发生意外。
7.在使用高压蒸汽灭菌过程中,应注意排尽灭菌器内冷空气。
8.达到灭菌时间后,关闭电源,使压力自然下降,压力指针到“0”后,方可打开锅盖。
27第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理28原核生物型微生物:
原核生物型微生物:
包括两个菌(细菌、放线菌),四个体(衣原体、支原体、立克次体、螺旋体).第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理-病原微生物的种类及特点病原微生物的种类及特点29第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理-病原微生物的种类及特点病原微生物的种类及特点原核生物型微生物的特点:
原核生物型微生物的特点:
1.大部分细菌可在人工培养基上生长繁殖。
2.构成细菌毒力的物质基础主要包括细菌的侵袭力(invasiveness)毒素(toxin).细菌致病性的强弱与细菌的毒力、侵入机体的数量、入侵途径及机体的免疫状态密切相关。
3.细菌感染可采用抗生素来治疗。
30第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理-病原微生物的种类及特点病原微生物的种类及特点n真核生物型微生物:
真核生物型微生物:
真菌(单细胞真菌和多细胞真菌)真菌(单细胞真菌和多细胞真菌)n特点:
特点:
1.真菌的致病:
浅表真菌感染浅表真菌感染-如:
皮肤癣菌。
真菌机会性真菌机会性感染感染-如:
白色念珠菌,新型隐球菌。
真菌毒素的致病作用真菌毒素的致病作用-真菌中毒和引起肿瘤(黄曲霉毒素)。
真菌性超敏反应真菌性超敏反应。
n2.治疗:
对细菌抗生素不敏感,必须采用抗真菌药物治疗。
31第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理-病原微生物的种类及特点病原微生物的种类及特点n非细胞型微生物:
非细胞型微生物:
病毒病毒病毒结构:
病毒结构:
核酸(DNA/RNA),蛋白衣壳,包膜(某些病毒有);病毒特点:
病毒特点:
1.在易感的活细胞中寄生。
病毒的致病作用主要通过侵入易感细胞、损伤细胞或改变细胞功能而引发。
2.病毒感染用抗生素治疗无效,目前理想的抗病毒药物不多。
3233第第五五章章病原微生物实验室生物安全管理病原微生物实验室生物安全管理-病原微生物的种类及特点病原微生物的种类及特点n非细胞型微生物:
非细胞型微生物:
朊粒朊粒(prion):
朊粒的特点:
朊粒的特点:
1.一种特殊的致病因子,只含蛋白质,不含核酸。
一种特殊的致病因子,只含蛋白质,不含核酸。
2.朊粒:
朊粒:
是一种由正常宿主细胞基因编码的、构象异常的朊蛋白,是一种由正常宿主细胞基因编码的、构象异常的朊蛋白,是人和动物的传染性海绵状脑病(是人和动物的传染性海绵状脑病(TSEs)的病原体。
)的病原体。
TSE可通过多可通过多种途径传播(消化道、血液、神经及医源性)。
种途径传播(消化道、血液、神经及医源性)。
3.抵抗力很强,一般高压灭菌条件不能破坏。
抵抗力很强,一般高压灭菌条件不能破坏。
对患者的血液、体液,对患者的血液、体液,手术器械等必须用手术器械等必须用1mol/LNaOH处理处理1小时小时,再高压灭菌再高压灭菌134C,2小时。
小时。
34一、病原微生物的风险等级一、病原微生物的风险等级第一类病原微生物第一类病原微生物是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物,以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物;如:
天花病毒、新疆出血热病毒、埃博拉病毒、猴痘病毒等29种病原体。
第二类病原微生物第二类病原微生物是指能够引起人类或者动物严重疾病,比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物;如:
汉坦病毒、告致病性禽流感病毒、爱滋病毒、乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、SARS冠状病毒、西尼罗病毒、炭疽杆菌、布氏杆菌、结核分枝杆菌、霍乱弧菌、鼠疫杆菌等70种。
第三类病原微生物第三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病,但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害,传播风险有限,实验室感染后很少引起严重疾病,并且具备有效治疗和预防措施的微生物;如:
肠道病毒、轮状病毒、肝炎病毒、风疹病毒、流感病毒、疱疹病毒、沙眼衣原体、破伤风梭菌致病性大肠杆菌、脑膜炎球菌、伤寒沙门菌、志贺菌、葡萄球菌、白假丝酵母菌等275种第四类病原微生物第四类病原微生物是指
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