z动物细胞工程12.ppt.ppt
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提问:
提问:
v植物细胞工程常用的技术手段有哪些?
植物细胞工程常用的技术手段有哪些?
植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交这些技术的理论基础:
这些技术的理论基础:
植物细胞的全能性植物细胞的全能性动物细胞全能性如何?
动物细胞全能性如何?
动物细胞动物细胞工程常用的技术有哪些?
工程常用的技术有哪些?
动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备细胞核移植细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程技术技术动物细胞工程的基础动物细胞工程的基础2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术教学目标教学目标简简述述动动物物细细胞胞培培养养的的过过程程、条条件件及应用。
及应用。
简简述述通通过过动动物物体体细细胞胞核核移移植植技技术术克隆动物的过程和应用前景。
克隆动物的过程和应用前景。
重点重点动物细胞培养的过程及条件。
动物细胞培养的过程及条件。
用动物体细胞核移植技术克隆动物的用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
过程。
难点难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
过程。
重点难点重点难点皮肤烧伤,如果创面很小(不大于硬币)只要皮肤烧伤,如果创面很小(不大于硬币)只要保持清洁,甚至深度烧伤,也可能自愈。
如果下层保持清洁,甚至深度烧伤,也可能自愈。
如果下层真皮受损面积较大,常常需要植皮。
植皮需要的健真皮受损面积较大,常常需要植皮。
植皮需要的健康皮片。
植皮需要的健康皮片,可以取自烧伤病人康皮片。
植皮需要的健康皮片,可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位(自体植皮),也可取自其他活自身未烧伤的部位(自体植皮),也可取自其他活人或尸体(异体植皮)等。
自体植皮是永久性的,人或尸体(异体植皮)等。
自体植皮是永久性的,取自其他人或动物的植皮是暂时性的,是在创面愈取自其他人或动物的植皮是暂时性的,是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施,合过程中为保护创面而采取的措施,10101414天后就天后就要被身体排斥。
要被身体排斥。
如果一个大面积烧伤的病人来说,自体如果一个大面积烧伤的病人来说,自体皮肤有限,其他渠道的皮肤来源不足。
如何皮肤有限,其他渠道的皮肤来源不足。
如何才能获得大量的自体健康皮肤?
才能获得大量的自体健康皮肤?
烧伤病人图片烧伤病人图片异体皮肤移植图片异体皮肤移植图片为什么要进行动物细胞培养?
人耳鼠“人耳鼠人耳鼠”再出风头再出风头20012001年,一只特别的活老鼠在年,一只特别的活老鼠在北京引起轰动北京引起轰动这是有着一对红这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。
值得一提的是,这只小白小白鼠。
值得一提的是,这只小白鼠的背上,竟长着一只几乎与身子鼠的背上,竟长着一只几乎与身子一般大小的一般大小的“人耳人耳”。
这只老鼠背。
这只老鼠背上的上的“人耳人耳”是由上海市第九人民是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。
教授利用组织工程技术复制出来的。
在京展出的数天,尽管门票高达在京展出的数天,尽管门票高达2020元,但还是有将近元,但还是有将近2020万人,心甘情愿地掏钱一睹万人,心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠人耳鼠”的风采。
的风采。
人耳鼠的出现,透露了怎样的信息?
1、概念、概念是指从动物机体内取出相关的是指从动物机体内取出相关的组组织织,将它分散成,将它分散成单个细胞单个细胞,然后放,然后放在适宜的在适宜的培养基培养基中,让这些细胞中,让这些细胞生生长长和和增殖增殖。
2、原理、原理细胞分裂增殖细胞分裂增殖一、动物细胞培养一、动物细胞培养如何进行细胞培养如何进行细胞培养?
(一)、动物细胞培养过程
(一)、动物细胞培养过程幼龄动物幼龄动物剪碎组织剪碎组织原代细胞培养原代细胞培养取动物器官取动物器官和组织和组织细胞悬浮液细胞悬浮液传代细胞培养传代细胞培养胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞1、有关概念有关概念:
(11)、)、原代培养:
原代培养:
将动物组织消化后的初次将动物组织消化后的初次培养培养。
(分瓶前)(分瓶前)(22)、)、传代培养:
传代培养:
将将贴满瓶壁的需要重新用贴满瓶壁的需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养培养,让细,让细胞继续增殖。
这样的胞继续增殖。
这样的培养培养过程过程称为传代培养。
称为传代培养。
(分瓶后)(分瓶后)在传代培养过程中在传代培养过程中10代以前的代以前的细胞核型不变细胞核型不变1050代,增殖逐渐减慢,以至于完全停代,增殖逐渐减慢,以至于完全停止,部分细胞止,部分细胞的的细细胞核型可能发生改变胞核型可能发生改变50代以后代以后的部分细的部分细胞发生突变,获得不死胞发生突变,获得不死性,朝着等同于癌细胞的方向发展。
性,朝着等同于癌细胞的方向发展。
应用:
目前应用:
目前使用的使用的或或冷冻保存的冷冻保存的正常细胞通常正常细胞通常为为1010代以内代以内,以保持细胞,以保持细胞正常的二倍体核型正常的二倍体核型。
有关概念有关概念(33)、)、细胞株:
细胞株:
10到到40、50代的细胞,代的细胞,遗传物质没发生改变。
遗传物质没发生改变。
(44)、细胞系:
)、细胞系:
超过超过50代的细胞,代的细胞,遗传物质发生改变,可无限增殖。
遗传物质发生改变,可无限增殖。
细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别:
细胞系的细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。
接触抑制,容易传代培养。
细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?
如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?
多数组织细胞固定在表面生多数组织细胞固定在表面生长和分裂长和分裂。
随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变取动物动取动物动的组织块的组织块胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个单个细胞细胞加培加培养液养液细胞细胞悬液悬液接触接触抑制抑制部分细胞部分细胞“癌变癌变”,无限传代,无限传代动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成动物体最终培养成动物体10代代细胞细胞原原代代培培养养传代培养传代培养细细胞胞贴贴壁壁胰蛋白胰蛋白酶处理、酶处理、细胞株细胞株细胞细胞细胞系细胞系2、动物细胞培养过程:
、动物细胞培养过程:
50代代细胞细胞培养瓶培养瓶适宜条适宜条件培养件培养分瓶分瓶培养培养归纳归纳过程过程取取的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液酶酶贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞加入加入液液动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白培养培养接触抑制接触抑制原代原代培养培养1-10代细胞代细胞遗传物质遗传物质改变改变原代细胞原代细胞培养培养加加液液4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)未未遗传物质遗传物质改变改变无限传代(无限传代(细胞系细胞系)已已传代传代培养培养胰蛋白胰蛋白酶酶强调一:
细胞贴壁过程强调一:
细胞贴壁过程细胞贴壁:
细胞贴壁:
在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
培培养瓶或培养皿壁要求:
养瓶或培养皿壁要求:
表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于贴贴附。
附。
当当贴壁细胞分裂生贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
胞的接触抑制。
强调二:
接触抑制强调二:
接触抑制思考题:
思考题:
11、选用健康动物体内什么样的组织块做细胞培养、选用健康动物体内什么样的组织块做细胞培养材料?
为什么?
材料?
为什么?
因为这些组织或器官,分裂能力因为这些组织或器官,分裂能力旺盛,易于培养。
旺盛,易于培养。
动物胚胎或幼龄个体的器官或组织动物胚胎或幼龄个体的器官或组织拓展拓展-动物组织或细胞培养的难易程度动物组织或细胞培养的难易程度幼体组织或细胞幼体组织或细胞老龄组织或细胞老龄组织或细胞分化程度低的组织或细胞分化程度低的组织或细胞分化程度高的组织分化程度高的组织或细胞或细胞肿瘤组织或细胞肿瘤组织或细胞正常组织或细胞正常组织或细胞3、胰蛋白酶的作用是什么呢?
由此可说明细胞间、胰蛋白酶的作用是什么呢?
由此可说明细胞间的物质是什么成份?
的物质是什么成份?
催化蛋白质水解。
细胞间的物质主要是蛋催化蛋白质水解。
细胞间的物质主要是蛋白质白质(胶原蛋白等胶原蛋白等)。
4、细胞膜的主要成份是什么?
、细胞膜的主要成份是什么?
蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖,且细胞不能与培养液充分接触,不利于增殖,且细胞不能与培养液充分接触,不利于培养。
培养。
22、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞?
、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞?
66、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢?
织分散成单个细胞要注意什么问题呢?
77、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?
为什么、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?
为什么?
注意时间的控制注意时间的控制不能,因为两者的最适不能,因为两者的最适PHPH不同,而正常组织不同,而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗?
、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗?
能能归纳归纳过程过程取取的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液酶酶细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制培养培养1010代细胞代细胞培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加加液液遗传物质遗传物质改变改变遗传物质遗传物质改变改变动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白培养培养原代原代传代传代未未已已50代细胞代细胞多细胞动物和人体的细胞多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所都生活在内环境中,根据你所学的知识,思考并讨论下列问学的知识,思考并讨论下列问题?
题?
1、体外培养细胞时需要哪些、体外培养细胞时需要哪些提供那些物质?
提供那些物质?
2、体外培养的细胞需要什么、体外培养的细胞需要什么样的环境条件?
样的环境条件?
11、无菌、无毒的环境(先对、无菌、无毒的环境(先对培养液培养液、培养器具培养器具无菌处理;添加一定量的无菌处理;添加一定量的抗生素抗生素,防止污染;,防止污染;定期定期更换培养液更换培养液,清除代谢产物清除代谢产物)22、营养、营养糖糖(葡萄糖)、(葡萄糖)、氨基酸氨基酸、促生长因子促生长因子、无机无机盐盐和和微微量元素量元素等(合成培养基);等(合成培养基);通常需加通常需加血清或血浆血清或血浆等天然成分。
等天然成分。
(二)
(二)动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件与植物培养基相比其特点是:
与植物培养基相比其特点是:
(11)液体培养基液体培养基(22)含有动物血清含有动物血清动物体细胞大都生活动物体细胞大都生活在在液体液体的环境的环境3、温度和、温度和PH36.5+(-)0.5度,7.2-7.44、气体环境:
、气体环境:
O2和和CO2(95%空气和空气和5%CO2)提醒提醒CO22作用作用调节培养基调节培养基pH;O22作用作用细胞有氧呼吸,细胞代谢必需细胞有氧呼吸,细胞代谢必需所用装置所用装置培养皿或松盖培养瓶培养皿或松盖培养瓶+培养箱。
培养箱。
植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的细胞的细胞细胞培养基特有培养基特有成分成分、植物激素、植物激素葡萄糖、葡萄糖、培养结果培养结果植物体植物体培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、
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