实验室生物安全系统程序化文件资料和SOP.docx

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实验室生物安全系统程序化文件资料和SOP

慈溪博视眼科医院检验科生物安全细则

（程序文件及SOP）

1.生物安全管理体系

1.1紧急事件电话和办公室联系方式

救护车/火警/警察120/119/110

生物安全负责人：

医院院长

生物安全办公室：

检验科主任

实验室平面图、紧急出口、撤离路线：

1.2生物安全管理机构

生物安全负责人：

医院院长

生物安全委员会委员：

医院主管院长，主要管理部门和实验室负责人

实验室生物安全责任人：

检验科主任

实验室生物安全管理员：

各专业实验室或专业组负责人

生物安全办公室：

设在检验科办公室内，主任：

检验科主任成员：

各专业安全员

1.3职责

1.3.1生物安全负责人

医院法定代表人为生物安全负责人。

生物安全负责人的主要职责是：

◆负责建立本单位生物安全管理体系，落实生物安全管理责任部门或责任人。

◆定期召开生物安全管理会议，对实验室生物安全相关的重大事项作出决定。

◆批准和发布实验室生物安全手册、生物危害评估等重要文件。

◆保持与生物安全办公室的联系。

1.3.2实验室生物安全责任人

各专业实验室主任为实验室生物安全责任人，其主要职责是：

◆全面负责本实验室生物安全工作。

◆决定并授权进入本实验室的工作人员。

◆监督有关法规和标准操作规程的执行，纠正违规行为并有权作出停止实验的决定。

◆任命实验室生物安全管理员具体落实实验室生物安全管理工作。

◆负责制定和实施实验室应急处置预案。

◆负责实验室安全事故的现场处置和调查，并将调查结果以及处理意见向生物安全办公室报告。

◆负责对涉及感染性物质的研究计划、方案以及操作程序等，实施前的生物安全审查。

1.3.3实验室生物安全管理员

实验室生物安全管理员的主要职责是：

◆负责实验室生物安全保障以及技术规章方面的咨询工作。

◆就技术方法、程序和方案、生物因子、材料和设备进行定期的内部安全检查。

◆纠正违反生物安全操作规程的行为。

◆在出现潜在感染性物质溢出或其他事故时，协助事故调查。

◆检查和监督实验室废弃物的有效管理与安全处置。

◆检查和监督实验室各项消毒灭菌措施的落实情况。

2.生物安全评估和管理

在建设实验室或开展实验活动之前，生物安全办公室应参照卫生部《名录》组织各相关方面的专家对拟操作的生物因子的危害程度、实验活动的危险性、气溶胶传播的可能性、预防治疗的获得性、防护屏障的安全性、应急预案的有效性等因素进行评估，确定相应的生物安全防护水平等级。

实验室生物危害评估结果应由中心的法定代表人签字认可，并归档保存。

生物安全负责人最终对实验室内的安全负责，其职责之一是指导现行工作以判断潜在的危害（生物安全评估），职责之二是实验开始前采用合适的安全程序（风险管理）。

特定的实验开始前需要预先进行登记和通过生物安全负责人的批准。

风险评估和风险管理的5个“P”是指：

◆Pathogen病原体–危险的生物因子

◆Procedures规程–推荐的实验操作和安全的操作规范

◆Personnel人员–相应的培训与技能

◆Protectiveequipment防护设备–防护衣和安全设备

◆Place地点–实验室所在位置

实验室工作的每一方面都应考虑风险评估和风险管理的5个“P”。

正确地指导和风险评估能帮助免受生物危害的暴露，以及最大程度减少实验室受到感染的可能性。

2.1风险评估和风险管理表

（见下表）

表2.1风险评估和风险管理表

风险评估

风险管理

病原体

◆传染因子类型（见附录A）

◆感染途径

◆感染性疾病发生过程

病毒性、致病性、数量、浓度、人群

中影响程度、昆虫媒介的存在

◆登记

⏹院感办公室

⏹疾控中心–选择机构

规程

◆气溶胶风险：

离心、混匀、

混合、振动

◆经皮风险:

针头、注射器、玻璃吸液管、解剖刀、低温刀片/刀等

◆飞溅/溅泼风险:

吸液管、接种环

◆建立一套结合安全使用的标准操作规程

◆遵守基本的生物安全规则

◆实验室、工作区域、BSL-2或更高传染因子实验室内的设备贴上标识

◆指导实验室操作和检查实验设备

◆用非传染性材料做尝试性试验，以测

试新的规程/设备

人员

◆人员免疫

⏹赘生物疾病

⏹感染

⏹免疫抑制治疗

⏹年龄、种族、性别、妊娠

⏹手术（脾、胃切除）

◆免疫力

◆后暴露预防

◆血清库

◆对安全的态度

◆安慰

◆外伤、破损皮肤、湿疹、皮炎

◆安全培训

◆以前从事生物危害的经历

◆技术的熟练程度

◆立即向生物安全负责人和生物安全办公室报告所有的暴露事件、被忽视的事件以及相关疾病的症状

◆调查/核实事件/飞溅等，以防止再

次发生

防护设备

◆防护：

●气溶胶-可以吸入粒子直径<5µm

●飞溅/溅泼

●锐器

◆口罩

◆手套

◆生物安全柜

◆安全离心管/转子

地点

◆风险组/生物安全等级、设备

◆气溶胶风险

◆受限制的过道

◆基本的实验室-门、易清洁的地方、冲眼器、窗户

◆标签

◆用直接气流预防

2.2暴露途径

生物因子要导致疾病发生，首先必须有足够数量的因子进入或侵入人体，进入的途径有经口、呼吸道、黏膜及与动物的接触（叮、抓伤），当生物危害物进入人体，它产生疾病还需满足其它条件，它们必须在人体细胞、组织和/或器官内生长繁殖，克服人体的自然免疫机制和变异或适合人体的变化。

年龄、免疫状况、职业、物理或地理环境等因素会导致个体对疾病的不同易感性。

在涉及生物危害时，确定其最低感染量是很困难的。

同一病原体相同剂量在一个人身上可能无症状，而在另一人身上可能导致严重的症状甚至致命。

有些微生物只要一个进入到人体就足以侵入并促使疾病的发生，结核杆菌就是一个例子。

暴露途径的更多信息见下图。

MucousMembranes:

Exposurestomucousmembranesoftheeyes,noseandmouththroughsplashesorsplatters.

Ingestion:

Mouthpipetting,eating,drinking,smokinginthelab.

Inhalation:

Breathinginrespirablesizedaerosols（<5µm）,centrifugeleaks,spills,pipetting,etc.

Percutaneous:

Throughintactornon-intactskinvianeedlestick,puncturewithcontaminatedsharpobject,animalscratchorbite,throughwoundsabrasions,oreczema.

Contact（indirecttransmission）:

Viamucousmembranesornonintactskinfromhandsthathavebeenincontactwithacontaminatedsurface（i.e.benches,phones,

2.2.1实验室内传染因子的传播途径

暴露途径

防护措施

黏膜：

通过飞溅或溅泼暴露眼、鼻、嘴里的

黏膜

通过以下方式进行面部的预防：

◆戴护眼镜或面罩

◆在生物安全柜内或保护罩后工作

◆进行规范的微生物操作

吸入：

由于离心渗漏、溢出或产生气溶胶的

操作如吸液、混匀等而吸入了可吸入

的气溶胶粒子（直径<5µm）。

通过以下方式避免暴露气溶胶：

◆在生物安全柜内工作

◆离心时使用密封转子或杯

◆进行规范的微生物操作

吞咽；口腔吸入、吃、喝、在实验室里抽烟

通过以下方式防止经吞咽产生的暴露：

◆不在实验室内吃、喝或吸烟

◆始终使用手工吸液

◆进行规范的微生物操作

经皮:

被感染过的锐器刺伤完好或破损皮肤、

动物叮咬、抓伤、湿疹

通过以下方式防止皮肤破损：

◆用塑料制品代替玻璃制品

◆使用锐器要非常小心

◆用后立即将锐器丢弃在坚固防漏容器内

◆适当限制动物

◆戴不易划破的手套、袖套、

◆用防水绷带包扎好破损皮肤并戴双层手套

接触（间接传播）:

通过接触污染面（如凳、

电话、电脑、设备把手等）的手来触

摸黏膜或破损皮肤，或实验后洗手不

彻底。

通过以下方式防止间接暴露：

◆工作台面消毒

◆工作后、脱去手套后总是洗手。

◆不要用戴手套或不戴手套的手触摸脸部（良

好的个人习惯）

◆实验室内不使用化妆品。

在实验室内的任何时候始终执行以下工作制度：

◆不在实验室内吃、喝或吸烟

◆工作结束后或脱去手套后总是洗手

◆实验室内穿戴好个人防护设备，离开实验室前务必脱去个人防护设备

◆不用口吸、始终用手工吸液

◆使用锐器格外小心

◆用合适的设备抑制气溶胶的产生

◆对工作台面、溢出物和废弃物进行消毒

2.3生物安全等级

国家和卫生部对微生物和生物医学实验室确立了从事生物危害工作对应的生物安全等级。

提供了微生物操作、实验室设备和安全设施的结合使用，以及所选的感染因子与使用推荐的四种生物安全等级的实验室操作。

以下是1-4级生物安全所要求的实验室操作、防护设备、实验室设施和传染因子的概括。

2.3.1所推荐的生物安全等级与相应感染因子

生物安全等级

感染因子

规程

安全设备

（第一道屏障）

实验室设备

（第二道屏障）

BSL-1

已知对健康成人

和动物不造成疾

病。

标准微生物操作。

不需要。

◆开放工作台。

◆防止节肢动物和啮齿动物进入。

◆实验室靠近出口处有洗手池。

◆实验室的窗户有纱窗。

◆适当的消毒设备。

BSL-2

能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。

实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。

BSL-1操作加：

◆限制进入

◆生物危害警示标记

◆锐器谨慎使用

◆制定安全手册，确定

所有废物消毒和医疗监督计划

I级orII级生物安

全柜或其它物理防护

设备，这些设备应用

于可能会产生飞溅或

气溶胶的感染因子的

操作；个人防护设备：

外套、手套、所需要

的面部防护

BSL-1加：

◆实验室门应带锁并可自动关闭。

◆应设洗眼设施、高压灭菌锅。

BSL-3

能引起人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。

BSL-2操作加：

◆控制进入

◆所有废弃物消毒

◆实验室衣服洗之前对

其进行消毒

II级（B2）或Ⅲ级生物安全柜和用于所有感染因子操作的其它物理防护设备；个人防护设备：

防护衣、手套、需要的呼吸道防护。

清洁区设置淋浴装置。

BSL-2加：

◆自成隔离区，进入实验室的过道用物理方式隔开。

◆入口处采用自动关闭

双层门。

◆独立的送排风系统，空气排至室外，不在

室内循环。

◆实验室负压

◆实验室污染区内设不排蒸汽的高压蒸汽灭菌器。

BSL-4

能引起人或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物之间传播的病原体。

BSL-3操作加：

◆进入实验室前更衣

◆出口处冲淋

◆所有材料在出口处消毒

按照Ⅲ级生物安全的所有步骤进行，全身穿上有空气供应系统、正压个人防护衣。

BSL-3加：

◆远离建筑物或单独的

区域

◆安装供应、排放真空

系统

◆BMBL上的其它需求

根据国家标准GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》编制

2.3.2生物安全评估

目前实验室内开展的病原体检测的范围为：

病毒名称

危害程度分类

未经培养的感染材料的操作

英文名

中文名

分类学地位

HepatitisAvirus

甲型肝炎病毒

小RNA病毒科

第三类

BSL-2

HepatitisBvirus

乙型肝炎病毒

嗜肝DNA病毒科

第三类

BSL-2

HepatitisCvirus

丙型肝炎病毒

黄病毒科

第三类

BSL-2

HepatitisDvirus

丁型肝炎病毒

卫星病毒

第三类

BSL-2

HepatitisEvirus

戊型肝炎病毒

嵌杯病毒科

第三类

BSL-2

序号

病原菌名称

危害程度分类

样本检测所需生物安全实验室级别

学名

中文名

1.

Mycobacteriumbovis

牛型分枝杆菌

第二类

BSL-2

2.

Mycobacteriumtuberculosis

结核分枝杆菌

第二类

BSL-2

3.

Vibriocholerae

霍乱弧菌

第二类

BSL-2

4.

Staphylococcusspp

葡萄球菌属

第三类

BSL-2

5.

Streptococcusspp

链球菌属

第三类

BSL-2

6.

Enterococcusspp

肠球菌属

第三类

BSL-2

7.

Micrococcusspp

微球菌属

第三类

BSL-2

8.

Moraxellaspp

莫拉菌属

第三类

BSL-2

9.

Neisseriaspp

奈瑟菌属

第三类

BSL-2

10.

Corynebacteriumspp

棒状杆菌属

第三类

BSL-2

11.

Bacillusspp

芽胞杆菌属

第三类

BSL-2

12.

Listeriaspp

李斯特菌属

第三类

BSL-2

13.

Erysipelothrixspp

丹毒丝菌属

第三类

BSL-2

14.

Rhodococcusequi

马红球菌

第三类

BSL-2

15.

Nocardiaspp

诺卡菌属

第三类

BSL-2

16.

Eikenellacorrodens

啮蚀艾肯菌

第三类

BSL-2

17.

Enterobacteriaceae

肠杆菌科

第三类

BSL-2

18.

Vibriospp

弧菌属（除霍乱弧菌）

第三类

BSL-2

19.

Aeromonasspp

气单胞菌属

第三类

BSL-2

20.

Plesiomonasspp

邻单胞菌属

第三类

BSL-2

21.

Pseudomonasspp

假单胞菌属

第三类

BSL-2

22.

Acinetobacterspp

不动杆菌属

第三类

BSL-2

23.

Flavobacteriumspp

黄杆菌属

第三类

BSL-2

24.

Haemophilusspp

嗜血菌属

第三类

BSL-2

25.

Pasteurellaspp

巴斯德菌属

第三类

BSL-2

26.

Gardnerellaspp

加德纳菌属

第三类

BSL-2

27.

Legionellapneumophila

嗜肺军团菌

第三类

BSL-2

28.

Campylobacterspp

弯曲菌属

第三类

BSL-2

29.

Helicobacterspp

螺杆菌属

第三类

BSL-2

30.

Clostridiumspp

梭菌属

第三类

BSL-2

31.

Bacteroidesspp

拟杆菌属

第三类

BSL-2

32.

Fusobacteriumspp

梭杆菌属

第三类

BSL-2

33.

Peptostreptococcusanaerobius

厌氧消化链球菌

第三类

BSL-2

34.

Actinomaduraspp

放线菌属

第三类

BSL-2

35.

Arcanobacteriumspp

隐秘杆菌属

第三类

BSL-2

36.

Chlamydiapneumoniae

肺炎衣原体

第三类

BSL-2

37.

Mycoplasmapneumoniae

肺炎支原体

第三类

BSL-2

38.

Ureaplasmaurealyticum

解脲脲原体

第三类

BSL-2

39.

Candidaalbicans

白假丝酵母菌

第三类

BSL-2

40.

Cryptococcusneoformans

新生隐球菌

第三类

BSL-2

根据上述病原体检测的表格，本实验室仅仅允许在生物安全等级为1和2的实验室里工作。

2.3.3生物安全检查

为确保实验室生物安全制度、措施落实到位，避免生物安全事故，特制订本制度。

1、主任每年至少组织一次生物安全全面检查，对关键控制点可根据风险评估报告适当增加检查频率。

检查内容包括：

a）生物安全管理体系、实验室活动运行情况；

b）生物安全管理制度是否完善、是否落实；

c）实验室设施、设备和人员的状态；

d）应急装备、消防装备、报警体系和撤离程序功能及状态是否正常；

e）危险物品如可燃易燃性、传染性、放射性以及有毒物质的防护、控制情况；

f）废物处理及处置情况；

g）不符合规定的工作是否及时得到纠正；h）现有资源能否满足工作要求等。

2、科室负责人负责实验室生物安全的全面管理，检查、督促生物安全监督员工作，每季度进行科室生物安全工作检查，检查内容包括：

a）生物安全监督员工作记录；

b）菌（毒）株、样本的运输、保存、使用、销毁情况；

c）生物安全实验室的消毒和灭菌情况以及感染性废物的处理情况；

d）生物安全设备的运行、维护情况；

e）防护物资的储备情况等。

3、生物安全监督员负责实验室日常工作的生物安全监督、检查，内容包括：

a）生物安全管理制度执行情况；

b）个人防护要求执行情况；

c）实验室人员的生物安全操作是否规范等；

d）及时发现、纠正违规行为，避免生物安全事故发生。

4、对于检查中发现的问题及时纠正，必要时制定纠正措施或实施整改，并进行跟踪验证。

5、按照资料、档案管理制度保存所有检查记录，及时归档。

6、将自查发现的问题作为实验室生物安全培训计划解决。

7、为保证检查工作的质量，应依据事先制定的适用于不同工作领域的检查表实施检查。

8、当发现不符合规定的工作、发生事件或事故时，应立即查找原因并评估后果；必要时，停止工作。

9、生物安全委员会应参与安全检查。

10、外部的评审活动不能代替实验室的自我安全检查。

3．标志

3.1墙面标志

3.1.1实验室入口处的墙面上应有实验室名称。

3.2门上标志

3.2.1实验室入口处门上必须有生物危害警告标志。

标志包括国际生物危害符号、生物危害等级（如BSL-1或2或3），有特殊要求的专用实验室应标明特殊进入等要求。

国际生物危害警告标志

3.2.2BSL-2实验室入口处门上必须有人员出入限制标志和相关信息，如实验室责任人的姓名、联系电话等。

3.3标贴和颜色

3.3.1在实验室内，生物危害符号应贴在医用垃圾容器、冰箱、冷冻箱、培养皿和含BSL-2或BSL-3传染因子的离心机、污水池、超声腐蚀器及生物安全柜等上。

3.3.2当设备用于处理人血液标本、其它潜在感染物质或感染因子时，生物危害符号应临时贴在相关的设备上。

3.3.3生物危害符号也应贴在其它用于储存、运送BSL-2或BSL-3传染因子、血液标本或“其它潜在感染物质”（注意：

未怀疑包含传染因子或“其它潜在感染物质”的运送可以不贴生物危害符号，而贴诊断样品标志）的容器上。

标贴应用带子、线、粘胶或其它方式尽可能贴近容器以防止松动或意外弄丢。

3.3.4生物危害警告标志底色应该是桔红色，字母和符号用对比明显的颜色。

如果有下列情况，生物危害警告标志可以免贴：

（1）废弃物是放在黄色有的袋内；

（2）在储存、转移、运送、处理过程中，单个盛血液或“其它潜在物质”的容器被放置在贴有生物危害符号的第二个容器中。

（3）当实验室门上贴有生物危害警告标志时，其室内的仪器等物品可免贴。

3.4外送维修或处理的设备

3.4.1已污染或可能污染的设备外送维修或处理必须尽可能彻底消毒，在设备上贴上生物危害警示。

3.4.2对一些不能进行彻底消毒的仪器设备，在外送之前，将这些仪器设备尽可能的消毒（冲洗或擦干净外部），并贴上生物危害警示。

3.4.3生物危害警示还必须注明哪些部分仍存在污染，生物危害符号贴在污染区域附近。

生物危害警示

本设备的外部和内部表面已消毒，已无任何生物危害。

本设备将作为（在□内打勾）

服务/维修□重新安置□报废□

消毒操作人员

所使用的消毒剂

消毒日期

设备放置地点

实验室联系电话

设备的以下区域仍存在污染

4.生物安全要求和人员管理

以下的内容描述了实验人员的要求。

每个专业科室负责人的职责是确保实验室能遵循规章制度。

4.1生物物质的使用登记

各专业科室实验室生物安全责任人要完成和递交“生物物质的使用登记表”。

生物安全办公室必须保存有关人员使用生物物质的准确的信息（例如：

微生物、细胞系、人源物质、动物和毒物），并要求各专业科室负责人每年递交准确信息，以及一年里有关生物物质的增加或删除、房间位置的增加或删除等变化。

4.1.1人类病毒

在开始研究人类致病因子前需要在生物安全办公室登记。

生物安全办公室必须在实验开始前批准全部包括有传染性因子或潜在生物危害的生物物质导入动物。

实验人员必须在新的实验开始前接受生物安全培训。

生物安全培训由生物安全办公室组织安排。

生物安全负责人的职责是确保实验室全体人员得到适当操作和技术的培训。

生物安全负责人和/或实验室生物安全责任人在用风险组2（生物安全水平2）因子工作前必须到生物安全办公室登记。

风险组2和较高致病因子名单见附录A。

生物安全办公室将定期监控设备和操作，同时回答任何关于安全的问题。

在下列情况发生之前必须联系生物安全办公室：

◆开始用新的可感染因子工作

◆改变现有工作的范围或位置

◆将可感染因子提供给科内外其他工作人员

◆在实验室安排非本实验室的工作人员工作

4.1.2人类血液、体液、组织和其他潜在有传染性的物质

血液耐受致病标准适用于“职业暴露”于人类血液或其他潜在有传染性物质下的工作人员。

其他潜在有传染物质包括：

◆人类细胞或组织培养

◆来自于人类（活的或死的）任何不固定的组织或器官，除了完整无缺的皮肤。

◆人类体液，包括尿液、粪、唾液或眼泪等。

◆HIV－或HBV－包括培养液或其他溶液

◆血液，器官或其他来自于感染了HIV或HBV或其他血液耐受致病原的实验动物组织。

如果工作人员没有直接接触血液或其他潜在有传染物质，但使用那些用于处理或贮存血液，其他潜在有传染物质或血液耐受致病