精选家兔主动脉神经放电 doc资料.docx

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精选家兔主动脉神经放电doc资料

实验八家兔主动脉神经放电

一、实验目的

1、学习颈部脉神经及血管分离术

2、学习在体主动脉神经冲动的引导方法

3、观察主动脉神经放电特点及药物对神经冲动发放的影响

二、实验原理

1、主动脉神经（又称减压神经）是主动脉弓压力感受器的传入神经。

神经传入冲动的频率，在一定范围内随主动脉血压的升高或降低而相应增加或减少，从而使压力感受性反射增强或减弱，以维持动脉血压的相对稳定，即减压反射。

2、心电图导联

心脏除极，复极过程中产生的心电向量，通过容积导电传至身体各部，并产生电位差，将两电极置于人体的任何两点与心电图机连接，就可描记出心电图，这种放置电极并与心电图机连接的线路，称为心电图导联（lead）。

常用的导联如下：

（一）标准导联亦称双极肢体导联，反映两个肢体之间的电位差。

⏹Ⅰ导联将左上肢电极与心电图机的正极端相连，右上肢电极与负极端相连，反映左上肢（L）与右上肢（r）的电位差。

当l的电位高于r时，便描记出一个向上的波形；当r的电位高于l时，则描记出一个向下的波形。

⏹Ⅱ导联将左下肢电极与心电图机的正极端相连，右上肢电极与负极端相连，反映左下肢（F）与右上肢（r）的电位差。

当f的电位高于r时，描记出一个向上波；反之，为一个向下波。

⏹Ⅲ导联：

将左下肢与心电图机的正极端相连，左上肢电极与负极端相联，反映左下肢（F）与左上肢（l）的电位差，当f的电位高于l时，描记出一个向上波；反之，为一个向下波。

3、心电图

①、P波：

心房除极化

②、QRS：

心室去极化

③、T波：

心室复极化T>1/10R

④、P-R间期：

<0.20s（60-90次/分）兴奋通过房室交界和房室束传导所需的时间

⑤、S-T段：

<0.05~0.1mV心室肌细胞均处于复极化缓慢进行阶段，各部分之间没有电位差。

⑥、u波：

T后0.02~0.04s，与T波方向一致，蒲肯野细胞复极化。

三、材料与方法

（一）动物与器材

⏹家兔

⏹兔体手术台、RM6240计算机采集系统、音箱、常用手术器械、引导电极、止血钳、注射器、20%氨基甲酸乙酯、生理盐水、肾上腺素（1∶5000）、乙酰胆碱（1∶10000）、石蜡油、棉花。

（二）实验操作

1.麻醉动物

2.固定与剪毛：

背位固定，剪去颈部手术野的被毛。

3.实验装置连接：

神经放电引导，心电图引导，监听。

4.切开颈部皮肤，分层分离颈部肌肉。

5.分离主动脉神经，用保护电极引导主动脉神经放电。

6、进入实验系统，通道1记录主动脉神经放电（采样频率20KHz，扫描速度100ms/div，灵敏度50uV，时间常数0.001s，滤波3KHz）。

7．通道2引导心电图将针形电极插入动物四肢，选择II导联记录（右上肢负极-绿，左下肢正极-红，左上肢接地）。

（采样频率20KHz，扫描速度100ms/div，灵敏度1mV，时间常数0.2s，滤波500Hz）。

8、实验观察：

1）选择适宜的扫描速度和增益（灵敏度），用比较显示的方式观察主动脉神经冲动发放与心电图的相干性。

2）从耳缘静脉注入0.1~0.3ml肾上腺素溶液，观察主动脉神经放电、心率变化。

3）待恢复后，同法注入0.1~0.2ml乙酰胆碱溶液，观察主动脉神经放电、心率变化。

四、实验结果及分析

1、正常放电及心电图

生物信号波形

实验名称：

兔减压神经放电实验日期：

2008-05-14

2、注入肾上腺素后波形图

3、注入乙酰胆碱后波形图

分析：

1、分析图1， P波代表了心房的去极化过程，其宽度反映了去极化在整个心房传播所需的时间。

QRS综合波出现在去极化在心室肌内传导的时候，包括三个紧密相连的电位波动。

由于心室组织的体积大于心房，QRS综合波幅度较P波为大；又由于去极化通过蒲肯野纤维和心室肌的传播速度很快，所以QRS综合波的时间较短。

P波早于心房收缩波、QRS波群早于心室收缩波说明心脏的搏动是由电信号引起的。

在窦房结发出兴奋，经心房肌传播到心房，形成P波，进而引起心房的搏动。

与此同时，窦房结的兴奋也可通过心房肌传到房事交界，然后由房室束传到蒲肯野纤维而到达心肌，进而引起心室的搏动。

2、支配心脏的传出神经为心交感神经和心迷走神经（见图2、3）。

（1）心交感神经及其作用：

心交感神经的节前神经元位于脊髓第1-5胸段的中间外侧柱，其轴突末梢释放的递质为乙酰胆碱，后者能激活节后神经元膜上的N型胆碱能受体。

心交感节后神经元末梢释放的递质为去甲肾上腺素，与心肌细胞膜上的β型肾上腺素能受体结合，可导致心率加快，房室交界的传导加快，心房肌和心室肌的收缩能力加强。

这些效应分别称为正性变时作用、正性变传导作用和正性变力作用。

（2）心迷走神经及其作用

支配心脏的副交感神经节前纤维行走于脑神经干中。

心迷走神经节后纤维末梢释放的乙酰胆碱作用于心肌细胞膜的M型胆碱能受体，开放K离子，减少Ca离子内流Ca，可导致心率减慢，心房肌收缩能力减弱，心房肌不应期缩短，房室传导速度减慢，即具有负性变时、变力和变传导作用。

一般说来，心迷走神经和心交感神经对心脏的作用是相佶抗的。

但当两者同时对心脏发生作用时，在多数情况下，心迷走神经的作用比交感神经的作用占有较大的优势。

在动物实验中如刺激心迷走-交感神经干，常出现心率减慢效应。

其机制比较复杂。

六、注意事项

1、麻醉应适量，过浅易骚动，过深不灵敏。

2、手术过程中应尽量减少出血，分离神经应小心以免损伤神经。

3、待前一实验的心电、神经冲动恢复正常后，再进行下一项目的观察。

4、实验中注射药物较多，注意保护血管。

汉防己甲素肺靶向微球对大鼠低氧性 肺动脉高压的急性效应

　　【摘要】　目的　了解汉防己甲素（Tet）肺靶向微球对低氧性肺动脉高压的治疗效应及其对肺循环的选择性作用。

方法　采用喷雾干燥法制备Tet含量为32%的Tet肺靶向微球；雄性Wistar大鼠分为3组，每组10只，分对照组和Tet水溶剂治疗组、Tet肺靶向微球治疗组。

经低氧处理3周，分别给予Tet水溶剂和Tet肺靶向微球，观察用药前后大鼠肺动脉平均压（mPAP）和体循环平均压（mSBP）的变化。

结果　低氧性肺动脉高压大鼠应用Tet肺靶向微球组mPAP的降低较Tet水溶剂治疗组更为明显（P<0.05），且mPAP在注药后60min时仍明显低于注射前水平；大鼠mSBP无显著变化。

结论Tet肺靶向微球对肺循环具有较好的选择性，可明显增强Tet降低mPAP的效应。

　　【关键词】　高血压，肺性；　汉防己甲素；　肺靶向微球

Theacuteeffectoftetrandrinepulmonarytargetingmicrospheresonhypoxicpulmonaryhypertensioninrats

CHENGDeyun,CHENWenbin,LUBin,etal.

DepartmentofRespiratoryDisease,TheFirstAffiliatedHospital,WestChinaUniversityofMedicalSciences,Chengdu610041,China

　　【Abstract】　Objective　Toinvestigatetheeffectoftetrandrine（Tet）pulmonarytargetingmicrospheresonhypoxicpulmonaryhypertensionanditsselectiveroleonpulmonarycirculation.Methods　Tetpulmonarytargetingmicrospheresweresynthesizedbysprayingdesiccation,thecontentoftetrandrineinpulmonarytargetingmicrospheresis32%.TwentyWistarratswereexposedtohypoxiaforthreeweeks,theratsweregivenTetpulmonarytargetingmicrospheresandTetaqueoussolutionrespectivelyandanother10ratswereasnormalcontrol.Themeanpulmonaryarterialpressure（mPAP）wasmeasuredbyarightcardiaccatheterization,meansystemicbloodpressure（mSBP）wasmeasuredbyleftfemoralcatheterization.Results　Attheendofhypoxictreatment,ratsdevelopedpulmonaryhypertension.mPAPintheratsreceivingTetpulmonarytargetingmicrospheresdecreasedmoreobviouslythantheratsreceivingTetaqueoussolution（P<0.05）,andtheeffectsmaintainedfor60minafteradministration.However,themSBPremainednormalinratsreceivingTetpulmonarytargetingmicrospheres.Conclusion　TetpulmonarytargetingmicrospherescanimprovetheeffectofTetonthehypoxicpulmonaryhypertensionandTethastheselectiveroleonthepulmonarycirculation.

　　【Keywords】　Hypertension,pulmonary;　Tetrandrine;　Pulmonarytargetingmicrospheres

　　汉防己甲素（tetrandrine,Tet）具有扩张血管、抑制胶原合成和多种介质释放的作用，临床上己应用于高血压和冠心病等多种疾病的治疗。

文献报道，Tet对慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺动脉高压亦具有较好的疗效［1］。

为了使药物主要分布于肺内，达到提高疗效和降低副作用的目的，我们采用喷雾干燥法制备Tet肺靶向微球，观察其对大鼠低氧性肺动脉高压的急性治疗效果。

材料与方法

　　一、Tet肺靶向微球的制备

　　1.试剂和主要仪器：

Tet（江西彭泽制药厂生产）；载体材料选择白蛋白。

UV-250型分光光度仪（岛津）；S-450型电子扫描显微镜（，分辨率6nm）；CDR-1型差热分析仪（上海天平仪器厂）。

　　2.制备工艺：

采用喷雾干燥法。

由于Tet不溶于水，采用改变溶剂法制成微晶，将微晶分散在液滴中喷雾干燥成球，然后加热变性（100℃）、离心和洗涤后制成白色粉末状Tet微球。

　　二、实验方法

　　1.动物和低氧处理：

雄性Wistar大鼠共30只（华西医科大学实验动物中心提供），体重200～220g，分笼饲养，自由饮水和摄食。

按体重配对分为正常对照组（Ⅰ组）、Tet水溶剂治疗组（Ⅱ组）和Tet肺靶向微球治疗组（Ⅲ组），每组10只。

TetⅡ组和TetⅢ组在注药前均接受常压低氧［吸入氧浓度（FiO2）=0.10±0.05］3周，建立肺动脉高压模型。

正常对照组在注药前不接受低氧处理，置于同一房间内饲养。

表1　各组大鼠Tet肺靶向微球降低mPAP的效果（±s）

组别

只数

注药前mPAP

（mmHg）

注药后mPAP（mmHg）

1min

5min

10min

20min

30min

60min

Ⅰ组

10

Ⅱ组

10

▲

*

*

?

Ⅲ组

10

▲

*

*#

*#

*#

*#

*#

　　注：

1mmHg=0.133kPa，与Ⅰ组比较，▲P＜0.01；与同组用药前比较，*P＜0.05；与Ⅱ组比较，#

表2　各组大鼠Tet肺靶向微球对mSBP的影响（±s）

组别

只数

注药前mSBP

（mmHg）

注药后mPAP（mmHg）

1min

5min

10min

20min

30min

60min

Ⅰ组

10

110±14

104±　9

98±12*

96±　9*

102±11

104±14

107±16

Ⅱ组

10

104±　9

99±12

96±　9*

95±14*

98±18

101±12

104±12

Ⅲ组

10

111±11

108±14

107±14

105±13

108±12

107±14

109±17

　　注：

与用药前比较，*P＜0.05

　　2.给药方法：

Ⅱ和Ⅲ组大鼠低氧结束后，Ⅱ组大鼠经左侧颈外静脉缓慢注射Tet水溶剂4mg/kg，Ⅲ组大鼠经左侧颈外静脉缓慢注射Tet肺靶向微球10mg/kg（相当于Tet3.2mg/kg）。

Ⅰ组大鼠经左侧颈外静脉缓慢注射Tet水溶剂4mg/kg。

　　3.观察指标：

大鼠经戊巴比妥钠（33mg/kg）腹腔内注射麻醉。

经右侧颈外静脉将微导管插入大鼠肺动脉检测其肺动脉平均压（mPAP），经大鼠左侧股动脉插管检测其体循环平均压（mSBP），以四道生理记录仪进行数据记录。

待上述测定指标稳定时记录用药前基础值，然后分别给予Tet水溶剂和Tet肺靶向微球，记录用药后1、5、10、20、30、60min时的上述指标变化。

　　三、统计分析

　　采用两样本均数的t检验，数据用±s表示。

结果

　　一、Tet肺靶向微球的特性

　　对微球特性分析，大多数微球呈大小均匀的球形微粒，其平均粒径为2μm，见1；药物含量分析显示微球中含Tet量为32%；经电泳试验证实微球带有正电荷。

　　二、Tet肺靶向微球的作用

　　1.Tet肺靶向微球对大鼠mPAP的作用：

对正常对照组大鼠静脉注射Tet水溶剂后，大鼠mPAP无明显改变；低氧3周大鼠mPAP明显升高，形成了肺动脉高压，经静脉注射Tet水溶剂1min后大鼠mPAP开始下降，于5min左右达最低水平，30min后回升至注射前水平；给低氧3周大鼠静脉注射Tet肺靶向微球后1minmPAP开始下降，于10min左右达最低水平，维持较长的时间，60min仍未回升至注射前水平，见表1。

1　Tet肺靶向微球扫描电镜　（　×15000）

　　2.Tet肺靶向微球对大鼠mSBP的作用：

对正常对照组及低氧3周大鼠静脉注射Tet后，mSBP出现下降趋势，于5～10min左右达最低水平，然后逐渐回升，于30min后恢复到注射前水平；给低氧3周大鼠静脉注射Tet肺靶向微球后，mSBP无明显变化，见表2。

讨论

　　正常大鼠静脉注射Tet水溶剂后，mPAP无明显变化，说明Tet对正常大鼠肺动脉压无影响。

低氧性肺动脉高压大鼠接受Tet水溶剂静脉注射后，出现mPAP下降，其降低mPAP的作用在30min左右消失；Tet肺靶向微球静脉注射后，大鼠mPAP降低程度更为显著，且mPAP在60min时仍明显低于注射前水平，说明Tet肺靶向微球具有比Tet水溶剂更强和更持久的降低低氧性肺动脉高压效应。

正常和低氧大鼠静脉注射Tet水溶剂后，均可出现轻微的mSBP降低，显示出Tet对体循环的降压效应，说明Tet同其它的扩血管药物一样，对肺循环不具有选择性，在降低mPAP的同时，可引起一定程度的mSBP下降。

对低氧大鼠应用Tet肺靶向微球后，mSBP无显著变化，提示Tet肺靶向微球的作用主要发生于肺内，亦即具有一定的选择性。

　　Tet为中药汉防己中提取的生物碱，具有多种药理作用，包括扩张血管、减轻炎症过程和抑制胶原合成等作用［2］；对COPD肺动脉高压患者应用Tet后，可使其肺动脉压降低［1］。

我们以前的研究亦发现，对低氧性肺动脉高压大鼠应用Tet水溶剂并同时继续低氧1周，其mPAP明显降低［3］，均提示Tet在低氧性肺动脉高压的治疗中具有较大的应用前景。

然而，由于Tet水溶剂经注射后，迅速通过肺脏进入体循环，故Tet水溶剂在肺内停留时间不长，其降低mPAP的作用时间亦较短暂，且进入体循环的Tet降低mSBP，产生一定的不良反应。

本研究将Tet制成白蛋白微球，经静脉注射后可被肺毛细血管床机械性滤取以及所带电荷的作用而具有肺靶向的特性。

　　Kanke等［4］报道，微粒的直径和电荷等特征可影响微球的靶向特性。

微球的大小与其机械性截留有关，直径为7～15μm的微球可被肺截留，从而达到延长药物在肺内停留时间的作用；微球所带电荷与其靶器官导向有关，带正电荷的微粒较易达到肺脏，而带负电荷的微球则较易进入肝脏［5］。

本研究采用喷雾干燥法制备的Tet肺靶向微球直径为2μm，带有正电荷，具备肺靶向的特性。

该法制成的微球直径为2μm较文献报道的微球直径为小，可避免微球直径过大导致肺毛细血管阻塞而发生肺血管栓塞的危险，但由于其电荷的作用，以及溶解后的微球可相互粘附，从而可延长微球在肺循环的停留时间。

低氧性肺动脉高压大鼠静脉注射后，初步研究的结果提示Tet肺靶向微球较Tet水溶剂具有更好的治疗效果，而无明显的降低体循环血压的作用。

说明Tet制成微球后在肺内停留时间显著延长，可明显提高Tet的治疗效果，减少不良反应的发生。

项目：

“九五”科技攻关专题资助项目（96-906-02-17）；四川省中医管理局科研资助项目（96027）

作者单位：

程德云（610041成都，华西医科大学附属第一医院呼吸科）

陈文彬（610041成都，华西医科大学附属第一医院呼吸科）

莫晓能（610041成都，华西医科大学附属第一医院呼吸科）

陆彬（药学院）

参考文献

　1，康健，于润江，王怀良，等.汉防己甲素降低慢性阻塞性肺病肺动脉高压的临床观察.中华结核和呼吸杂志，1993，16：

93-94.

　2，杨仪方，王联亿.汉防己甲素的药理作用研究近况.中国药理学通报，1986，2：

43-45.

　3，李为民，陈文彬，吴兆锋，等.汉防己甲素对缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织钙调素活性的影响.中华结核和呼吸杂志，1996，19：

75-77.

　4，KankeM,SimmonsGH,WeissDL,etal.Clearanceof141　　Ce-labeledmicrospheresfrombloodanddistributioninspecificorgansfollowingintravenousandintraarterialadministrationinbeagledog.JPharmSci,1980,69:

755-762.

　5，王剑红，陆彬，胥佩菱，等.肺靶向米托蒽醌明胶微球的研究.药学学报，1995，30：

549-555.

（收稿日期：

1999-12-15）

黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应*

    摘　要　目的与方法：

以柯萨奇B3病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞，利用膜片钳记录技术了解黄芪对感染柯萨奇病毒后心肌细胞L型钙通道及钠钙交换载体的影响，以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制。

结果：

黄芪不影响正常心肌细胞L型钙通道电流的幅度，但可减缓L型钙通道电流的衰减。

黄芪也不影响内向NCE电流，但使外向NCE电流增加，从而使动作电位期间由NCE转运入细胞内的钙离子增加。

病毒感染增加心肌细胞L型钙通道电流的幅度，抑制内向钠钙交换电流，并使钠钙交换电流的逆转电位负移。

黄芪可抑制病毒感染细胞L型钙通道电流的增加，减轻CVB3对内向NCE电流的抑制作用和使负移的逆转电位正常化。

结论：

黄芪通过拮抗CVB3感染对L型钙通道和钠钙交换电流的影响，可防止病毒感染可能导致的细胞内钙超载和异常电活动，从而对感染细胞起到保护作用。

　　主题词　黄芪；柯萨奇病毒；钙通道；心肌；大鼠；

EffectsofastragalusmembranaceusonLtypecalciumchannel

andNa+/Ca2+exchangeinadultratcardiomyocytes

infectedwithcoxsackievirusB3

LIUGong-Xin,YANGYing-Zhen,GUQuan-Bao,GuoQi,YuYong

KeyLaboratoryofViralHeartDiseasesofMinistryofPublic

Health,ZhongshanHospital,ShanghaiMedicalUniversity;

ShanghaiInstituteofCardiovascularDiseases,Shanghai（200032）

　　AbstractAIMandMETHODS:

　Bypatchclamprecordingtechniquestoinvestigatetheeffectsofastragalusmembranaceus（AM）onLtypevoltagedependentcalciumchannel（LVDCC）andNa+／Ca2＋exchange（NCE）inadultratcardiomyocytesinfectedwithcoxsackievirusB3（CVB3）soastounderstandthemechanismofAMtocuremyocarditis.RESULTS：

AMdidnotaffecttheamplitudeofcalciumcurrent,butdecreasedthe“rundown”ofcalciumcurrent;also,AMhadnoeffectoninwardNCEcurrent,butincreasedoutwardNCEcurrent.BothofthefunctionsofAMtoLVDCCandNCEwouldincreasethecalciuminflowduringtheactionpotential.TheLVDCCcurrentinratcardiomyocytesinfectedwithCVB3increased;theinwardNCEcurrentdecreased,andthereversepotentialofNCEwasshiftedtonegative.AMcouldinhibittheincreaseofcalciumcurrent,mitigatetheinhibitionofCVB3wasshiftedt