中药制剂分析打印.docx

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1.国家药品标准包括：

《中华人民共和国药典》和局颁药品标准2.制定中药质量标准额的原则安全有效、技术先进、经济合理、不断完善。

3.制定中药质量标准额的原则主要体现在安全性与有效性、先进行与合理性、规范性与进展性、权威性。

4.去除蛋白方法：

加入与水相混溶的有机溶剂、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐及铜盐的有机溶剂、超滤法、酶水解法、加热法。

5.净化与富集的方法：

液液萃取法LLE、固相萃取法SPE、注切换技术。

6.固相萃取法SPE的原理、洗脱方式及步骤：

原理：

建立在传统的液液萃取基础之上，结合物质的相似相溶机理和目前广泛应用的HPLC、GC中的固定相基础知识逐渐发展起来的。

洗脱方式：

（1）待测成分与固定相之间的亲和力更强，因而被保留，用一种溶剂先将杂质洗掉，然后用另一种对待测成分亲和力更强的溶剂洗脱待测成分；

（2）杂质较待测成分与固定相之间亲和力更强，则待测成分被直接洗脱。

操作步骤：

（1）柱的活化，用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5ml水洗去柱中的甲醇。

（2）上样。

（3）清洗，用2~5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如氨基酸、亲水的蛋白质、无机盐、糖以及中等保留成分的极性化合物、低肽等。

（4）洗脱，用2~5ml甲醇或甲醇_水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂的药物等强保留的待测组分。

7.缀合物的水解方法：

酸水解、酶水解、溶剂解。

8.生物碱的定性鉴别方法：

化学反应法、色谱法。

9.生物碱含量测定

（1）总生物碱的含量测定①化学分析法A酸碱滴定法B重量法多为测定总生物碱的含量，据游离生物碱和生物碱盐在水和水不相溶的有机溶剂中的溶解度不同而设计的；或利用与沉淀试剂反应形成不溶性盐来设计。

a提取重量法b形成不溶性盐的重量法②分光光度法A.直接测定法B.离子对萃取比色法（酸性染料比色法）：

原理：

在适当的PH介质中，生物碱B可与氢离子结合成盐，成为阳离子BH+，而酸性染料在此条件下解离为阴离子In-,生物碱盐的阳离子与染料阴离子定量的结合成有色络合物。

BH++In--BH+In-此离子对课定量的溶于某些有机溶剂，测定有机溶剂的吸收度或经碱化后释放出的染料的吸收度，即可按分光光度法测定生物碱的含量。

注意事项：

a、介质的pH、酸性染料的种类和有机溶剂的选择，尤以PH的选择最重要。

如pH太低，则水相酸性强，虽然生物碱成盐，但酸性染料亦以酸的形式存在；pH太高则水相碱性强，生物碱以游离状态存在，酸性染料以离子形式存在。

都不能使阴阳离子定量地结合。

b、酸性染料的选择常用的有甲基橙、溴酚蓝、溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫等c、选择有机溶剂的原则是根据离子对与有机溶剂能否形成氢键以及形成氢键的能力的强弱而定。

d、有机相中混入水分对结果有影响，可加入脱水剂或经滤纸滤过出去微量的水分。

10.雷氏盐比色法：

原理：

雷氏盐可在酸性介质中与生物碱类成分定量地生成难溶于水的有色络合物。

生物碱雷氏盐沉淀易溶于丙酮。

11.单体生物碱的含量测定A.薄层扫描法B.气相色谱法适用于有挥发性的、遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱。

C．高效液相色谱a.正相高效液相色谱局限性：

①、由于硅胶上具有弱酸性硅醇基，易吸附产生拖尾，常在溶剂中加入碱性改善剂，如氨、二乙胺、三乙胺，但在碱性系统下硅胶G的稳定性较差②、因使用的多数流动相含有相对高比例的极性改善剂，如醇或碱，以及样品中存在的水或流动相中的水，易使硅胶浸润而失活。

b.反相HPLC的改进：

①、流动相方面的改进A：

加入硅醇基抑制剂，可在流动相中抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使生物碱易出峰，峰形好。

最常用的有二乙胺、三乙胺；B：

加入离子对试剂，使其与生物碱生成离子对而掩蔽其碱性基团，从而不会与固定相表面的硅醇基作用；常用辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠表面活性剂。

注意：

柱子及时清洗C：

也可以加入季铵盐试剂，连续添加季铵盐时，平衡向右，因而被分离的生物碱和硅醇基之间的作用被阻碍，从而使生物碱得到很好的分离。

常用有溴化四甲基胺。

D：

在流动相中加入一定浓度电解质缓冲盐，可改变流动相离子强度，稳定pH值及促进离子对作用，从而改善峰形及分离效果。

②、固定相方面的改进：

封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三甲基氯硅烷（TMCS）处理，可减少残余羟基，增加单体覆盖度。

12.比色法测定生物碱含量常用的方法有：

酸性染料比色法，雷氏盐比色法，苦味酸盐比色法，异羟肟酸铁比色法。

13常用生物碱沉淀试剂：

碘-碘化钾（KI-I2）、碘化铋钾（BiI3KI）、碘化汞钾（HgI22KI）、磷钼酸（H3PO412MoO3）、磷钨酸（H3PO412WO3）、苦味酸（三硝基间苯三酚）、硫氰酸铬酸（雷氏铵盐NH4[Cr（NH3）2（SCN）4]14.黄酮类光谱特征：

吸收带Ⅰ是由B环的桂皮酰基所引起，在300-400nmⅡ带是由A环的苯甲酰基引起，在较短波长240-285nm15黄酮的定性鉴别

（1）化学显色法①还原反应A．盐酸-镁粉反应：

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红，少数显紫-蓝色，异黄酮除少数外均不显色。

B.盐酸-锌粉反应:

用以区别二氢黄酮醇、黄酮以及黄酮醇。

通常仅二氢黄酮醇显红色，黄酮、黄酮醇不显色。

C.四氢硼钠（钾）反应:

NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂，与二氢黄酮类化合物产生红色紫红，其它黄酮类化合物均不显色，可与之区别。

②络合反应（与金属离子铝、铅、锆、镁等）：

产生络合反应的条件必须具备下述条件之一：

A、5-羟基B、3-羟基C、邻二酚羟基铝盐：

常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液，生成的络合物为黄色，并有荧光。

锆盐：

多用2%二氯氧化锆甲醇液，生成黄色的络合物。

铅盐：

常用1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，生成黄-红色沉淀。

镁盐：

常用醋酸镁甲醇液，二氢黄酮、二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光。

而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄橙黄--褐色16.黄酮成分的含量测定：

A分光光度法：

以芦丁为对照品计算总黄酮的含量。

B高效液相色谱法。

17.醌类;化学显色反应①Borntrager反应：

蒽醌类成分常具有酚羟基，遇碱显橙、红、紫红色、蓝等

（2）与金属离子反应：

Pb+、Mg2+有色络合物。

游离蒽醌的含量测定：

以1、8二羟基蒽醌为对照品。

结合蒽醌的含量测定原理：

蒽醌类成分极性较强，适于极性溶剂提取，通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出，然后水解成苷元进行含量测定：

也可将药渣先行酸水解，再用非极性溶剂提取甘愿之后测定，其结果为zo总醌含量，在从中减去游离蒽醌的含量既得结合蒽醌的含量。

18.香豆素类显色反应：

异羟肟酸铁反应，与三氯化铁试剂反应，Gibbs反应，Emerson反应，重氮化反应。

含量测定：

紫外可见分光光度法，荧光分光光度法，高效液相色谱法，气相色谱法。

19.皂苷类显色反应：

乙酐-浓硫酸，三氯甲烷-浓硫酸，芳香醛-浓硫酸。

定性鉴别：

薄层色谱法：

常用显色剂有25%三氯乙酸乙醇液，15%三氯化锑试剂，10%硫酸乙醇液，0.5%茴香醛硫酸乙醇液（30:

70）等。

含量测定方法：

重量法，分光光度法，薄层扫描法，高效液相色谱法。

20.木脂素类：

含量测定：

分光光度法，薄层扫描法，高效液相色谱法21.有机酸类含量测定：

酸碱滴定法，高效液相色谱法，薄层扫描法。

22.鞣质中总酚含量测定方法（1.化学法）：

Folin-酚法，普鲁士蓝法，高锰酸钾法。

多糖含量测定主要采用比色法，显色试剂可选用3,5-二硝基水杨酸、硫酸铜-砷钼酸、苯酚-硫酸、地衣酚-硫酸、蒽酮-硫酸等23.在含砷化合物中比较重要的有雄黄、雌黄（As2S3）、信石、砒霜。

24.含汞的朱砂、灵砂、轻粉、红粉、白降丹25.含铅的红丹，铅粉、密陀僧、铅霜26.中药指纹图谱的基本属性：

整体性和模糊性27.指纹图谱的构建方法：

光谱法、色谱法、联用技术、分子生物学技术28.中药指纹图谱可按应用对象、测定手段不同进行分类。

如按应用对象来分类，可分为中药材（原料药材）指纹图谱、中药原料药（包括饮片、配方颗粒）指纹图谱、中药中间体（生产过程中间产物）指纹图谱和中药制剂指纹图谱；按测定方法可分为中药化学指纹图谱和中药生物指纹图谱。

中药化学指纹图谱系指采用色谱、光谱和其他分析方法建立的用以表征中药化学成分特征的指纹图谱；中药生物指纹图谱包括中药材DNA指纹图谱、中药基因组学指纹图谱及中药蛋白组学指纹图谱29中药指纹图谱的研究程序：

研究方案设计、样品收集、供试品溶液制备、对照品（参照物）的制备、研究方法的选择、指纹图谱的建立、指纹图谱的分析与评价指纹图谱的分析中重要参数的建立：

共有指纹峰、重叠率、n强峰、特征指纹峰BAba+’（%）=W实际摩尔浓度=F30.含量测定：

1）滴定度

（2）直接滴定法（3）剩余量滴定法（回滴法）无空白进行空白校正加入定过量滴定液A,用滴定液B滴定剩余的A，注意:

滴定度为滴定液A的滴定度1lg31.紫外-可见分光光度法原理:

（1）对照品比较法：

溶剂浓度原料药制剂

（2）吸收系数法：

溶剂浓度原料药Xc=BW制剂32.气相色谱，高效液相色谱系统适用性试验：

（1）色谱柱的理论板数（n）

（2）色谱峰的分离度（R）（3）色谱系统的重复性（RSD%）（4）色谱峰的拖尾因子（T）CAf=校正因子测定法：

（1）内标法

（2）外标法1.我国药品质量管理法规《药品非临床研究质量管理规范》GLP《药品临床试验管理规范》GCP《药品生产质量管理规范》GMP《药品经营质量管理规范》GSP《中药材生产质量管理规范》GAP）《医疗机构药剂质量管理规范》GUP2.中药制剂分析的特点：

中医药理论的指导性、中药制剂化学成分的复杂性、中药制剂杂质来源的多途径性Dd+VCcMbaCT%%100=）（mg/ml=100’100%=WFTVWTTV含量规定摩尔浓度%100）（（%）ABBAA=WVTFVFV含量%100）（（%）ABSBOB=WTFV含量EclTcA==RRXXAAc=%100（%）X=WB（%）VDc含量%100（%）XBW=WDc标示量%100c%）（RRX=A含量DDcA标示量AX100）ml/g（W%11cm标示量=E%%100X=WD100（%）XDc标示量%1001001000（%）1%1cm=标示量BVEARRSS）（CASScAAAfc=XX）（含量RXRX）（AAcc=含量WWDAc=RXR）（mg/片含量3中药制剂分析工作的基本程序：

取样、供试品溶液的制备、鉴别、检查、含量测定、原始记录和检验报告取样原则:

均匀合理4中国药典最新版是2010版，内容有（凡例、正文、附录、索引）5药典规定：

阴凉处:

不超过20℃；凉暗处:

避光并不超过20℃；冷处:

2～10℃；常温:

10～30℃。

未规定贮藏温度，即指常温6对照品：

化学药品标准物质常称为对照品，除另有规定外均按干燥品或无水物进行计算后使用。

精密称定：

系指称取重量应准确至所取重量的千分之一称定：

系指称取重量应准确至所取重量的百分之一恒重：

除另规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量准确度：

系指测定结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示精密度：

系指用相同方法对同一供试品进行多次测定，各测量值彼此接近的程度。

一般用标准偏差（S）或相对标准偏差（RSD％）表示检测限：

系指供试品中被测物质成分能被检出的最低量。

确定检测限常用的方法：

直观法、信噪比法、数据要求定量限：

系指供试品中待测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。

专属性：

系指在其他成分可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测成分的特性7、中药制剂分析中常用的提取方法:

浸渍法（优:

操作简单，适用于热不稳定样品，且提取杂质少;缺点:

费时、费溶剂、提取不充分，较少用于含量测定）超声提取法：

能使样品粉末更好的分散于溶剂中，提高提取效率和提取速度回流提取法：

提取效率高，可缩短提取时间，但提取杂质较多。

对热不稳定或具有挥发性的成分不宜使用连续回流提取法：

用索氏提取器，提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作简单，但受热易分解的成分不宜使用蒸馏法:

用于挥发性成分消化法:

破坏有机物质，有湿法消化（硝酸-高氯酸法、硝酸-硫酸法、硫酸-硫酸盐法）干法消化（适用于湿法消化不易破坏的有机物，某些不能用硫酸进行破坏的有机药物）超临界流体萃取法：

加压溶剂萃取法：

微波辅助萃取法：

8、中药制剂的鉴别包括：

性状鉴别、显微、理化、生物9、理化鉴别：

化学反应法、光谱法及色谱法。

色谱法特别是薄层色谱法已成中药制剂定性鉴别的主要方法光谱法：

主要有荧光法，可见-紫外分光光度计法。

红外分光光度法。

10、铁盐检查基本原理：

在酸性溶液中，硫氰酸盐与三价铁生成可溶性红色硫氰酸铁的配离子，比较供试品与标准铁溶液在同一条件下所显硫氰酸铁的颜色深浅，检查供试品中铁盐的限量加入过硫酸铵的目的：

加入氧化剂过硫酸铵可将供试品中的Fe2+氧化成Fe3+，同时可防止由于光线等作用，使硫氰酸配离子被还原而分解褪色。

另外，硫氰酸铁还原或分解褪色与光照时间的长短成正比，为了减少褪色现象，可加入过硫酸铵。

11、总灰分：

是指中药经粉碎，高温炽灼，其细胞组织及其内含物中的有机物被破坏分解，转变成挥发性物质而逸出，残留的非挥发性无机物，也称生理灰分。

酸不溶性灰分：

是指中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸外理，得到不溶于盐酸的灰分。

12、杂质的来源：

原料中引入的杂质、生产制备过程中引入的杂质、贮藏过程中引入的杂质杂质种类：

水分、氯化物、铁盐、灰分、酸败度13、氯化物检查的基本原理：

在硝酸溶液中，供试品中的氯化物与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，在相同条件下，通过与一定量标准氯化钠溶液生成的氯化银浑浊液比较，检查供试品中氯化物的限量。

反应条件：

稀硝酸条件14、重金属检查第一法基本原理：

在酸性（PH3~3.5）条件下，硫代乙酰胺发生水解，产生硫化氢，可与重金属离子生成有色硫化物的均匀混悬液。

适用范围：

适用于供试品可不经有机破坏，在酸性溶液中显色的药物中重金属限量检查检查条件：

弱酸15、中国药典砷盐检查法包括：

古蔡法，二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）反应中加醋酸铅棉花的目的：

供试品和锌粒中可能含有少量硫化物等，在酸性溶液中产生的硫化氢气体会干扰检查，用乙酸铅棉花可吸收除去硫化氢气体16、水分测定法检查方法：

烘干法、甲苯法、减压干燥法、气相色谱法17、丸剂的检查项目：

重量差异检查、装量差异检查、装量检查、溶散时限检查注射剂检查：

装量、装量差异、不溶性微粒、有关物质、无菌、热原、细菌内毒素注射剂有关物质检查：

一般应检查蛋白质、鞣质、树脂等，静脉注射液还应检查草酸盐、钾离子等颗粒剂：

粒度检查、溶化性检查、装量差异检查片剂：

重量差异检查、崩解时限检查、融变时限检查、发泡量检查合剂：

应澄清，贮存期间不得有发霉、酸败、异物、变色、产生气体或其他变质现象，允许有少量摇之易散的沉淀。

检查相对密度、PH、装量等酒剂：

总固体、总醇量和装量酊剂：

乙醇量和装量栓剂：

重量差异、融变时限18、超临界流体萃取法：

是以超临界流体作为提取溶剂的一种样品预处理新技术。

超临界流体是指高于临界压力和临界温度时所形成的单一相态，既不是液体也不是气体。

特征：

①密度与液体的相近，具有与液体相近的溶剂作用，即对样品组分溶解能力强②黏度比液体低，扩散系数比液体高，具有良好的传质性能，有利于样品中化学成分扩散进入流体中③表面张力几乎为零，较容易渗透进样品基质空隙中，有利于流体与样品充分接触④在临界点附近，压力和温度的微小变化将导致流体密度较大的变化，从而大幅度改变其对成分的溶解能力，有利于不同极性成分的分离及提取物的解析。

目前最常用的是超临界CO2流体，性质稳定，使用安全，价格低廉，临界点低，易于操作。

CO2为非极性物质，对非极性化合物的溶解能力低，加入极性改性剂如甲醇、乙醇等能增加其溶解能力。

有时也通过衍生化来增加被测成分在CO2流体中的溶解度。

这样CO2能萃取从亲脂性化合物至含多个羟基的极性化合物，从而使SFE的应用更加广泛。

19.常用预处理技术1）分离纯化技术：

沉淀、结晶、回流提取、萃取、柱层析2）浓缩技术：

冻干、红外干燥、旋转蒸发、气流吹蒸3）衍生化技术与标记技术：

酯化、酰化、烷基化、硅烷化、硼烷化、环化、离子化4）消解技术：

金属适于分析的状态经有机破坏和不经有机破坏2种方法如：

氧瓶燃烧法、强酸破坏法20.样品预处理的原则1）消除干扰因素2）尽可能完整保留待测组分，避免待测组分在预处理过程中丢失。

3）防止样品在制备过程中被染，尽可能减少无关化合物引入。

4.使被测组分浓缩5）便于成批处理试样，特别是自动化在线技术。

21.样品的净化一、沉淀法：

利用某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离沉淀或保留溶液的精制方法二、液-液萃取法：

1）直接萃取法2）离子对萃取法三、色谱法四、固相萃取法五、固相微萃取技术22特殊杂质检查方法a土大黄苷的检查：

正品大黄主要含有蒽苷及其苷元，此外还含有痕量或少量土大黄苷和它的苷元土大黄苷元。

在结构上为二苯乙烯的衍生物。

劣等大黄中土大黄苷的含量较高..b乌头酯型生物碱的检查：

乌头中的双酯型生物碱是乌头毒性的主要成分，通常利用双酯型生物碱在碱性条件下与盐酸羟胺反应，生成异羟肟酸，再与三价铁离子反应，生成红色的异羟肟酸铁，在520nm波长处有特征吸收。

23.含量测定的方法学考察包括哪些内容？

1）提取条件的选定2）净化分离方法的选定3）线性关系及线性范围考察4）测定方法稳定性试验5）精密度试验6）检验灵敏度及最小检出量7）回收率试验8）耐用性9）专属性考察24.中药制剂分析：

是以中医药理论为指导，应用现代分析理论和方法，研究中药制剂质量的一门应用学科。

中药制剂分析的对象主要是制剂中起主要作用的有效成分、毒性成分、或其他影响疗效、质量的化学成分。

中药制剂分析的对象包括制剂生产中的半成品、成品及新药开发研究中的实验样品25性状鉴别的内容主要包括颜色、形态、性状、气、味和其他（如滑石制剂有滑腻感、有光泽感等）一些中药制剂还测定一些物理常数作为定性鉴别的依据，如折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔点、相对密度等。

凡以药材粉碎成细粉后直接制成或添加有部分药材粉末的制剂，均可用显微定性鉴别法进行鉴别26.水分测定的方法：

烘干法：

适用于不含或少含挥发性成分。

甲苯法：

韩挥发性成分的药品。

减压干燥法：

含有挥发性成分的贵重药品。

气相色谱法：

适合于各种类型中药制剂中微量水分的精密测定。

费休法：

微量水分的测定，预热易破坏的样品27紫外分光光度法的含量测定方法有哪几种？

（1）对照品比较法

（2）吸收系数法（3）标准曲线法28简述总灰分和酸不溶性灰分的概念、意义及应用。

答：

中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为生理灰分，即总灰分。

规定中药的总灰分限度，对于保证中药的品质和洁净程度，有一定的意义。

总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。

酸不溶性灰分主要是泥土，砂石等硅酸盐成分。

由于在酸中钙盐等无机物可溶而泥土、砂石等（主要含硅酸盐等成分）不溶解，因此酸不溶性灰分在测定对于那些生理灰分本身差异较大，特别是在组含有草酸钙较多的中药，能更准确表明其中泥土砂石等杂质的掺杂含量。

29湿消化法：

硝酸高氯酸法、硝酸硫酸法、硫酸硫酸盐法（硫酸盐是为了提高硫酸的沸点，是样品破坏加速完全，同时防止硫酸在加热过程中过早地分解为三氧化硫）干消化法：

温度420℃以下，不适用于含易挥发金属有机样品的破坏30.砷盐检验法中二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）既可作为作为砷盐的限量测定方法又能作为砷盐的含量测定。

31.农药残留的提取最常用乙腈和丙酮，现在丙酮被广泛利用，提取方法有索氏提取和振荡提取。

农药残留的测定以色谱分离方法为主，其中气相色谱在农药残留分析使用更广泛32.水分测定法四种方法：

烘干法【不含或含少量挥发性成分的药品】连续两次称重的差异不超过5㎎甲苯法【含挥发成分的药品】减压干燥法【挥发性成分的贵重药品】气相色谱法【各种中药制剂中微量水分的精密测定】注意事项：

甲苯与微量水混溶引起水份测定结果偏低，在测定前甲苯需先加少量水充分饱和后放置，将水分分离弃去，经蒸馏后方可使用33.药品的特性是安全有效、稳定和质量可控；药品质量标准的特征是权威性、科学性、进展性。

制定质量标准的前提：

药物组成固定；原料稳定；制备工艺稳定