生化组操作规程4.docx
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生化组操作规程4.docx
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生化组操作规程4
生化专业组作业指导书
尿酸测定标准操作程序(SOP-201)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-201变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆及体液中的尿酸。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
本试剂采用改良Trinder’s方法,其反应为:
尿酸酶
尿酸+O2+H2O—————→尿素+CO2+H2O2
过氧化物酶
H2O2+AAP+TBHBA——————→醌亚胺+H2O
式中AAP=4-氨基安替比林,TBHBA=3-羟基-2,4,6三溴苯磺酸。
通过上述二步反应,最终产生醌亚胺色素,其浓度随尿酸含量的比例而变化,在波长520nm处读取吸光度即可计算其含量,试剂中加亚铁氰化钾可抑制样品中胆红素的干扰。
5.2试剂:
5.2.1试剂Ⅰ:
过氧化物酶300U/L
3-羟基-2,4,6三溴苯磺酸2.5mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
磷酸盐缓冲液150mmol/L
4-氨基安替比林0.7mmol/L
含非反应性填充物及稳定剂
试剂Ⅱ:
磷酸盐缓冲液150mmol/L
尿酸酶500U/L
复星长征尿酸校准液0.36mmol/L
5.2.2标准品:
RANDOX。
5.2.3质控品:
BECKMAN高、中、低质控液。
5.3标本采集:
静脉采血后及时分离血清,避免溶血。
5.4操作步骤:
5.4.1标本编号,分离血清,按顺序置样本架上。
5.4.2仪器校准:
标准方法与上述方法相同。
5.4.3试验参数:
AU1000
HI7600
AU1000
HI7600
标本(ul)
5
3
反应类型
+
+
试剂1(ul)
200
150
S1
5
16
试剂2(ul)
50
43
E1
16
34
波长1(nm)
520
546
S2
-
-
波长2(nm)
600
660
E2
-
-
方法
END
END
温度(℃)
37
37
5.4.4参考值:
150---430µmol/l。
5.4.5室内质控:
质控品高值范围XXX—-XXXXµmol/L
质控品中值范围XXX—-XXXXµmol/L
质控品低值范围XXX—-XXXXµmol/L
质控方法:
每天测定样品前做一组质控,在测定样品中间放一组质控品,最
后再测一组质控品,前、中、后共三组,观察每组质控的值是否有误差。
控制限(x±2s)超过+2s或-2s均为失控,遇此情况,应寻找原因,另作处理。
当测定的质控品浓度达不到原瓶靶值或允许范围时,应将其重复测定20次,计算均值和标准差,再以此值作为质控用的靶值。
5.5注意事项:
5.5.1试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,可稳定至瓶签所示失效日期,启用后2-8℃可稳定30天,若试剂混浊或以水为空白在520nm外吸光度>0.4时,则不能使用。
5.5.2血清或血浆标本,均应不溶血,血浆只能用肝素EDTA抗凝,血及尿中尿酸置20-25℃可稳定3天,冷冻保存可达6个月。
5.5.3尿酸含量大于1.5mmol/L时,应取生理盐水将样品稀释后再测试,计算时乘以稀释倍数。
5.5.4为确保测定结果准确可靠,每批测试均应放置正常和异常质控血清与被检样品同时测试,用以检查试剂和仪器的性能。
5.5.5遇高浓度维生素C的标本,可使测定结果偏低,故不少试剂盒中加入抗坏血酸氧化酶,防止维生素C和干扰。
5.6临床意义:
5.6.1血清尿酸测定对痛风诊断最有帮助,痛风患者血清中尿酸增高,但有时亦会出现正常尿酸值。
5.6.2在核酸代谢增加时,如白血病,多发性骨髓瘤,真性红细胞增多症等血清尿酸值亦常见增高。
5.6.3在肾功能减退时,常伴有血清尿酸增高,粥样硬化,糖尿病,甲减或其他遗传病亦可见高尿酸血症。
5.6.4在氯仿中毒,四氯化碳中毒及铅中毒,子痫,妊娠反应及食用富含核酸的食物等均可引起血中尿酸含量增高。
5.6.5尿酸水平降低,可见于威尔逊氏病。
5.6.6单位换算:
SuA(mmol/L)×16.8=SuA(mg/dl)
授权人
质量负责人
部门负责人
操作人员
姓名
日期
肌酐测定标准操作程序(SOP-202)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-202变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆及体液中的肌酐。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
肌酐的化学速率法测定是根据肌酐与苦味酸反应,生成桔红色的苦味酸肌酐复合物的拟一级反应动力学。
在碱性反应环境中,样品中的肌酐或干扰物质和苦味酸的反应速度不同,选择适宜的速率监测时间,可以提高肌酐的特异性。
5.2试剂
5.2.1试剂Ⅰ:
0.04mol/L苦味酸溶液;
试剂Ⅱ:
0.32mol/L氢氧化钠溶液;
碱性苦味酸溶液:
根据工作用量,将0.04mol/L苦味酸和0.32mol/L氢氧化钠溶液等体积混合,可加适量的表面活性剂(TritonX-100),放置20分钟以后即可应用。
)
5.2.2标准品:
RANDOX
5.2.3质控品:
BECKMAN高、中、低质控液
5.3标本采集:
静脉采血后及时分离血清,避免溶血
5.4操作步骤:
5.4.1标本编号,分离血清,按顺序置样本架上。
5.4.2仪器校准:
标准方法与上述方法相同。
5.4.3试验参数:
AU1000
HI7600
AU1000
HI7600
标本(ul)
15
15
反应类型
+
+
试剂1(ul)
200
150
S1
8
19
试剂2(ul)
50
150
E1
10
22
波长1(nm)
520
505
S2
-
-
波长2(nm)
600
600
E2
-
-
方法
FIXED
END
温度(℃)
37
37
5.4.4参考值:
44---144µmol/L。
5.4.5室内质控:
质控品高值范围XXX—-XXXXµmol/L。
质控品中值范围XXX—-XXXXµmol/L。
质控品低值范围XXX—-XXXXµmol/L。
质控方法:
每天测定样品前做一组质控,在测定样品中间放一组质控品,
最后再测一组质控品,前、中、后共三组,观察每组质控的值是否有误差。
控制限(x±2s)超过+2s或-2s均为失控,遇此情况,应寻找原因,另作处理。
当测定的质控品浓度达不到原瓶靶值或允许范围时,应将其重复测定20次,计算均值和标准差,再以此值作为质控用的靶值。
5.5注意事项:
5.5.1干扰速率法测定的非肌酐色源物质有两类:
一类为快速反应假肌酐物质,在
样品与碱性苦味酸混合20秒内迅速出现反应,产生非肌酐的有色化合物。
另一类为慢性反应假肌酐物质,一般在样品和碱性苦味酸混合后80-100秒才开始反应。
这样在20-80秒之间,出现“窗口期”,此时肌酐与苦味酸的呈色反应占主导地位。
1980年对速率法进行严格评价后提出,速率法仍受到a-酮酸的正干扰和胆红素的负干扰。
5.5.2速率法线性范围可达2000umol/l,血清样本值过高可用盐水稀释;尿液标本
用蒸馏水作20-50倍稀释。
测定结果乘以稀释倍数。
5.5.3为确保测定结果可靠,每次测定均需放置正常和异常质控血清,与被检样品
同时测定,用以检查试剂和仪器的性能。
5.6临床意义:
肌酐经肾小球滤过后不被肾小管吸收,通过肾小管排泄。
在肾脏疾病初期,血清肌酐值通常不增高,在正常肾血流条件下,肌酐值如升高至176-353umol/l提示为中度至严重的肾损害。
所以血肌酐测定对晚期肾脏病临床意义较大。
正常肌酐浓度约为尿素氮的10分之一,在病理情况下和肌酐、尿素变化不一定平行,二者比例有一定诊断意义。
尿素氮/肌酐比例大于10时应考虑增高,主要为肾外因素,见于高蛋白饮食、胃肠道出血、蛋白分解代谢亢进(烧伤、感染、消耗性疾患大量应用类固醇激素)。
比值小于10见于肾实质疾病以及合并低蛋白饮食、腹泻、呕吐、肝功能不全以及人工透析等。
授权人
质量负责人
部门负责人
操作人员
姓名
日期
尿素氮测定标准操作程序(SOP-203)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-203变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆及体液中的尿素氮。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
本方法由Talke和Schubert首先提出,反应式如下:
尿素酶
尿素+H2O————→2NH3+CO2
GLDH
NH3+a-酮戊二酸+NADH+H+————→谷氨酸+NAD++H2O
在340nm处测定NADH的吸光度下降率与尿素浓度成正比。
5.2试剂:
5.2.1试剂Ⅰ:
Tris100mmol/L
GLDH8000U/L
α-KG7.5mmol/L
保护剂、稳定剂适量
试剂Ⅱ:
尿素酶9000U/L
ADP0.6mmol/L
NADH0.76mmol/L
5.2.2标准品:
RANDOX。
5.2.3质控品:
BECKMAN高、中、低质控液。
5.3标本采集:
空腹静脉采血后及时分离血清,避免溶血。
5.4操作步骤:
5.4.1标本编号,分离血清,按顺序置样本架上。
5.4.2仪器校准:
标准方法与上述方法相同。
5.4.3试验参数:
AU1000
HI7600
AU1000
HI7600
标本(ul)
5.0
3
反应类型
-
-
试剂1(ul)
200
150
S1
8
20
试剂2(ul)
50
38
E1
16
25
波长1(nm)
340
340
S2
-
-
波长2(nm)
380
405
E2
-
-
方法
RATE
RATE
温度(℃)
37
37
5.4.4参考值:
3.0---7.0mmol/l。
5.4.5室内质控:
质控品高值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品中值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品低值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控方法:
每天测定样品前做一组质控,在测定样品中间放一组质控品,最
后再测一组质控品,前、中、后共三组,观察每组质控的值是否有误差。
控制限(x±2s)超过+2s或-2s均为失控,遇此情况,应寻找原因,另作处理。
当测定的质控品浓度达不到原瓶靶值或允许范围时,应将其重复测定20次,计算均值和标准差,再以此值作为质控用的靶值。
5.5注意事项:
5.5.1样品中尿素浓度>43mmol/L(或尿素氮)120mg/L时应以无氨生理盐水稀释计算时乘以稀释倍数。
5.5.2为确保测定结果准确可靠,每批测定均应放置正常和异常质控血清与被检样
品同时测试,用以检查试剂和仪器的性能。
.
5.5.3不溶血的血清或血浆,抗凝剂可用肝素或EDTA,但不能用枸橼酸钠、氟化物。
标本在2-8℃至少可以稳定7天。
5.6临床意义:
5.6.1生理意义:
高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出显著升高。
血清尿素浓度
男性比女性平均高0.3-0.5mmol/L,随着年龄的增加,有增高的倾向,成人的日间生理变动平均为0.63mmol/L.妊娠妇女由于血容量增加,尿素浓度比非孕妇低。
5.6.2病理意义:
常见于肾脏因素,其次为非肾脏因素,血液尿素增加的原因可分为肾前、肾性、及肾后。
5.6.2.1肾前性:
最重要的原因是失水,引起血液浓缩,由于血液浓缩后引起肾血流量减少,肾小球滤过率减低而使血尿素潴留。
这种情况可见于剧烈呕吐,幽门梗阻,肠梗阻和长期腹泻。
5.6.2.2肾性:
急性肾小球肾炎,肾病晚期,肾功能衰竭,慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎均可出现血液中尿素含量增高。
5.6.2.3肾后性疾患:
如前列腺肿大,尿路结石,尿道狭窄,膀胱肿瘤,致使尿道高压等都可能使尿路阻塞引起血液中尿素含量增加。
血尿素减少较为少见,常常表示严重的肝病,如肝炎合并广泛性肝硬化。
授权人
质量负责人
部门负责人
操作人员
姓名
日期
钾、钠、氯测定标准操作程序(SOP-204)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-204变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆及体液中的钾、钠、氯。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
离子选择电极分析法是以测量电池的电势为基础的定量分析方法。
将离子选择电极和一个参比电极连接起来,置于待测的电解质溶液中,就构成了一个测量电池。
此电池的电动势(E)与被测离子活度的对数符合能斯特(NERNST)方程式。
2.03RT
E=E°+─—————logax*fx
Nf
式中:
E=离子选择电极在测量溶液中的电位;
E°=离子选择电极的标准电极电位;
N=被测离子的电荷数;
R=气体常数(8.314J/K.mol);
T=绝对温度(273+t℃)
F=法拉第常数(95487C/mol)
Ax=被测离子的活度;
Fx=被测离子的活度系数;
离子选择电极由钾、钠、氯离子不同活度的作用而产生不同的电位。
这种电位的变化由离子活度所决定,与钾、钠、氯离子的浓度成比例。
5.2试剂:
5.2.1(903钾/钠/氯仪):
定标/冲洗液:
K+4.0mmol/L、Na+140mmol/L、
CL-100mmol/L、斜率定标液:
K+/Na+/Cl-:
8.0/110/70mmol/L、
(HI7600-020):
内标液、稀释液、参比电极液,由日立公司提供。
5.2.2标准品:
(903):
RANDOX;(HI7600-020):
由日立公司提供。
5.2.3质控品:
(903):
上海生物制品研究所提供;(HI7600-020):
由日立公司提供。
5.3标本采集:
采静脉血分离血清或用肝素锂盐抗凝血浆,溶血标本不宜作血钾测定,可以拒收。
5.4操作(903钾、钠、氯仪):
5.4.1调标\清洗管道;
5.4.2用适合本仪器的低、高斜率液进行两点定标;
5.4.3使用质控液进行调整;
5.4.4测定标本;
5.4.5每天测试结束,用去蛋白酶进行去蛋白处理。
定期对电极进行活化.活化操作
(HI7600-020):
将高、低值标准品及校正品置于相应位置与样本同时上机测定。
5.4.6.参考值:
血清钠:
135---145mmol/L
尿钠:
130---260mmol/24h
血清钾:
3.5---5.5mmol/L
尿钾:
25---100mmol/24h
血清(浆)氯:
100---110mmol/L
尿液氯化物:
170---250mmol/24h
脑脊液氯化物:
120---132mmol/L
5.4.7室内质控:
质控品高值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品中值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品低值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控方法:
每天测定样品前做一组质控,在测定样品中间放一组质控品,最后再测一组质控品,前、中、后共三组,观察每组质控的值是否有误差。
控制限(x±2s)超过+2s或-2s均为失控,遇此情况,应寻找原因,另作处理。
当测定的质控品浓度达不到原瓶靶值或允许范围时,应将其重复测定20次,计算均值和标准差,再以此值作为质控用的靶值。
5.5注意事项:
5.5.1标本不能溶血,若不能立即测定应及时分离血清,置于具塞试管内冰箱4℃保存。
5.5.2测定用的玻璃器皿必须用去离子水冲洗干净,不得有离子污染。
5.5.3.仪器应严格按说明书操作,并定期进行保养。
5.6临床意义:
5.6.1钠
5.6.1.1血清钠降低:
血清钠浓度低于135mol/L为低钠血症,临床上常见于:
a.胃肠道失钠:
可见于幽门梗阻,呕吐,腹泻,胃肠道、胆道、胰腺手术后造瘘、引流等都可以丢失大量消化液而发生缺钠。
b.尿钠排出增多:
见于严重肾盂肾炎、肾小管严重损害、肾上腺皮质机能不全、糖尿病、应用利尿剂治疗等。
c.皮肤失钠:
大量出汗时,如只补充水分而不补充钠;大面积烧伤、创伤、体液及从创口大量丢失,亦可引起低血钠。
d.抗利尿激素过多、肾病综合症的低蛋白血症,肝硬化腹水,右心衰竭时有效血容量低等都引起抗利尿激素增多,血钠被稀释。
5.6.1.2血清钠增高:
血清钠超过140mmol/L时为高血钠,可见于:
a.肾上腺皮质功能亢进,如柯兴氏综合证,原发醛固酮增多症,由于皮质激素的排钾保钠作用,使肾小管对钠的重吸收增加,出现高血钠。
b.严重脱水:
体内水份丢失比钠丢失多时发生高涨性脱水。
c.中枢性尿崩症时ADH分泌量减少,尿量大增,如供水不足血钠增高。
5.6.2钾
5.6.2.1血清钾降低:
常见于严重腹泻、呕吐、肾上腺皮质功能亢进,服用利尿剂,胰岛素的应用、钡盐与棉籽油中毒、家族性周期性麻痹在发作时血清钾下降,可低至2.5mmol/L左右,但在发作间隙期血清钾正常.大量注射青霉素钠盐时,肾小管会大量失钾。
5.6.2.2血清钾增高:
可见于肾上腺皮质功能减退,急性或慢性肾功能衰竭,休克,组织挤压伤,重度溶血,口服或注射含钾液过多等。
5.6.3氯
5.6.3.1血清(浆)氯化物增高:
高氯血症常见于高钠血症,失水大于失盐,氯化物浓度相对增高,高氯性代谢性酸中毒.过量注射生理盐水等。
5.6.3.2血清(浆)氯化物降低:
临床上低氯血症较多见,常见原因有:
氯化物的异常丢失或摄入减少,如呕吐、腹泻、胃液或胰液、胆汗大量丢失,长期限制氯化物的摄入、阿狄森病、抗利尿激素分泌增多的稀释性低钠、低氯血症。
5.6.3.3脑脊液低氯症:
脑脊液为细胞外液的一部分,低钠血症都会伴有脑脊液低氯症。
重症结核性脑膜炎时,氯化物含量显著降低,化脓性脑膜炎时偶见减少,普通型脊髓灰白质炎与病毒性脑炎时基本正常。
重型中枢神经引起感染时,抗利尿激素分泌增多,因水潴留易发生稀释性低钠、低氯血症,脑脊液氯化物亦相应减低。
5.6.3.4尿液氯化物排泄量的增减情况基本上同尿钠一致。
授权人
质量负责人
部门负责人
操作人员
姓名
日期
二氧化碳结合力测定标准操作程序(SOP-205)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-205变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆中的二氧化碳结合力。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
血清中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)催化下和磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)反应,生成草酰乙酸和磷酸;草酰乙酸和苹果酸脱氢酶(MDH)反应,生成苹果酸,同时将NADH氧化成NAD;在340nm处吸光度的降低与样品中的HCO3-含量成正比。
反应式如下:
PEPXC
磷酸烯醇式丙酮酸+HCO3-————→草酰乙酸+磷酸
MDH
草酰乙酸+NADH+H+——————→苹果酸+NAD+
5.2试剂:
5.2.1TrisBuffer25mmol/LPH6.5
组份:
PEP6.3mmol/L
NADH0.45mmol/L
PEPC200ul/L
MDH600ul/L
MG++8.0mmol/L
5.2.2标准品:
25mmol/L。
5.2.3质控品:
BECKMAN高、中、低质控液。
5.3.标本采集:
静脉采血后迅速分离血清,及时进行测定。
5.4操作步骤:
5.4.1标本编号,分离血清,按顺序置样本架上。
5.4.2仪器校准:
标准方法与上述方法相同。
5.4.3试验参数:
AU1000
HI7600
AU1000
HI7600
标本(ul)
2
2
反应类型
-
-
试剂1(ul)
210
270
S1
0
0
试剂2(ul)
-
-
E1
16
15
波长1(nm)
340
340
S2
-
-
波长2(nm)
-
405
E2
-
-
方法
END
END
温度(℃)
37
37
5.4.4参考值:
23.0---32.0mmol/L。
5.4.5室内质控:
质控品高值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品中值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控品低值范围XXX—-XXXXmmol/L
质控方法:
每天测定样品前做一组质控,在测定样品中间放一组质控品,最
后再测一组质控品,前、中、后共三组,观察每组质控的值是否有误差。
控制限(x±2s)超过+2s或-2s均为失控,遇此情况,应寻找原因,另作处理。
当测定的质控品浓度达不到原瓶靶值或允许范围时,应将其重复测定20次,计算均值和标准差,再以此值作为质控用的靶值。
5.5注意事项:
5.5.1在准备试剂和收集标本时,应严格做好密封工作,以最大限度地减少干扰。
5.5.2严重脂血、溶血和黄胆标本应做标本空白管。
5.5.3试剂混浊或试剂空白吸光度小于1.0时均不能使用。
5.6临床意义:
5.6.1增高:
代谢性碱中毒,如幽门梗阻、柯兴氏综合症和服用碱性药物过多等。
呼吸性酸中毒,如呼吸中枢抑制、呼吸肌麻痹、肺气肿、支气管扩张和气胸。
5.6.2降低:
代谢性酸中毒,如严重腹泻、肾功能衰竭、糖尿病和服酸性药物过多等。
慢性呼吸性碱中毒时,由于长时间呼吸增速,肺泡中Pco2减低,肾小管代偿性HCO3-排出增多。
授权人
质量负责人
部门负责人
操作人员
姓名
日期
镁测定标准操作程序(SOP-206)
1.目的:
确保测定结果准确、可靠。
2.SOP-206变动程序:
由操作者提出,并经科主任审核。
3.范围:
测定人或动物血清、血浆中的镁。
4.溯源:
全国临床检验操作规程(第二版)。
5.操作程序:
5.1测定原理:
血清中镁与络合指示剂Calmagite反应,形成Calmagite-镁复合物,此复合物在540nm(500-550nm)处的吸光度与样本中镁的浓度成正比。
试剂中加入EGTA用于防止钙的干扰;加入KCN用于防止形成重金属络合物;表面活性剂防止血清蛋白质干扰,以避免almagite-镁复合物吸收峰的偏移。
Calmagite+Mg++————→Mg++——CalmagiteComplex
5.2试
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- 关 键 词:
- 生化 操作规程
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