微生物免疫学实验报告.docx
- 文档编号:26490885
- 上传时间:2023-06-19
- 格式:DOCX
- 页数:24
- 大小:61.25KB
微生物免疫学实验报告.docx
《微生物免疫学实验报告.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《微生物免疫学实验报告.docx(24页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
微生物免疫学实验报告
NewlycompiledonNovember23,2020
微生物免疫学实验报告
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
细菌的形态学检查
(一)
教学目标
学会显微镜的使用,重点掌握油镜的使用与保护。
进一步认识细菌的形态,明确细菌的大小与测量单位。
熟悉细菌的特殊结构。
教学重点
油镜的观察和使用
教学难点
油镜的观察和使用
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝√﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
1实验内容:
2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的:
5学会显微镜的使用,重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态,明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料:
显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法:
(1)显微镜油镜的使用与保护
显微镜是一种贵重的光学仪器,而油镜又是显微镜的最精密部分,是观察细菌最重要的
工具。
因此,要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护,尤其是油镜,避免损坏。
1识别油镜:
95╳、100╳、HI、OeL。
2对光:
自然光用平面反光镜,人工光用凹面反光镜;先用低倍镜对光,次用高倍镜。
对好光源后,染色标本将聚光器升高,光圈放开。
3、调节焦距:
选一张细菌染色标本置于载物台上,用推进器固定,用低倍镜先找准物象,再用高倍镜看清物体,于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察,转动粗螺旋调节器,将油镜头徐徐下降浸入其中,切不可用力过猛,以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察,徐徐向上转动粗螺旋调节器,见模糊物象后,再用细螺旋调节器,直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护:
⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭,用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭,再用干擦镜纸擦去二甲苯,以防二甲苯镜头上的固定胶,致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕,将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒,用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上,双手端平送入镜箱内。
置于干燥处,以防受潮。
(二)细菌形态观察
1、细菌的基本形态;球菌:
肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌:
大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌:
霍乱弧菌
2、细菌的特殊结构:
荚膜:
肺炎球菌、产气荚膜杆菌
鞭毛:
水弧菌(周毛菌)
芽胞:
破伤风杆菌(芽胞位于菌体顶端,呈鼓槌状)
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
细菌的形态学检查
(二)
教学目标
进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
掌握革兰染色的操作法,充分认识革兰染色的临床意义。
教学重点
革兰染色的操作法
教学难点
革兰染色的操作法
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝√﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
一、实验内容:
3细菌标本片的制备(操作)
4革兰染色法(操作)
二、实验目的:
1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
2掌握革兰染色的操作法,充分认识革兰染色的临床意义。
三、实验材料:
革兰染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、生理盐水、玻片、接种环、酒精灯。
四、实验方法:
㈠细菌标本片的制备(操作)
1、涂片:
点燃酒精灯;取洁净玻片一张,右手持接种环一酒精灯火焰中消毒,稍冷后取
1-2环生理盐水置于玻片中央;再次消毒后,用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许,在生理盐水中涂匀制成约1cm左右的薄膜,并将接种环再次消毒后,置于试管架中。
2、干燥:
在室温中自然干燥;天冷时可在酒精灯火焰上方略加温,不可高温加热,否则,细菌被破坏后染色效果差。
3、固定:
右手持玻片一端,标本面向上,在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次,约2妙种。
固定的目的是杀死细菌,使细菌与玻片粘附较紧密。
㈡革兰染色法(操作)
1、初染:
滴加结晶紫染液于标本上,以覆盖满为度,染1分钟后水洗,洒去积水。
2、媒染:
加鲁格碘液,媒染1分钟后水洗,洒去积水。
7脱色:
加95%酒精脱色(边加酒精边摇晃玻片,使酒精流去再加酒精,如此反复2
-3次)约30妙钟后水洗,洒去积水。
12复染:
加复红染液染30妙钟后水洗,洒去积水,待干或用吸水纸吸干后镜检。
先低
倍镜观察效果,再用高倍镜看清物象,滴加镜油后用油镜观察。
结果:
G+菌呈紫色,G-菌呈红色。
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
细菌的培养及代谢产物的检查
教学目标
熟悉细菌的培养方法,进一步掌握人工培养细菌的临床意义。
了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。
教学重点
培养基的制备
教学难点
细菌代谢产物
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝√﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
一、实验内容
1、培养基的制备(操作)
2、细菌的人工培养法(操作)
3、细菌代谢产物观察(示教)
4、药敏试验(示教)
二、实验目的
1、熟悉细菌的培养方法,进一步掌握人工培养细菌的临床意义。
2、了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。
三、实验材料
牛肉膏、蛋白胨、、氯化钠、琼脂、SS琼脂、蒸馏水、1molNaOH、molNaOH、粗天平、%酚红指示剂、pH比色器、无菌培养皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培养基、高压消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆菌菌液、乙型副伤寒杆菌菌液等。
四、实验方法
㈠培养基的制备(操作)
1、培养基的制备程序
称量 溶化 pH测定与矫正 分装 灭菌 检定 保存。
2、液体培养基的制备
1)称量:
称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g,置于1000ml三角烧瓶中,加入蒸馏水1000ml。
2)混合溶解:
加热溶化,待冷至4050oC时,测定并矫正pH为。
3)pH测定与矫正方法:
⑴准备工作:
取①、③酚红标准比色管及蒸馏水管②各1支,按图示装好;取口径与比色管相同的试管3支,各加待测液体基5ml,分别编上④、⑤、⑥号,按图示装好。
⑵比色:
将比色架对光目视比色,比较二排管的颜色是否相同,若基为酸性(一般呈酸性),则向⑤号管中加%酚红指示剂摇匀,取1ml吸管一支吸取molNaOH1ml,缓慢滴入⑤号管内,边加边摇匀,直至与标准管其中一侧颜色相同,准确记录NaOH的用量。
⑶计算:
5ml基矫正至用去,剩余的培养基则需加入1molNaOH为Xml。
用比例公式计算。
N1:
V1=N2:
V2
5:
975=:
X
X=*975/5=39(ml)
molNaOH需要39ml,而加1molNaOH只需。
4)分装:
分装十适当容器内(试管),包装好,高压蒸气灭菌后备用。
㈡细菌的人工培养法(操作)
1、平板划线接种法:
1)点燃酒精灯,右手以握笔式持接种环,在火焰上灭菌后稍冷,挑取葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液一环。
2)用左手掌持琼脂平板,以左手拇指将平板盖启开,右手将取了菌液的接种环伸入平板,呈45O角,用分段划线法分离细菌(如图所示),盖好平板。
3)于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
2、液体培养基接种法:
左手持液体培养基,按照平板划线取葡萄球菌少许,用右手小指拔开棉塞,夹于指间(示教),并将管口在火焰上灭菌,将细菌接种于液体培养基内。
再次灭菌管口,塞好棉塞。
贴上标签,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
㈢细菌代谢产物观察(示教)
1、糖发酵试验:
细菌分解糖后产酸产气,产酸后使批示剂显色,产气后可见到气泡。
产酸产气以“+”表示,只产酸不产气以“+”表示,不分解以“-”表示。
大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下:
菌 种
葡萄糖
乳 糖
大肠杆菌
伤寒杆菌
+
+
+
-
2、硫化氢试验:
某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸,产生硫化氢气体。
硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐反应,形成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀,为阳性,无黑色沉淀为阴性。
大肠杆菌硫化氢试验为阴性,乙型副伤寒杆菌为阳性。
㈣药敏试验(示教)
1、平板划线:
1)用密集划线法将细菌布满平板,方法同平板划线接种法。
2)在无菌接种箱内,用左手启开平板盖,用无菌镊子夹取抗菌素纸片,间隔5cm放置平板培养基表面,盖好平板,贴上标签,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
3)结果:
观察抑菌区有无,测量抑菌区的直径。
直径<5mm为阴性(不敏感)、直径510mm为轻度敏感、直径1015mm为中度敏感、直径>15mm为高度敏感。
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
细菌的分布与消毒灭菌检查
教学目标
证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在,以树立严格的消毒及无菌观念。
了解常用消毒灭菌器械的使用方法,初步掌握紫外线的灭菌方法护注意事项。
教学重点
细菌的检查及消毒灭菌器械的使用方法
教学难点
灭菌方法使用时的注意事项
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝√﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
一、实验内容
1、空气中细菌的检查(操作)
2、皮肤消毒试验(操作)
3、咽喉部细菌的检查(操作)
4、常用消毒灭菌器械的使用(示教)
二、实验目的
1、证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在,以树立严格的消毒及无菌观念。
2、了解常用消毒灭菌器械的使用方法,初步掌握紫外线的灭菌方法护注意事项。
三、实验材料
普通琼脂平板、SS琼脂平板、血平板、接种环、酒精灯、高压消毒灭菌器、干烤箱、紫外线、大肠杆菌培养液、1%龙胆紫、%碘酒,75%乙醇、无菌棉签、镊子等。
四、实验方法
㈠空气中细菌的检查(操作)
1、取普通琼脂平板4个,启开皿盖,培养基面向上,分别放在实验室、寝室、室外及无菌操作台等处,暴露1020min后加盖。
2、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
3、结果:
如实填写。
㈡皮肤消毒试验(操作)
1、取普通琼脂平板1个,在底部用玻璃蜡笔划线分区并标号,启开皿盖,用右手食指轻轻涂抹培养基表面。
2、用%碘酒消毒右手食指后,再用消毒后的手食指轻轻涂抹培养基表面,加盖。
3、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
4、结果:
如实填写。
㈢咽喉部细菌的检查(操作)
1、取血平板1个,启开皿盖,口对培养基表面(距离约10cm),深咳嗽三次(不可吹痰),加盖。
2、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
3、结果:
如实填写。
㈣常用消毒灭菌器械的使用(示教、介绍)
1、紫外线杀菌试验
⑴点燃酒精灯,取普通琼脂平板1个,在底部用玻璃蜡笔划线分出二个区并标号,启开皿盖,右手持接种环在火焰上灭菌后,稍冷,取大肠杆菌培养液一环,密集划线,加盖。
⑵将培养基置于无菌接种箱内,启开皿盖,将盖子盖于培养基上的一半,打开紫外线灯开头,照射30min后,加盖。
⑶于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培养24h后,观察结果。
⑷结果:
如实填写。
2、手提式高压蒸气灭菌器(介绍)
⑴构造:
略
⑵用法:
加水至规定的水平面、放入灭菌物品,加盖、旋紧,打开排气阀;通电加热、温度逐渐上升时,器内冷空气由排气阀排出,待有大量蒸气逸出时,关闭排气阀,继续加热,直到压力表的指针指在所需的位置后,调节电源,控制温度,维持2030min后,打开排气阀排气,待压力表指针指向“0”时,再开盖取物。
⑶注意事项:
①灭菌开始时必须排尽冷空气;②灭菌完毕,切不可突然打开盖子排气减压,以免瓶内液体等冲出外溢;③放置物品不应太挤。
⑷用途:
用于耐高温和不怕潮湿的物品灭菌。
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
病原性球菌的检查
教学目标
通过实验让学生掌握病原性球菌的形态、染色特性。
了解脓汁标本的病原性球菌的分离鉴定的程序。
了解抗“O”试验的原理、方法及临床意义。
教学重点
1、病原性球菌标本的观察。
2、脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序。
3、抗“O”试验
教学难点
抗“O”试验的原理
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝√﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
病原性球菌的检查
实验目的:
1掌握病原性球菌的形态、染色特性。
2了解脓汁标本的病原性球菌的分离鉴定的程序。
3了解抗“O”试验的原理、方法及临床意义。
实验内容:
1、病原性球菌标本的观察。
2、脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序。
3、抗“O”试验
实验材料:
显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、%碘酒、棉签、
生理盐水、血平板、兔血浆、抗“O”试剂、血平板。
实验方法:
(2)病原性球菌标本的观察
1、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的形态观察(操作)。
2、葡萄球菌、链球菌溶血现象观察(示教)。
(4)脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序
直接涂片革兰染色镜检
脓汁标本观察菌特征及溶液血情况
接种血平板24h培养后观察取菌落涂片革兰染色镜检
取菌落作生化反应、致病力试验
(5)抗“O”试验
原理:
乙型溶血性链球菌能产生溶血素“O”,能溶液解人和兔红细胞并有很强的抗原性,
能刺激机体产生抗溶血素“O”(抗体)。
抗溶血素“O”能中和溶血素“O”的溶血作用。
本法是将病人血清与已知溶血素“O”抗原先混合,作用一段时间后,再加入红细胞悬液。
若红细胞不被溶解为阳性,溶解为阴性。
方法:
1、取小试管6支,分别编号,分两排置于试管架上(1-3为第一排,4-6为第二排)。
2、第一排试管加待检血清分别稀释为200、400、800倍;第二排试管加待检血
清分别稀释300、600、1200倍。
3、分别加链球菌溶血素“O”抗原,充分混匀,置于37oC水浴箱中10min。
7分别加5%红细胞悬液,充分混匀,置37oC水浴箱中30min后观察结果。
结果:
以完全不溶液血的血清最高稀释度为抗“O”抗体的效价。
正常值为500单位以下。
用途:
600单位及以上有诊断意义,用于辅助诊断活动性风湿。
(四)血浆凝固酶试验
3取玻片一张,加生理盐水一环。
用接种环取葡萄球菌少许,混匀。
4加血浆一滴、混匀,数分钟后观察结果。
出现颗粒状凝集的为阳性、反之为阴性。
授课进度
第周,第次课(2学时)
授课日期
年月日
授课题目(教学章、节或主题)
肠道杆菌的检查
教学目标
通过实验让学生掌握肠道杆菌的形态、染色特性。
了解肠道杆菌的分离鉴定的程序。
了解肥达试验的原理、方法及临床意义。
教学重点
1、肠道杆菌形态标本的观察。
2、肠道杆菌的分离鉴定程序。
3、肥达试验。
教学难点
肥达试验的原理方法及结果分析
教学方法
请选择你授课时所采用的教学方法(在括号中画“√”):
讲授法﹝﹞,讨论法﹝﹞,演示法﹝﹞,案例法﹝﹞,发现法﹝﹞,探究法﹝﹞,谈话法﹝﹞,实验法﹝√﹞,参观法﹝﹞,考察法﹝﹞,自学辅导法﹝﹞,练习法(习题或操作课)﹝﹞,读书指导法﹝﹞,听说法﹝﹞,写生法﹝﹞,视唱法﹝﹞,工序法(技能课)﹝﹞,实习作业法﹝﹞,其他﹝﹞
教学手段
请选择你授课时所采用的教学手段(在括号中画“√”):
实物﹝﹞,多媒体﹝﹞,投影﹝﹞,影像﹝﹞,CAI课件﹝﹞,PPT﹝﹞,标本﹝﹞,挂图﹝﹞,模型﹝﹞,其他﹝√﹞
讨论、
思考题、作业
实验报告
参考文献
(1)杨致邦,叶彬.病原生物学与免疫学实验【M】.北京.科学出版社.2013年.
(2)潘丽红.病原生物学与免疫学实验及学习指导【M】.中国科学技术大学出版社,2013年.
肠道杆菌的检查
实验目的:
1、掌握肠道杆菌的形态、染色特性。
2、了解肠道杆菌的分离鉴定的程序。
3、了解肥达试验的原理、方法及临床意义。
实验内容:
1、肠道杆菌形态标本的观察。
2、肠道杆菌的分离鉴定程序。
3、肥达试验。
实验材料:
显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、%碘酒、棉签、
生理盐水、SS培养基、患者血清1:
10稀释、伤寒杆菌O菌液、H菌液、甲、乙型副伤寒H菌液。
实验方法:
一、肠道杆菌的形态观察
【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌革兰染色示教片。
【方法】注意上述肠道杆菌形态、排列、染色的共同点,故肠道杆菌的染色镜检不能做为肠道杆菌之间的鉴别依据。
二、肠道杆菌培养物与生化反应观察
【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在SS培养基、双糖铁、尿素及蛋白胨水培养基上24小时培养物。
【方法】
1、观察大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在EMB培养基上生长情况,注意菌落的形态、大小、颜色及透明度。
表1 五种肠道杆菌在SS培养基上的菌落特征
菌种
培养基
大肠杆菌
变形杆菌
伤寒沙门菌
乙型副伤寒沙门菌
痢疾杆菌
琼脂平板
菌落红色或呈红色之中心,不透明,直径2-3mm左右
菌落无色半透明,有时带黑心,直径2mm左右,有时呈膜状生长。
菌落无色,半透明,直径2mm左右。
同伤寒杆菌菌落,菌落可带黑心。
同伤寒杆菌菌落。
EMB
菌落扁平,紫黑色,具有金属光泽
圆形菌落,扁平,无色或半透明,似沙门菌
小至中等透明或半透明,不发酵乳糖
无色或半透明,光滑不发酵乳糖,中等大小
2、观察大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在双糖铁、尿素及蛋白胨水培养基上生长情况,注意生化反应与动力的鉴别。
表2 五种肠道杆菌生化反应与动力鉴别表
菌名
生化反应
动力
葡萄糖
乳糖
H2S
尿素
靛基质
大肠杆菌
⊕
⊕
-
-
+
+
变形杆菌
⊕
-
+/-
+
+/-
+
副伤寒乙杆菌
⊕
-
+++
-
-
+
伤寒杆菌
+
-
-/+
-
-
+
痢疾杆菌
+
-
-
-
+/-
-
三、粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定
(一)标本采集
尽可能在发病早期或治疗前采集新鲜粪便,选取脓血或粘液部分,取材后应立即送检。
如不能立即送检,可将标本保存于30%甘油缓冲盐水中。
(二)检验程序
肠道杆菌检验程序
(三)检验方法:
1、分离培养
【材料】新鲜粪便标本、SS琼脂平板。
【方法】
按上述检验程序进行第一日的检验步骤,即用接种环挑取新鲜粪便标本,划线接种于EMB或SS平板上,37℃培养24小时。
【结果】
观察平板上菌落,依据其大小、颜色、透明度等特点,初步识别可疑病原菌菌落,进行鉴定。
在EMB平板上非致病菌菌落较大、紫黑色、有金属光泽,不透明,而可疑菌落略小,半透明。
2、初步鉴定
【材料】双糖铁培养基
【方法】
用接
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 微生物 免疫学 实验 报告
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)