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优秀工作总结范文液体菌种工作总结
液体菌种工作总结
(2010-11-2222:
29:
46)
目的要求
初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。
实验内容
1.细菌染色一般程序
涂片干燥固定初染(媒染)脱色复染
(1)涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上,固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水,然后取菌少许在盐水中磨匀,呈轻度混浊。
涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。
(2)干燥涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干,切不可在火焰上烧干。
(3)固定细菌的固定常用火焰加热法,即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3~5次,温度以手能摸时热而不烫为度。
目的在于杀死细菌,凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。
(4)初染不同的染色方法,所用染液也不同。
染液以覆盖菌膜为度。
(5)媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。
媒染剂还可用于固定之后,亦可含在固定液或染液中。
(6)脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用。
(7)复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染,便于观察。
复染液的颜色与初染液有明显不同。
2.常用染料原液配制
一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量:
美兰2g~5g;结晶紫7g~14g;碱性复红3g~7g。
3.常用的染色方法
(1)单染色法即用一种染料染色的方法。
常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。
1)染液
①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01%KOH溶液70ml即成。
②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸溶液90ml,然后用蒸馏水作10倍稀释即成。
2)菌种大肠埃希菌普通斜面培养物。
3)染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液,染色1min,以水冲洗至无颜色流下为止,自然干燥或以远火烘干后镜检。
4)结果以美兰染色者菌体呈现兰色;以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色。
(2)革兰染色法
1)原理细菌被结晶紫着色后,再经媒染剂处理,染成深紫色或紫黑色。
如被酒精脱去颜色,经复红复染成红色,称为革兰阴性菌;如不被酒精脱色,则仍为紫黑色,称为革兰阳性菌。
革兰染色的原理尚未完全明了,主要有三种学说:
①等电点学说革兰阳性菌的等电点低(pH2~3),革兰阴性菌等电点较高(pH4~5),一般染色液pH值
为7.0左右,故电离后阳性菌所带阴电荷比阴性菌多,因此,摄取带阳电荷的染料(如结晶紫)多且不易脱色。
②通透性学说革兰阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌小,脱色剂较易通过革兰阴性菌的细胞壁,将染料溶解洗出,思想汇报专题故易脱色;阳性菌的细胞壁通透性低,故不易脱色。
③化学学说革兰阳性菌细胞内含有某种特殊化学成分,一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物,它能和染料-媒染剂互相结合,使已着色的细菌不易脱色;革兰阴性菌体含核糖核酸镁盐复合物较少,易被脱色。
2)染液
①结晶紫染液取结晶紫饱和溶液20ml+1%草酸铵水溶液80ml混合过滤。
②卢戈碘液取碘化钾2ml以10ml蒸馏水充分溶解,然后加碘1g待完全溶解后加蒸馏水至300ml。
③脱色剂95%乙醇。
④稀释石炭酸复红同单染色法。
3)菌种大肠埃希菌和葡萄球菌混合菌液。
4)方法
①初染将结晶紫染液2~3滴加于制好的涂片上,染色1min,水洗;②媒染加卢氏碘液2~3滴染色1min,水洗;
③脱色95%乙醇脱色0.5min(无紫色脱落为止),水洗;
④复染加稀释石炭酸复红数滴,染色1min,水洗干后镜检。
5)结果革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性菌染成红色。
6)注意事项①涂片不宜过厚,否则脱色受影响,使革兰阴性菌染成革兰阳性菌,造成错误鉴定。
②为防止染液蒸发而改变浓度,碘液的颜色变淡应弃去。
③涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果,故每次水洗后应将玻片甩干。
④注意细菌的菌龄,一般以18h~24h左右培养物效果最好,菌龄过长影响细菌染色性。
(3)萋-纳抗酸染色法(ziehl—neelsen):
主要用于结核杆菌和麻风杆菌检查范文写作。
1)染液
①石炭酸复红染液取碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸水溶液90ml混合。
②脱色剂3%盐酸酒精。
③复染剂吕氏美兰染液,同单染色法。
2)菌种卡介苗和表皮葡萄球菌混合液。
3)方法
①初染在已固定的涂片上滴加石炭酸复红染液,远火徐徐加热至有蒸汽冒出,但切不可沸腾,并随时添加染色液,染色3min~5min,冷却后水洗。
②脱色滴加3%盐酸酒精脱色至无红色流下为止,一般为2min。
③复染水洗后用吕氏美兰复染0.5min~1min,水洗干后镜检。
4)结果抗酸菌染成红色,非抗酸菌染成蓝色。
5)注意事项①加热时火切勿过大,防止染液沸腾。
②每张玻片只允许放一份标本,以免阴阳结果混淆。
③用过的玻片要彻底洗干净,防止抗酸菌留在玻片上。
④切勿使用染色缸,印干的滤纸只能一片一张,不得重复使用。
⑤脱色时间宁长勿短,以免误诊。
⑥为防止实验室感染,标本要高压灭菌后再制片。
(4)潘本汉抗酸染色法(panpenhein)主要用于尿及粪便中抗酸菌检查。
最全面的范文参考写作网站当用萋-纳抗酸染色检出抗酸菌后,用该方法染色,结核分枝杆菌染成红色,耻垢分枝杆菌染成蓝色。
1)染液
①石炭酸复红染液见萋-纳抗酸染色法。
②复染液取蔷薇色酸1g先溶于100ml无水乙醇中,然后加美兰2g(至饱和),置室温中4天,使其充分溶解,过滤后加甘油20ml混匀备用。
2)标本怀疑肾结核患者的尿液。
3)方法
①初染于制好的涂片上滴加石炭酸复红染液数滴加温染色2min。
②复染倾去染液勿水洗,滴加复染液,边滴边倾去,重复4~5次后,水洗、待干、镜检。
3)结果结核分枝杆菌染成红色,耻垢分枝杆菌及其他细菌染成蓝色。
(5)鞭毛镀银染色法
1)染液
①甲液鞭酸5g,三氯化铁5g,36%甲醛1ml,1%NaOH1ml,蒸馏水100ml。
②乙液取AgNO32g溶于100ml蒸馏水中,临用前用15%氨水滴定,出现棕色沉淀后继续滴加氨水直至呈现乳白色薄雾状为止。
2)方法
①将奇异变形杆菌在1.4%的软琼脂上传两代,形成迁徙生长现象。
取洁净玻片一张,于玻片上滴加蒸馏水一滴,然后取上述迁徙生长边缘的细菌少许,轻轻点于蒸馏水中,使其自然扩散、干燥,切勿火焰固定。
②在制好的涂片上滴加甲液染3min~5min,用蒸馏水冲洗。
③用乙液冲去残水后,加乙液0.5min~1min,并在火焰上方稍加热,用蒸馏水冲洗,干后镜检。
3)结果菌体染成深褐色,鞭毛染成浅褐色。
4)注意事项①细菌培养时传代次数因菌种不同可适当增加。
②制涂片时菌量不宜过多,动作要轻,切勿研磨,以免鞭毛脱落。
③加乙液后加热温度不要太高。
(6)魏曦氏鞭毛染色法
1)染液饱和钾明矾液2ml,5%石炭酸液5ml,20%鞣酸液2ml相混合。
临用时加碱性复红酒精饱和液1ml,混合后过夜,次日过滤后使用。
此染液以3日内使用效果最好。
2)方法将奇异变形杆菌在1.4%的软琼脂上传两代,形成迁徙生长现象。
取高度洁净玻片一张,于玻片上滴加蒸馏水一滴,然后取上述迁徙生长边缘的细菌少许,轻轻点于蒸馏水中,使其自然扩散,置37℃培养箱内让其自干。
无需火焰固定。
滴加染液染0.5min~1min,水洗待干,镜检。
3)结果菌体与鞭毛均呈红色。
(7)芽胞染色法
1)染液
①石炭酸复红染液见抗酸染色法。
②脱色剂95%乙醇。
③复染液吕氏美兰染液,同单染色法。
2)菌种炭疽芽胞杆菌普通斜面培养物。
3)方法
①初染于制好的涂片上滴加石炭酸复红染液加热染3min~5min,勿使染液沸腾。
②脱色水洗后用95%乙醇脱色约1min,水洗。
③复染加吕氏美兰染液染1min,水洗干后镜检。
4)结果芽胞染成红色,菌体呈蓝色。
(8)黑斯(Hiss)荚膜染色法
1)染液结晶紫染液:
取结晶紫饱和液5ml加蒸馏水95ml混合;20%CuSO4水溶液。
2)标本提前数日小白鼠腹腔注射肺炎链球菌菌液0.2ml,小鼠死亡后解剖取腹腔液印片。
3)方法
①将印片在空气中自然干燥,无需加热固定。
②滴加结晶紫染液在火焰上加热,使有蒸汽冒出为止,勿水洗。
③以20%CuSO4溶液冲洗染液,勿水洗,干后镜检。
4)结果菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色。
(9)阿尔伯特(Albert)异染颗粒染色法
1)染液
①甲液甲苯胺兰0.15g,孔雀绿0.2g,溶于95%酒精2ml中再加入蒸馏水至100ml及冰醋酸1ml,放置24h后过滤备用。
②乙液将碘化钾3g溶于蒸馏水10ml~20ml中,再加碘2g等溶解后加蒸馏水至300ml备用。
2)菌种白喉棒状杆菌吕氏鸡蛋斜面培养物。
3)方法已固定的涂片上加甲液染3min~5min,水洗后,再加乙液染色1min,水洗待干,镜检。
4)结果菌体呈蓝绿色,异染颗粒呈蓝黑色。
(10)刚果红染色法(负染色法):
背景着色而菌体不着色的染色方法。
1)染液2%刚果红水溶液,1%盐酸酒精溶液。
2)方法于载玻片上滴加2%刚果红溶液1滴与少量培养菌混合,涂成均匀厚片待干,以1%盐酸酒精溶液冲洗,待干后镜检。
3)结果背景呈蓝色,菌体无色。
(11)金胺“O”染色法
1)染液
①金胺“O”染液金胺“O”0.1g溶于10ml95%酒精中,另取3ml石炭酸加在87ml的蒸馏水中。
将此二液混匀,虽混浊但不必过滤,装入褐色瓶中,放室温保存。
②0.5%盐酸酒精。
③0.5%高锰酸钾溶液。
2)菌种怀疑结核的痰标本。
3)方法在已固定的涂片上加金胺“O”染液染15min,水洗后用0.5%盐酸酒精脱色2min,水洗,再加0.5%高锰酸钾液作用3min,水洗,待干,用荧光显微镜观察。
4)结果抗酸菌呈亮黄色荧光。
(12)美兰染色法
美蓝是常用的活体染色染料,当它处于氧化状态是呈现出蓝色,而还原态时为无色。
用它进
行活体染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色;而衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。
(13)苏木精-伊红染色
苏木精-伊红染色,又称“苏木素-伊红染色”,或“HE染色”(hematoxylinandeosinstain、HEstain),是组织学最常用的染色方法之一。
这种染色方法的基础是组织结构对不同染料的结合程度不同。
染料苏木精可以将嗜碱性结构染成蓝紫色,而伊红可以将嗜酸性结构染成粉红色。
嗜碱性结构通常包括含有核酸的部分,如核糖体、细胞核及细胞质中富含核糖核酸(RNA)的区域等。
嗜酸性结构则通常由细胞内及细胞间的蛋白质,如路易体(Lewybody)、酒精小体(Mallorybody)、细胞质的大部分等。
有时,黄褐色也会出现在染色样本中,这是由于组织内原有的色素,例如黑色素等造成的。
(14)吉姆萨染液
吉姆萨染液(英语:
Giemsastain)是一种用于染色体的染色方法。
它是罗曼诺夫斯基染色法的改进版本。
以它的发明者,德国汉堡科学家古斯塔夫·吉姆沙命名。
染色物质Giemsa与DNA上的磷酸机团结合,可以用于产生G显带并制作染色体组型图。
通过后者,可以观察到染色体变异,如缺失,易位等。
Giemsa在A-T丰富的区段结合率高,通过显微镜可以观察到该区段呈暗带。
(15)免疫组织化学
免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。
只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。
免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉,所以广为医院采用,通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。
免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。
(16)刘氏染色法
刘氏染色法(Liu’sstain),一种将动物细胞染色以便用光学显微镜观察的方法。
改良自瑞氏染色法(RomanowskyStain),1953年由台湾大学刘祯辉教授所研究发表。
简介
相较于其他染色法,刘氏染色法的优点是非常快速,染色过程只须2~3分钟。
刘氏染色法在临床上的应用非常广泛,主要用作血球染色形态分类,此外也可以当作组织学的简易染色,在临床细菌学上的使用更可以作为阴道分泌物、痰液、脓等检体的简单染色剂(SimpleStain)。
成份
刘氏染色法所用的染液分成LiuA和LiuB两部份。
LiuA含有EosinY,可将细胞质和血红素等染成红色;LiuB则含有AzurI和methyleneazure,可和细胞核以及白血球的嗜碱性颗粒作用,染成蓝紫色。
染液
LiuAEosinY甲醇(用来固定细胞)methyleneazure(少量)
LiuBAzurImethyleneazureNa2HPO4˙12H2O水KH2PO4
步骤
将组织切片放到玻片上风干固定
将LiuA染液滴加在已固定的玻片上,静置30~45秒
直接再加上LiuB染液(大约两倍LiuA体积的量),吹气混合,静置60~90秒
用小水流冲洗玻片背面,洗去残余染液,可看到表面出现绿色金属光泽
篇二:
发酵小结
发酵小结
1.生物反应过程的特点
常温常压;原料简单粗放;反应专一性强;反应必须在无菌条件下进行;能够进行复杂高分子化合物的生产;微生物菌种是进行发酵的根本因素;经济效益显著
2.微生物工业对菌种的要求
能在廉价原料制备的培养基上迅速生长和生成所需的代谢产物产量高;培养条件易于控制;生长迅速,发酵周期短;满足代谢控制的要求;抗噬菌体能力强;菌种遗传稳定性好;安全性(不是病源菌,不产毒素);对需要添加的前体物质有耐受能力,并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用
3.菌种衰退的原因及保藏方法
一是菌种保藏不当;二是菌种生长的条件没有得到满足,或是遇到不利条件,或是失去某些需要的条件;此外还有经诱变得来的新菌株发生回复突变,从而丧失新的特征等情况。
斜面低温保藏法:
酵母菌
石蜡油封保藏法:
酵母菌
砂土管保藏法:
细菌,霉菌,防线菌
冷冻干燥法:
细菌,防线菌
液氮超低温冻结法:
细菌,真菌
4.防止菌种衰退的措施
从菌种选育方法上考虑
1)进行充分的后培养及分离纯化
2)增加突变位点,减少基因回复突变的几率
从菌种保藏方式上考虑
1)尽量减少传代次数
2)选择适宜的保藏培养基
从菌种培养条件上考虑
1)结构类似物抗性菌株在保藏培养基中应添加相应药物,及时淘汰回复突变细胞。
2)基因工程菌添加抗生素于培养基中防止质粒的丢失
从菌种管理措施上考虑:
复壮
1)定期对保藏菌种分离纯化,淘汰已退化细胞;
2)定期对发酵液进行分离筛选,选取自发性突变的细胞—生产育种
5.菌种保藏的原理和方法
原理:
菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点,人工创造条件,使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低,以减少其变异。
一般可通过:
保持培养基营养成分在最低水平;缺氧状态;干燥和低温。
使菌种处于“休眠’状态,抑制其繁殖能力。
发酵工业用微生物的分离
采样—增殖培养—分离纯化—初筛—复筛—性能鉴定
6.出发菌株的选择
有一定的目标产物的生产能力;生长繁殖快、营养要求低、产孢子多且早;对诱变剂敏感,变异幅度大等;要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞。
7.初筛复筛的区别
初筛以迅速筛出大量的初步要求的分离菌落为目的,以量为主;复筛则是精选,以质为主,也就是以精确度为主,复筛结合发酵进行,一株三瓶,可重复多次进行。
8.影响诱变效果的因素
细胞的生长状态(选择对数中后期,同步培养物);菌悬液的均一性;菌悬液的细胞浓度;菌悬液介质(缓冲液或生理盐水)。
(种子罐的级数主要取决于菌种的性质和菌体生长速率及发酵设备的合理应用!
)
(检验液化,是否有淀粉,用碘液,是否呈兰色;检验糖化,是否水解完全:
测定还原糖)
9.培养基的配置原则和选择原则
1营养物质满足微生物的需要;营养物质的浓度及配比应恰当;物理化学条件适宜;考虑培养的目的
2应根据微生物的特性和培养的pH的,快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合,发挥各自的优势,避其所短;适当的碳/氮比对发酵的影响极为明显;注意生理酸,碱性盐和pH缓冲剂的加入和搭配。
10.培养基设计步骤
根据前人经验和培养基成分确定必须考虑的问题,初步确定可能的培养基成分;通过单因素实验最终确定出适宜的培养基组分;当培养基组分确定后,再确定各组分的最适浓度。
培养基灭菌的要求:
达到要求的无菌程度(10-3);尽量减少营养成分的破坏
11.高温瞬时灭菌的原因
由于灭菌的活化能E比营养物质(维生素)破坏高,因此,随着灭菌温度的升高,比死亡速率的增加较分解速率常数快,因而在较高温度下可以缩短灭菌时间而保留较多的营养物质。
12.连续灭菌与间歇灭菌的比较
连续灭菌的优缺点
优点:
保留较多的营养物质质量;容易放大;较易自动控制;缩短灭菌周期;采用板式换热器时,可节约能量;发酵罐利用率高;蒸汽负荷均匀。
缺点:
设备比较复杂,投资较大,易染菌。
分批灭菌的优缺点
优点设备投资较少;染菌的危险性较小;人工操作较方便;对培养基中固体物质含量较多时更为适宜
缺点:
灭菌过程中蒸汽用量变化大,造成锅炉负荷波动大,一般只限于中小型发酵装置。
(对于小发酵罐,连续灭菌优势不明显;对培养基中含固体颗粒或有较多泡沫时,采用分批灭菌较好。
)
13.提高除菌效率的主要措施及影响过滤效率的因素
提高压缩前空气的质量;设计合理的空气预处理设备;设计和安装合理的空气过滤器;降低进入空气过滤器的空气相对湿度。
介质纤维直径越小,效率越高;过滤效率随填充密度和厚度增加而提高;当空气流速低时,过滤效率随气流流速增加而降低,当气流流速增加至临界值后,过滤效率随气流流速的增加而提高。
14.酵母酒精发酵与细胞酒精发酵的异同
相同点:
均是厌氧发酵,均产生酒精,从PYR到酒精阶段过程相同
不同点:
途径不同,酵母为EMP途径,酒精为ED途径;产能不同,酵母一分子葡萄糖产2分子ATP,酒精只产1分子ATP;细菌酒精发酵代谢速率快,发酵周期短,比酵母菌酒精产率高。
15.同型乳酸发酵与异型乳酸发酵的区别
发酵菌种不同(同型乳酸链球菌,乳酸杆菌等,异型肠膜明串株菌,葡聚糖明串株菌等);发酵机制不同(同型EMP,异型HPK与PK);发酵产物也不同(异型除乳酸外还有乙醇乙酸CO2等)。
16.酵母的三种发酵
酵母酒精发酵,亚硫酸盐发甘油发酵,碱法甘油发酵。
后两者不产生ATP,产生甘油(碱法还产生乙醇乙酸等)正常酵母菌也有极少量甘油产生:
磷酸二羟丙酮也可作为还原辅酶1的氢受体,形成磷酸甘油。
17.谷氨酸的生物合成途径及调节机制
控制生物素亚适量;α-酮戊二酸脱氢酶活力减弱;C02固定反应的酶系强,提高对糖的利用率;增强谷氨酸脱氢酶的活力,并丧失其反馈抑制和反馈阻遏;过量的NH4+
18柠檬酸积累机理
①由锰缺乏抑制了蛋白质的合成,而导致细胞内的NH4+浓度升高和一条呼吸活性强的侧系呼吸链不产生ATP,这两方面的因素分别解除了对磷酸果糖激酶(PFK)的代谢调节,促进了EMP途径畅通。
②由组成型的丙酮酸羧化酶源源不断提供草酰乙酸。
③在控制Fe2+含量的情况下,顺乌头酸水合酶活性低,从而使柠檬酸积累
④丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA和C02固定两个反应平衡,以及柠檬酸(来自:
在点网:
液体菌种工作总结)合成酶不被调节,增强了合成柠檬酸能力。
⑤柠檬酸积累增多,pH低,在低pH时,顺乌头酸水合酶和异柠檬脱氢酶失活,从而进一步促进了柠檬酸自身的积累。
19.氨基酸发酵的代谢控制
控制发酵的环境条件;控制细胞渗透性(通过加表面活性剂或生物素,油酸;加青霉素抑制细胞壁的合成);控制旁路代谢;降低反馈作用物的浓度(营养缺陷型突变株);消除终产物的反馈抑制与阻遏作用(抗氨基酸结构类似物突变株);促进ATP的积累,以利于氨基酸的生物合成
20.核苷酸发酵
在IMP合成系中,IMP脱氢酶收GMP的反馈抑制,也被GMP阻遏;GMP还原酶收ATP的反馈抑制。
同样,AMP抑制SAMP合成酶。
并且GTP作为SAMP-AMP反应体系的功能体,ATP作为XMP-GMP反应的功能体。
21.分批发酵优缺点
优点:
操作简单、周期短;操作引起染菌的概率低;不会产生菌种老化和变异等问题;生产过程,产品质量易掌握。
缺点:
非生产时间较长、设备利用率低;高浓度基质抑制产物的形成
补料分批发酵的优缺点
优点:
使发酵系统中维持很低的基质浓度;避免快速利用碳源的阻遏效应,防止底物的抑制;能减缓代谢有害物的不利影响;底物浓度过高,粘度影响传质和搅拌;和连续发酵比、不需要严格的无菌条件;不会产生菌种老化和变异等问题;延长产物的形成期
缺点:
存在一定的非生产时间;和分批发酵比,中途要流加新鲜培养基,增加了染菌的危险。
连续发酵的优缺点
优点:
能维持低基质浓度;可以提高设备利用率和单位时间的产量;便于自动控制。
缺点:
菌种发生变异的可能性较大;要求严格的无菌条件。
22.影响微生物需氧量的因素
1)微生物的生理特性(种类和生长阶段)a.好气程度b.菌龄c.数量d.菌的“聚集状态”
2)培养基特性a.培养基的组成b.配比和浓度c.物理性质:
粘度,表面张力d.补料的种类和方式
3)温度:
对传氧和生长速率的影响4)其他因素:
消泡剂,表面活性剂等
23.发酵不同阶段溶氧的不同
发酵前期由于产酶菌大量繁殖,需氧量不断大幅度增加,此时需氧超过供氧,溶氧明显下降发酵中期溶氧浓度明显地受工艺控制手段的影响,如补料的数量、时机和方式等
发酵后期由于菌体衰老,呼吸减弱,溶氧浓度也会逐步上升,一旦菌体自溶,溶氧就会明显地上升溶氧下降原因:
污染好氧杂菌;菌体代谢发生异常,需氧要求增加;某些设备或工艺条件发生故障或变化。
溶氧上升原因:
污染烈性噬菌体;菌体代谢异常,耗氧能力下降;同上。
凡是使KLa和C*增加的因素都能使发酵供氧改善
增加C*的办法
在通气中掺入纯氧或富氧,使氧分压提高;提高罐压(增加溶氧同时也会增加CO2的浓度);改变通气速率:
搅拌和通气;降低温度。
增加KLa的办法
提高设备的供氧能力(从改善搅拌考虑);增加功率输出(可直接通过改变搅拌器的直径或转速来达到);增加搅拌(作用在于改善罐内液体的混合和循环,从而具有抑制气泡聚合效果)使液相的良好混合(避免“死角”的存在)。
(需氧角度:
养料的丰富程度影响菌的生长;温度的影响)
24.引起pH下降的因素:
碳源过量,C/N比中C过高,特别是葡萄糖过量;中间补糖过多,若溶氧不足,使有机酸大量积累;消泡油添加过量;生理酸性物质的存在。
(上升类似)
PH的控制:
调节基础培养基的配方(培养基的成分,初始pH,缓冲剂);补料控制(直接加酸加碱,补加碳源或氮源,如生理酸性物质等)
25.泡沫产生的危害及控制
在好气性发酵中当发酵旺盛时会产生大量泡沫,而引起“逃液”,给发酵造成困难,带来许多负作用:
降低发酵罐的装料系数;增加菌群的非均一性;增加污染杂菌的机会;导致产物的损失;消沫剂的加入将给提取工序带来困难
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