第4章-2细胞化学染色检验(血液检验).ppt
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第二节第二节细胞化学染色检验细胞化学染色检验本节主要内容:
本节主要内容:
一、铁染色一、铁染色二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色三、过氧化物酶染色三、过氧化物酶染色n掌握细胞化学染色临床应用掌握细胞化学染色临床应用n掌握各种细胞化学染色的原理及临床意义掌握各种细胞化学染色的原理及临床意义n熟悉各种细胞化学染色结果判断及正常血熟悉各种细胞化学染色结果判断及正常血细胞染色反应细胞染色反应n了解细胞化学染色的基本步骤了解细胞化学染色的基本步骤要求:
要求:
一、概念一、概念细胞化学染色是细胞学和化学相结合细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。
它以而形成的一门科学。
它以细胞形态学细胞形态学为为基础,结合运用基础,结合运用化学反应的原理化学反应的原理对血细对血细胞内的各种胞内的各种化学物质化学物质(酶类酶类/脂类脂类/糖类糖类/铁铁/蛋白质蛋白质/核酸等核酸等)作作定性、定位、半定量定性、定位、半定量分析的方法。
分析的方法。
第一部分第一部分概概述述二、必要性二、必要性nn从形态学观察,存在较多的主观性;从形态学观察,存在较多的主观性;nn有些原始细胞形态较相似,难以鉴别;有些原始细胞形态较相似,难以鉴别;nn结合细胞化学染色,提高疾病的诊断率。
结合细胞化学染色,提高疾病的诊断率。
三、临床应用三、临床应用1.辅助判断急性白血病的细胞类型辅助判断急性白血病的细胞类型2.辅助血液系统疾病的诊断和鉴别辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断诊断3.观察疾病的疗效和预后观察疾病的疗效和预后4.疾病疾病发病机制的探讨发病机制的探讨白血病的诊断:
白血病的诊断:
MICM分型分型M:
morphologyI:
immunologyC:
cytogeniticsM:
molecularbiology形态学分型:
进行初步的诊断形态学分型:
进行初步的诊断形态学分型:
进行初步的诊断形态学分型:
进行初步的诊断免疫学分型:
明确细胞种类免疫学分型:
明确细胞种类免疫学分型:
明确细胞种类免疫学分型:
明确细胞种类细胞遗传学分型:
与疾病预后有关细胞遗传学分型:
与疾病预后有关细胞遗传学分型:
与疾病预后有关细胞遗传学分型:
与疾病预后有关分子生物学分型:
提高到分子水平分子生物学分型:
提高到分子水平分子生物学分型:
提高到分子水平分子生物学分型:
提高到分子水平四、基本步骤四、基本步骤
(1)物理法:
干燥、火焰)物理法:
干燥、火焰
(2)化学法:
化学法:
A、蒸气固定:
蒸气固定:
B、液体固定液体固定:
甲醛、乙醇、甲醇。
甲醛、乙醇、甲醇。
1.固定固定
(1)偶氮偶联法:
酯酶染色)偶氮偶联法:
酯酶染色
(2)联苯胺法:
联苯胺法:
POX(3)普鲁士蓝反应:
普鲁士蓝反应:
Fe(4)雪夫反应:
雪夫反应:
PAS(5)金属沉淀法:
金属沉淀法:
NAP(6)物理显色法:
物理显色法:
SBB2.显示:
有色沉淀反应显示:
有色沉淀反应铁染色铁染色-中性红、伊红中性红、伊红PAS-甲基绿甲基绿3.复染:
使各种细胞能显示出来复染:
使各种细胞能显示出来核:
中性红、甲基绿、沙黄等。
核:
中性红、甲基绿、沙黄等。
浆:
伊红、刚果红、光绿等。
浆:
伊红、刚果红、光绿等。
第二部分第二部分具体细胞化学染色方法具体细胞化学染色方法铁染色铁染色(Ferricstain)骨骨髓髓中中的的贮贮存存铁铁主主要要存存在在于于骨骨髓髓小小粒粒(外外铁铁)和和幼幼红红细细胞胞(内内铁铁)中中;检测采用普鲁氏蓝反应。
检测采用普鲁氏蓝反应。
一、原一、原理理4Fe4Fe3+3+3K+3K44Fe(CN)Fe(CN)66FeFe44Fe(CN)Fe(CN)6633+12K+12K+含铁物质含铁物质含铁物质含铁物质亚铁氰化钾亚铁氰化钾亚铁氰化钾亚铁氰化钾亚铁氰化铁亚铁氰化铁亚铁氰化铁亚铁氰化铁酸性酸性酸性酸性二、结果判断二、结果判断1.细胞外铁细胞外铁(骨髓小粒含铁血黄素骨髓小粒含铁血黄素)铁颗粒、铁颗粒、铁铁小珠、小珠、铁铁团块团块细胞外铁细胞外铁(低倍镜观察低倍镜观察)():
无颗粒():
无颗粒():
有少量铁颗粒或偶见铁小珠():
有少量铁颗粒或偶见铁小珠():
有较多的铁颗粒或铁小珠():
有较多的铁颗粒或铁小珠():
有很多的铁颗粒、铁小珠():
有很多的铁颗粒、铁小珠和少数铁小块和少数铁小块():
有极多铁颗粒、小珠和():
有极多铁颗粒、小珠和很多铁小块,密集成堆。
很多铁小块,密集成堆。
+
(1)分级)分级(按铁颗粒数量的多少及大小按铁颗粒数量的多少及大小)细小颗粒:
细沙样铁小粒,不易看清细小颗粒:
细沙样铁小粒,不易看清。
粗大颗粒:
很容易看清的颗粒。
粗大颗粒:
很容易看清的颗粒。
(2)阳性率)阳性率观察观察100个中个中晚幼红细胞,计算出铁晚幼红细胞,计算出铁粒幼红细胞的百分比。
粒幼红细胞的百分比。
2.细胞内铁细胞内铁(中晚幼红细胞,油镜观察中晚幼红细胞,油镜观察)细胞内铁细胞内铁(油镜观察幼红细胞油镜观察幼红细胞)型:
型:
12个小铁颗粒;个小铁颗粒;型型:
35个小铁颗粒;个小铁颗粒;型:
型:
610个小铁个小铁颗粒或颗粒或14个大颗粒;个大颗粒;型:
型:
10个以上小铁颗粒个以上小铁颗粒或或5个以上大颗粒。
个以上大颗粒。
环形铁粒幼红细胞环形铁粒幼红细胞(ringedsideroblast)幼红细胞胞质内铁颗粒幼红细胞胞质内铁颗粒6个,围绕个,围绕核周核周1/2以上者。
以上者。
铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞(sideroblast):
胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞铁粒红细胞(siderocyte):
胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。
胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。
绿色箭头示:
环形铁粒幼红细胞;蓝色箭头示:
铁粒红细胞绿色箭头示:
环形铁粒幼红细胞;蓝色箭头示:
铁粒红细胞1.细胞外铁细胞外铁:
(+)(+)2.细胞内铁:
细胞内铁:
铁粒幼红细胞阳性率大约铁粒幼红细胞阳性率大约1944%,III型(型(I型为主),无型为主),无型、型、型、环形铁粒幼红细胞及铁粒型、环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。
红细胞。
三、参考范围三、参考范围四、临床意义四、临床意义1.缺铁性贫血:
缺铁性贫血:
外铁(),内铁外铁(),内铁15%。
4.非缺铁性贫血:
非缺铁性贫血:
溶贫、巨幼贫、再障、溶贫、巨幼贫、再障、白血病等,内外铁常增多。
白血病等,内外铁常增多。
5.感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等:
感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等:
外铁外铁增多增多。
五、应用评价五、应用评价铁染色是临床常用的一种细胞化学铁染色是临床常用的一种细胞化学染色,虽不如血浆铁蛋白敏感,但是反染色,虽不如血浆铁蛋白敏感,但是反映机体储存铁的金标准。
映机体储存铁的金标准。
外铁外铁:
反映骨髓中铁的储存量;:
反映骨髓中铁的储存量;内铁:
反映骨髓中可利用的铁量。
内铁:
反映骨髓中可利用的铁量。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色neutrophilicalkalinephosphatase(NAP)-磷酸萘酚钠磷酸萘酚钠-萘酚萘酚+磷酸钠磷酸钠NAPPH9.6-萘酚萘酚+重氮盐重氮盐不溶性沉淀定位不溶性沉淀定位于胞质于胞质Kaplow偶氮偶联法:
偶氮偶联法:
一、原一、原理理二、正常血细胞染色反应二、正常血细胞染色反应nnNAP主主要要存存在在于于成成熟熟的的中中性性粒粒细细胞胞胞胞质质中中。
严严重重的的化化脓脓性性感感染染时时,晚晚幼幼阶阶段粒细胞也可见有阳性反应。
段粒细胞也可见有阳性反应。
nn其他细胞基本呈阴性反应其他细胞基本呈阴性反应。
三、结果判断及参考范围三、结果判断及参考范围1.结果判断:
出现深褐色颗粒的量及密度结果判断:
出现深褐色颗粒的量及密度NAP染色反应强度标准:
染色反应强度标准:
():
胞质中无颗粒;():
胞质中无颗粒;():
():
胞质胞质含少量颗粒,约占含少量颗粒,约占1/4;():
胞质含中等量颗粒,():
胞质含中等量颗粒,约占约占1/2;():
胞质():
胞质含较多颗粒,约占含较多颗粒,约占3/4;():
():
胞质胞质充满颗粒,无空隙。
充满颗粒,无空隙。
+EOS钙钙钴钴法法NAP染色结果报告包括阳性率和积分值。
染色结果报告包括阳性率和积分值。
阳阳性性率率:
指指计计数数100个个中中性性成成熟熟粒粒细细胞胞,其其阳阳性性细细胞胞的的数数量量即即为为阳阳性性率率;积积分分值值:
指指计计数数100个个中中性性成成熟熟粒粒细细胞胞,不不同同阳阳性性程程度度细细胞胞数数量量乘乘以以其其阳阳性性程程度度之之和和即即为为积积分分值值,其其计计算算公公式式为为:
积积分分值值=()数数量量1+()数数量量2+()数量数量3+()数量数量4。
2.NAP染色结果报告染色结果报告:
3.参考范围:
参考范围:
中性粒细胞中性粒细胞NAP阳性率:
阳性率:
40%NAP积分为:
积分为:
30130分分NAP染色结果既报阳性率又报积分值。
染色结果既报阳性率又报积分值。
四、临床意义四、临床意义1.生理性变化:
应激状态、妊娠、新生儿等。
生理性变化:
应激状态、妊娠、新生儿等。
2.病理性变化:
病理性变化:
(1)NAP:
细菌性感染、慢粒细菌性感染、慢粒(加、急加、急)、急、急淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、骨纤、真红、再障、原发性血小骨纤、真红、再障、原发性血小板增多症、使用糖皮质激素等。
板增多症、使用糖皮质激素等。
3.疾病的鉴别:
疾病的鉴别:
(1)类白与慢粒类白与慢粒:
前者前者后者后者
(2)慢粒慢性期与慢粒慢性期与慢性中性粒细胞白血病:
慢性中性粒细胞白血病:
前者前者后者后者(3)细菌性感染与病毒性感染细菌性感染与病毒性感染/寄生虫感染:
寄生虫感染:
前者前者后两者后两者正常或正常或
(2)NAP:
慢粒慢粒(慢慢)、PNH、MDS、恶组等。
、恶组等。
(6)恶组与反应性组织细胞增多症恶组与反应性组织细胞增多症:
前者前者后者常后者常(7)急性白血病类型:
急性白血病类型:
急性髓细胞急性髓细胞急淋急淋(4)慢粒病情观察:
慢粒病情观察:
(5)再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿:
再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿:
前者前者后者后者CML类白类白五、应用评价五、应用评价NAPNAP染色有多种检测方法,国际标准化委员会推荐染色有多种检测方法,国际标准化委员会推荐染色有多种检测方法,国际标准化委员会推荐染色有多种检测方法,国际标准化委员会推荐KaplowKaplow萘酚萘酚萘酚萘酚AS-BIAS-BI磷酸钠法和磷酸钠法和磷酸钠法和磷酸钠法和TomonagaTomonaga萘酚萘酚萘酚萘酚AS-MXAS-MX磷酸钠法。
钙磷酸钠法。
钙磷酸钠法。
钙磷酸钠法。
钙-钴法试剂成本低廉,操作繁琐,反应钴法试剂成本低廉,操作繁琐,反应钴法试剂成本低廉,操作繁琐,反应钴法试剂成本低廉,操作繁琐,反应时间长,临床上逐步被偶氮偶联法取代,阳性产物色时间长,临床上逐步被偶氮偶联法取代,阳性产物色时间长,临床上逐步被偶氮偶联法取代,阳性产物色时间长,临床上逐步被偶氮偶联法取代,阳性产物色泽鲜明、定位精确,尤其以萘酚泽鲜明、定位精确,尤其以萘酚泽鲜明、定位精确,尤其以萘酚泽鲜明、定位精确,尤其以萘酚AS-BIAS-BI磷酸钠法最为磷酸钠法最为磷酸钠法最为磷酸钠法最为广泛使用,利于评定广泛使用,利于评定广泛使用,利于评定广泛使用,利于评定NAPNAP活性强度的分级。
常用重氮活性强度的分级。
常用重氮活性强度的分级。
常用重氮活性强度的分级。
常用重氮盐有坚牢蓝盐有坚牢蓝盐有坚牢蓝盐有坚牢蓝RRRR、坚牢蓝、坚牢蓝、坚牢蓝、坚牢蓝BBBB、坚牢紫酱等,不同偶联、坚牢紫酱等,不同偶联、坚牢紫酱等,不同偶联、坚牢紫酱等,不同偶联有不同的灵敏度。
有不同的灵敏度。
有不同的灵敏度。
有不同的灵敏度。
过氧化物酶染色过氧化物酶染色(peroxidase,POX)一、原一、原理理粒粒细细胞胞和和部部分分单单核核细细胞胞的的溶溶酶酶体体颗颗粒粒中中含含有有过过氧氧化化物物酶酶(POX),它它可可分分解解H2O2释释放放出出新新生生态态的的氧氧,后后者者氧氧化化二二氨氨基基联联苯苯胺胺,形形成成金金黄黄色色
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- 细胞 化学 染色 检验 血液