影响酶促反应的因素温度ph激活剂及抑制剂生化实验报告共8篇.docx
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影响酶促反应的因素温度ph激活剂及抑制剂生化实验报告共8篇
影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇)
影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解,生成一系列水解产物,即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。
淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。
在不同温度,不同PH值下,唾液淀粉酶活性不同,催化淀粉水解程度不一,生成的产物也就不同。
此外,激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性,影响淀粉的水解。
因此可根据在不同反应条件下,溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度,从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
淀粉I2【操作】1.温度对酶促反应速度的影响取3支试管,编号,按下表操作:
2.PH对酶促反应速度的影响取3支试管,编号,按下表操作:
3.激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管,编号,按下表操作:
【结果及分析】观察各管颜色变化,说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
【实验注意事项】篇二:
生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么?
答:
生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材,还应当注意具体的情况,如植物的季节性、地理位置和生长环境等,动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等,微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些?
答:
(1)机械的方法:
包括研磨法、组织捣碎法;
(2)物理法:
包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等;(3)化学与生物化学方法:
包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?
两种滴定方法各有何优缺点?
答:
我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和,缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差;直接法的优点是反应原理直观易懂,缺点是操作较复杂,条件剧烈,不易控制。
实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法
(1)本实验制备得到的是粗脂肪,若要制备单一组分的脂类成分,可用什么方法进一步处理?
答:
硅胶柱层析,高效液相色谱,气相色谱等。
(2)本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?
答:
防止脂质被氧化。
实验六蛋白质等电点测定1、在分离蛋白质的时候,等电点有何实际应用价值?
答:
在等电点时,蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加,所以处于等电点的蛋白质最容易沉淀。
在分离蛋白质的时候,可以根据待分离的蛋白质的等电点,有目的地调节溶液的pH使该蛋白质沉淀下来,从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。
实验七氨基酸的分离鉴定-纸层析法1、如何用纸层析对氨基酸进行定性和定量的测定?
答:
将标准的已知氨基酸与待测的未知氨基酸在同一张层析纸上进行纸层析,显色后根据斑点的Rf值,就可以对氨基酸进行初步的定性,因为同一个物质在同一条件下有相同的Rf值;将点样的未知氨基酸溶液和标准氨基酸溶液的体积恒定,根据显色后的氨基酸斑点的面积与点样的氨基酸质量成正比的原理,通过计算斑点的面积可以对氨基酸溶液进行定量测定。
3、纸层析、柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点?
答:
实验八蛋白质含量的测定
(1)简述紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理及优点。
答:
原理:
由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。
在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(OD280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。
优点:
迅速、简便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
实验十影响酶活性的因素
(1)本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的?
答:
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下:
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。
麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
因此反应后颜色如为蓝色说明酶活力低,淡黄色则说明酶活力高。
(2)如何通过加入班氏试剂后生成沉淀多少来反映酶促反应快慢的?
答:
淀粉与糊精无还原性,或还原性很弱,对本尼迪克特试剂呈阴性反应。
麦芽糖、葡萄糖是还原糖,与本尼迪克特试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。
因此,产生红棕色氧化亚铜的沉淀越多说明酶活力越高。
(3)通过本实验,结合理论课的学习,小结出哪些因素影响唾液淀粉酶活性?
是如何影响的?
答:
温度、pH、激活剂、抑制剂等。
高于或低于最适温度或pH,酶活力都会降低;激活剂和抑制剂不是绝对的,只是相对而言,随着浓度的变化而变化。
实验十二碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定
(1)试说明用硫酸铵分级分离酶的方法及应注意的事件。
答:
用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。
由于硫酸铵在水中溶解度很大(20℃,每升可溶760克),并且对许多酶没有很大的影响,因此它是最常用的盐。
例如:
某酶(或蛋白质)发生盐析的范围为35-65%饱和硫酸铵的浓度,因此可先选择30%饱和硫酸铵浓度,去沉淀杂蛋白,然后选择70%饱和硫浓度酸铵,留沉淀(含所要的酶)。
注意事项:
在用硫酸铵沉淀酶蛋白时,要注意缓冲液的pH值和温度,盐的溶解度随温度不同而有较大的变化,同时酶的溶解度亦随温度的改变而改变。
在加硫酸铵时,需事先将硫酸铵粉末研细。
加入过程需缓慢并及时搅拌溶解。
搅拌要缓慢,尽量防止泡沫的形成,以免酶蛋白在溶液中表面变性。
(2)用正丁醇处理匀浆液可以有效地使碱性磷酸酶酶蛋白释放,使酶的产量大大提高,这是为什么?
答:
因为碱性磷酸酶酶是一种膜蛋白,正丁醇处理后可使结合在膜上的蛋白质更多地释放出来。
(3)酶活力测定时,为什么必需先将酶液对缓冲液透析后才测定?
答:
去除盐离子的影响。
实验十三凝胶过滤层析纯化碱性磷酸酶1.在本实验中要注意哪些重要环节?
答:
1)注意区分柱子的上下端。
2)各接头不能漏气,连接用的小乳胶管不要有破损,否则造成漏气、漏液。
3)装柱要均匀,既不过松,也不过紧,最好在要求的操作压下装柱,流速不宜过快,避免因此凝胶。
4)始终保持柱内液面高于凝胶表面,否则水分蒸发,凝胶变干。
也要防止液体流干,使凝胶混入大量气泡,影响液体在柱内的流动。
5)核酸蛋白检测仪,记录仪,部分收集器要正确连接。
6)要控制一定流速。
7)收集得到的液体要进行酶活力的检测。
实验十四底物浓度对酶活力的影响(米氏常数的测定)1.在测定酶催化反应的米氏常数Km和最大反应速度Vm时,应如何选择底物浓度范围?
答:
底物浓度选择范围[S]?
0.2-5.0Km为宜。
底物浓度选取还应该注意其倒数能均匀分布。
1/v1/v01/[S]01/[S]底物浓度太大底物浓度太小2.试说明米氏常数Km的物理意义和生物学意义。
答:
(1)Km是酶的一个极重要的动力学特征常数,Km物理含义:
ES络合物消失速度常数与形成速度常数之比;其数值相当于酶活性部位的一半被底物占据时所需的底物浓度。
(2)可根据Km估计底物浓度的水平。
(3)Km可作为同工酶的判断依据。
(4)鉴别最适底物。
(5)有助于在酶学研究中对底物浓度的选择。
选用[S]10Km浓度进行活力测定3.为什么说米氏常数Km是酶的一个特征常数而Vm则不是?
答:
某种酶的Km在给定的体系中不随酶浓度改变而改变,也与酶的纯度无关,因此是酶的一个特征常数。
但Vm随酶浓度改变而改变。
实验十七SDS-PAGE电泳
(1)简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量的原理;答:
1)SDS能使蛋白质的氢键、疏水键打开,并结合到蛋白质分子上,形成蛋白质–SDS复合物。
2)SDS带有大量负电荷,当它与蛋白质结合时,消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异,使SDS与蛋白质的复合物都带上相同密度的负电荷。
3)SDS-蛋白质复合物在水溶液中的形状一样,都是近似于雪茄烟形的长椭圆棒。
4)不同的SDS-蛋白质复合物都带有相同密度的负电荷,并具有相同形状;因此在一定浓度的凝胶中,由于分子筛效应,则电泳迁移率就成为蛋白质分子量的函数。
(2)是否所有的蛋白质用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定得到的分子量都完全可靠?
答:
不是。
如电荷异常或构象异常的蛋白质,带有较大辅基的蛋白质(如某些糖蛋白)以及一些结构蛋白如胶原蛋白等。
例如组蛋白F1,它本身带有大量正电荷,因此,尽管结合了正常比例的SDS,仍不能完全掩盖其原有正电荷的影响,它的分子量是21,000,但SDS-凝胶电泳测定的结果却是35,000。
实验十八维生素C的定量测定
(1)简述本法测定VC的利与弊。
答:
碘量法测定VC相比其它方法传统的碘滴定法迅速、简捷,但易受到待测物颜色干扰而不易判断滴定终点;只能测定待测溶液还原型的Vc含量,如果溶液中还含有其他还原型较篇三:
生化实验思考题1.氨基酸的纸层析分离1.什么是纸层析技术是利用混合物中各组分物理化学性质差异,使其以不同速度移动的一种物理分离方法。
2.什么是分配系数分配系数是指溶质在固定相中的浓度和溶质在流动相中的浓度的比值。
3.层析技术的种类1吸附层析2分配层析3离子交换层析4凝胶过滤层析5亲和层析6气象层析7固相层析8柱层析9纸层析10薄层层析11高效液相层析4.影响Rf值的因素有哪些1纸层析时纸层析时要在密闭仪器中加入平衡试剂使纸层析上吸附的溶剂达到饱和.2滤纸要保持洁净,点样时要适量斑点不能过大.3样品物分子结构和极性4滤纸的厚薄和纤维松紧度不一样,结合的水量也不一样。
2.酵母RNA的提取和分离1.试验中为什么选择干酵母做实验材料?
酵母中RNA含量较高(2.67%~10.0%),DNA含量少2.提取RNA的方法有几种?
稀碱法和浓盐法3.加入酸性乙醇的目的?
在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可使解聚的核糖核酸沉淀,由此得到RNA的粗制品。
4.如何鉴定RNA的组分?
现象如何?
RNA中含有核糖,碱基,磷酸各组分。
核糖与浓盐酸和苔黑酚共热产生绿色;嘌呤碱与银铵络离子共热白色絮状嘌呤银化物沉淀;磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵,加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。
3.球蛋白提取及含量测定1.蛋白质沉淀方法有哪些?
分可逆沉淀法和不可逆沉淀法两种。
其中可逆沉淀法有等电点沉淀,中性盐沉淀法,有机溶剂沉淀法;不可逆沉淀法有加热沉淀,重金属盐沉淀,生物碱沉淀。
2.蛋白质含量测定的方法紫外分光光度计,可见光光度计,双缩脲法,福林酚法3.分光光度计的使用及注意事项1接电源,打开样品室暗箱盖,预热20min2调节所需波长3开盖放黑色比色皿,关盖,调T%为0%4放空白对照,放样品液到比色皿2/3到3/4处,用擦镜纸擦干表面,在对照组处调T为100%5调节T%到ABS,分别测各样品分光光度值4.盐析原理将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。
蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40μg~400μg范围内时,吸光度与DNA浓度成正比。
在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。
7.植物过氧化物同工酶聚丙烯酰氨凝胶电泳1.什么是电泳,同工酶,等电点?
?
?
在溶液中,蛋白质分子会由于氨基酸的解离而带电荷,电场中蛋白质带电粒子会向与自身电荷相反的电极泳动,这就是电泳。
?
?
指生物体内催化相同反应但分子结构不同的一组酶?
?
氨基酸分子静电荷为零时的PH2.Acr,Bis,AP,TEMED各自中文名称及作用?
Acr:
丙烯酰胺,作为单体;Bis:
甲叉双丙烯酰胺,交联剂;AP:
0.15%过硫酸铵,化学聚合催化剂;TEMED:
四甲基乙二胺,加速剂3.过氧化物酶的底物是什么?
H2O24.溴酚蓝的作用?
指示电泳前沿:
溴酚蓝分子带负电,比蛋白质小迁移速度快,总是位于蛋白质之前。
5.本实验使用的缓冲溶液是什么?
写出各自的名称,PH?
?
提取液缓冲液:
PH=8.0?
?
电极缓冲溶液:
PH=8.3?
?
上样缓冲溶液:
PH=8.98.蔗糖酶米氏常数的测定1.为什么说Km是酶的特征常数?
什么是Km?
单位是什么?
一个酶对一个特定的底物有一个特定的Km与之对应;Km是酶促反应最大速度1/2时的底物浓度;单位:
mol/L、mmol/L2.双倒数作图法求Km值,横纵坐标分别是什么?
横:
1/【s】;纵:
1/v。
(【s】是底物浓度)3.NaOH作用?
使酶失活,反应停止4.涉及化学反应:
蔗糖水解为葡萄糖;3,5﹣二硝基水杨酸与葡萄糖加热反应生成棕红色的3﹣氨基﹣5﹣硝基水杨酸9.胰蛋白酶活性的测定1.酶活单位如何定义?
一个酶活力单位是指在最适条件下,在一分钟内能转化1μmol底物所需要的酶量2.紫外分光光度计使用方法?
设置波长:
【GotoWL】键设置波长?
【T%/ABS】:
按【T%/ABS】可在透光率(T%)和吸光度(ABS)之间切换。
?
保存参数:
可将当前参数保存在内存或数据包内。
?
测量屏幕:
确定参数后按【样品测定】或【START/STOP】键的同时进行第一次测量,每按一次得到一个数据。
?
自动调零:
当需要空白校正时,在测量前设置好空白样品,然后按【AUTOZERO】键,此时的光度值设定为0ABS(100%)3.BAEE,BA中文名BAEE:
N﹣苯甲酰﹣L﹣精氨酸乙酯BA:
N﹣苯甲酰﹣L﹣β-硫基乙醇:
抗氧化剂,有效防止酚被氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。
3.DNA提取方法有哪些?
CTAB法,玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法,异硫氰酸胍法,碱法,酶法4.DNA纯度鉴定方法篇四:
实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称:
生物化学实验(甲)指导老师:
成绩:
实验名称:
酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型:
分离鉴定实验同组学生姓名:
一、实验目的和要求(必填)三、主要仪器设备(必填)五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理(必填)四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析(必填)Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。
2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3.学会排除干扰因素,设计酶学实验。
二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。
酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性,酶催化的反应(酶促反应)要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。
酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性,即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用,对其他底物无催化反应。
根据各种酶对底物的选择程度不同,它们的专一性可以分为下列几种:
1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。
2.绝对专一性:
有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物,而不作用于任何其他物质。
如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。
如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖,淀粉酶只作用于淀粉,而不作用于纤维素。
3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种,而对另一种则全无作用。
如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。
本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。
采用Benedict试剂检测反应产物。
Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。
Na2CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+2+Na2SO4还原糖(—CHOor—C=O)+2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)+2H2与Benedict试剂无呈色反应。
淀粉被淀粉酶水解,产物为葡萄糖;蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解,其产物为果糖和葡萄糖,它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。
本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。
三、实验材料与试剂1、实验材料⑴蔗糖酶(样品Ⅳ);⑵新鲜唾液(含唾液淀粉酶);2、实验试剂⑴蔗糖酶液蔗糖酶液(样品Ⅳ)加蒸馏水适当稀释,备用;⑵唾液淀粉酶液(学生自制)取0.5mL唾液至25ml量筒中,用蒸馏水(稀释)到25ml,用棉花过滤备用。
唾液稀倍数因人而异,可稀释50~400倍,甚至更高;⑶5%蔗糖(A.R.)溶液;⑷0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl);⑸Benedict试剂;四、实验器材与仪器1.漏斗,2.脱脂棉花;3.恒温水浴(37℃,100℃);4.量筒;5.试管;6.烧杯;7.吸量管。
五、实验操作方法和步骤㈠检查试剂取3支试管,按下表操作:
注:
1、检查目的:
试剂是否有干扰因素存在。
2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在,请自己设计。
㈡淀粉酶的专一性取三支试管,按下表操作:
注:
可增加一组唾液淀粉酶液经100℃加热3min处理后的样品对照组。
㈢蔗糖酶的专一性取三支试管,按下表操作:
注:
可增加一组蔗糖酶液经100℃加热3min处理后的样品对照组。
六、结果分析讨论各试管观察结果依次是:
(一):
1号蓝绿色,2号蓝色,3号蓝色Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。
3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖,说明在不加酶时,淀粉和蔗糖不易水解。
试剂无干扰因素的存在。
(1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解)
(二):
1号土黄色,2号黄绿色,3号蓝色加入唾液淀粉酶,1号试管底物是淀粉,所以很容易水解成葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。
所以1号颜色变化比较大。
(2号可能是因为蔗糖在37℃恒温水浴中也有少部分水解,所以颜色变化,但变化不明显。
)总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性,不能催化蔗糖水解,具有对淀粉的底物专一性。
3号是对照。
(三):
1号蓝色,2号红棕色,3号蓝色加入蔗糖酶,2号试管底物是蔗糖,所以很容易水解成果糖和葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。
所以2号颜色变化比较大。
(1号可能是因为淀粉在37℃恒温水浴中也有部分水解,所以有颜色变化,但变化不明显。
)从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用,对淀粉无催化作用,具有对蔗糖的底物专一性。
3号是对照。
七、思考题1.观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验?
每组各有何意义?
蒸馏水有何用?
第一组作为整个实验的空白对照组,检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响,排除干扰因素的存在。
第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组,第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。
蒸馏水作为每一个组中的空白对照,与组内其余两组进行对照。
2.将酶液煮沸10min后,重做二、三的操作,观察有何结果?
各试管都为蓝色,因为酶在煮沸过程中已经变性,失去催化活性,故不能催化各自对应底物的水解反应。
3.在此实验中,为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液?
0.3%NaCl的作用是什么?
0.3%NaCl中的Cl是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性,使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活性不足而导致不同。
八、注意事项1.试管要干净,所有试剂加量准确,加好试剂后要摇匀。
2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染;试剂用好瓶盖要立即盖好,防止试剂间的互相污染。
以免实验结果的错误。
-Ⅱ.影响酶活性的因素——⑴唾液淀粉酶(学生自制)取唾液1ml至25ml量筒中,用蒸馏水稀释至25ml,用棉花过滤备用。
唾液稀释倍数因人而异,可稀释50~400倍,甚至更高。
⑵0.1%淀粉溶液⑶1.0%氯化钠溶液⑷1.0%硫酸铜溶液⑸1.0%硫酸钠溶液⑹℃)五、实验操作方法和步骤取试管4支,按下表操作:
注意:
⑴找出准确的保温时间,是本实验是实验能否成功的关键步骤之一,唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定,通过37℃水浴溶保温计时,反应时间最好在8~15min以内,只有确定准确的保温时间才能进行实验。
(2)加入酶液后,务必充分摇匀,保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。
(3)碘化钾–碘液不要过早地加到点滴板上,以免碘液挥发,影响显色效果。
六、结果分析讨论1号试管为蓝紫色,2号为浅黄色,3号为褐色,4号为浅褐色。
试管1中颜色最深,说明CuSO4可以抑制淀粉酶的活性;试管2中颜色最浅,基本呈碘色,故淀粉酶活性最高,说明NaCl可以激活淀粉酶的活性;试管3、4中颜色基本一致,且深浅居于试管1、2之间,淀粉酶活性一般,说明Na+、SO42-对淀粉酶活性都没有影响。
故总体上看,可以得出Cl-是唾液淀粉酶的激活剂,Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。
七、思考题1.激活剂可分哪几类?
本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型?
激活剂可分为:
简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。
NaCl属于简单无机离子;CuSO4属于重金属抑制剂。
2.本实验中,1,2,3,4管各有何用意?
为什么要设计第3管和第4管?
1管可观察抑制剂对反应影响的现象,2管可观察激活剂对反应影响的现象,第3管可以将1管中的Na和2管中的SO4对反应的影响去除,4管作为空白对照。
3.抑制剂与变性剂有何不同?
试举例说明。
抑制剂只改变酶的催化活性,并不使蛋白质变性,其影响是可逆的;变性剂破坏了蛋白质的高级结构,使蛋白质变性,并且多数变性剂的影响是不可逆的。
如:
Cu是唾液淀粉酶的抑制剂,但如果将Cu去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。
八、注意事项1.试管要干净,所有试剂加量准确,加好试剂后要摇匀。
2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染,以免实验结果的错误。
3.试剂用好瓶盖要立即盖好,防止试剂间的互相污染。
4.两种淀粉不要弄错。
5.激活剂抑制剂实验中,注意运用点滴板(显色板)来控制保温时间;如1,2,3,4管颜色反应无明显差别,可能是唾流淀粉酶活力太高或太低,若酶活性太高可将酶稀释后重做;若酶活性太低,可延长保温时间或增加酶的浓度。
2+2++2-Ⅲ.影响酶活性的因素——温度,最适温度测定一、实验目的和要求1.了解温度对酶活力的影响;2.学习测定最适温度的原理和方法;二、实验基本原理酶的催化反应受温度影响很大,每一种酶所催化的反应,在一定条件下,仅在某一温度范围内表现出最大的活力,即反应速度最大时的温度,这个温度称为该酶促反应的最适温度,高于或低于最适温度时,反应速度逐渐下降。
因此,酶促反应与温度的关系,用酶活力对温度作图,通常具有钟罩形曲线特征。
温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件,把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下,然后在一系列不同温度条件下,进行反应初速度测定,以酶反应初速度对温度作图,可以得一个钟罩形的曲线,即为温度—酶活性曲线,在某温度有一酶活力最大值,这个温度即为最适温度。
实验①利用唾液淀粉酶为试验对象,在0℃~65℃之间选择不同的温度,进行酶活力测定。
根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同,遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。
实验②采用
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